脐血单个核细胞体外扩增的实验研究

目的 :采用集落刺激因子体外扩增脐血单个核细胞 (CBMC) ,研究集落刺激因子对CBMC增殖活性的影响。方法 :用RPMI1 640培养液加入集落刺激因子IL - 3、SCF、GM -CSF及其组合 ,体外扩增CBMC ,健康成人外周血单个核细胞 (PBMC)作为对照组。结果 :加入不同集落刺激因子体外培养CBMC与PBMC后 ,增殖活性均有不同程度的升高 ,以加入IL - 3、SCF、GM -CSF组最为显著 ;CBMC的增殖活性与PBMC比较有显著性差异 (P<0 .0 5)。结论 :集落刺激因子可在体外扩增CBMC ,IL - 3、SCF、GM -CSF之间有明显的协同作用 ;与PBMC相比 ,CBMC有更高的增殖潜能     

催乳素对体外单独培养的Graves病外周血单个核细胞活化及增殖影响的研究

目的 :研究催乳素 (PRL)对体外单独培养的Graves病 (GD)外周血单个核细胞的活化及增殖有无直接影响。方法 :提取 12例GD患者和 8例正常健康对照的外周血单个核细胞 ,单用含不同浓度羊催乳素或植物血凝素的培养液进行体外培养。并利用流式细胞技术等测定其表面CD2 5的表达 (反映活化状态 )或细胞内DNA含量以计算增殖指数 (反映增殖状态 )。结果 :GD患者和正常人的外周血单个核细胞经 12 .5 10 0 0ng/ml羊催乳素作用后 ,其CD4+ CD2 5 + 细胞百分率、CD8+ CD2 5 + 细胞百分率及增殖指数均无明显变化 (P均 >0 .0 5 )。所设阳性对照植物血凝素 (5 μg/ml)能直接刺激这两种来源的单个核细胞发生活化、增殖 ,使上述各项指标均显著增高 (P均<0 .0 1)。结论 :催乳素不能刺激体外单独培养的GD外周血单个核细胞发生活化及增殖     

外周血单个核细胞向平滑肌祖细胞分化的体外培养

目的 探讨外周血单个核细胞向平滑肌祖细胞分化的培养方法. 方法 分离人外周血单个核细胞,接种于加有牛垂体提取物的M-199培养基中,第8 天予以血小板源性生长因子-BB(PDGF-BB)刺激促进细胞分化,刺激15 d后运用RT-PCR、免疫荧光法和Western blot检测平滑肌细胞特异性α-辅肌动蛋白(α-SMA)、平滑肌肌球蛋白重链(SM MHC)、调宁蛋白(Calponin)、CD34、Tie-2 和Flk-1的表达, 并以流式细胞技术检测培养细胞α-SMA阳性表达率,对培养细胞进行鉴定. 结果 在PDGF-BB刺激培养15 d后细胞表达平滑肌细胞的标记α-SMA、SM MHC和Calponin,同时表达干细胞的标记CD34,并发现其Flk-1阳性表达,Tie-2阴性表达.PDGF-BB刺激后细胞α-SMA阳性表达率为 (90.57±5.63)%,与阴性对照细胞之间有统计学差异(P＜0.05). 结论 外周血单个核细胞分离后第8天,使用PDGF-BB刺激可使其向平滑肌前体细胞分化,提出了一种新的外周血单个核细胞向平滑肌细胞分化的培养方法.     

外周血单个核细胞向平滑肌祖细胞分化的体外培养

目的探讨外周血单个核细胞向平滑肌祖细胞分化的培养方法。方法分离人外周血单个核细胞,接种于加有牛垂体提取物的M-199培养基中,第8天予以血小板源性生长因子-BB(PDGF-BB)刺激促进细胞分化,刺激15 d后运用RT-PCR、免疫荧光法和Western blot检测平滑肌细胞特异性α-辅肌动蛋白(α-SMA)、平滑肌肌球蛋白重链(SMMHC)、调宁蛋白(Calponin)、CD34、Tie-2和Flk-1的表达,并以流式细胞技术检测培养细胞α-SMA阳性表达率,对培养细胞进行鉴定。结果在PDGF-BB刺激培养15 d后细胞表达平滑肌细胞的标记α-SMA、SM MHC和Calponin,同时表达干细胞的标记CD34,并发现其Flk-1阳性表达,Tie-2阴性表达。PDGF-BB刺激后细胞α-SMA阳性表达率为(90.57±5.63)%,与阴性对照细胞之间有统计学差异(P<0.05)。结论外周血单个核细胞分离后第8天,使用PDGF-BB刺激可使其向平滑肌前体细胞分化,提出了一种新的外周血单个核细胞向平滑肌细胞分化的培养方法。     

体外人类单个核细胞表达降钙素原

降钙素原(PCT)为降钙素的前体物质，已证实其在系统性细菌感染中的诊断价值，但目前对于其体内的主要产生部位不明，由于外周血单个核细胞(PBMC)是细菌性感染的重要炎性细胞，故本文主要探讨了人类PBMC表达PCT的情况以及各种炎性因子对其表达的影响。通过逆转录一多聚酶联反应(PT-PCR)发现：人类PBMC是产生PCT的主要场所之一，细菌脂多糖(LPS)、IL-1β、IL-2、IL-6以及TNF-α可显著增强PBMC表达PCT的mRNA，而IL-10则无明显的影响。     

乙肝病毒感染时外周血单个核细胞中HBV DNA的变化

本文用斑点杂交法检测51例HBsAg阳性HBV感染病人的外周血单个核细胞(PBMC)HBVDNA,其中19例阳性,阳性率37.3％;同时检测病人血清HBV DNA,51例中18例阳性,阳性率31.4％。单个核细胞HBV DNA阳性而血清HBV DNA阴性者12例,为23.5％。说明用斑点杂交法检测HBV感染病人的外周血单个核细胞HBV DNA,对血清HBV DNA阴性肝炎病人的临床观察有一定的参考价值。     

HBV感染者外周血单个核细胞中HBV DNA的检测

目的；研究乙型肝炎毒（ＨＢＶ）感染者外周血单个核细胞（ＰＢＭＣｓ）中ＨＢＶ ＤＮＡ的存在及其与血清ＨＢＶ ＤＮＡ的关系。方法：用ＰＣＲ法及斑点杂交法对５０例ＨＢｓＡｇ（＋）的感染者ＰＢＭＣｓ ＨＢＶ ＤＮＡ进行检测。同时用ＰＣＲ法检测感染者血清ＨＢＶ ＤＮＡ。结果：ＰＣＲ法和斑点杂交法分别从３５份和３２份ＰＣＭＣｓ检出率均为６０．０％左右。ＰＣＲ法检测血清ＨＢＶ ＤＮＡ阳性率为３６．０％。结论：Ｈ     

SLE患者外周血单个核细胞凋亡的研究

目的 探讨ＳＬＥ患者外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）凋亡率异常是否与其自身抗体产生高低有关。方法 采用碘化丙锭（ＰＩ）染色法,在流式细胞仪下宣检测２０例ＳＬＥ患者及１０名正常人ＰＢＭＣ体外凋亡情况,同时观察了ＳＬＥ患者自身抗体的表达及与凋亡率的关系。结果 ＳＬＥ患者ＰＢＭＣ体外培养０、２４、４８、７２ｈ后凋亡率较正常人明显增高（Ｐ〈０．０５）,且活动期ＳＬＥ高于非活动期（Ｐ〈０．０５）。ＳＬＥ患者自身     

尼古丁对体外培养人外周血单个核细胞分泌TNF的影响

OBJECTIVE: To observe the effect of nicotine on the secretion of TNF of human peripheral blood mononuclear cells (PBMC) in vitro, and explore the possible mechanism of the high level of TNF caused by smoking. METHODS: Twenty-one non-smokers and 19 smokers were studied. The PBMCs isolated from each volunteer's blood sample were distributed to three groups, and cultured for 72 hours in supplemented RMPI 1640 alone or in supplemented RPMI 1640 containing 50 ng.ml-1 nicotine or 500 ng.ml-1 nicotine respectively. The level of TNF in supernate was quantified with the immuno-radioassay, and PBMC proliferation was observed. RESULTS: The level of TNF spontaneously secreted by PBMCs in smokers was significantly higher than that in non-smokers (P < 0.05). When the concentrations of nicotine were 50 ng.ml-1 and 500 ng.ml-1, the level of TNF increased significantly in non-smokers (P < 0.05, P < 0.01). In smokers, the level of TNF significantly increased when the concentration of nicotine was 50 ng.ml-1; however, the level of TNF significantly decreased (P < 0.05), and the proliferation of PBMCs was inhibited when the concentration of nicotine was 500 ng.ml-1 (P < 0.05, P < 0.05). The level of TNF was positively correlated to the multiple of PBMC proliferation (r = 0.93, P < 0.05). The linear regression equation was Y = 2.913X - 2.955. CONCLUSION: Nicotine can induce PBMCs to secrete more TNF, and the magnitude of the effect is strongly related to the dosage of nicotine, but a great dose of nicotine will inhibit the production of TNF.     

乙型肝炎患者外周血单个核细胞HBV cccDNA含量的检测及其临床意义

[目的]采用实时荧光定量PCR的方法检测乙型肝炎患者外周血单个核细胞中HBV cccDNA 的含量,并探讨其临床意义.[方法] 应用实时荧光PCR(RT-PCR)方法对随机选取的乙型肝炎患者100例和1例追踪治疗的乙肝患者的血清HBV DNA 含量和外周血单个核细胞中HBV cccDNA 的含量进行检测;对已确诊的慢性乙肝患者40例,肝硬化患者30例外周血单个核细胞中HBV cccDNA 的含量进行检测.[结果] 100例乙型肝炎患者中,HBV DNA含量<5×102 copies/mL有57例,HBV cccDNA 的含量均<5×102 copies/mL;HBV DNA含量>5×102 copies/mL 有43例,HBV cccDNA 的含量>5×102 copies/mL 有22例;HBV DNA含量>1×103 copies/mL的患者有17例,在这些患者中HBV cccDNA 的含量>5×102 copies/mL者为13例,两者之间比例经χ2检验,差异无显著性意义,P>0.05;肝硬化患者HBV cccDNA 阳性率(>5×102 copies/mL)为67.7%,远远高于慢性乙肝患者的42.5%和随机乙肝人群的22.0%.各组间患者比例经χ2检验,差异有显著性意义,P<0.05.[结论] 乙型肝炎患者进行外周血单个核细胞中HBV cccDNA的检测,对于抗病毒治疗效果的监测和预后判断都重要的临床意义.     

外周血单个核细胞穿孔素活性与慢性乙肝关系的探讨

目的 探讨外周血单个核细胞(PBMC)穿孔素活性与不同程度慢性乙肝肝损害、HBV复制程度之间的关系。方法 将5l例慢性乙肝按肝损害程度分为轻度组(22例)和中重度组(29例)；按HBVDNA测定分为HBVDNA( )组(32例)和HBVDNA(-)组(19例)，另以15例健康者为对照组，采用溶血法测定各组PBMC穿孔素活性并进行比较。结果 轻度组PBMC穿孔素活性低于对照组，中重度组PBMC穿孔素活性高于对照组，均有显著性差异(P＜0．05)。HBV-DNA( )组PBMC穿孔素活性高于对照组，有显著性差异(P＜0．05)；HBV-DNA(-)组与对照组相比无显著性差异(P＞0．05)。结论 PBMC穿孔素活性与慢性乙肝肝损害有一定关系；与乙肝病毒复制有一定关系。     

丙型肝炎病毒感染外周血单个核细胞对丙型肝炎的影响

为了研究丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）感染外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）对丙型肝炎的影响,运用非同位素原位杂交法（ＮＩＳＨ）和链酶亲和素－生物素（ＳＡＢＣ）法分别检测２０例慢性丙型肝炎患者ＰＢＭＣ中的ＨＣＶ－ＲＮＡ及其Ｔ淋巴细胞亚群,同时检测这些患者的肝功能指标。结果显示８例（４０．０％）ＨＣＶ患者的ＰＢＭＣ中的ＨＣＶ－ＲＮＡ呈阳性结果。ＨＣＶ－ＲＮＡ呈散在颗粒状或弥漫分布,主要位于胞浆中。ＨＣＶ－ＲＮＡ阳     

慢性粒细胞白血病患者外周血单个核细胞诱生树突细胞的体外研究

目的 :体外诱生慢性粒细胞白血病 ( CML)患者外周血单个核细胞 ( PBMNCs)为树突细胞( DCs)。方法 :CML患者 PBMNCs在含 GM- CSF、IL- 4、TNF- α的培养液中培养 1 4d,倒置显微镜、电镜下观察细胞形态 ,流式细胞仪检测细胞的表面标志 ,免疫磁珠 ( MACS)富集所诱生的 DCs,用D- FISH、RT- PCR方法检测 DCs的白血病源性。利用 MTT法检测所诱生 DCs刺激 T细胞增殖能力。结果 :所诱生的细胞高表达 CD80 、CD86、CD1a、HLA- DR,电镜下细胞表面有丰富突起 ,细胞浆内有丰富线粒体 ,D- FISH、RT- PCR检测所诱生的 DCs具有 bcr/abl融合基因。CML DCs具有刺激 T细胞增殖能力。结论 :体外利用 CML患者 PBMNCs成功诱导生成了来源于 CML细胞的 DCs( CML DCs)。     

健康人外周血单个核细胞体外诱导分化内皮祖细胞

[目的]将外周血单个核细胞诱导分化为内皮祖细胞,为冠心病缺血心肌血管新生提供理想的种子细胞来源.[方法]收集健康成人外周血,通过Ficoll离心法获得外周血单个核细胞,置于纤维连接蛋白预衬的EGM-2培养基中加以诱导,并通过相差显微镜和免疫荧光标记等方法对诱导分化后的细胞进行形态学观察和鉴定.[结果]在上述诱导分化条件下,外周血单个核细胞分化成为内皮祖细胞,倒置荧光微镜下呈典形的"纺锤样"梭形细胞,ac-LDL吞噬及lectin抗体荧光标记双阳性,FLK-1和VWF免疫荧光抗体染色均为阳性.[结论]成人外周血单个核细胞在特定培养条件下可诱导分化成为内皮祖细胞,内皮祖细胞可作为冠心病缺血心肌血管新生的种子细胞.     

同一HBV感染者外周血单个核细胞与肝组织中HBV DNA

用聚合酶链反应(PCR)及Southern印迹杂交检测了16例慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染者外周血单个核细胞(PBMCs)及肝组织中HBV DNA.有13例同时在PBMCs及肝组织中检出HBV DNA,1例仅在PBMCs中检出,1例只在肝组织中检出。结果表明,在慢性HBV感染过程中PBMCs可同时被感染。     

HIV/AIDS患者抗反转录治疗前后外周血单个核细胞中HIV-DNA检测临床意义

目的 讨论HIV/AIDS患者抗反转录治疗(ART)前和治疗48周时外周血单个核细胞(PBMC)中HIV-DNA检测的临床意义。方法 选择准备ART的HIV/AIDS患者50例,在ART前和ART 48周时采集患者外周血分别进行HIV1-RNA、HIV1 DNA、CD4⁺、CD8⁺及CD4⁺/ CD8⁺检测,分析ART前后各指标间的变化,分析ART前HIV1 RNA与HIV1 DNA间的关系。结果 50例HIV/AIDS患者ART前和ART 48周时HIV1-DNA含量分别为3.29(2.41,3.72),2.76(1.98,3.28)Lgcopies/10⁶PBMC,差异有统计学意义(Z=-6.758,P<0.01),ART前HIV1-RNA含量4.28(4.05,4.95)LgIU/ml,ART 48周时HIV1-RNA含量均<1.70LgIU/ml。HIV1-DNA与HIV1-RNA在治疗前后含量均呈正相关(r=0.627,0.415,P均<0.01)。ART前外周血T淋巴细胞CD4⁺计数及CD4⁺/CD8⁺值明显低于ART后,差异有统计学意义(t=5.728,6.254,P<0.01),ART后CD8⁺有所降低但与ART前比较,差异无统计学意义(t=-0.209,P>0.05)。ART前后外周血CD4⁺计数与HIV1-DNA含量呈负相关(r=-0.396,P<0.05)。结论 ART过程HIV/AIDS患者PBMC中HIV1-DNA逐渐降低,与CD4⁺T淋巴细胞和HIV1-RNA存在一定相关性,HIV1-DNA可作为ART治疗过程中观察疗效的新指标。     

急性肾炎患儿外周血单个核细胞NF-KB的表达

目的:探讨NF-KB在肾炎发生和发展中的作用。方法:采用MMLV-步法RT-PCR法,检测急性肾炎患儿疾病期外周血单个核细胞NF-KB的表达。结果:急性肾炎患儿外周血单个核细胞NF-KB表达高于正常对照组。结论:外周血单个核细胞NF-KB可作为肾炎发生时炎症反应指标。