内毒素血症大鼠肺主动脉中一氧化氮合酶蛋白表达

一氧化氮合酶（NOS）作为NO生长的限速因素，是影响内毒素体克发病过程的重要中介物质，现已发现的NOS按产生是否需要外界刺激分为结构型（cNOS)和诱导型，按分布位置又将前者分为神经型（eNOS).在动物实验和临床观察中应用NOS和（或）iNOS抑制剂抑制NOS的基因和蛋白表达变化可使肺间质水肿和低血压得到改善，但是内毒素休克的死亡率仍然居高不下。且肺循环和体循环对吸入DO存在不同的反应，本实验拟在大鼠内毒素血症模型的肺动脉和胸主动脉中观察3种NOS蛋白表达的时间依从性变化及肺动脉和胸主动脉中NOS蛋白表达的差异，以了解内毒素休克时肺循环和体循环中3种NOS的蛋白表达的变化规律。     

诱导性一氧化氮合酶抑制药对内毒素处理鼠主动脉和肺动脉的 …

目的：观察比较ｉＮＯＳ抑制药ＡＧ对鼠离体主动脉和肺动脉环力的影响。方法：测定血管对ＮＥ的量－效反应，在ＬＰＳ（３００ｎｇ／ｍｌ）中孵育４小时后。分为Ｌ－ＮＡＭＥ（３００μｍｏｌ／Ｌ）或ＡＧ（１００μｍｏｌ／Ｌ）孵育６０或２０分钟共８组。结果：ＬＰＳ孵育后动脉环对ＮＥ的反应明显降低，给予Ｌ－ＮＡＭＥ或ＡＧ后均升高以１０＾－６ｍｏｌ／Ｌ ＮＥ作比较，Ｌ－ＮＡＭＥ组主动脉２０分种时反应性明显高于ＡＧ组。     

异丙酚对高血压大鼠胸主动脉内皮型一氧化氮合酶和诱导型一氧化氮合酶表达的影响

目的 评价异丙酚对高血压大鼠胸主动脉内皮型一氧化氮合酶(eNOS)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的影响.方法 SD大鼠,雌雄各半,体重240～ 280 g,采用皮下注射去氧皮质酮的方法制备高血压模型,采用随机数字表法,将64只造模成功的大鼠随机分为4组(n＝16):高血压组(H组)、小剂量异丙酚组(P1组)、中剂量异丙酚组(P2组)和大剂量异丙酚组(P3组).P1组、P2组和P3组分别静脉输注异丙酚20、30、40 mg·kg-1·h-13 h,H组给予等容量生理盐水.分别于给药前、给药1h、3h时记录平均动脉压(MAP).给药3h时处死大鼠,摘眼球法采集血样,硝酸还原酶法测定血清一氧化氮(N0)浓度,取胸主动脉,采用RT-PCR和Western blot法测定eNOS mRNA、iNOS mRNA及其蛋白表达水平.结果 与H组比较,P1组、P2组和P3组给药3h时MAP降低,血清NO浓度升高,主动脉eNOS mRNA及其蛋白表达上调,主动脉iNOS mRNA及其蛋白表达下调,且呈剂量依赖性(P<0.05或0.01).结论 异丙酚降低高血压大鼠血压的机制与下调iNOS表达,上调血管内皮细胞eNOS表达,促进NO释放有关.     

辛伐他汀预处理对脓毒症大鼠胸主动脉诱导型一氧化氮合酶及内皮型一氧化氮合酶表达的影响

目的 探讨辛伐他汀预处理对脓毒症大鼠胸主动脉诱导型一氧化氮合酶(iNOS)及内皮型一氧化氮合酶( eNOS)表达的影响.方法 清洁级雌性Wistar大鼠80只,4月龄,体重200～250 g,采用随机数字表法,将其随机分为4组:正常对照组(Ⅰ组,n=8)、假手术组(Ⅱ组,n=8)、脓毒症组(Ⅲ组,n=32)和辛伐他汀预处理组(Ⅳ组,n=32).Ⅱ组打开腹腔找到盲肠后还纳腹腔,缝合腹壁切口.Ⅲ组和Ⅳ组采用盲肠结扎穿孔法制备大鼠脓毒症模型.Ⅳ组制备脓毒症模型前经胃管灌注辛伐他汀20 mg/kg,1次/d,连续2周,Ⅰ组～Ⅲ组给予等容量生理盐水.Ⅱ组于假手术后6h处死动物,Ⅲ组和Ⅳ组于盲肠结扎穿孔后3、6、24、48 h分别取8只动物,处死,取胸主动脉,采用Western blot法测定iNOS和eNOS表达水平.结果 与Ⅰ组比较,Ⅱ组iNOS和eNOS表达差异无统计学意义(P＞0.05),Ⅲ组和Ⅳ组iNOS表达上调,eNOS表达下调(P＜0.05);与Ⅲ组比较,Ⅳ组iNOS表达下调,eNOS表达上调(P＜0.05).结论 辛伐他汀预处理可下调脓毒症大鼠血管内皮细胞iNOS表达和上调血管内皮细胞eNOS表达,对血管内皮细胞功能有保护作用.     

氯化镧对内毒素/脂多糖诱导巨噬细胞株一氧化氮合酶表达的抑制作用

目的了解氯化镧（LaCl3）对内毒素／脂多糖（LPS）刺激的巨噬细胞诱导型一氧化氮合酶（iNOS）表达的影响，并探讨其机制。方法将小鼠巨噬细胞株RAW264．7分为空白对照组、LaCl、组、LPS组和LaCl3＋LPS组。前3组细胞分别用常规培养液、含2．50μmol／L LaCl3的培养液、含1mg／L LPS的培养液培养24h，LaCl3＋LPS组用含2．5μmol／LLaCl，的培养液培养24h后，换为含1mg／L LPS的培养液培养24h。采用免疫细胞化学染色法检测iNOS在各组细胞中的表达强度；蛋白质印迹法检测iNOS的蛋白表达水平；反转录一PCR测定iNOS的mRNA表达水平；硝酸还原酶法测定各组细胞培养上清液中一氧化氮（NO）含量。结果免疫细胞化学染色结果显示，iNOS主要分布于各组细胞的胞质中，空白对照组和LaCl3组荧光强度极弱；LPS组荧光强度最强，阳性细胞百分率为44．4％，明显高于LaCl3＋LPS组（11．8％，P〈0．05）。LPS组iNOS蛋白及其mRNA表达量和细胞培养上清液中NO含量均高于其余各组（P〈0．05）。结论LaCl3可在mRNA水平和蛋白水平抑制LPS诱导的iNOS过度表达，减少NO生成，提示LaCl3能拮抗LPS诱导的iNOS过度活化。     

葛根素对去卵巢大鼠股骨及主动脉一氧化氮合酶亚型表达的影响

目的观察葛根素对去卵巢大鼠股骨及主动脉一氧化氮合酶（NOS）不同亚型表达的影响。方法3月龄雌性SD大鼠72只，随机分为6组：假手术组（SHAM）、去卵巢组（OVX）、17p雌二醇治疗组（ERT）、高剂量葛根素（PH）、中剂量葛根素（PM）和低剂量葛根素（PL）治疗组。去卵巢术后1w开始皮下注射给药，连续7w。硝酸还原酶法测定血清NO水平，免疫组化法分别观察股骨及主动脉内皮型NOS（eNOS）和诱导型NOS（iNOS）的表达。结果①与OVX组相比，PH、PM组大鼠血清NO水平显著提高（P〈0．01）；②在股骨及主动脉组织中，OVX组eNOS的表达明显减低（P〈0．01），各剂量葛根素组可不同程度地提高eNOS的表达（P〈0．01）；③iNOS的表达仅见于OVX大鼠股骨，其余各组大鼠股骨和各组大鼠主动脉均未见iNOS的明显表达。结论葛根素可以提高去势大鼠股骨及主动脉两组织中eNOS的表达，增加内源性NO的合成与释放，对防治绝经后妇女骨质疏松及动脉粥样硬化可能有益。     

内毒素血症致肾衰大鼠中人参皂苷及L－硝基－精氨酸对一氧化氮合酶表达的影响

多脏器功能衰竭（MOF）的发病机制尚未完全明了，其中免疫复合物学说认为与内毒素（LPS）血症有关。一氧化氮合酶（NOS）和一氧化氮（NO）在内毒素休克所致急性肾衰（ARF）的发病机制中具有重要作用。中医学认为，休克系“阳气暴脱”，而人参有“回阳救逆”之功效，其有效成分主要是人参皂甙。本研究通过制作内毒素血症所致急性肾衰的大鼠模型，观察人参皂甙以及NOS抑制剂L-硝基-精氨酸（L-NNA）对肾组织中NOS表达的影响。     

内毒素血症下大鼠主、肺动脉血红素氧化酶-1的不同表达

感染性休克是一种临床上并非罕见的症候群,对于其发病机制已有很多研究,但仍未完全被阐明。本文旨在研究内毒素血症时大鼠主、肺动脉内血红素氧化酶-1（HO-1）的变化,以明确一氧化碳在感染性休克时体循环和肺循环的不同     

先天性心脏病合并肺动脉高压患者肺组织一氧化氮合酶的表达

目的：通过观察先天性心脏病合并肺动脉高压患者肺组织内皮型一氧化屡合酶（eNOS)的表达，了解其肺血管内皮细胞功能有否异常。方法：32例先天性心脏病患者分为2组，组I：合并肺动脉高压患者（n=16);组Ⅱ：未合并肺动脉高压患者（n=16)。在心内直视术下，取少许右肺中叶组织，利用免疫组织化学和逆转录－聚合酶链反应（RT－PCR）技术，对eNOS进行半定量分析。结果：组Ⅱ患者肺血管内皮细胞内eNOS免疫染色比组I明显增强（F＝93．98，P＜0．01）；组Ⅱ患者肺血管内皮细胞内eNOSmRNA表达比组I明显增高（F＝58．76，P＜0．01）。结论：先天性心脏病合并肺动脉高压患者的eNOS表达减少，造成内源性一氧化氮（NO）生成不足，为该类患者吸入NO治疗肺动脉高压提供了理论依据。     

肝癌组织中一氧化氮合酶及其基因表达的研究

目的 研究肝癌组织中一氧化氮合酶（iNOS）及其基因表达与肝癌发生发展的关系。方法 用免疫组化和原位杂交的方法对21例肝癌及癌旁组织中的诱导型一氧化氮合酶（iNOS)及其基因表达进行原位检测和观察。结果 iNOS阳性反应物质呈黄色或棕黄色,位于细胞浆中。非癌组织（肉眼观距癌组织边缘＞1．5cm）多呈阴性或弥漫弱阳性,但部分非癌组织中可见iNOS呈阳性的细胞呈点状分布;癌旁组织多呈阳性,提示iNOS表达与肝组织癌变有关。癌组织核心多呈阴性或弥漫弱阳性,但分化中和差的癌组织核心也分别有1例iNOS呈强阳性;周边癌组织呈局灶阳性,侵入纤维组织中的弥散癌细胞呈强阳性,提示iNOS的表达与肝癌组织的浸润能力有关。肝癌组织iNOS mRNA阳性细胞的分布与iNOS蛋白的表达基本相似。结论 iNOS蛋白及其基因表达与肝组织癌变及肝癌浸润能力有关。     

Gene expression of inducible nitric oxide synthase in injured spinal cord tissue

ＮＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＯｒｔｈｏｐｅｄｉｃｓ ,ＺｈｕｊｉａｎｇＨｏｓｐｉｔａｌ,ＴｈｅＦｉｒｓｔＭｉｌｉｔａｒｙＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ,Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ 5 10 2 82 ,Ｃｈｉｎａ (ＬｉｕＣＬ ,ＪｉｎＡＭ ,ＺｈｏｕＣＳａｎｄＣｈｅｎＢ)ＴｈｉｓｗｏｒｋｗａｓｓｕｐｐｏｒｔｅｄｂｙｔｈｅＮａｔｉｏｎａｌＮａｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅＦｏｕｎｄａｔｉｏｎｏｆＣｈｉｎａ (Ｎｏ :3980 0 16 6 )ｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅ (ＮＯ) ,ａｈｉｇｈｌｙ ａｃｔｉｖａｔｅｄｍｏｌｅｃｕｌｅ ,ｉｓｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎ…     

诱导型一氧化氮合酶在单侧输尿管梗阻大鼠肾脏的表达

目的:探讨诱导型一氧化氮合酶(iNOS)在单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠术侧肾脏的表达.方法:建立左侧输尿管梗阻模型(UUO组),设假手术组为对照.3 d后应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测iNOS的mRNA水平.结果:与对照组相比,UUO组大鼠肾脏出现明显病理变化,并且其iNOS mRNA表达明显增加.结论:iNOS参与UUO的发生和发展的病理过程.     

大鼠脊髓损伤后一氧化氮合酶基因表达的变化

目的　探讨大鼠脊髓损伤后3种类型一氧化氮合酶（NOS）mRNA表达的变化规律。方法　成年SD大鼠36只,随机分为种类6组,每组6只大鼠。建立大鼠脊髓压迫伤模型,以逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法测定伤段脊髓组织神经型（nNOS）、诱导型（iNOS）及内皮型（eNOS）一氧化氮合酶的mRNA表达情况。结果　脊髓压迫伤后nNOSmRNA及NOSRNA表达增强,伤后6h达到高峰0.633±0.012、1.236±0.207;iNOSmRNA表达亦增高,但在伤后24h才达到高峰1.043±0.049。结论　脊髓损伤后NOSmRNA的表达增强,但不同类型的NOSmRNA变化规律不同,增强或抑制不同NOSmRNA的表达可能减轻脊髓继发性损伤。     

脂多糖对离体大鼠胸主动脉和肺组织HO-1mRNA及蛋白表达的影响

目的 观察离体大鼠胸主动脉和肺组织脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS)孵育后血红素氧合酶－1（HO－1）mRNA及蛋白表达时间依从性的变化。方法 24只Wistar大鼠颈椎脱臼处死，取其胸主动脉和肺组织，随机分成四组：对照组（n=6)，实验组包括LPS3、8、24组（均为n=6)，分别与LPS（1μg/ml）孵育3、8、24h。采用蛋白免疫杂交（Western blot）和半定量聚合酶链反应（RT－PCR）分别测定HO－1蛋白和mRNA表达，结果 与对照组相比，胸主动脉HO－1蛋白表达LPS3组即达最高值（P＜0．05），LPS8和LPS24组仍处于较高水平（P＜0．05）；肺组织HO－1蛋白表达LPS3组已开始升高（P＜0．05）,LPS8力LPS24组仍处于较高水平（P＜0．05）；肺组织HO－1蛋白表达LPS3组已开始升高（P＜0．05），LPS8组达最高水平（P＜0．01），LPS24组有下降趋势，但仍与对照组有差异（P＜0．05）。与对照组相比，胸主动脉HO－1mRNA表达LPS3组即达最高值（P＜0．05），LPS8组较LPS3组无明显变化（P＞0．05），而LPS24且则恢复至始水平；肺组织HO－1mRNA表达LPS3组开始升高（P＜0．05），LPS8组达到最大值（P＜0．01），LPS24组回到基础水平（P＞0．05）。结论 脂多糖可以明显促进大鼠胸主动脉和肺组织HO－1mRNA及蛋白表达，且两种组织表现出不同的时间依从性变化，可能与感染性休克体肺循环不同变化的病生理机制有关。     

缺氧诱导小鼠神经干细胞诱导型一氧化氮合酶的表达

目的　探讨缺氧对小鼠神经干细胞 (NSC)中诱导型一氧化氮合酶 (iNOS)表达的诱导作用。方法　用含表皮生长因子的培养基原代培养NSC ;用免疫组织化学法检测在急性缺氧诱导下iNOS的表达 ;在每张免疫组织化学图像中随机选取 10个细胞 ,用图像分析系统分析经不同缺氧时间处理后平均灰度级变化 ,其灰度级均数间接反映酶表达强度的改变。结果　原代培养的细胞能连续增殖并分化为神经元及神经胶质细胞样细胞 ;行免疫组织化学检测 ,在一般培养条件下 ,NSC及分化细胞中iNOS呈阴性表达 ;经缺氧处理后呈阳性表达。图像分析缺氧诱导 10、3 0min与非缺氧组灰度级均数分别为 :15 8.7± 5 .95、12 8.4± 5 .73、2 0 0 .3± 5 .5 5。结论　用缺氧方法能诱导NSC表达iNOS ,其表达强度与缺氧时间呈正相关。第四军医大学西京医院全军神经外科研究所