IAg1对肾足细胞分泌VEGF、Col-Ⅳ的影响及复方积雪草2号的干预作用

目的:探讨复方积雪草2号对Ig1诱导的小鼠肾足细胞分泌血管内皮生长因子(VEGF)、Ⅳ型胶原(Col-Ⅳ)的影响.方法:用体外实验的方法,将小鼠肾足细胞经培养及传代,分成正常组、模型组、复方积雪草2号高、中、低剂量组、泼尼松龙组及缬沙坦7组,用IgA1诱导并分别予以上述各药进行干预24小时,用RT-PCR及ELISA法分剐检测VEGF、Col-Ⅳ的mRNA及其蛋白质的表达.结果:lgA1刺激可以使小鼠足细胞VEGF与Col-Ⅳ表达明显升高(P<0.05),泼尼松龙、缬沙坦和复方积雪草2号的干预均能明显降低小鼠足细胞VEGF的高表达,与模型组相比,P均<0.05;而且泼尼松龙和复方积雪草2号还能明显降低足细胞Col-Ⅳ的高表达,与模型组相比,P均<0.05.结论:复方积雪草2号可抑制肾足细胞由IgA1诱导造成的VEGF、Col-Ⅳ的高表达.     

IgA_1对肾足细胞分泌VEGF、Col-Ⅳ的影响及复方积雪草2号的干预作用

目的:探讨复方积雪草2号对IgA1诱导的小鼠肾足细胞分泌血管内皮生长因子(VEGF)、IV型胶原(Col-IV)的影响。方法:用体外实验的方法,将小鼠肾足细胞经培养及传代,分成正常组、模型组、复方积雪草2号高、中、低剂量组、泼尼松龙组及缬沙坦7组,用IgA1诱导并分别予以上述各药进行干预24小时,用RT-PCR及ELISA法分别检测VEGF、Col-IV的mRNA及其蛋白质的表达。结果:IgA1刺激可以使小鼠足细胞VEGF与Col-IV表达明显升高(P0.05),泼尼松龙、缬沙坦和复方积雪草2号的干预均能明显降低小鼠足细胞VEGF的高表达,与模型组相比,P均0.05;而且泼尼松龙和复方积雪草2号还能明显降低足细胞Col-IV的高表达,与模型组相比,P均0.05。结论:复方积雪草2号可抑制肾足细胞由IgA1诱导造成的VEGF、Col-IV的高表达。     

复方积雪草含药血清对肾小管上皮细胞表型保护作用的研究

目的：探讨复方积雪草含药血清对炎症介质诱导的肾小管上皮细胞表型转化的干预作用。方法：用IL-1β（10ng／m1）刺激原代小鼠肾小管上皮细胞，并用低、中、高浓度复方积雪草含药血清进行干预。应用MTT法测定复方积雪草含药血清的细胞毒性；Western-blottlng和逆转录-聚合酶链反应（RT-PER）分别测定细胞α-SMA、Vimentin蛋白和基因表达。结果：IL-1β能够诱导肾小管上皮细胞α-SMA、Vimentin蛋白质合成增加，基因表达亦显著上调；各个浓度的复方积雪草含药血清干预均可显著降低α-SMA、Vimentin蛋白质、基因的表达。结论：复方积雪草含药血清可抑制免疫炎症因子诱导的肾小管上皮细胞表型转化，从而在防治肾小管间质纤维化中发挥其作用。     

黄芪对AngⅡ诱导人足细胞分泌VEGF的影响

目的:观察AngII对足细胞分泌VEGF的影响及中药黄芪的保护作用.方法:用不同浓度的AngII刺激足细胞,观察其对足细胞VEGF的影响;并用不同剂量的黄芪注射液干预,运用RT-PCR方法检测足细胞VEGFmRNA表达的变化.结果:AngII可以剂量依赖性地刺激足细胞VEGFmRNA表达增高(P＜0.05),黄芪注射液可以剂量依赖性地降低AngII引起的足细胞VEGFmRNA表达增高(P＜0.05).结论:黄芪注射液可以通过抑制AngII引起的足细胞分泌VEGF的增高而减轻肾小球的损伤.     

复方积雪草2号治疗IgA肾病大鼠的实验研究

目的:观察复方积雪草2号对IgA肾病(IgAN)模型大鼠蛋白尿、血尿及肾脏病理改变的改善情况.方法:复合免疫法制造大鼠IgAN模型,分设正常对照,模型,缬沙坦,复方积雪草2号高剂量、中剂量、低剂量6组.观察各组大鼠尿红细胞、尿蛋白及肾组织病理变化.结果:①模型组血尿、蛋白尿较正常组明显增多,各治疗组的血尿、蛋白尿均较模型组改善(P＜0.05),其中复方积雪草2号改善血尿作用优于缬沙坦(P＜0.05).②免疫荧光镜下观察模型组大鼠肾小球系膜区有较强IgA荧光,光镜下系膜基底膜面密度明显增加,而毛细血管袢面密度明显减少;各治疗组系膜区内的IgA荧光强度、系膜增生情况均较模型组明显改善(P＜0.05).③电镜下模型组系膜细胞增生,基质明显增多,有足突融合,各治疗组足突融合情况均较模型组明显改善(P＜0.05).结论:复方积雪草2号能降低IgAN大鼠肾组织内IgA的沉积、减少系膜增生、减轻足细胞融合,从而改善IgAN大鼠的肾脏损害,减少蛋白尿、血尿.     

雷公藤多甙对IgA肾病患者外周血γδΤ细胞及其分泌TGF-β_1功能的影响

目的:观察雷公藤多甙对IgA肾病(IgAN)外周血γδΤ细胞及其表达TGF-β1功能的影响。方法:选择IgAN患者25例,运用流式细胞仪检测IgAN患者用药前后外周血γδΤ细胞比率并测定血清IgA水平;以抗TCRγδ单克隆抗体(mAb)固相法,体外选择性地扩增γδΤ细胞。在体外培养条件下,以抗CD3抗体刺激48小时后,用ELISA法测定体外培养体系中γδΤ细胞的TGF-β1表达。结果:雷公藤多甙能抑制IgAN患者外周血γδΤ细胞与血清IgA的升高,同时还能抑制γδΤ细胞的TGF-β1过度分泌。结论:降低IgAN外周血γδΤ细胞与血清IgA水平,同时抑制γδΤ分泌TGF-β1,是雷公藤多甙治疗IgAN的作用机理之一。     

复方积雪草含药血清对肾小管上皮细胞Activin A和TGF-β1 mRNA表达的调节作用

目的：探讨复方积雪草对炎症因子刺激下肾小管上皮细胞生物活性改变的干预作用。方法：实验用IL-β1刺激肾小管上皮细胞，用不同剂量复方积雪草含药血清进行干预。用福辛普利（血管紧张素转换酶拮抗剂）含药血清作为对照。TGF-β1、ActivinA和ActivinA受体ActR Ⅰ等基因表达采用逆转录-聚合酶链式反应（RT—PCR）方法。结果：IL-1β诱导可使肾小管上皮细胞TGF-β1和ActivinA的基因表达较正常对照细胞显著增高。各浓度复方积雪草含药血清干预均可下调ActivinA及其受体的基因表达，但仅高浓度复方积雪草含药血清对TGF-β1的基因表达有显著下调作用。结论：复方积雪草对肾小管上皮细胞ActivinA及其受体ActRⅠ的基因表达有下调作用，可能是其抑制炎症因子诱导的肾小管上皮细胞发生细胞活性改变，降低肾小管间质进一步炎症损伤的重要机制之一．福辛普利亦有相似作用．但机制可能不完全相同．     

复方积雪草对人肾系膜细胞清道夫受体表达的影响

目的:探讨复方积雪草对人肾小球系膜细胞(HMC)表达清道夫受体(SR)水平的影响.方法:应用流式细胞仪和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测体外培养人肾系膜细胞在佛波酯(PMA)刺激后复方积雪草对HMC SR的mRNA的表达.结果:体外培养的人肾系膜细胞在PMA刺激下能大量表达SR及其mRNA,且随着剂量的增加而增强,其基因序列测定结果与巨噬细胞所表达的SR完全相同.复方积雪草能抑制PMA诱导的人肾小球系膜细胞SR表达,且随着浓度和时间的增加而增强.结论:人肾系膜细胞具有表达SR的潜力,复方积雪草能明显抑制人肾系膜细胞SR在PMA诱导下的表达,这可能是其发挥治疗作用的机理之一.     

加减下瘀血汤对脂质诱导小鼠肾小球足细胞增殖影响的实验研究

目的：观察加减下瘀血汤对脂质诱导小鼠肾足细胞增殖的影响。方法：用不同浓度低密度脂蛋白(LDL)和氧化低密度脂蛋白(OX-LDL)诱导小鼠肾足细胞增殖,再用不同浓度加减下瘀血汤及强的松龙、缬沙坦的含药血清进行刺激干预,然后用四唑盐(MIT)法检测足细胞增殖。结果：25μml浓度LDL与100μg/ml OX-LDL刺激足细胞增殖达峰值,加减下瘀血汤的高、低剂量,强的松龙的中、高剂量及缬沙坦的中、高剂量含药血清有明显抑制足细胞增殖作用。结论：①LDL和OX-LDL在一定的剂量和时间条件下可以刺激足细胞增殖。②加减下瘀血汤、可抑制脂质诱导的足细胞增殖现象。     

比较分析气阴两虚型IgA肾病患者与正常人肾系膜细胞的蛋白质组学

目的:创建气阴两虚型IgA肾病患者与正常人的血清IgA1刺激人肾系膜细胞的蛋白质组学图谱,并分析表达有差异的蛋白,试图寻找IgA肾病的特异性生物标志物及筛选药物治疗IgA肾病的可能靶点。方法:①Jacalin亲和层析联合分子筛层析分离气阴两虚型IgA肾病患者与正常人血清IgA1并用Western blot方法鉴定;②双向电泳技术分离气阴两虚型IgA肾病患者与正常人血清aIgA1刺激肾系膜细胞的蛋白质,凝胶用银染显色,扫描仪获取凝胶图像并对其进行软件分析。结果:同组实验重复3次,IgAN(Test)组蛋白质点数有(602±13)个,匹配率平均为95.97%;正常人(Control)组有(569±5)个,匹配率平均为93.27%,具有较好的重复性。IgAN组与正常人组比较,表达增加大于3倍的点有22个,且有8个点仅表达于IgAN组,有6个点仅表达于正常组。结论:气阴两虚型IgA肾病患者与正常人的肾系膜蛋白表达有差异,这可能与IgA肾病的发生发展有密切关系。     

糖肾平胶囊通过PI3K/Akt信号通路干预高糖+LPS诱导足细胞凋亡的机制

目的:观察糖肾平对高糖环境下脂多糖(LPS)对足细胞凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法:利用雄性Wistar大鼠,分别用糖肾平小、中、大剂量(0. 525,1. 05,2. 1 g·kg-1),厄贝沙坦(17. 5 mg·kg-1)灌胃给药,制备相应药物血清。采用高糖,LPS体外刺激大鼠足细胞建立模型。并分为正常组(5%正常大鼠血清),高糖组(5%模型大鼠血清+4. 5‰葡萄糖),高糖+LPS组(5%模型大鼠血清+4. 5‰葡萄糖+LPS 1 mg·L-1),厄贝沙坦组(5%厄贝沙坦组大鼠血清+4. 5‰葡萄糖+LPS1 mg·L-1),糖肾平小剂量组(5%糖肾平小剂量大鼠血清+4. 5‰葡萄糖+LPS 1 mg·L-1),中剂量组(5%糖肾平中剂量大鼠血清+4. 5‰葡萄糖+LPS 1 mg·L-1),大剂量组(5%糖肾平大剂量大鼠血清+4. 5‰葡萄糖+LPS 1 mg·L-1)。采用蛋白免疫印迹法(Western blot)及逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测足细胞中CD2相关蛋白(CD2AP),nephrin和磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号转导通路中关键因子的蛋白和mRNA的表达水平。结果:与正常组比较,高糖组和高糖+LPS组足细胞nephrin,CD2AP,PI3K,Akt蛋白及mRNA表达明显减少(P 0. 05,P 0. 01); B淋巴细胞瘤-2相关凋亡蛋白(Bad蛋白)及mRNA表达明显增加(P 0. 05,P 0. 01)。与高糖+LPS组比较,厄贝沙坦组足细胞CD2AP,PI3K,Akt蛋白及mRNA表达明显增加(P 0. 05,P 0. 01); nephrin mRNA表达增加; Bad蛋白及mRNA蛋白表达减少。糖肾平各组足细胞CD2AP,PI3K,Akt蛋白及mRNA表达明显增加(P 0. 05,P 0. 01); Bad蛋白及mRNA蛋白表达减少(P 0. 05,P 0. 01)。结论:糖肾平维持足细胞裂孔隔膜蛋白稳定表达,保护肾小球滤过屏障,同时进一步激活PI3K/Akt信号通路,抑制足细胞凋亡;是其多靶点防治糖尿病肾病的作用机制之一。     

通络保肾复方对高糖环境下LPS刺激肾小球足细胞增殖及TGF-β_1 mRNA表达的影响

目的:探讨通络保肾复方对肾小球脏层上皮细胞(POD)增殖反应及转分化生长因子-β1(TGF-β1)mRNA表达的影响。方法:将5%含药血清培养基加入体外培养的足细胞,分别于高糖环境下脂多糖(LPS)刺激足细胞12h、24h、36h、48h后,用MTT方法检测各组的增殖情况,RT-PCR方法检测TGF-β1mRNA的表达。结果:LPS刺激12h后足细胞开始增殖,24h达高峰,48h后开始下降。通络保肾复方能够抑制足细胞增殖,以通络保肾复方大剂量组效果显著,与LPS组比较差异显著(P<0.01)。同时通络保肾复方可以降低足细胞TGF-β1mRNA的表达。本研究结果提示,通络保肾复方可以抑制高糖环境下LPS刺激诱导的足细胞增殖及降低足细胞TGF-β1mRNA的表达,减轻足细胞的损伤,抑制细胞外基质的异常积聚和沉积,从而延缓肾小球硬化的进程。     

复方积雪草对局灶节段性硬化大鼠E-钙粘素表达的影响

目的:观察复方积雪草对局灶节段硬化性(focal segmental glomerulosclerosis,FSGS)模型大鼠E-钙粘素(E-Cadherin,E-cad)表达的影响,探讨其防治肾纤维化的作用及机制。方法:建立局灶节段硬化性FSGS大鼠模型,分为正常组、模型组、复方积雪草组和苯那普利对照组。采用定量PCR和免疫组化法分别测定肾组织E-cad的基因和蛋白的表达。结果:模型组大鼠出现局灶节段性肾小球硬化,肾间质纤维化程度也较为明显,肾组织中的E-cad基因表达和肾小球足细胞、肾小管上皮细胞E-cad蛋白表达均明显降低,经复方积雪草干预后肾组织病变程度减轻,肾小球足细胞、肾小管上皮细胞E-cad基因和蛋白表达均有所升高,疗效与苯那普利相似。结论:复方积雪草可上调FSGS大鼠肾组织E-cad基因和蛋白表达,从而保护肾小球足细胞及抑制肾小管上皮细胞转分化,可能是防治肾纤维化程度的重要机制之一。     

肾必宁颗粒对IgA肾病小鼠肾小球系膜细胞凋亡的影响

目的 :观察肾必宁对IgA肾病模型小鼠肾小球系膜细胞凋亡及调控基因Fas表达的影响。方法 :复制IgA肾病小鼠模型 ;HE染色光镜下观察肾小球系膜增殖 ;TUNEL法检测肾小球系膜区细胞凋亡 ;免疫组化SABC法观察系膜区Fas、PCNA的表达。结果 :肾必宁可促进肾小球系膜区Fas表达 ,细胞凋亡率增加 ,PCNA表达下降 ,病理损害减轻 ,治疗组与模型组相比有显著性差异 (P <0 .0 5或P <0 .0 1 )。结论 :肾必宁可能通过影响Fas的表达 ,促进系膜细胞凋亡 ,抑制系膜增殖而使病理损害减轻。     

黄芪多糖对高糖刺激小鼠肾小球足细胞Desmin表达的影响

目的:体外模拟高糖病理微环境,探讨黄芪多糖对小鼠肾小球足细胞Desmin表达的影响。方法:将培养的小鼠肾小球足细胞分为:正常对照组、甘露醇高渗对照组、高糖组和黄芪多糖干预组,采用流式细胞术和real-Time PCR检测各组足细胞Desmin蛋白和mRNA的表达。结果:流式细胞术计数结果显示:黄芪多糖干预组小鼠肾小球足细胞表面Desmin阳性细胞百分率明显低于高糖组,差异有统计学意义(P0.05);较正常对照组和甘露醇高渗对照组,高糖组Desmin mRNA表达增加(P0.05);而相较高糖组,黄芪多糖干预组Desmin mRNA表达明显降低,差异有统计学意义(P0.05)。结论:在高糖刺激下,黄芪多糖干预可下调肾小球足细胞Desmin表达,是黄芪治疗DN蛋白尿的可能作用靶点。     

积雪草苷对LPS刺激RAW264.7细胞炎症因子的影响

目的：观察积雪草苷对脂多糖刺激小鼠RAW264．7细胞释放细胞因子的影响。方法：体外培养小鼠RAW264.7细胞，用LPS刺激小鼠RAW264．7细胞分泌TNF-α、IL-6，用不同浓度积雪草苷进行干预，ELISA法检测培养上清中促炎细胞因子的含量。结果：积雪草苷可抑制LPS刺激小鼠RAW264．7细胞释放TNF-α和IL-6，并呈一定的量效关系。结论：积雪草苷呈浓度依赖性地抑制LPS刺激小鼠RAW264，7细胞释放TNF-α和IL-6。     

绞股蓝总皂苷对高糖培养条件下小鼠足细胞nephrin、VEGF mRNA表达的影响

目的:观察绞股蓝总皂苷对高糖培养条件下小鼠永生足细胞nephrin、VEGF(vascular endothelial growth factor,血管内皮生长因子)mRNA表达的影响。方法:利用体外培养条件性永生小鼠足细胞,高糖干预24小时,模拟糖尿病肾病足细胞损伤,分为正常组、高糖模型组、高渗对照组、绞股蓝治疗组(绞股蓝总皂苷高、中、低剂量组)及缬沙坦对照组,Real Time PCR法检测足细胞nephrin、VEGF mRNA的表达。结果:绞股蓝总皂苷干预组nephrin mRNA含量显著升高,VEGF mRNA表达有一定程度提高,与模型对照组比较,差异有显著统计学意义(P0.05或P0.01)。结论:绞股蓝总皂苷可有效调节肾脏足细胞nephrin、VEGF mRNA表达。     

益气化瘀清热方及其拆方对嘌呤霉素氨基核苷损伤小鼠足细胞表达Podocalyxin及Podocin的影响

目的观察益气化瘀清热方及其拆方对嘌呤霉素氨基核苷(Puromycin aminonucleoside,PAN)损伤体外培养的小鼠足细胞表达Podocalyxin及Podocin的影响。探讨不同类中药治疗肾病的作用强度。方法应用PAN(50μg/mL)刺激体外培养的小鼠足细胞,形成PAN足细胞损伤模型,造模成功后的足细胞随机分为益气组、化瘀组、清热组、复方组、对照组、模型组、空白组,采用实时定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹法(Western Blot)检测各组血清对小鼠足细胞表达Podocalyxin、Podocin的影响。结果益气化瘀清热方及其拆方均能影响造模足细胞Podocalyxin及Podocin的表达,但不同药物作用于造模足细胞的时间不同,其对Podocalyxin及Podocin表达的作用强度不同。结论益气化瘀清热方及其拆方可能通过提高造模足细胞Podocalyxin及Podocin的表达而发挥治疗作用。     

积雪草苷对足细胞α-actinin-4、synaptopodin蛋白及ERK/JNK通路的影响

目的:探讨积雪草苷对阿霉素诱导的足细胞中α-actinin-4、synaptopodin蛋白及ERK/JNK通路的影响。方法:1)MTT法检测积雪草苷对足细胞及阿霉素诱导的足细胞活力的影响。2)选用1μmol/L阿霉素制造足细胞损伤模型,蛋白印迹法(Western blotting)检测足细胞α-actinin-4、synaptopodin蛋白表达。3)免疫荧光检测足细胞骨架及Western blotting检测ERK/JNK信号通路的磷酸化水平。结果:1)低浓度积雪草苷(10～80μg/mL)对足细胞活力无明显影响,而高浓度积雪草苷(80μg/mL)可降低足细胞活力;2)阿霉素体外可损伤足细胞,降低足细胞活力;积雪草苷浓度依赖性地减轻阿霉素对足细胞的损伤,增加足细胞活力;阿霉素体外可增加足细胞骨架蛋白α-actinin-4的表达,减少足细胞骨架蛋白synaptopodin的表达,而积雪草苷可下调阿霉素诱导的足细胞α-actinin-4蛋白表达,上调阿霉素抑制的足细胞synaptopodin的表达;3)阿霉素(1μmol/L)能升高ERK、JNK的磷酸化水平,与空白对照组比较差异有统计学意义(P0.05);积雪草苷预处理细胞后,能够有效遏制阿霉素诱导的ERK活化,与模型对照组比较差异有统计学意义(P0.05),但却不能抑制阿霉素诱导的JNK信号通路中JNK的活化。结论:积雪草苷预处理细胞后可能通过遏制阿霉素诱导的ERK信号通路的活化,减少阿霉素对足细胞骨架的损伤作用,从而改变了α-actinin-4、synaptopodin蛋白表达。     

积雪草苷对DBA/1小鼠胶原诱导型关节炎中Th17/Treg细胞表达的影响

目的:观察积雪草苷对DBA/1小鼠胶原诱导型关节炎(CIA)中辅助性T细胞17(Th17)和调节性T细胞(Treg)表达的影响.方法:将SPF级DBA/1雄性小鼠按体质量随机分为6组:正常组,CIA组,甲氨蝶呤组(MTX组,0.5 mg·kg-1),积雪草苷低、中、高剂量(5,15,45 mg· kg-1)组.除正常组...