独活中6种香豆素类成分在Caco-2细胞单层模型中的吸收转运研究

目的研究独活中6种香豆素类成分(伞形花内酯、甲氧基欧芹素、二氢欧山芹素、二氢欧山芹醇乙酯、当归醇-A和当归醇-B)在人源结肠腺癌细胞系Caco-2细胞单层模型的吸收和转运.方法采用Caco-2细胞单层模型研究6种香豆素类化合物由绒毛面(AP侧)到基底面(BL侧)和从BL侧到AP侧两个方向的转运过程,采用高效液相色谱法测定其在AP和BL侧的含量,计算表观渗透系数(apparent permeability coefficient,Papp),并与阳性对照药普萘洛尔和阿替洛尔进行比较.采用ATP耗竭剂碘乙酰胺和MRP2抑制剂MK571添加法探讨当归醇-B的转运机制.结果6种香豆素类成分皆以被动扩散为主要方式被Caco-2细胞吸收、转运.伞形花内酯、甲氧基欧芹素、二氢欧山芹素、二氢欧山芹醇乙酯、当归醇-A和当归醇-B由AP侧到BL侧的Papp分别为(2.679±0.263)×10-5、(1.306±0.324)×10-5、(0.595±0.086)×10-6、(0.293±0.041)×10-6、(1.532±0.444)×10-5和(1.413±0.243)×10-5cm/s;由BL侧到AP侧的Papp分别为(3.381±0.410)×10-5、(0.898±0.134)×10-5、(0.510±0.183)×10-6、(0.222±0.025)×10-6、(1.203±0.280)×10-5和(0.754±0.092)×10-5cm/s.在本实验条件下,易吸收的阳性对照药普萘洛尔由AP侧到BL侧的Papp值为2.18×10-5cm/s,不易吸收的阳性对照药阿替洛尔由AP侧到BL侧的Papp值为2.77×10-7cm/s.上述6个香豆素类化合物中,伞形花内酯、甲氧基欧芹素、当归醇-A和当归醇-B的Papp值与普萘洛尔的Papp值在一个数量级;二氢欧山芹素和二氢欧山芹醇乙酯的Papp值在易吸收和不易吸收的阳性对照药之间.以EBSS代替HBSS作为转运介质,在碘乙酰胺和MK571存在下,当归醇-B从AP侧到BL侧和从BL侧到AP侧转运的Papp值与HBSS为转运介质的对照组相比皆没有统计学意义上的变化.回收率实验中,伞形花内酯的平均总回收率为(83.31±3.52)%、当归醇-A的平均总回收率为(77.39±7.38)%;甲氧基欧芹素、二氢欧山芹素和当归醇-B的平均总回收率在50%～65%之间,二氢欧山芹醇乙酯的平均总回收率低于10%.甲氧基欧芹素和二氢欧山芹素在Caco-2细胞中的蓄积率分别为(36.15±5.87)%和(53.90±4.39)%.结论6种香豆素皆以被动扩散为主要方式被Caco-2细胞单层吸收和转运;伞形花内酯、甲氧基欧芹素、当归醇-A和当归醇-B是良好吸收的化合物,二氢欧山芹素和二氢欧山芹醇乙酯的吸收性属中等.在Caco-2细胞中,甲氧基欧芹素和二氢欧山芹素有蓄积,二氢欧山芹醇乙酯具有代谢不稳定性.当归醇-B的转运不受转运介质EBSS(pH 6.5)的影响,碘乙酰胺或MK571的存在亦不影响当归醇-B在两个方向的转运.     

中药当归化学成分的分离及其内酯类成分结构的鉴定研究

目的探讨中药当归中的化学成分及当归中藁苯内酯类成分结构的鉴定方法,为当归药理作用提供参考。方法采用硅胶柱色谱及制备薄层色谱等方法进行化学成分的分离纯化,参照理化性质和波谱数据(1H-NMR、13C-NMR)鉴定当归中藁苯内酯类化合物的结构。结果 1分离得到15个化合物,分别鉴定为双藁苯内酯、4-(2羟基-1-甲氧乙基)-苯酚、4-(2-羟基-1-乙氧乙基)-苯酚、正丁基苯酞、反式阿魏酸、厚朴酚、黄芩苷、5-乙酰氧甲基糠醛、5-羟甲基糠醛、香草醛、阿魏酸、对甲基苯酚、发卡二醇、菠菜甾醇、异欧前胡素,其中4-(2羟基-1-甲氧乙基)-苯酚、4-(2-羟基-1-乙氧乙基)-苯酚、厚朴酚、菠菜甾醇化合物为当归植物中首次分离获得。2当归根乙醇提取物中用色谱方法分离到4个化合物,经光谱分析分别鉴定为(Z)-藁苯内酯,(Z)-6,7-反式-二羟基藁苯内酯,(Z)-6,7-环氧藁苯内酯和当归酸(Z)-藁苯内酯-11-醇酯,其中当归酸(Z)-藁苯内酯-11-醇酯为第一次在中药当归中获得。结论硅胶柱色谱和薄层色谱法分离中药当归的化学成分,操作方法简单,并通过波谱数据方法鉴定出中药当归中的五种新化合物,为深入研究当归化学成分的理化性质提供了科学参考依据。     

正交实验优化独活总香豆素的渗漉提取工艺

[目的] 研究独活总香豆素的最佳渗漉提取工艺。[方法] 采用L9(3⁴)正交实验法,考察乙醇浓度、料液比、浸泡时间对独活提取物中蛇床子素、二氢山芹醇乙酸酯、二氢山芹醇、二氢山芹醇当归酸酯含量的影响。[结果] 乙醇浓度为影响独活总香豆素渗漉提取效果的主要因素,最佳提取工艺为75%乙醇,料液比为1:8,浸泡8 h。[结论] 此方法可作为独活总香豆素的最佳渗漉提取工艺。     

中药杭白芷化学成分的研究

目的:研究杭白芷Angelica dahurica (Fisch. ex Hoffm.) Benth. et Hook. f. var. formosana (Boiss.) Shan et Yuan根的化学成分.方法:采用90%乙醇渗漉提取,所得提取物经硅胶柱色谱(石油醚-乙酸乙酯系统和氯仿-甲醇系统)梯度洗脱,Sephadex LH-20(氯仿-甲醇)及制备薄层等方法分离纯化,光谱法鉴定结构.结果:分离得到17个化合物,经鉴定分别为异欧前胡素(1)、欧前胡素(2)、佛手柑内酯(3)、别欧前胡素(4)、花椒毒酚(5)、8-甲氧基-5-羟基补骨脂素(6)、白当归素(7)、佛手酚(8)、白当归脑(9)、栓翅芹烯醇(10)、水合氧化前胡内酯(11)、广金钱草碱(12)、棕榈酸(13)、豆甾醇(14)、β-谷甾醇(15)、β-胡萝卜苷(16),蔗糖(17).结论:化合物8和12为首次从杭白芷中分离得到.化合物12为首次从伞形科植物中分离得到.所有香豆素化合物均为呋喃香豆素衍生物.     

10种苦竹属竹叶中香豆素类化合物的比较研究

采用高效液相色谱法,检测了10种苦竹属竹叶中东莨菪内酯、香豆素、补骨脂素、蛇床子素、东莨菪苷、花椒毒素、伞形酮、茴芹内酯、6,7-二甲氧基香豆素、欧前胡素、5,7-二甲氧基香豆素及茵芋苷等12种香豆素类化合物的含量,10种竹种包括苦竹、宜兴苦竹、川竹、斑苦竹、杭州苦竹、高舌苦竹、垂枝苦竹、衢县苦竹、丽水苦竹及实心苦竹。共检测出茵芋苷、东莨菪内酯、伞形酮、6,7-二甲氧基香豆素、香豆素和茴芹内酯6种香豆素类化合物,其含量在2.20~82.20 mg/kg之间,其中川竹叶东莨菪内酯含量最高。本研究为苦竹属竹叶中香豆素类化合物的开发利用提供了理论基础,为竹叶资源的化学利用及香豆素类化合物的研究提供参考。     

山矾的化学成分研究

目的 研究山矾Symplocos caudata的化学成分。方法 采用色谱法分离,用波谱方法进行结构鉴定。结果 从山矾根中分离鉴定了9个化合物,5个木脂素苷：(7R,8S)-二氢脱氢二松柏醇4-O-β-D-呋喃芹糖基-(1→6)-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(Ⅰ)、(7S,8R)-二氢脱氢二松柏醇4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(Ⅱ)、(7R,8S)-二氢脱氢二松柏醇9′-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(Ⅲ)、橙皮素B(Ⅳ)、(+)-落叶松脂素-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(Ⅴ);还有1个三萜,2个甾醇和1个芳香苷：白桦脂酸(Ⅵ)、Δ7-豆甾烯醇(Ⅶ)、菠甾醇(Ⅷ)和3,4,5-三甲氧基苯基-1-O-β-D-呋喃芹糖基-(1→6)-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(Ⅸ)。结论 化合物Ⅰ和Ⅸ外,其他化合物均为首次从山矾科植物中分离得到。     

重齿毛当归化学成分的研究

从重齿毛当归根及根茎中分离鉴定了１５个化合物，其中伞形香豆素、尤劳帕替醇、彼西丹醇、水合氧化前胡素、紫花前胡甙、阿彼期基姆素、胡苏卜甙、蔗糖、腺苷、２，３，４，９－四氢－１Ｈ－嘴啶并－（３，４－ｂ）吲哚－３－羟酸为首次从该植物中分得。     

HPLC指纹图谱及多成分定量的独活饮片质量评价研究

目的 建立独活饮片HPLC指纹图谱,并同时测定6种主要成分的含量,为其饮片炮制及质量控制提供依据。方法 HPLC-PDA法建立15批独活饮片的指纹图谱,结合聚类分析和偏最小二乘法判别分析（PLS-DA）,对15批独活饮片进行质量分析,测定二氢欧山芹素、当归醇A、当归醇G、二氢欧山芹醇乙酸酯、蛇床子素、二氢欧山芹醇当归酸酯6个成分的含量。结果 15批独活饮片相似度在0.858~0.986,共标定了21个共有峰,指认出7个色谱峰,分别为二氢欧山芹素、当归醇A、当归醇G、二氢欧山芹醇乙酸酯、蛇床子素、异欧前胡素、二氢欧山芹醇当归酸酯,其中二氢欧山芹素、当归醇A、当归醇G、二氢欧山芹醇乙酸酯、蛇床子素、二氢欧山芹醇当归酸酯6种成分的含量分别为0.013%~0.051%、0.553%~0.866%、0.222%~0.396%、0.032%~0.259%、0.327%~1.229%、0.108%~0.473%。聚类分析将15批饮片分为3类,PLS-DA法标记出饮片中的8个差异性成分。结论 建立的指纹图谱及多成分定量分析方法稳定可靠,能为独活饮片质量标准的建立提供理论指导。      

羌活胜湿汤物质基准多指标成分含量测定及量值传递分析

[目的] 建立经典名方羌活胜湿汤（QSD）物质基准的高效液相（HPLC）含量测定方法，进行量值传递分析。[方法] 制备15批QSD物质基准冻干粉，以羌活醇、二氢欧山芹醇当归酸酯、5-O-甲基维斯阿米醇苷、蔓荆子黄素、异欧前胡素、甘草酸铵为专属性指标成分，建立含量测定的检测方法，明确指标成分的含量范围、转移率范围及出膏率，对饮片到物质基准对应实物间的量值传递进行分析。[结果] 15批物质基准指标成分含量（转移率）分别为：羌活醇1.09~1.70 mg/g（10.17%~32.62%），二氢欧山芹醇当归酸酯0.06~0.20 mg/g（7.30%~10.85%），5-O-甲基维斯阿米醇苷1.27~2.81 mg/g（66.13%~92.13%），蔓荆子黄素0.09~0.59 mg/g（5.24%~13.37%），异欧前胡素0.03~0.28 mg/g（0.94%~1.92%），甘草酸铵12.74~33.78 mg/g（48.96%~62.56%）；出膏率为30.09%~34.35%。[结论] 采用HPLC法初步建立了经典名方QSD物质基准多指标成分含量测定方法，为经典名方QSD后续的研究及相关制剂研发的质量控制提供依据。     

沙生风毛菊的化学成分及其细胞毒活性

目的研究菊科风毛菊属植物沙生风毛菊Saussurea arenaria Maxim.的抗肿瘤活性成分。方法用柱色谱和重结晶等方法从沙生风毛菊乙醇提取物的醋酸乙酯部位中提取分离化学成分,通过光谱分析鉴定其结构,并检测其细胞毒活性。结果分离得到13个化合物,分别鉴定为:泽兰叶黄素(Ⅰ)、棕矢车菊素(Ⅱ)、( )-丁香脂素(Ⅲ)、d-松脂素(Ⅳ)、3S-( )-9-oxonerolidol(Ⅴ)、α-香树醇棕榈酸酯(Ⅵ)、羽扇豆醇棕榈酸酯(Ⅶ)、羽扇豆醇乙酸酯(Ⅷ)、α-香树醇(Ⅸ)、羽扇豆醇(Ⅹ)、伞形花内酯(Ⅺ)、对羟基苯甲醛(ⅩⅡ)和3-甲氧基-4-羟基-苯甲醛(ⅩⅢ)。化合物Ⅰ、Ⅱ对人结肠癌HCT8细胞和人肺癌A549细胞具有抑制作用,IC50值为8～14μg/mL。结论以上化合物均为首次从该植物中分离得到,泽兰叶黄素和棕矢车菊素是沙生风毛菊的主要活性成分。     

免疫毒素BDI—1—PEA的构建及其活性测定

目的 构建新型免疫毒素BDI-1-PEA,并进行抗入膀胱肿瘤活性的初步研究测定。方法 应用异型双功能连接剂N-琥珀酰胺酯3-（2-吡啶基二硫）丙酸（SPDP）将抗人膀胱肿瘤单克隆抗体（BDI-1）与铜绿假单胞菌外毒素（PEA）交联,制备出新型免疫毒素BDI-1-PEA。应用四甲基偶氮唑盐（MTT）法初步检测其对人膀胱肿瘤细胞系E-J的选择性杀伤活性。结果 BDI-1-PEA结合物具有高效靶向杀伤膀胱肿瘤细胞的能力,优于游离PEA或BDI-1的混合物。结论 新型免疫毒素BDI-1-PEA有较高的选择性抗人膀胱肿瘤细胞的活性,有较高的研究的应用价值。     

直接还原法标记^99mTc与抗人膀胱癌单克隆抗体BDI—1

通过２ － 巯基乙醇直接还原法将抗人膀胱癌单克隆抗体 Ｂ Ｄ Ｉ－ １ 与核素９９ｍ Ｔｃ 进行标记, 制备９９ ｍ Ｔｃ － Ｂ Ｄ Ｉ－ １ ． 优化条件后进行标记并进行一系列检测． 结果： 标记率为７２ ％ , 经 Ｓｅｐｈａｄｅｘ 柱纯化后标记抗体的放化纯度高于９５ ％ ; 标记抗体的免疫活性分数为８７ ％ , 与 Ｅ－ Ｊ细胞的结合率为９０ ％ ; 无毒、无菌、无热原． 结果表明： ２ － 巯基乙醇直接还原法将抗人膀胱癌单克隆抗体 Ｂ Ｄ Ｉ－ １ 与核素９９ ｍ Ｔｃ 进行标记为进一步进行膀胱癌的放射免疫显像诊断奠定了基础．     

人膀胱肿瘤细胞的荧光标记及其移植模型的整体荧光成像

目的对人膀胱移行细胞癌T24细胞进行荧光标记并建立其可在活体荧光成像系统下直接观察肿瘤生长及转移的简便、可靠的原位移植模型。方法以绿色荧光蛋白作为标记基因导入人类膀胱移行细胞癌T24细胞株中,经梯度浓度G418筛选获得稳定表达绿色荧光蛋白的细胞克隆并扩大培养,然后接种于裸小鼠膀胱壁内及颈部皮下,活体荧光成像系统直接观察肿瘤的生长与转移,并与常规石蜡切片苏木素-伊红(HE)染色比较。结果经绿色荧光蛋白标记的人膀胱肿瘤T24细胞在荧光显微镜下发出绿色荧光,并可在体内、外持续稳定表达。膀胱原位接种5×105个转染后的膀胱肿瘤细胞后1周即可在荧光成像系统下观察到下腹部新生膀胱肿瘤发出绿色荧光,2周后膀胱肿瘤可被触及,4周后经解剖可在荧光成像系统下观察到腹膜后及盆腔淋巴结等远处转移。结论绿色荧光蛋白能够在T24人膀胱肿瘤细胞中长期稳定表达,用绿色荧光蛋白标记的人膀胱肿瘤T24细胞建立的裸鼠原位移植模型为进一步研究膀胱肿瘤提供了一种简便、可行的新方法。     

银杏叶多糖在肿瘤放射、化学治疗中的增敏作用研究

目的：探索银杏叶多糖对鼻咽癌细胞、宫颈癌细胞放射和化学治疗敏感性的影响。方法：采用MTT比色法和台盼蓝拒染法,观察鼻咽癌细胞CNE-2、宫颈癌Hela细胞株经过药物作用后其放射敏感性的变化以及银杏叶多糖与多种抗癌药物合用后对鼻咽癌细胞、宫颈癌细胞的生长抑制的作用。结果：银杏叶多糖与CNE-2细胞、Hela细胞混合培养后进行照射,其作用效果与药物浓度存在良好的相关性。同时银杏叶多糖与环磷酰胺、卡铂、顺铂、5-Fu、盐酸阿霉素等药物合用,其抑制鼻咽癌细胞、宫颈癌细胞的生长能力强于各药物单独使用的抑制率。结论：银杏叶多糖可增加化疗药物对鼻咽癌细胞、宫颈癌细胞的治疗敏感性。是一种有希望的放射增敏剂。     

刺芒柄花素氮芥衍生物的合成及抗肿瘤活性

设计合成了一系列刺芒柄花素氮芥衍生物,采用MTT法评价目标化合物对HCT-116(人体结肠癌细胞系),HeLa(人体宫颈癌细胞系),DU-145(人体前列腺癌细胞系),SGC-7901(人体胃癌细胞系)和SH-SY5Y(人体神经母细胞癌细胞系)的抗肿瘤活性。其体外抗肿瘤活性实验表明,许多衍生物具有明显的抗肿瘤活性,而且大部分衍生物的抗肿瘤活性高于刺芒柄花素。     

苦参总黄酮体内外抗肿瘤作用实验研究

目的：考察苦参总黄酮（kushenflavonoids，KS—Fs）的体内外抗肿瘤作用。方法：采用甲基噻唑基四唑（methylthiazolyltetrazolium，MTT）比色法检测KS—Fs对多种肿瘤细胞株的生长抑制作用；构建S180肉瘤、H22肝癌和Lewis肺癌小鼠肿瘤模型和人非小细胞肺癌H460、食管癌Eca-109裸小鼠移植肿瘤模型，研究KS—Fs体内抗肿瘤作用；急性毒性试验考察KS—Fs的毒副作用。结果：KS—Fs和苦参酮（kurarinone，Kur）在体外有比苦参总碱（kushenalkaloids。KS—As）更强的细胞毒作用（半数抑制率：KSFs4．9～29．4〉g／ml，Kur2．0～13．1〉g／ml，KSAs〉200／lg／m1）。体内研究表明KSFs和Kur不仅能有效抑制小鼠H22肝癌、S180肉瘤、Lewis肺癌（瘤质量抑瘤率60％～80％），而且能显著抑制人非小细胞肺癌H460和人食管癌Eca109裸小鼠移植肿瘤的生长（瘤质量抑瘤率在41％～47％）。小鼠口服和静脉注射KS—Fs的最大耐受剂量分别大于2．8g／kg和750mg／kg，远远超过苦参碱（口服半数致死量为1．18g／kg），且无明显毒副作用。结论：研究表明KSFs或Kur是新颖的高效低毒的抗肿瘤候选药物。     

转染p16基因对人膀胱癌细胞周期的影响

目的 探讨p16基因对人膀胱癌细胞周期的影响。方法 通过脂质介导的基因转移技术将野生型P16基因导入人膀胱癌细胞系T24中,绘制细胞生长曲线,用流式细胞仪检测转染前后细胞周期的变化。结果 与对照组相比,转染p16基因的膀胱癌细胞生长速率降低,流式细胞仪检测显示S期及增殖指数明显降低。结论 p16基因能阻止肿瘤细胞进入S期,抑制肿瘤细胞DNA的合成,对膀胱癌细胞生长起明显抑制作用。     

人工虫草菌HK-1与天然虫草提取物的抗肿瘤活性比较

目的比较人工虫草菌HK-1与天然虫草提取物抗肿瘤活性及主要化学成分。方法人工虫草菌HK-1与天然虫草分别用石油醚、醋酸乙酯、乙醇和水提取。用MTT法测定各提取物对小鼠黑色素瘤细胞B16、人肝癌细胞HepG2、人乳腺癌细胞MCF-7和类前骨髓白血病细胞HL-60的细胞毒作用。对活性提取物进一步用动物模型检测其体内抗肿瘤作用。高效液相色谱法测定提取物中的化学成分。结果对于小鼠黑色素瘤细胞B16,所有虫草菌HK-1提取物的细胞毒作用均比天然虫草提取物的作用强,其中以醋酸乙酯提取物的细胞毒作用最强。虫草菌HK-1醋酸乙酯提取物对4种肿瘤细胞的细胞毒作用均比天然虫草醋酸乙酯提取物的作用强;体内实验也表明虫草菌HK-1醋酸乙酯提取物可以抑制肿瘤的生长。对提取物化学成分的分析表明麦角甾醇和腺苷可能是虫草菌HK-1中具有抗肿瘤活性的成分。结论人工虫草菌HK-1比天然虫草具有更强的抗肿瘤活性,是有开发潜力的抗肿瘤候选药物。     

抗癌药合用维拉帕米对体外人胃癌细胞的影响

目的　观察无毒剂量钙拮抗剂维拉帕米 (VPM)与小剂量化疗药阿霉素 (ADM)、 5 -氟尿嘧啶 (5 - FU)、顺铂(CDDP) ,合并用药前后对胃癌细胞影响实验研究 .方法　用MTT法观察其对体外培养的人胃癌细胞 SGC- 790 1,在 VPM与 ADM,5 - FU和 CDDP合并用药前后对细胞存活率的影响 ,并通过流式细胞仪检测细胞周期变化 ,透射电镜观察细胞超微结构变化 .结果　 VPM与 ADM,5 - FU和 CDDP合用与单独应用化疗药相比细胞存活率明显下降 ,ADM10 μg· L- 1细胞存活率 88% ,CDDP 10 0μg· L- 1 77% ,5 - FU 10 0μg· L- 15 6 % ,合并用药后细胞存活率分别下降至 49% ,47%和 2 9% .其增效倍数为单独用药的 2 .5 1～ 6 .31倍 (P<0 .0 0 1) ,细胞生长停止在 S期 ,S期数分数为 0 .48,抑制细胞有丝分裂及DNA合成 ,细胞超微结构显示 :细胞核固缩、空泡形成、微绒毛减少、线粒体及内质网肿胀 .结论　本研究表明无毒剂量VPM与小剂量化疗药合用 ,可获得化疗药单独用药相同疗效 ,VPM增加化疗药对肿瘤细胞的细胞毒作用 ,增加敏感性 ,减少药物副作用