应用超声背向散射积分技术评价糖尿病大鼠肾脏纤维化

目的 检测不同病程糖尿病大鼠肾脏背向散射积分(IBS),同时观察纤维化指标,探讨IBS与肾脏纤维化的关系.方法 腹腔注射链尿佐菌素(65mg/kg)建立SD大鼠糖尿病模型,于第4、12、24周测定肾皮质和肾髓质的IBS％,Masson染色观察血管周围胶原面积(PVCA)、肾小球胶原沉积评分(GCDS)、肾小管间质病变评分(TIDS),肾脏胶原蛋白(CollagenI、CollagenⅢ)免疫组织化学染色.心肌光镜与透射电镜观察,并与同龄正常大鼠进行比较.结果 ①与对照组相比:糖尿病组肾皮质、肾髓质的IBS％明显增高(P＜0.05);糖尿病组肾脏纤维化指标PVCA、GCDS、TIDS、Collagen Ⅰ、CollagenⅢ的表达均明显增高(P＜0.05);②肾皮质与肾髓质IBS％与PVCA、GCDS、TIDS、CollagenⅠ、CollagenⅢ表达呈正相关(P＜0.05);③电镜发现糖尿病组肾小球毛细血管基底膜弥漫性增厚,间质胶原增生.结论 糖尿病大鼠存在明显的肾脏纤维化,通过监测IBS可以监测糖尿病大鼠肾脏组织纤维化的程度.     

果糖-1，6-二磷酸对糖尿病大鼠心肌有保护作用，但不能被超声背向散射积分正确评价

目的：通过分析超声背向散射积分（IBS）参数的变化评价果糖-1,6-二磷酸（FBP）对糖尿病（DM）大鼠心肌纤维化及超微结构的影响。方法：通过一次性腹腔注射链脲佐菌素（STZ,65mg／kg）建立SD大鼠糖尿病模型,分成模型对照组（DM组）和FBP干预组（FBP500mg·kg^-1·d^-1腹腔注射）,DM组及正常对照组（NC组）给予等量生理盐水腹腔注射。1月后,超声测量IBS参数（包括标化的背向散射积分IBS％、背向散射积分周期变异幅度CVIB）;取心肌组织进行透射电镜（TEM）观察、羟脯氨酸浓度（HPC）测定、Masson染色、嗜银染色及结缔组织生长因子（CTGF）免疫组织化学染色。结果：①3组间比较IBS％值FBP组〉DM组〉NC组（P〈0．05）,CVIB值无明显变化（P〉0．05）;②HPC、胶原容积分数（CVF）3组间比较,均DM组〉FBP组〉NC组（P〈0．05）;而嗜银纤维容积分数（APFVF）DM、FBP组间无明显差异（P〉0．05）,两组均〉NC组（P〈0．05）;CTGF的表达FBP、NC组无明显差异,两组均〈DM组;③超微结构变化：与NC组比较,DM组肌原纤维减少,线粒体增多且伴空泡变性,FBP组线粒体空泡变性明显减轻。结论：FBP可以减轻糖尿病大鼠心肌纤维化及保护心肌线粒体功能,IBS不能准确评价此种保护作用的原因是：线粒体作为主要散射体之一,其空泡化减轻使IBS％值增大。     

缺氧诱导因子1α在异丙肾上腺素诱导的大鼠心房纤维化中的表达及意义

目的 探讨缺氧诱导因子1α(HIF-1α)在盐酸异丙肾上腺素(ISO)诱导的大鼠心房纤维化中的表达及其可能机制.方法 健康雄性Wistar大鼠30只,随机均分为空白对照组、ISO组、ISO+西罗莫司(Rapa)干预组(Rapa组).于实验15d时处死大鼠取心肌组织,放射免疫法检测血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)的含量,HE和Masson染色法观察纤维化程度即胶原容积分数(CVF),免疫组织化学法、Western blotting检测HIF-1α、转化生长因子β1(TGF-β1)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)在大鼠心房纤维化组织中的表达,并分析HIF-1α、TGF-β1、MMP-9蛋白表达量与心房纤维化指标CVF的相关性,以及HIF-1α、TGF-β1、MMP-9蛋白表达量之间的相关性.结果 ISO组、Rapa组AngⅡ含量较空白对照组明显升高(P＜0.01).空白对照组CVF为15.482％±0.837％,无心房纤维化,而Rapa组、ISO组CVF分别为16.730％±1.052％、86.704％±1.928％,Rapa组较ISO组的心房纤维化程度明显减弱(P＜0.01).免疫组化及Western blotting检测显示,与空白对照组相比,ISO组HIF-1α、TGF-β1和MMP-9蛋白表达量均明显增加(P＜0.01),与ISO组比较,Rapa组中HIF-1α、TGF-β1和MMP-9蛋白表达量明显降低(P＜0.01). HIF-1α、TGF-β1和MMP-9蛋白表达量均与心房纤维化程度(以CVF为评价指标)呈正相关(r=0.987,r=0.988,r=0.917,P＜0.01); HIF-1α与TGF-β1、MMP-9蛋白表达量呈正相关(r=0.976,r=0.901,P＜0.01),MMP-9与TGF-β1蛋白表达量亦呈正相关(r=0.912,P＜0.01).结论 在异丙肾上腺素诱导的大鼠心房纤维化过程中,AngⅡ、HIF-1α、TGF-β1、MMP-9发挥着重要作用.     

非酒精性脂肪性肝炎肝组织TNF-α、TGF-β1和Leptin的表达及意义

目的探讨细胞因子TNF-α、TGF-β1和Leptin在非酒精性脂肪性肝炎（NASH）患者肝组织中的表达状况及在发病机制中的意义。方法应用免疫组化方法检测59例不同病变程度NASH穿刺肝组织中TNF-α、TGF-β1和Leptin的表达,分析其与NASH病变以及肝星状细胞（HSC）、库普弗细胞（KC）活化程度之间的关系。结果NASH肝组织中,TNF-α表达于肝脂肪变区及炎症活动区的肝窦壁细胞及炎细胞中,其阳性表达随肝脏炎症损伤程度的加重而增加（P〈0．05）;TGF-β1主要表达于纤维化较明显区域的肝窦壁细胞,其阳性表达与炎症及纤维化程度均密切相关（P〈0．05）,分布及表达量与HSC的免疫组化改变大致平行;Leptin主要于NASH肝组织脂肪变区及纤维化区的单个核细胞、KC和HSC内表达,与NASH肝脂肪变及纤维化程度呈正相关（P〈0．05）;Leptin表达纤维化程度加重而呈递增趋势,与TGF-β1的变化呈大致平行关系。结论TNF-α可能是NASH炎症过程中的关键性炎症因子,而TGF-β1和Leptin可能与NASH纤维化的启动及进展关系密切,上两者间可能存在着协同作用。     

阿托伐他汀对心房纤维化大鼠中转化生长因子-β1的调节作用

目的：采用大鼠心房纤维化模型,探讨阿托伐他汀对转化生长因子-β1的调节作用。方法：将30只雄性Wistar大鼠随机等分为对照组（A）、异丙肾组（B）、异丙肾＋阿托伐他汀组（C）,并造模给药。8周后处死,Masson染色法测心房纤维化程度;免疫组化法测定及半定量分析心肌组织TGF-β1的分布特征,RT-PCR测心肌组织TGF-β1 mRNA表达情况。结果：C组大鼠心房纤维化程度较B组明显减轻;组织中TGF-β1含量及mRNA表达量明显减少（P〈0.05）;C组大鼠较A组各指标均无明显变化。结论：阿托伐他汀能显著改善大鼠心房纤维化程度,该作用可能与其减少大鼠心肌中TGF-β1含量有关。     

重组人血管内皮抑制素对大鼠放射性心肌纤维化的影响

目的 建立放射性心脏纤维化大鼠模型,观察重组人血管内皮抑制素（恩度）对心肌纤维化的影响,初探转化生长因子-β1（TGF-β1）、结缔组织生长因子（CTGF）与心肌纤维化的相关性。方法 将40只SD大鼠按随机数表法分为4组,每组10只,A组为健康对照组;B组为恩度干预组,恩度（6 mg/kg）腹腔连续注射14 d;C组为单纯照射组,心脏照射25 Gy/5次,连续5 d;D组为照射+恩度干预组,恩度给药方法同B组、心脏照射方法同C组。照射后第1、3个月各麻醉处死5只大鼠。Masson染色评估心肌纤维化情况,Western blot检测心肌TGF-β1、CTGF及胶原蛋白Ⅰ（COL-Ⅰ）型表达。结果 照射后1和3个月,B组未见明显的心肌纤维化表现,C组和D组可见胶原纤维分布于心肌细胞间质。照射后1个月,半定量分析结果显示A组的心肌胶原容积分数（CVF）为（5.20±0.75）%,C组（10.12±2.17）%和D组（10.32±1.36）均高于A组（t=4.74、4.93,P<0.01）,C组和D组的CVF差异无统计学意义（P>0.05）;照射后3个月C组的CVF（13.17±2.67）%仍比A组（5.23±1.32）%高（t=4.49,P<0.01）,C组的CVF低于D组（16.92±3.58）%（t=3.19,P<0.05）。照射后1个月,A组TGF-β1的表达量为0.441±0.063,C组0.817±0.079高于A组（t=5.81,P<0.01）;照射后3个月,A组TGF-β1的表达量为0.501±0.110,C组0.832±0.150高于A组（t=4.19,P<0.01）,D组1.403±0.133高于C组（t=7.24,P<0.01）。照射后1、3个月,各组间CTGF及COL-I的变化趋势与TGF-β1的变化趋势相似。结论 射线可引起心肌纤维化的形成,重组人血管内皮抑制素可能会加重晚期放射纤维化的形成。     

PFD对二甲基亚硝胺诱导的大鼠肝纤维化治疗疗效和 CTGF表达的影响

目的：观察不同剂量PFD对二甲基亚硝胺（ Dimethylnitrosamine DMN）诱导大鼠肝纤维化的治疗作用和CTGF表达的影响,初步探讨其可能的作用机制。方法健康雄性Wistar大鼠105只随机分为正常组21只,给予生理盐水10 mg／kg体重腹腔内注射,每周前三天连续给药,1次／日,连续注射3周;造模组84只,给予1％DMN溶液10 mg／kg体重腹腔注射,每周前三天连续给药,1次／日,连续注射3周。两周末将造模组随机分为4组,每组21只,分别是：模型组、IFN －α治疗组、PFD 120 mg、PFD 240 mg治疗组。各组大鼠均于造模第3周第一天给予药物治疗,每周七天,1次／日,治疗共4周。各组给药剂量及方法如下：正常组、模型组予以0．5％CMC－Na 6 mL／kg灌胃;PFD不同剂量组予以相应剂量PFD灌胃; IFN －α组予以IFN －α10万单位／只,皮下注射。治疗四周后处死所有大鼠,留取肝组织行Masson染色,免疫组织化学法测Ⅰ型胶原, CTGF表达。结果（1） Masson染色SSS半定量评分,模型组与正常组比较显著升高（ P＜0．05）。 IFN －α组、PFD组SSS半定量评分较模型组显著降低（ P＜0．05）。免疫组化法检测肝组织Ⅰ型胶原的表达,模型组与正常组比较显著升高（ P＜0．05）,PFD组与模型组比较显著降低（P＜0．05）,IFN －α组与模型组比较无统计学差异（P＞0．05）,（2）免疫组化法检测肝组织CTGF的表达,模型组与正常组比较显著升高（P＜0．05）。 PFD 120 mg、PFD 240 mg各组与模型组比较显著降低（P＜0．05）。结论（1）PFD具有治疗DMN诱导的大鼠肝纤维化的作用,与α－IFN无明显差别。（2）PFD抗DMN诱导大鼠肝纤维化的作用机制可能与下调CTGF的表达,抑制促纤维化因子有关。     

整合素连接激酶在抗体介导的慢性排斥反应患者肾组织中的表达及意义

目的研究移植肾组织中整合素连接激酶（ILK）及Ⅳ型胶原、转化生长因子β1（TGF-β1）表达和抗体介导的慢性排斥反应的关系。方法 用免疫组织化学技术和计算机真彩色图像分析系统半定量检测46例抗体介导的慢性排斥反应（Chronic active antibody-mediated rejection,ABMR）患者移植肾组织中ILK、Ⅳ型胶原和TGF-β1的表达情况,分析3者间及与ABMR的间质纤维化与肾小管萎缩（IF/TA）的病理分级之间的关系。15例正常肾组织作为对照。结果 ABMR移植肾组织中ILK、Ⅳ型胶原、TGF-β1的表达比正常肾组织明显增加（P〈0.001）,并随ABMR中IF/TA病理分级呈逐渐递增的趋势。移植肾组织中ILK的表达与TGF-β1、Ⅳ型胶原呈正相关（r分别为0.830、0.707,P〈0.001）。结论 ILK可能是介导TGF-β1促进移植肾间质纤维化细胞外基质（extracellular matrix,ECM）异常沉积的发病机制,Ⅳ型胶原的异常沉积是ABMR中IF/TA患者移植肾纤维化的重要表现。转化生长因子β1已经证明了与移植肾纤维化显著的相关性,ILK在抗体介导的排斥反应的移植肾纤维化进程中起重要作用。     

血管紧张素转换酶基因多态性与房颤心肌纤维化的相关性研究

目的：研究血管紧张素转换酶基因（ACE）插入／缺失多态性与心肌纤维化及心房纤颤的相关性，以寻找心房纤颤发病的分子机制。方法：选择50例房颤患者（房颤组）及43例非房颤者（对照组），用PCR方法检测两组ACE基因插入／缺失多态性；用ELISA法测定心肌纤维化的指标（Ⅰ型前胶原羧基端肽、Ⅲ型前胶原氨基端肽）．比较不同基因型、不同等位基因的分布及Ⅰ型前胶原羧基端肽（PIP）和Ⅲ型前胶原氨基端肽（PⅢP）的血清浓度。结果：房颤组与对照组ACEI／D多态性缺失纯合型（DD型）、杂合子（DⅠ型）、插入纯合型（Ⅱ型）基因型频率分别为34％、40％、26％和18．6％、41．9％、39．5％；房颤组与对照组D等位基因、Ⅰ等位基因分布频率为54％、46％和39．5％、60．5％；对不同基因型分布比较发现：D等位基因分布频率在房颤组中较对照组明显增大（P〈0．05）；房颤组PIP、PⅢP浓度明显高于对照组（P〈0．05）；在不同基因型之间PIP、PⅢP浓度比较中发现，DD基因型PIP、PⅢP浓度显著高于DⅠ型和Ⅱ型（P〈0．05）。结论：D等位基因可能是房颤的易患基因；房颤患者心肌纤维化指标PIP、PⅢP显著升高；ACEDD基因型可能是心肌纤维化及心脏重构的危险因素。     

高血糖对肝纤维化大鼠肝组织α—SMA和CTGF表达的影响

目的探讨高血糖对肝纤维化大鼠肝组织α－平滑肌肌动蛋白（α－SMA反映肝星状细胞HSC活化）和结缔组织生长因子（CTGF）表达的影响。方法将52只SD雄性大鼠随机分为糖尿病肝纤维化组、正常血糖肝纤维化组与正常对照组。通过链脲佐菌素（streptozocin,STZ）诱导糖尿病,后用四氯化碳诱导肝纤维化。肝组织HE染色检测病理改变。免疫组化法检测肝组织α－SMA、CTGT蛋白表达。结果高血糖肝纤维化组α—SMA（灰度值142．5±3．67）和CTGF（灰度值144．2±5．01）表达水平较正常血糖肝纤维化组（α—SMA灰度值158．9±2．18,CTGF灰度值157．7±6．80）显著升高（P〈0．05）。结论高血糖可通过诱导肝脏α—SMA、CTGF表达,加重大鼠肝纤维化的程度,促进肝纤维化的形成。其机制与促进肝星状细胞的增殖活化及细胞外基质的合成分泌等有关。     

背向散射积分评价二甲双胍对糖尿病大鼠肾脏纤维化的干预作用

目的应用超声背向散射积分(IBS)技术评价二甲双胍对糖尿病大鼠肾脏纤维化的干预作用。方法 30只雄性Wistar大鼠,随机抽取20只高脂饲料喂养4周后,腹腔注射链脲佐菌素(STZ,40mg/kg)建立糖尿病大鼠模型。模型成功后,将其随机分成模型对照组(DM组)、二甲双胍干预组(MET组),余下10只作为正常对照组(NC组)。NC和DM组蒸馏水灌胃2ml/d,MET组二甲双胍0.5g.kg-1.d-1)灌胃。8周后,超声测量肾实质标化背向散射积分值(IBS%),对肾组织进行羟脯氨酸浓度(HPC)测定;PAS染色计算肾小球系膜基质指数(Ms/Gs),Masson染色观察肾小球胶原沉积评分(GCDS)、血管周围胶原面积(PVCA)、肾小管间质病变评分(TIDS)。结果与NC组比较,DM组IBS%及纤维化指标(HPC、Ms/Gs、GCDS、TIDS、PVCA)均明显增高(P<0.05);与DM组比较,MET组IBS%减低(P<0.05),纤维化指标减轻,但未达NC组水平。IBS%与纤维化指标呈正相关(P<0.05)。结论糖尿病大鼠存在明显的肾脏纤维化;二甲双胍可以在一定程度上减轻纤维化病变;超声IBS技术可以检测到糖尿病大鼠肾脏纤维化及二甲双胍的干预效果。     

2型糖尿病心肌背向散射积分及左室舒张功能变化的研究

 目的评价2型糖尿病(Diabetes mellitus,DM)患者心肌背向散射积分(Integrated backscatter,IBS)及左室舒张功能的变化.方法用脉冲多普勒超声心动图(Pulsed Doppler echocardiography,PDE)、多普勒组织显像(Dopplertissue imaging,DTI)技术及IBS技术测定40例2型DM患者、20例健康人二尖瓣口和肺静脉血流参数(Ep、Ap、ap)、二尖瓣环运动参数(Vs、Ve、Va)及心肌IBS参数(IBS、IBS%、CVIB).结果DM组Ap、ap、Va增高,Ep/Ap、Ve、Ve/Va降低(P＜0.05);DM组IBS%增高、CVIB减低(P＜0.05).结论2型DM患者早期存在舒张功能异常;DTI测定二尖瓣环运动速度评价左室舒张功能敏感而简便;IBS能早期反映DM患者心肌的组织学改变.     

丹参注射液对肺纤维化大鼠肺组织病理形态学的影响

目的探讨丹参注射液抑制肺纤维化的作用及其机制。方法将40只健康雌性SD大鼠采用随机数字表法分为正常组、丹参组、地米组、模型组,每组10只,丹参组、地米组、模型组采用气管内注入博莱霉素建立SD大鼠肺纤维化模型。观察大鼠肺系数、肺纤维化评分、肺组织病理形态学改变等,并通过实时定量聚合酶链反应（RT-PCR）检测大鼠肺组织转化生长因子-β1（TGF-β1）及基质金属蛋白酶-9（MMP-9）mRNA的表达。结果丹参组及地米组肺系数明显低于模型组,但高于正常组,差异均具有统计学意义（P〈0．01）,同时丹参组低于地米组（P〈0．01）;肺组织病变呈肺纤维化改变,与模型组比较,丹参组及地米组明显较轻（P〈0．01）,且丹参组优于地米组,差异具有统计学意义（P〈0．01）。RT．PCR检测结果提示模型组大鼠TGF-β1及MMP-9明显高于丹参组及地米组（P〈0．01）,丹参组也明显低于地米组（P〈0．01）。结论丹参注射液能够减轻肺纤维化,其作用机制可能与下调TGF-β1及MMP-9mRNA的表达有关。     

超声组织定征评价射频消融正常兔肝脏的实验研究

目的:探讨超声组织定征技术评价射频消融正常兔肝改变的价值。方法:建立射频消融正常兔肝模型,分别于消融前、消融后1、3、5和15 d行二维超声及超声组织定征检查,二维超声观察肝脏消融后变化,超声组织定征定量分析消融灶改变。结果:射频消融后,二维超声显示高回声区类圆形病灶,其内相间弱回声;消融灶的超声组织定征平均强度、标准化IBS值均高于消融前,差异有显著性意义(P<0.05)。结论:射频消融正常兔肝的超声组织定征改变可以反映病理变化。     

苯那普利对慢性心衰患者心功能-内分泌-细胞因子的影响

目的评价心功能-内分泌-细胞因子这一潜在系统在慢性心衰（CHF）发病中的作用,以及苯那普利对该系统的作用。方法50例伴有心率〉90bpm的CHF患者分为B组与M组,分别使用苯那普利（5～10mg/d）及美托洛尔（12.5～50mg/d）治疗,根据血压及心率调整剂量,疗程8周。观察两组治疗前后心衰相关指标的变化。结果①心功能：治疗后收缩压（SBP）、舒张压（DBP）及心率（HR）均有不同程度的下降,其中B组的SBP下降明显,M组的HR下降明显,组间差异均有统计学意义（P〈0.05）。治疗后两组患者的NYHA分级呈不同程度下降,以B组明显（Z=-2.078,P=0.038）。治疗后患者左心室收缩末期直径（LVESd）有所减小,左室射血分数（LVEF%）及舒张早/晚期心室充盈速度峰值比（E/A）有所升高,均以B组明显（P〈0.05）;②心脏内分泌指标：治疗后血浆心钠肽（ABP）及脑钠肽（BNP）均有所下降,仍以B组明显;③细胞因子：治疗后血清转化生长因子β1（TGF-β1）及白介素1β（IL-1β）的变化情况与内分泌指标相同,以B组明显（P〈0.05）;④相关性分析显示ANP、BNP、TGF-β1与IL-1β四者两两呈正相关性（相关系数C〉0.850,P〈0.01）;LVEF%与以上四者均呈负相关性（均│C│〉0.80,均P〈0.05）。结论心功能-内分泌-细胞因子这一系统可能在CHF发病机制中起到重要作用,苯那普利治疗伴有心率加快CHF的临床疗效优于美托洛尔,前者可能是通过上述机制起效的。     

心房颤动患者心房组织中的胶原重构

 目的 研究风湿性心脏瓣膜病心房颤动(房颤)患者心房组织中胶原表达的变化,探讨房颤患者心房纤维化的机制及其在房颤发生、持续中的作用.方法 75例风湿性心脏瓣膜病接受换瓣置换手术者分为3组,其中窦性心律组34例,阵发性房颤组11例,慢性房颤组30例,于术中获取右心耳组织约100 mg,采用苦味酸天狼猩红染色法对心房组织胶原沉积量及分布情况进行分析,应用半定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法,测定心房组织中Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原的mRNA水平.结果 (1)房颤患者心房组织存在明显纤维化,纤维化程度与左心房内径(r=0.390, P=0.001)、房颤持续时间呈正相关(r=0.320,P=0.005);(2)与窦性心律 组比较,Ⅰ型胶原的mRNA在阵发性房颤患者(P＜0.05)、慢性房颤患者(P＜0.001)心房组织中的表达均明显增加;房颤患者Ⅲ型胶原的mRNA表达虽有增加,但差异无统计学意义.Ⅰ型胶原的mRNA表达水平与左心房内径(r=0.336,P=0.004)、房颤持续时间 (r=0.339,P=0.003)呈正相关.结论 房颤患者心房组织存在明显纤维化,Ⅰ型胶原的分子重构可能是房颤时心房纤维化发生的分子机制之一,与房颤的发生和持续有关.     

甘氨酸联合smad7质粒转染对肝纤维化模型大鼠的影响

目的探讨甘氨酸联合smad7真核细胞表达质粒对大鼠肝纤维化的疗效。方法将120只SD大鼠随机分为5组：正常对照组（C）、肝纤维化组（HF）、甘氨酸治疗组（G）、smad7质粒转染组（S）、联合治疗组（G＋S）。观察肝组织的病理分级及免疫组化染色分析肝组织Ⅲ型胶原的表达情况。结果病理分级各治疗组和正常组明显低于肝纤维化组（P〈0.01）;联合治疗组优于各单一组（P〈0.05）;Ⅲ型胶原的表达在HF组明显高于各治疗组,联合治疗组Ⅲ型胶原的表达低于各单一治疗组（P〈0.05）。结论甘氨酸联合smad7质粒转染对肝纤维化的疗效优于单一治疗。