检测大肠杆菌菌体蛋白的夹心ELISA试剂盒的建立及应用研究

目的  建立特异、敏感的检测大肠杆菌菌体蛋白的夹心ELISA试剂盒。方法  采用大肠杆菌菌体蛋白免疫家兔,制备得到高效价抗菌体蛋白抗血清。将经饱和硫酸铵盐析、阴离子交换柱层析和亲和层析纯化的兔抗大肠杆菌菌体蛋白特异性多克隆抗体作为包被抗体和检测抗体,用生物素标记检测抗体,并加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的亲和素。结果　建立的大肠杆菌菌体蛋白夹心ELISA检测方法的敏感性为0.32 μg/L,检测范围为1~100 μg/L,与国际同类商品化试剂盒相当。此法具有良好的稳定性,其批内变异系数小于7.7%,批间变异系数小于6.2%。结论  建立了特异、敏感、稳定的检测大肠杆菌菌体蛋白的夹心ELISA试剂盒,为生物制品中残留大肠杆菌菌体蛋白的质量控制提供了一种重要的检测方法。     

新型食物不耐受sIgG定量检测方法的构建

【摘要】目的以检测鸡蛋特异性免疫球蛋白G（sIgG）为例,探讨新型食物不耐受的定量检测方法。方法选择行食物过敏原sIgG检测的患者173例,另择健康体检者78例为阴性对照。制备生物素化牛血清白蛋白-链酶亲和素酶标反应板,同时加入生物素化鸡蛋抗原和待检血清,洗涤后再加入酶标记抗人IgG,建立一种抗原间接包被-液相反应模式的酶联免疫方法;优化生物素化过敏原和酶标记抗体的浓度,确定反应条件。应用此方法检测血清标本中的sIgG。结果选用生物素化蛋清作为抗原,其最适稀释比例是1∶2000,酶标抗体的最适稀释比例是1∶12000。此方法批内及批间变异系数分别为4.83%~8.55%,4.88%~7.93%;与蟹、牛奶、羊奶等的交叉反应率均<10%;与临床现用食物不耐受sIgG检测法有较好的相关性（=0.977X+8.45,r=0.961, P<0.05）。结论本检测方法可用于检测鸡蛋不耐受患者血清sIgG,操作简便,具有较高的准确性和特异性,重复性好,并显示较好灵活性潜能,为今后研制“个性化”随机组合食物品种的检测试剂盒奠定基础。     

化学发光免疫分析测验题

{j0牺殓题(第端套题,单选题}1.物理发光物质有A.萤火虫荧光素 B.鲁米诺C.吖啶酯 D.邻苯三酚E.草酸2.化学发光剂有A.萤火虫荧光素B.鲁米诺C.细菌荧光素 D.三联吡啶钌E.生物素化酶3.电化学发光剂有A.萤火虫荧光素 B.鲁米诺C.吖啶酯 D.三联吡啶钌E.细菌荧光素4.化学发光剂的标记有A.间接标记抗体B.间接标记抗原C.直接标记抗原或抗体D.只能标记酶 E.标记生物素5.化学发光酶免疫分析A.标记物为单一的化学发光剂B.化学发光酶免疫测定底物是酶C.化学发光酶免疫测定的底物是 化学发光剂D.化学发光酶免疫测定靠发光基 质的转移判读结果E.是…     

AIB1蛋白双单克隆抗体夹心ELISA检测法的建立及初步应用

目的 建立双单克隆抗体夹心ELISA方法检测血清中AIB1的水平,探讨其在AIB1蛋白检测中的应用价值.方法 应用抗AIB1-C单克隆抗体4B9F12作为固相抗体,Biotin-1A2E1作为标记抗体,ELISA双抗体夹心法检测AIB1.构建及优化的内容包括:最适包被浓度、最适包被缓冲液、生物素标记抗体工作的浓度;鉴定的指标包括:敏感性、特异性、稳定性等.结果 使用0.05 mo·L-1碳酸盐缓冲液(pH9.6)为包被缓冲液,包被抗体4B9F12工作浓度为10μg·mL-1,Biotin-1A2E1工作浓度选择1∶500;采用双抗体夹心法检测外周血中AIB1的特异性和敏感性均较高.结论 抗AIB1双抗体夹心ELISA方案的构建、鉴定达到了预期目的 ,为临床研究奠定了基础.     

双抗原夹心酶联免疫法检测抗白细胞介素-3的抗体

目的 :建立一种多用途、快速简便和易行的检测抗白细胞介素 3(IL 3)抗体的酶联免疫检测方法。方法 :以高纯度的基因工程人白细胞介素 3(rhIL 3)包被酶标板 ,以辣根过氧化物酶标记rhIL 3,建立了检测抗rhIL 3抗体的一步法双抗原夹心法。结果 :特异性 :与相似的蛋白分子 (其它细胞因子抗体 )无交叉反应 ,实验动物和人的正常血清反应呈阴性。灵敏度 :最低检出限为抗IL 3的单抗 5ng/ml。精密性 :组间和组内变异系数均 <1 2 %。应用于rhIL 3长期毒性实验取得良好的检测效果。结论 :此法特异性强、灵敏度高、方法稳定、操作简便 ,与其它细胞因子的单抗无交叉反应 ,能在同一条件下检测不同种属动物血清中的IL 3抗体 ,用于IL 3长期毒性实验等明显优于间接酶联免疫法。     

泰它西普免疫原性分析方法建立及验证

目的:建立桥式酶联免疫吸附法测定食蟹猴血清中抗药抗体(anti-drug antibody, ADA)和竞争酶联免疫吸附法测定中和抗体(neutralizing antibody, NAb),并进行方法学验证。方法:桥式酶联免疫吸附法在96孔板预包被泰它西普(代号：RC18),与待测样品中的抗RC18抗体结合形成复合物,依次加入生物素化的RC18(Biotin-RC18)、辣根过氧化物酶标记链霉亲和素(SA-HRP)和四甲基联苯胺底物(TMB)显色,终止反应后在酶标仪450 nm/630 nm波长处读取吸收度。竞争酶联免疫吸附法在96孔板预包被B细胞激活因子或增殖诱导配体蛋白,加入与Biotin-RC18预混合的样品,形成B细胞激活因子或增殖诱导配体-抗RC18抗体-Biotin-RC18三者的复合物,依次加入SA-HRP和TMB显色,终止反应后在酶标仪上读取吸收度。结果:桥式酶联免疫吸附法线性范围的精密度≤12.32%,灵敏度为50 ng·mL^-1,筛选临界阈值为0.937,确证临界阈值为23.62%。竞争酶联免疫吸附法方法线性范围的精密度≤20%,灵敏度为31...     

脑脊液中IgG检测方法的建立及临床应用

目的建立一种稳定的检测脑脊液IgG的方法,为化脓性脑膜炎(化脑)及乙型病毒性脑膜炎(乙脑)的临床诊断和鉴别诊断提供一定的依据.方法以马抗人IgG抗体作为包被抗体,以酶标兔抗人IgG抗体作为检测抗体建立测定IgG的双抗体夹心.ELISA,并对该方法的线性、灵敏度、精密度及回收实验进行评价.同时,用该方法检测了化脑及乙脑患者脑脊液标本,并与正常人进行对照.结果本法测定的IgG浓度在20～320 ng/ml范围内呈良好线性关系,灵敏度高,批内和批间平均变异系数(CV)分别为6.8%和7.56%.临床标本检测结果表明正常、化脑及乙脑的脑脊液之间IgG含量均有显著性差异.结论本方法脑脊液IgG测定线性好,重复性好,对临床诊断化脑及乙脑有一定的参考价值.     

间接ELISA测定血清中RI含量方法的建立

目的：建立检测血清中核糖核酸酶抑制因子（Ribonuclease Inhibitor，RI）含量的问：陵酶联免疫吸附法（EUSA），并分析该方法的特异性和敏感性。方法：用血清样品包被酶标板，兔抗人RI抗体为一抗，辣根过氧化物酶标记的羊抗兔抗体为二抗，建立血清RI定量检测的间接EUSA法。结果：所建立的用于血清中RI含量检测的间接ELISA方法特异性好．灵敏度高。结论：间接ELISA法可以用于测定血清中的RI抗原含量，具有良好的灵敏度和稳定性，能够有效的反映出人血清中的RI表达情况。     

牛奶过敏患者血清特异性抗体检测方法构建

目的:建立双抗原夹心酶联免疫法检测疑似牛奶过敏患者血清特异性抗体。方法:将4种牛奶过敏原P1组分、酪蛋白、β-乳球蛋白、α-乳白蛋白按质量比3:1:4:2混合作为包被抗原制备酶标反应板;同时4种成分分别标记辣根过氧化物酶制备酶标记抗原,经棋盘滴定确定酶标抗体浓度并最终建立双抗原夹心酶联免疫法检测牛奶特异性抗体。以阴性对照在450nm波长处吸光度(A450)的2.1倍为临界点判定阴、阳性结果,并以德国MEDIWISS酶免疫印记检测试剂检测结果为参比标准计算灵敏度与特异度。结果:本文建立的双抗原夹心酶联免疫法批间精密度为5.8%～13.6%,批内精密度为3.7%～11.3%。与参比方法比对,灵敏度为91.7%,特异度为94%,准确度为93.3%。结论:本文建立的双抗原夹心酶联免疫法可检测血清牛奶特异性抗体,用于牛奶过敏患者的体外诊断。     

间接抗体夹心酶联免疫吸附法测定人红细胞生成素(EPO)体外活性

目的　介绍一种经济、实用的红细胞生成素(EPO)体外活性检测方法—间接抗体夹心酶联免疫吸附法。方法　采用捕捉抗体(单克隆抗体:鼠抗EPO)包被酶标板,然后用封闭液封闭酶标板,加入稀释成合适浓度的EPO样品进行温育,再加入EPO第二抗体(多克隆抗体:兔抗EPO)温育,然后加入酶连抗体(HRP -羊抗兔)温育,最后加入底物缓冲液显色,用酶标仪读数,计算出EPO体外效价。结果　该方法重复性好(CV <5 %),与ELISA试剂盒比较,两法测定的结果相符( P >0 . 5 )。结论　该方法是一种经济、实用、准确、可靠的红细胞生成素(EPO)体外活性检测方法,与EPOELISA试剂盒比较,大大降低了实验费用