颌骨骨髓基质细胞对牙周膜细胞生物学特性的影响

目的观察间接共培养犬颌骨骨髓基质细胞(canine maxillary bone marrow stromal cells, cM-BMSCs)对犬牙周膜细胞(canine periodontal ligament cells, cPDLCs)生物学特性的影响。方法 原代培养犬颌骨骨髓基质细胞和犬牙周膜细胞。MTT法检测犬牙周膜细胞增殖速率;利用Transwell结构建立犬颌骨骨髓基质细胞与犬牙周膜细胞共培养体系;qPCR法检测犬牙周膜细胞矿化相关基因核心结合因子2(Runx2)、碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(OCN)的变化;Western印迹法检测Runx2和OCN蛋白的表达变化。构建牙片/细胞膜片复合体植入裸鼠皮下。结果 两种细胞体外均贴壁生长,呈纺锤状外形;颌骨骨髓基质细胞间接共培养下对牙周膜细胞增殖有抑制作用;共培养组牙周膜细胞ALP活性高于对照组;qPCR和Western印迹法均能检测到牙周膜细胞Runx2、OCN的表达,共培养组牙周膜细胞的Runx2和OCN的表达均高于对照组。经过颌骨骨髓基质细胞条件培养液诱导后的牙周膜细胞与牙本质片复合形成了排列更加有序的牙周膜/牙骨质样结构,单纯的牙周膜细胞膜片不能新生类似的牙周组织复合结构。结论犬颌骨骨髓基质细胞间接共培养情况下可能会限制牙周膜细胞的增殖,促进牙周膜细胞向成骨样细胞分化。     

Mage-D1与活化后的p75神经营养因子受体结合可正向调节大鼠外胚间充质干细胞的矿化

目的 检测Mage-D1与活化后p75NTR的结合及对外胚间充质干细胞（EMSCs）矿化的调控。方法 取孕19.5 d SD大鼠牙胚,组织贴壁法获取EMSCs,流式细胞术检测细胞表面抗原。设置实验分组：空白对照组（NC）,100 ng/mL NGF刺激组（100 ng/mL NGF）、慢病毒干扰Mage-D1组（SH-Mage-D1）。邻位连接技术检测Mage-D1与经NGF活化后p75NTR结合的变化,并比较不同分组间的结合强度差异。茜素红与ALP染色观察染色,RT-PCR与Western blot检测ALP、Runx2、OCN、BSP、OPN、Col1、Msx1及Dlx1的表达水平。结果 组织块贴壁法获得孕19.5 dEMSCs,流式细胞术检测细胞表面抗原结果为CD44、CD90、CD29、CD146,CD105高表达,CD45低表达;邻位连接法检测Mage-D1与经NGF活化后p75NTR的结合随着时间的延长而增多,且实验组与对照组相比结合强度差异具有统计学意义（P<0.05）;茜素红与ALP染色结果显示矿化结节与碱性磷酸酶与强度变化一致;RT-PCR与Western blot检测ALP、Runx2、OCN、BSP、OPN、Col1、Msx1及Dlx1在100 ng/mL NGF组最高（P<0.05）。结论 Mage-D1在外胚层间充质细胞中可与经NGF活化后的p75NTR直接结合,且二者的结合对EMSCs的矿化有正向调节作用。     

LncRNA MALAT1通过miR-34c/SATB2轴对脂肪间充质干细胞成骨分化的促进作用

目的：探讨长非编码RNA肺癌转移相关转录本1（LncRNA MALAT1）通过微小RNA（miR）-34c/特异AT序列结合蛋白2（SATB2）轴对脂肪来源的间充质干细胞（ADSCs）成骨分化的影响,并阐明其作用机制。方法：人ADSCs转染Lenti-NC、Lenti-MALAT1、sh-NC、sh-MALAT1、miR-NC和miR-34c,RT-PCR法检测ADSCs中LncRNA MALAT1、miR-34c和SATB2 mRNA表达水平;miRcode和TargetScan 7.1网站预测并通过荧光素酶报告基因实验验证miR-34c与LncRNA MALAT1、miR-34c与SATB2之间的靶向结合作用;Western blotting法检测ADSCs中成骨标志物Runt相关转录因子2（Runx2）、骨桥蛋白（OPN）和骨钙蛋白（OCN）表达水平;碱性磷酸酶（ALP）染色和茜素红S（ARS）染色检测ADSCs中ALP和ARS水平及钙盐沉积。结果：与第0天比较,ADSCs成骨诱导第3、7、14和21天后,细胞中LncRNA MALAT1、SATB2、Runx2、OPN和OCN蛋白表达水平明显升高（P<0.05）,miR-34c表达水平明显降低（P<0.05）。与Lenti-NC组和sh-NC组比较,Lenti-MALAT1组ADSCs中LncRNA MALAT1表达水平,Runx2、OPN和OCN蛋白表达水平,ALP和ARS水平明显升高（P<0.01）,sh-MALAT1组上述指标明显降低（P<0.01）。与miR-NC+Lenti-NC组比较,miR-34c+Lenti-NC组ADSCs中Runx2、OPN和OCN蛋白表达水平明显降低（P<0.01）,ALP和ARS水平明显降低（P<0.01）,miR-34c+Lenti-MALAT1组ADSCs中上述各项指标比较差异无统计学意义（P>0.05）。与Lenti-NC+miR-NC组比较,Lenti-SATB2+miR-NC组ADSCs中Runx2、OPN和OCN蛋白表达水平及ALP和ARS水平明显升高（P<0.01）,Lenti-SATB2+miR-34c组上述各项指标差异无统计学意义（P>0.05）。结论：LncRNA MALAT1通过miRNA-34c/SATB2轴促进ADSCs的成骨分化。     

地塞米松在创伤性颞下颌关节强直中的作用机制研究

目的 通过建立小型猪髁突囊内骨折（ICF）动物模型,探讨地塞米松在预防颞下颌关节强直中的作用。方法 对15只3个月龄健康小型猪行ICF,随机将猪分为3组：自然愈合组、生理盐水组、地塞米松组。通过定量实时聚合酶链反应（RT-PCR）和蛋白质印迹技术检测血管内皮生长因子（VEGF）、骨钙素（OCN）、骨桥蛋白（OPN）、骨形态发生蛋白（BMP2）的mRNA和蛋白表达水平。结果 与自然愈合组和生理盐水组相比,地塞米松组发生关节强直的风险较小（P<0.05）。术后6个月地塞米松组最大颌骨张开度明显高于自然愈合组和生理盐水组（P<0.05）。在大体标本观察、影像学、组织学检查中,自然愈合组比生理盐水组和地塞米松组有更多的病理变化。自然愈合组VEGF、OCN、OPN蛋白及mRNA表达明显高于生理盐水组和地塞米松组（P<0.05）。结论 VEGF、OCN、OPN和BMP2是参与外伤性颞下颌关节强直的重要蛋白。地塞米松通过抑制VEGF、OCN、OPN的表达,从而降低颞下颌关节强直的发生风险。     

缓释地塞米松改性丝胶蛋白水凝胶支架促进大鼠下颌骨缺损修复：基于调节巨噬细胞M2极化

目的 探究改性丝胶蛋白水凝胶（SMH-CD/DEX）调节巨噬细胞极化促进骨缺损修复的能力。方法 将地塞米松搭载于丝胶蛋白水凝胶构建SMH-CD/DEX水凝胶。通过扫描电镜、傅里叶红外光谱、细胞活性实验和释放曲线测定,对SMH-CD/DEX水凝胶的形貌、化学性质及生物活性进行表征分析。通过Western blot、RT-qPCR、流式细胞术检测THP-1巨噬细胞中iNOS和Arg-1蛋白表达量,IL-6、IL-10、Arg-1、iNOS基因表达水平及CD86、CD206的表达比例。在共培养条件下通过Western blot,RT-qPCR检测h PDLSCs人牙周膜干细胞COL1A1和Runx2蛋白的表达量,ALP、Runx2、OCN、BMP2基因表达量,并进行碱性磷酸酶染色和茜素红染色。在大鼠下颌骨骨缺损模型植入水凝胶,通过Micro-CT扫描和组织病理染色分析新骨形成情况。结果 通过主客体相互作用与化学偶联改性丝胶蛋白水凝胶,成功构建SMH-CD/DEX水凝胶。SMH-CD/DEX水凝胶能够有效提高巨噬细胞M2极化相关标志物的IL-10及Arg-1的表达量（P<0.001）;并...     

聚乙烯亚胺衍生物PEN介导寡核苷酸MT01递送对实验性大鼠牙移动的抑制作用

目的：探讨聚乙烯亚胺（PEI）衍生物PEN介导寡核苷酸MT01的体内局部递送能力,初步阐明其对实验性牙移动模型大鼠牙槽骨改建的影响及生物学安全性。方法：48只Wistar雄性大鼠随机均分为PEN组、MT01组、硫代修饰的MT01（MT01s）组和PEN/MT01组,建立实验性牙移动模型,各组大鼠分别于左侧上颌第一磨牙颊侧牙龈黏膜局部注射以上4种药物作为药物干预侧,右侧上颌第一磨牙颊侧牙龈黏膜局部注射PBS作为PBS对照侧,每3 d注射1次,14d时处死大鼠。HE染色观察大鼠重要脏器组织病理形态表现,大体照片及X线片测量牙移动距离,实时定量荧光PCR（RT-PCR）法检测牙周组织中成骨标志性基因Runt相关转录因子2（Runx2）、成骨细胞特异性转录因子（SP7）和骨钙素（OCN）mRNA表达水平。结果：局部注射以上药物后,各组大鼠的主要脏器组织中均未见明显的炎细胞浸润及结构差异,各脏器组织未见明显异常。与PBS对照侧比较,MT01、MT01s和PEN/MT01组大鼠药物干预侧第一磨牙移动距离均缩小（P<0.05或P<0.01）,PEN组差异无统计学意义（P>0.05）,各组大鼠双侧牙齿近中移动距离的差值PEN/MT01组>MT01s组>MT01组>PEN组,且PEN/MT01组与MT01s组比较差异有统计学意义（P<0.05）。与PBS对照侧比较,MT01s组和PEN/MT01组大鼠药物干预侧牙周组织中Runx2、SP7和OCN mRNA表达水平均明显升高（P<0.05或P<0.01）,且PEN/MT01组升高最为明显;MT01组大鼠药物干预侧牙周组织中Runx2mRNA表达水平降低（P<0.05）,SP7和OCN mRNA表达水平明显升高（P<0.01）;PEN组大鼠药物干预侧牙周组织中Runx2mRNA表达水平降低（P<0.05）,SP7和OCN mRNA表达水平差异无统计学意义（P>0.05）。结论：PEI衍生物PEN可安全递送MT01进入体内,使牙周组织中Runx2、SP7和OCN mRNA表达水平升高,减少实验性牙移动大鼠的牙齿移动距离。     

黄芩苷对人牙周膜干细胞生物学特性的影响及作用机制

【摘要】 目的 探讨黄芩苷（baicalin）对人牙周膜干细胞（PDLSCs）生物学特性的影响及其潜在的作用机制。 方法 体外培养人PDLSCs,将对数期的PDLSCs随机分为：control组（DMEM培养液）、baicalin组（1.0 μmol/L baicalin）、baicalin+XAV939组（1.0 μmol/L baicalin和4.0 μmol/L Wnt/β-catenin信号通路特异性抑制剂XAV939）,采用细胞计数法（CCK-8）检测各组细胞增殖情况,黏附实验和Transwell实验分别检测细胞黏附和迁移能力,酶联免疫检测仪检测碱性磷酸酶（ALP）活性,实时荧光定量PCR（RT-PCR）法检测成骨相关基因骨钙蛋白（OCN）,骨桥蛋白（OPN）和成骨细胞转录因子2（RUNX2）的表达,蛋白免疫印迹（Western blot）法分析Wnt/β-catenin信号通路关键分子β-连环蛋白（β-catenin）、c-myc和细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）的表达。 结果 与control组相比,baicalin组PDLSCs增殖能力明显升高,黏附和迁移能力均明显提高,ALP活性随时间的延长而升高,OCN、RUNX2和OPN基因的表达量明显升高,β-catenin、c-myc和Cyclin Dl蛋白表达显著上调,差异均具有统计学意义 (P＜0.05)。与baicalin组相比,添加XAV939能够部分逆转baicalin对PDLSCs以上各指标的影响。 结论 黄芩苷能够促进PDLSCs增殖、黏附和迁移能力,且可诱导PDLSCs的成骨分化,其作用机制可能与激活Wnt/β-catenin信号通路有关。     

携带siRbpj重组腺病毒载体的构建及其对BMP9诱导骨髓间充质干细胞成骨分化作用影响

目的：构建并筛选特异性干扰Notch信号通路核转录因子Rbpj基因的重组腺病毒,探讨通过Rbpj的经典Notch信号通路在骨形态发生蛋白（bone morphogenetic protein,BMP）9诱导骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells,ＭＳＣs）成骨分化中的作用。方法：设计3对针对小鼠Rbpj的siRNA序列,将其分别亚克隆至pSES-HUS穿梭质粒,再与骨架质粒pAdEasy-1在大肠杆菌BJ5183内同源重组获得重组质粒,经脂质体转染至HEK293细胞中包装扩增腺病毒,利用RT-PCR及Western blot进行筛选、验证有效的干扰腺病毒。该重组腺病毒与AdBMP9处理ＭＳＣs细胞株C3H10T1/2,采用组织化学和RT-PCR检测早期成骨指标碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）和晚期成骨指标骨桥蛋白（osteopontin,OPN）,骨钙蛋白（osteocalcin,OCN）及BMP下游靶基因Id 1、Runx 2等的表达。结果：成功构建了3个重组腺病毒,并筛选出干扰效率最好的AdsiRbpj-2重组腺病毒,转染C3H10T1/2,AdsiRbpj-2可以明显下调BMP9诱导的早期成骨指标ALP的活性及晚期成骨指标OPN、OCN的表达,成骨相关基因Runx 2等的表达也有下降。结论：成功构建了特异性阻断Notch经典信号通路腺病毒载体AdsiRbpj-2,该重组腺病毒能够抑制BMP9诱导的C3H10T1/2细胞的成骨分化进程,从而进一步证明Notch信号通路在BMP9诱导的MSCs成骨分化过程中有着重要的作用。     

贝伐珠单抗引起肝癌细胞HepG2的血管内皮生长因子受体2上调表达

目的 探讨贝伐珠单抗对肝癌细胞HepG2 血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF） 相关受体的影响。 方法 通过不同浓度的贝伐珠单抗降低培养液中VEGF 来模拟低浓度VEGF 的肿瘤微环境,RT-PCR、ELISA、Western lotting 检测肿瘤细胞VEGF 相关受体表达水平的变化。 结果 细胞培养液的VEGF 浓度大幅度下降（P ＜ 0.05） ;可溶性VEGFR2 的浓度出现了上升（P ＜ 0.05） ;HepG2 细胞VEGF 和VEGFR1 表达水平无明显变化（P ＞ 0.05） ;VEGFR2 表达水平出现了明显的上调（P ＜ 0.05）。 结论 贝伐珠单抗导致了肝癌细胞HepG2 大幅度上调了VEGFR2 的表达。     

miR-210促进小鼠BMMSCs血管内皮生长因子的表达和分泌

目的 通过体内与体外的手段验证miR-210能够有效的促进骨髓间充质干细胞(BMMSCs)血管内皮生长因子(VEGF)的表达和分泌.方法 构建慢病毒载体,分别转染BMMSCs和人脐静脉内皮细胞(HUVEC),Lenti-miR-210/BMMSCs和Lenti-LacZ/BMMSCs培养第7天RT-PCR法检测VEGF表达,第14天Western blot法检测VEGF表达,PKH26荧光染色Lenti-miR-210/HUVEC和Lenti-LacZ/HUVEC,Matrigel成管实验24 h,荧光显微镜观察成管效果;agomir-210和agomir-NC分别与BMMSCs复合HyStem-HP凝胶缓释系统裸鼠皮下注射7d后取标本CD31免疫荧光染色.结果 miR-210慢病毒载体转染BMMSCs,第7天RT-PCR和第14天Western blot法检测VEGF表达,明显高于Lenti-LacZ/BMMSCs(P ＜0.05);Matrigel成管实验24 h结果显示:LentimiR-210/HUVEC组与Lenti-LacZ/HUVEC组相比,端端接触明显且管状结构完整;agomir-210和agomir-NC与BMMSCs复合HyStem-HP凝胶缓释系统裸鼠皮下注射7d后标本CD31免疫荧光染色结果:agomir-210组CD31阳性细胞含量明显高于agomir-NC组.结论 通过体内与体外的检测,miR-210过表达能够有效促进BMMSCs血管内皮生长因子的表达和分泌.     

不同浓度雌激素对人源性牙周膜干细胞成骨分化能力的影响

目的：对比研究不同浓度的雌激素对人源性牙周膜干细胞成骨分化的影响。方法：采用DMEM完全培养基将人牙周膜干细胞制成单细胞悬液,分别加入浓度为0、10×10^-10、10×10^-9、10×10^-8、10×10^-7、10×10^-6、10×10^-5mol/L的雌激素,以未加入雌激素的成骨诱导液组（普通DMEM培养基中加入10mMβ-甘油磷酸钠、50μM维生素C及10nM地塞米松）作为阴性对照。培养后实时定量PCR方法分别检测成骨早中晚期关键指标Runx2、ALP和OCN mRNA表达。结果：浓度为10×10^-10、10×10^-9、10×10^-8、10×10^-7、10×10^-6、10×10^-5mol/L的雌激素对人源性的牙周膜干细胞培养均无毒性;不同浓度组间差异无统计学意义（P＞0.05）;在成骨诱导7、14、21天时,Runx2、ALP及OCN mRNA表达在10×10^-7组最高（P＜0.05~0.01）。在不同浓度雌激素组中成骨相关基因的表达均高于阴性对照组（P＜0.05）。结论：当雌激素浓度＜10×10^-7mol/L时,雌激素能够以剂量依赖的方式促进人牙周膜干细胞成骨分化过程中成骨相关基因的表达。当雌激素浓度＞10×10^-7mol/L时,雌激素浓度的增加并未促进成骨相关基因的表达。     

NGF基因转染对牙周膜细胞成骨性的影响

目的 探讨神经生长因子(nerve growth factor,NGF)基因转染对牙周膜细胞(periodontal ligament cells,PDLC)成骨性的影响.方法 运用基因转染技术将NGF基因通过质粒pcDNA3.1-NGF转入PDLC中,利用免疫组化及免疫印记法鉴定转染细胞的表达并观察对其成骨性的影响.结果 免疫细胞化学证实,牙周膜细胞有NGF蛋白表达.转染NGF后的PDLC的OC含量较未转染NGF组明显增高(P＜0.01).结论 转染NGF后的牙周膜成纤维细胞成骨性明显增强,为使牙周膜细胞成为牙周组织再生的种子细胞奠定基础.     

人重组骨形成蛋白-7对人牙周膜成纤维细胞增殖及分化能力的影响

目的:研究人重组骨形成蛋白-7（ rhBMP-7）对体外培养的人牙周膜成纤维细胞(HPDLCs)增殖、分化能力的影响,为进一步探讨其促进牙周组织再生奠定细胞学基础。方法：选取因阻生或正畸需要拔除的牙齿,无菌条件下刮取根中1/3的牙周膜组织,采用组织块法培养牙周膜成纤维细胞,经免疫细胞化学鉴定后接种培养板,加入含浓度为50、100、200及400 μ mol·L^-1 rhBMP-7的培养液。分别于培养后1、3及5 d,采用MTT法测定HPDLCs的增殖能力,采用ELISA检测HPDLCs培养液中ALP的活性。结果:原代牙周膜细胞生长缓慢,加入rhBMP-7后细胞生长旺盛,细胞形态为纺锤形或成纤维样,胞浆透明,生长状态良好。随着时间的延长,rhBMP-7在100、200及400 μ mol·L^-1 各浓度时,HPDLCs细胞的增殖率呈逐渐增加的趋势(P<0.01),但各浓度组间比较差异无显著性(P>0.05);
与对照组比较,100、 200及400 μ mol·L^-1 rhBMP-7 各浓度组HPDLCs细胞裂解液和培养液中的ALP活性均增高(P<0.05或P<0.01),其中200 μ mol·L^-1 rhBMP-7 组ALP活性最高。结论: BMP-7可能通过促进HPDLCs细胞的增殖和向骨细胞分化功能而参与牙周组织改建。     

生物活性复合膜对大鼠牙周组织缺损的修复作用

目的：联合应用胶原（Co）、聚乳酸/聚羟基乙酸共聚体（PLGA）、牙周膜细胞（PDLCs）和血小板胶（APG）制作生物活性复合膜,评价其对大鼠牙周组织缺损的修复效果。方法：合成厚度约0.5 mm的PLGA膜,与PDLCs体外共培养3 d。扫描电镜观察PLGA结构及PDLCs生长情况。选取1只成年雄性Wistar大鼠,抽取全血10 mL制作富血小板血浆（PRP） 1 mL,加入含有1 000 U•mL^-1牛凝血酶的10% CaCl2溶液制成APG。应用酶联免疫吸附法测定全血和PRP中生长因子水平。将60只成年雄性Wistar大鼠随机分为5组,分别制作大鼠下颌牙周骨缺损模型（5 mm×2 mm,去除根面牙骨质）。各组按置入材料不同命名为对照组、PLGA+Co组、PLGA+APG+Co组、PLGA+PDLCs+Co组和PLGA+PDLCs+APG+Co组。术后2、4和6周每组分别处死4只大鼠,HE染色观察新生牙周骨量,应用Image-Pro Plus测量新生牙周骨面积。结果：PLGA膜平均孔径为(131.80±43.97)  μm,孔隙率为60%;PDLCs能在PLGA膜上黏附生长、状态良好。PRP中血小板浓度高达全血的4倍以上,PRP上清液中生长因子水平高于血浆(P<0.05)。术后6周牙周新生骨量PLGA+PDLCs+APG+Co组分别高于PLGA+Co组、PLGA+APG+Co组和PLGA+PDLCs+Co组,差异有统计学意义（P<0.05）; PLGA+APG+Co组和PLGA+PDLCs+Co组高于PLGA+Co组（P<0.05）; PLGA+Co组、PLGA+APG+Co组、PLGA+PDLCs+Co组和PLGA+PDLCs+APG+Co组均高于对照组（P<0.05）;PLGA+APG+Co组与PLGA+PDLCs+Co组间比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论：PLGA膜生物相容性良好,孔径大小适宜,具有良好的机械性能;PLGA+PDLCs+APG+Co生物活性复合膜能促进牙周组织生长,对牙周骨组织缺损修复具有显著作用。     

牙周膜干细胞对脐血单个核细胞分化为破骨样细胞的影响

目的研究牙周组织改建过程中,牙周膜干细胞对破骨细胞形成的影响,初步探讨静压力和诱导因子对牙周膜干细胞调控破骨细胞形成的作用机制。方法有限稀释法克隆化培养牙周膜干细胞,密度梯度离心法分离脐血,收集单个核细胞。建立直接共培养和Transwell间接共培养体系。实验分组:A组,对照组(单纯共培养);B组,静压力组,共培养后第2天即对共培养细胞施加120 KPa压力,持续作用1 h后继续培养;C组,诱导因子组,培养液中加入诱导因子1,25二羟基维生素D3(1×10-8mol/L)和前列腺素E2(1×10-6mol/L)。采用倒置相差显微镜及TRAP染色,骨磨片染色等方法检测破骨样细胞(osteoclast-like cells,OLC)的形成及功能。结果各组第3、7天OLC计数比较结果显示,施加静压力后,直接共培养组OLC数量明显多于间接共培养组(P<0.01);而诱导因子组,直接共培养组OLC少于间接共培养组(P<0.01)。结论牙周膜干细胞能够促进脐血单个核细胞分化为破骨样细胞,且在静压力作用下,两种细胞直接接触时,这种调控作用更为明显。     

TNF-α刺激人牙周膜细胞表达MMP-9的研究

  目的 研究TNF-α对hPDLCs表达MMP-9的影响。方法 分别以1、2、5ng/mL浓度的TNF-α刺激hPDLCs 24h,以及2ng/mL浓度的TNF-α刺激hPDLCs 6h、12h、24h、48h,应用ELISA法测定细胞上清液中MMP-9的表达水平。结果 随着TNF-α浓度增大和作用时间延长,hPDLCs表达MMP-9均增加。结论 TNF-α能够以时间和剂量依赖的方式增强hPDLCs表达MMP-9。     

干细胞因子对牙周膜细胞增殖分化能力的影响

目的探讨干细胞因子（SCF）对体外培养的人牙周膜细胞（hPDLCs）增殖、分化能力的影响。方法无菌条件下刮取因阻生或正畸需要拔除的牙齿根中1／3的牙周膜组织，采用组织块法行体外原代培养，所培养的细胞经免疫细胞化学鉴定后接种于塑料培养板，加入含0.1、1、10、100μmol／L SCF的培养液。然后采用MTT法测定细胞增殖、分化能力，并以ELISA法检测碱性磷酸酶（ALP）活性。结果原代牙周膜细胞组织块法培养的细胞生长缓慢，加入SCF后细胞生长旺盛，细胞形态为纺锤形或成纤维样，细胞质透明，状态良好。SCF在0．1、1、10、100μmol／L时对hPDLCs均有明显的促增殖作用，其中浓度为10μmol／L时促进作用最明显（P〈0.05）。此外，SCF还可以增强hPDLCs的ALP活性，其中浓度为10μmol／L时ALP OD值最高（P〈0.05）。结论SCF对hPDLCs的生物学活性有促进作用，能促使其向成骨细胞方向分化，提示SCF可能有促进牙周组织再生的作用。     

动态牵张应变对人牙周膜细胞的细胞骨架的影响

目的 研究动态牵张应变下人牙周膜细胞（HPDLCs）细胞骨架的变化。方法 体外培养HPDLCs,利用动态牵张应变细胞加载装置对HPDLCs分别加载1%、10%和20%的牵张应变,每种应变分别加载7个时间段（0.5、1、2、4、6、12、24 h）,应用激光共聚焦显微镜观察HPDLCs细胞骨架的形态结构;收集图像并运用Image-Pro Plus 4.5.0.29软件进行分析,测定HPDLCs的面积、长度与宽度比（长宽比）以及细胞骨架蛋白F-actin的积分荧光强度。结果 激光共聚焦显微镜观察发现：随着加载牵张应变的作用时间延长和应变值提高,HPDLCs细胞逐渐呈现栅栏状相互平行排列趋势,且排列方向垂直于牵张力方向,胞体被拉长。图像分析结果显示：加载动态牵张应变后,HPDLCs的细胞面积、长宽比及F-actin的表达量均发生相应的变化。结论 动态牵张应变可引起HPDLCs细胞骨架的变化,并且与施加应变的大小和应变作用时间有关。     

骨髓基质干细胞与黄芪-壳聚糖/聚乳酸支架对犬牙周骨缺损再生的影响

目的:探讨以犬骨髓基质干细胞(bone marrow stem cells,BMSCs)为种子细胞、黄芪-壳聚糖/聚乳酸(astragalus polysaccharides-chitosan/polylactic acid,AP-C/PLA)为支架移植对水平型牙周骨缺损再生的影响。方法:分离并诱导培养自体犬BMSCs细胞,与AP-C/PLA、壳聚糖/聚乳酸(chitosan/polylac-ticacid,C/PLA)支架构建组织工程复合物随机植入10只犬双侧下颌第3,4前磨牙水平型牙周骨缺损处,共40个实验牙位,每组10个牙位,共设4组:空白对照组;AP-C/PLA 培养基对照组;C/PLA BMSCS材料对照组;AP-C/PLA BMSCS实验组。8周后分别收集牙周标本作组织检查和组织学测量。另取2只犬植入AP-C/PLA BMSCS,4周后作组织学检查。结果:体外诱导培养的BMSCs表达Ⅰ型胶原和碱性磷酸酶活性(alka linephos phatase,ALP);4周实验组缺损部位均有不规则的新骨形成;第8周时,新骨逐渐成熟,各组均有不同程度的牙周再生:实验组牙槽骨修复高度和修复率[(2.90±0.41)mm,57.46%]明显高于空白对照组[(0.83±0.30)mm,15.68%]、培养基对照组[(1.46±0.55)mm,30.13%]、材料对照组[(2.67±0.26)mm,51.87%](P<0.01,P<0.01,P<0.05)。结论:黄芪多糖具有促进牙周缺损部位骨形成作用,以BMSCs为种子细胞、黄芪-壳聚糖/聚乳酸为支架的组织工程复合物修复水平型牙周骨缺损可获得部分的牙周组织再生。     

犬牙周膜细胞与骨髓基质细胞组织再生能力比较的实验研究

目的 比较犬骨髓基质细胞(BMSC)和牙周膜细胞(PDLC)体内成骨及成韧带样组织的能力,为牙周组织工程种子细胞的选择提供实验依据. 方法 将体外培养Beagle犬BMSC及PDLC与脱细胞真皮基质(ADM)膜复合后植入裸鼠皮下,以单纯ADM为对照组,分别于术后4周和8周进行标本组织学及免疫组织化学染色分析,比较骨保护素(OPG)和胶原Ⅻ的表达. 结果 复合物植入4周和8周组织学观察显示,BMSC形成骨样组织多于PDLC,面形成韧带样组织少于PDLC.免疫组织化学染色显示,BMSC组的OPG表达量高于PDLC组,但胶原Ⅻ的表达量低于PDLC组. 结论 BMSC体内成骨能力高于PDLC组,但成韧带样组织能力低于PDLC组.