庆大霉素对豚鼠前庭上皮IGF-1及其受体表达的影响

目的：研究庆大霉素对豚鼠前庭上皮胰岛素样生长因子-1（insulin-like growth factor-1，IGF-1）及其受体（insulin-like growth factor-1 receptor，EGF-1R）表达的影响，并探讨其生物学特性。方法：采用免疫组织细胞化学方法，以抗IGF-1及IGF-1R抗体为标记物，检测庆大霉素损伤后豚鼠前庭上皮自发修复期IGF-1及IGF-1R的表达变化和分布特点；采用Brdu体内标记和抗Brdu抗体免疫组化染色，检测庆大霉素损伤后豚鼠前庭上皮增殖的变化。结果：IGF-1及IGF-1R在正常成年豚鼠前庭上皮细胞中有低水平表达，庆大霉素损伤后，其表达增多。在1d组IGF-1及IGF-1R表达最强，其后逐渐减少。在正常对照组中无Brdu阳性细胞。各实验组均观察到Brdu阳性细胞，7d组最多。结论：庆大霉素损伤后，豚鼠前庭上皮IGF-1及IGF-1R表达增强，其时程变化与细胞增殖活动密切相关。IGF-1在豚鼠前庭上皮损伤后的细胞增殖中可能起重要信号转导作用。     

豚鼠前庭上皮扫描电镜观察

研究豚鼠前庭上皮的扫描电镜结构。方法：制作 豚鼠前庭扫描电镜标本,用Ｓ－５２０型扫描电镜观察。结果：前庭上皮由Ⅰ型、Ⅱ型毛细及支志细胞表有呈阶梯状排列的静纤毛及一根动纤毛,两种毛细胞大小,纤毛排列方式均不同相同。结论：正常豚鼠前庭毛细胞分为两型Ⅰ型毛细胞大,其静纤毛长,Ⅱ型毛细胞相对小,其静纤毛短。     

豚鼠发育过程前庭上皮ERK 1/2的表达

目的：检测胞外信号调控蛋白激酶1/2（extracellu-lar signal regulated kinase，ERK1/2）在豚鼠发育过程前庭上皮的表达和分布特点，并探讨其生物学特征及意义。方法：利用免疫组织化学的方法，以ERK1，ERK2抗体为标记物，检测发育期豚鼠前庭器中的表达情况及分布特点；利用West-ern bolt方法检测ERK1/2的活性变化。结果：ERK1/2可在豚鼠前庭上皮细胞中表达，随年龄增加而逐渐减少。ERK1/2的活性随年龄的增长而逐渐降低，且ERK2的活性高于ERK1。结论：正常豚鼠前庭上皮中有ERK1/2表达，其表达量及活性与细胞增殖、分化相一致，随发育过程而减少。     

豚鼠内耳前庭感觉毛细胞的分离

用机械分离法从豚鼠前庭感觉上皮中分离出不同种类的前庭感觉毛细胞（ＶＨＣ）。ＶＨＣ主要可分为Ⅰ型和Ⅱ型细胞。两种细胞形态虽有所差异，但一般均有四形或瓶形胞体，胞核位于细胞基部，胞颈和纤毛变化较大。细胞的活性可通过１％中性红染色鉴定，发现在室温下，１ｈ内大约９０％以上的分离ＶＨＣ可维持其正常形态和活性。并参照对外毛细胞形态的研究提出活性ＶＨＣ的鉴别标准。此项工作为进一步研究ＶＨＣ的感觉机制和某些疾病的发生机理打下了基础。     

豚鼠一侧前庭损毁后前庭内侧核GFAP表达

目的 观察左侧迷路切除后前庭内侧核（MVN）胶质纤维酸性蛋白（GFAP）的表达变化。方法 左侧迷路切除后,不同存活时间行前庭内侧核GFAP二步法免疫组化染色。结果 一侧迷路切除（UL）后可诱导双侧MVN区星形胶质细胞GFAP免疫反应增强,且术侧大于未损侧,GFAP反应在术后10h已较正常对照增强,20h强于10h,此后40h至20dGFAP反应处于下降趋势,结论 UL后可诱导MVN区胶质细胞GFAP免疫反应增强,初级前庭传入或中枢前庭神经元的静息放电降低可能与胶质细胞反应有关,但其在前庭代偿中的作用尚有待研究。     

人体甲状腺癌组织中蛋白激酶C和蛋白激酶A活性水平的测定

目的研究蛋白激酶C(protein KinaseC,PKC)和蛋白激酶A(protein kinaseA,PKA)在甲状腺癌发生过程中的作用.方法利用酶的放射分析方法测定手术切除经病理证实的18例甲状腺癌患者和17例甲状腺癌患者手术切除的肿瘤组织中PKC和PKA活性水平.结果甲状腺癌组织中胞膜和胞浆PKC活性分别为7.280±2.380和7.397±4.065,PKA活性水平为1.716±0.923.甲状腺癌组织中胞膜和胞浆PKC活性分别为0.515±0.676和0.347±0.332,PKA活性水平为0.646±0.324.胞浆部分PKC与PKA活性比值甲状腺癌组织为4.3;甲状腺癌组织为0.53.结论PKC与PKA均参入甲状腺癌细胞的增殖过程.     

氯胺酮雾化吸入对致敏豚鼠气道平滑肌蛋白激酶C活性的影响

目的:研究氯胺酮雾化吸入对致敏豚鼠气管平滑肌PKC活性的影响。方法:①10只雄性豚鼠用整体引喘法分别测定雾化吸入1%~5%氯胺酮10min后豚鼠气道反应性的变化。②40只雄性豚鼠随机分为正常组(N组)、哮喘组(A组)、3%和5%氯胺酮雾化吸入组(K1组和K2组,n=10)。A组、K1组和K2组均在激发哮喘发作后,分别给予0.9%NaCl、3%或5%氯胺酮雾化吸入10min。1周后,取所有豚鼠的气管测定PKC活性。结果:①2%~5%氯胺酮雾化吸入10min后有明显的气道舒张作用(P>0.05)。②气道平滑肌内PKC活性A组较N组明显升高(P<0.05)。K1和K2组气道平滑肌内PKC活性均比N组高,但较A组低(P<0.05),而K1组和K2组之间无明显区别。结论:①2%~5%氯胺酮雾化吸入5min以上有良好的平喘作用。②致敏豚鼠气管平滑肌的PKC活性较正常豚鼠明显增加。3%和5%氯胺酮雾化吸入对致敏豚鼠气道平滑肌的PKC活化有抑制作用。     

佛波酯对体外培养大鼠前庭上皮PKC表达的影响

目的 观察体外培养条件下蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)在佛波酯（phogrbol 12-myristate 13-acetate,PMA)诱导下大鼠前庭上皮的表达和分布特点。方法 取新生大鼠椭圆囊，建立体外前庭器官培养模型，采用免疫组织细胞化学的方法，以PKCβ，γ抗体为标记物，检测PMA诱导后前庭上皮PKCβ，γ的表达变化和分布特点。结果 PKCβ，γ在正常培养新生大鼠前庭上皮细胞的细胞膜及细胞质中有弱表达。PMA作用后，其表达逐渐增多，PKCβ1主要位于细胞膜，在30min时表达最强，其后逐渐减少，45min仍高于正常（P＜0．01）。PKCβ2不但位于细胞膜，而且在纤毛亦明显表达；PKCγ在PMA诱导后胞质表达增加。在毛细胞层和支持细胞层均有，主要位于毛细胞层。结论 体外前庭器官培养在PMA诱导后，PKC各亚型激活的形式及程度不同。     

脊髓损伤后蛋白激酶C在脊髓前角神经元的表达

蛋白激酶C(PKC)可能通过多种途径参与脑损伤后继发性损伤．PKC在大鼠脊髓中存在多种PKC同工酶，但PKC在损伤脊髓组织中分布及损伤后变化规律仍不清楚，本实验应用免疫组化定位及图像分析，以明确大鼠SCI后不同时相点PKC的分布变化规律，为进一步研究PKC与SCI的关系提供依据。     

碳酸锂对慢性应激抑郁模型大鼠海马蛋白激酶A和蛋白激酶C表达的影响

  目的 研究碳酸锂对慢性应激抑郁模型大鼠海马蛋白激酶A（PKA）和蛋白激酶C（PKC）表达的影响。方法 将大鼠随机分为抑郁模型组、碳酸锂组和对照组。模型组和碳酸锂组给予21 d的应激刺激,此期间对照组正常饲养,刺激期间碳酸锂组每天灌胃给予碳酸锂（60 mg/kg）,模型组和对照组每天灌胃给予等体积的生理盐水。应用open-field法和液体消耗实验进行行为学检测。采用Western blot检测各组大鼠海马PKA和PKC的表达情况。结果 应激后,模型组大鼠水平穿越格数、竖立次数、修饰次数和糖水消耗百分比均显著低于对照组,碳酸锂组水平穿越格数和糖水消耗百分比低于对照组（P0.05）。Western blot结果显示,模型组大鼠海马PKA和PKC的表达水平显著低于对照组（P0.05）。结论 碳酸锂可以逆转慢性应激抑郁模型大鼠海马中PKA和PKC表达的降低,碳酸锂对PKC表达的影响大于对PKA的影响。     

PKC信号传导通路对缺氧人视网膜色素上皮细胞表达VEGF的作用

目的 :探讨蛋白激酶C(PKC)信号传导通路对缺氧状态下培养的视网膜色素上皮 (retinalpigmentepithelium ,RPE)细胞表达VEGF的作用 .方法 :在缺氧状态下分别培养人RPE细胞 6 ,1 2和 2 4h ;将不同浓度的PKC激动剂佛波醇 1 2 豆蔻酰 1 3乙酸 (phorbol 1 2 myristate 1 3 acetate,PMA)及PKC抑制剂Chelerythrine分别加入人RPE细胞培养液 ,在缺氧状态下培养 2 4h .用免疫组化方法检测各组RPE细胞中VEGF的表达 ,经计算机图像处理 ,定量分析 .结果 :在缺氧状态下 ,RPE细胞对VEGF的表达较非缺氧组RPE细胞显著增加 (P <0 .0 1 ) ;较对照组 ,PMA可增强缺氧状态下RPE细胞VEGF的表达 (P <0 .0 1 ) ,Chelerythrine则减弱VEGF的表达 (P <0 .0 1 ) .结论 :缺氧诱导VEGF在RPE细胞中的表达 ,其信号传导途径部分是通过PKC通路实现的     

哮喘豚鼠肺组织PKC的表达及对TXA2释放的影响

目的：探讨蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）在哮喘发病中的作用。方法：采用卵蛋白雾化吸入致敏哮喘模型，在诱发哮喘２４ｈ后放射性同位素标记方法测定哮喘豚鼠肺组织总ＰＫＣ活性及膜活性变化，采用免疫组织化学的方法检测肺组织ＰＫＣ的表达，体外检测ＰＫＣ活化剂ＰＭＡ和抑制剂Ｈ－７对肺组织血栓烷Ａ２（ＴＸＡ２）释放的影响。结果：①哮喘组肺组织ＰＫＣ活性显著增加；②ＰＭＡ引起了肺组织ＴＸＡ２的释放的增加，而Ｈ－７则抑制了ＰＭ     

Dunkin Hartley白化豚鼠和Hartley花色豚鼠高脂造模以及降脂药效学的比较

目的 比较分析Dunkin Hartley白化豚鼠与Hartley花色豚鼠在构建高脂血症模型以及评价降脂药效学方面的差异,为高脂血症模型建立时豚鼠的品种选择提供参考。方法 选取5周龄的白化豚鼠和花色豚鼠测定基础血脂水平,具体包括总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)和低密度脂蛋白(LDL-C)。随后分别随机分为正常组(12只)和高脂模型组(24只),正常组饲喂普通饲料,高脂模型组饲喂高脂饲料以构建高脂血症模型;饲喂4周后,同上测定血脂水平。进一步将高脂模型组随机分为匹伐他汀钙组(12只)和溶媒对照组(12只),匹伐他汀钙组每天灌胃给予匹伐他汀钙(1mg/kg),溶媒对照组每天灌胃给予同体积的溶媒,持续给药4周,并同步饲喂高脂饲料;给药结束后,同上测定血脂水平。结果 当给予普通饲料喂养时,白化豚鼠血脂较为稳定,随周龄增长没有显著变化,而花色豚鼠的TC和LDL-C在9周龄后才比较稳定。当给予高脂饲料喂养时,白化豚鼠的TC、TG和LDL-C在造模的4周时间内迅速上升,且增幅显著大于花色豚鼠,HDL-C与花色豚鼠的变化幅度相似。运用模型组豚鼠,进行降脂药效学的考察,匹伐他汀钙在白化豚鼠高脂血症模型中降脂(TC、TG和LDL-C)幅度更大、升高HDL-C的作用更显著。结论 在选用正常豚鼠评价降脂作用时,降TG或升HDL-C类药物宜选用5周龄之后的白化豚鼠,降TC或LDL-C类药物宜选用9周龄之后的花色豚鼠;在选用高脂血症豚鼠模型评价降脂作用时,白化豚鼠较花色豚鼠在造模后的血脂水平更加紊乱,且对降脂药物的敏感程度更高,故可作为构建高脂血症模型和评价降脂药效学研究较佳的实验动物。     

沙棘浓缩果汁中VC与晶体VC对豚鼠生长发育和治疗VC缺乏症的效果观察

研究了沙棘浓缩果汁中ＶＣ与晶体ＶＣ对豚鼠生长发育的影响。结果表明：沙棘浓缩果汁与晶体ＶＣ均可促进小动物的生长发育并可治疗ＶＣ缺乏症。沙棘汁的作用略优于同等剂量的晶体ＶＣ     

通鼻胶囊对豚鼠变态反应性鼻炎的抑制作用

[目的]探讨通鼻胶囊对豚鼠变态反应性鼻炎的抑制作用.[方法]给予2,4-二异氰酸甲苯酯橄榄油溶液制备豚鼠变态反应性鼻炎模型,灌胃给予通鼻胶囊,取胸腺及脾脏称其质重,鼻黏膜行光学显微镜及电子显微镜观察.[结果]通鼻胶囊明显抑制变态反应性鼻炎豚鼠胸腺增生,对脾脏质量无明显影响,使豚鼠鼻黏膜的组织结构及超微病理形态基本恢复正常.[结论]通鼻胶囊对豚鼠变态反应性鼻炎有一定的抑制作用.     

自身免疫性感音神经性聋豚鼠的子代内耳生理功能研究

目的 :观察自身免疫性感音神经性聋 (ASHL)母豚鼠所产子代内耳生理功能的变化 ,探讨针对内耳的自身免疫因素对子代内耳生理功能的影响及其改变特点。方法 :同种内耳抗原 (CIEAg)持续免疫孕豚鼠 ,采用耳蜗电图 (记录cAP、CM )和眼震电图仪 (记录自发性眼震和冷热空气试验 )测试母鼠和子鼠的听觉和前庭功能 ,并检测血清特异性体液免疫反应。结果 :ASHL模型母豚鼠所产子鼠血清中发现有特异性抗体水平升高 ,部分 (3 /9)出现听觉损伤。非ASHL母鼠和对照组母鼠所产子代未见明显异常。结论 :ASHL雌鼠所产子代可出现感音神经性聋 ,其内耳损伤和功能障碍极可能与针对内耳组织的自身免疫反应 (尤其是体液免疫 )有关 ,从而提示内耳自身免疫因素可能为部分先天性非遗传性感音神经性聋的病因之一。