自体组织工程化全层皮肤缺损修复实验研究

目的 为制成含表皮细胞与成纤维细胞的双层皮肤替代物，直接用于修复全层皮肤缺损。方法 选用长枫杂交仔猪10只，酶消化法获取皮肤表皮细胞与成纤维细胞，将原代培养处于对数生长期的表皮细胞、成纤维细胞分别与30％氧化异丙烯F－127混匀成细胞悬液后，种植聚羟基乙酸（polyglycolic acid,PGA)形成细胞－生物材料复合物，用于修复自体动物背部直径4cm全层皮肤缺损，以单纯生物材料（PGA＋氧化异丙烯）充填的创面作为对照组。修复术后1，2，4，8周取材，通过组织学和基底膜特殊染色等方法对新生组织进行评价。结果 第1周新生组织即出现表皮与真皮2层结构，特殊染色观察到连续的基底膜。第2周表皮与真皮均较前增厚。修复后第8周组织工程化皮肤的形态结构均与正常皮肤相似。对照组则无皮肤形成，仅见大量肉芽组织。结论 应用组织工程技术，以PGA 氧化层丙烯为表皮细胞、成纤维细胞载体构建的组织工程化皮肤可修复全层皮肤缺损。     

表皮细胞、成纤维细胞、毛囊同时移植修复全层皮肤缺损的实验研究

我们利用组织工程技术，在修复全层皮肤缺损时，除移植自体表皮细胞与成纤维细胞外，同时移植自体毛囊，在组织工程化皮肤中增加毛囊成分，使其与正常皮肤更加接近。     

复合壳多糖人工皮肤修复家兔全层皮肤缺损的实验研究

目的　探讨复合壳多糖人工皮肤在修复新西兰家兔全层皮肤缺损中的作用。　方法　在无菌条件下将成纤维细胞与复方真皮基质凝胶混合制成真皮替代物 ,然后接种角质形成细胞 ,培养1周后升至液面 ,继续培养 1～ 2周 ,形成人工皮肤。将复合壳多糖人工皮肤移植于家兔的全层皮肤缺损处 ,观察家兔反应 ,定期活检 ,作组织病理检查。　结果　所有家兔创面愈合良好 ,无一例出现移植物下积脓、出血和感染 ,没有明显的免疫排斥反应 ,能长期覆盖创面 ,且具有较好的弹性和抗撕拉性 ,便于操作。　结论　复合壳多糖人工皮肤是一种操作简便的具有良好的组织相容性的生物活性敷料。     

组织工程技术修复全层皮肤缺损的研究

目的　探讨用异体脱细胞真皮基质 (ADM )复合自体表皮角朊细胞 (AKCs)移植修复全层皮肤缺损的可行性。方法　用DispaseII/TritonX 10 0制备ADM。在猪背部两侧分别作 5cm× 5cm的全层皮肤缺损 ,用ADM覆盖创面。 7～ 10d后 ,将AKCs与Pluronic混匀涂布于一侧ADM表面 ,另一侧单纯ADM组作为对照组。术后观察愈合情况 ,比较创面收缩率 ,取材作组织学及电镜观察。结果　ADM去除了所有细胞成分 ,胶原束结构及排列均保持正常 ;ADM在创面成活 ,能诱导成纤维细胞长入和新生血管形成 ,并支持移植于其表面的AKCs生长。 4周时 ,对照组收缩至原面积的 41% ,实验组为原面积的 65 %。结论　ADM可以作为重建真皮层的诱导支架 ;ADM与AKCs复合移植可以形成新生皮肤并修复全层皮肤缺损。     

组织工程皮肤修复全层皮肤缺损的实验研究

目的 探索由人表皮干细胞、成纤维细胞与纤维蛋白支架构建的组织工程皮肤修复全层皮肤缺损的可行性. 方法 将人全层皮肤采用胰蛋白酶消化法使表皮干细胞和真皮成纤维细胞分离后,分别在无血清培养基中行原代及传代培养.将体外扩增培养至第3、4代的表皮干细胞(5×104/mL)和真皮成纤维细胞(1×104/mL)共0.5 mL与纤维蛋白支架(0.5 mL)混合凝固构建组织工程皮肤.取4～5周龄雄性裸鼠45只,体重19.5～20.3 g,平均20.0 g,制备背部全层皮肤缺损模型.随机分为5组,每组9只,分别为空白对照组(C组),创面仅覆盖凡士林油纱,自然愈合;单纯支架组(F组),创面移植无细胞的纤维蛋白支架;表皮支架组(S组),创面移植含有表皮干细胞的纤维蛋白支架复合物;成纤维细胞支架组(Fb组),创面移植含有成纤维细胞的纤维蛋白支架复合物;组织工程皮肤组(T组),创面移植组织工程皮肤.术前及术后1、3、6、8周行全身及移植部位大体观察;移植后3、6、8周,取材行组织学、免疫组织化学及扫描电镜观察. 结果 细胞培养4周后,表皮干细胞培养皿内可见圆形细胞,在加有BrdU的培养液中培养6 d后可见BrdU染色阳性细胞;成纤维细胞培养皿内可见梭形细胞.构建的组织工程皮肤可见CK19免疫荧光染色阳性细胞、Nestin染色阳性细胞.移植后T组新生皮肤较其余各组生长快、瘢痕轻.术后6周,C、F、S、Fb及T组皮肤厚度分别为(0.460 ±0.049)、(0.480 ±0.055)、(0.540 ±0.043)、(0.510 ±0.032)及(0.60 ±0.047)mm,T组明显厚于其余各组,且差异有统计学意义(P＜0.05).术后3、6、8周,HE染色及扫描电镜示,T组新生表皮层数及真皮成纤维细胞、血管数量均多于其余各组,且T组真皮血管及胶原纤维排列均较其余各组整齐;术后3周,Ⅳ型胶原免疫组织化学染色显示,T组已形成连续的染色带,而其余各组均不连续;术后6周,CK14免疫组织化学染色显示,T组可见阳性细胞,其余各组均未见. 结论 用表皮干细胞、成纤维细胞及纤维蛋白支架构建的组织工程皮肤移植后能使创面迅速愈合,可望成为一种较理想的组织工程皮肤.     

组织工程化人工复合皮肤的构建

目的 为皮肤缺失的移植提供具有生物活性的表皮、真皮的组织工程化人工复合皮肤。方法 将体外传代培养的表皮角朊细胞和真皮成纤维细胞分别接种在冷冻干燥及戊二醛交联的I型胶原基质网架的两侧,在液面下培养1周后,改为气－液界面培养,动态观测人工皮肤光镜下组织学形态及电镜下超微结构。结果 人工复合皮肤具有表皮、真皮双层结构。培养过程中表皮逐步增殖、分化、发育,形成基底层、棘细胞层、颗粒层和角质层;真皮基质网架渐渐降解,并逐步被增殖的成纤维细胞及其所分泌的细胞外基质所取代,完成真皮构建。结论 利用组织工程技术体外构建人工复合皮肤,可用于皮肤缺失者的自体移植治疗,体外构建的复合人工皮肤可从根本上解决自体供皮不足,且细胞源于自体皮肤,排除了发生免疫排斥反应和疾病传播的风险,具有安全、有效、实用等优点。     

利用胎儿表皮干细胞构建组织工程皮肤修复裸鼠全层皮肤缺损创面

DMEM培养基、角质形成细胞无血清培养基、重组人表皮生长因子、霍乱毒素、dispase酶（美国Gibco公司），小鼠Ⅳ型胶原、L-谷氨酰胺、纤维蛋白、牛胰岛索（美国Sigma公司）．角蛋白14单克隆抗体、角蛋白19、整合素B，（美国ADI公司），重组人成纤维细胞生长因子2（FGF2，珠海亿胜生物制药有限公司）．凝血酶（奥地利Immuno AG公司），聚乙醇酸（PGA，日本Synthecon公司，[第一段]     

利用聚羟基乙酸构建组织工程皮肤的实验研究

目的 以聚羟基乙酸(PGA)为培养支架，用组织工程方法在体外构建双层、有活性皮肤。方法应用酶消化法分别获取人成纤维细胞(FB)和表皮角质形成细胞(KC)，体外扩增培养。接种HF与PGA上1周后，在复合物表面接种KC，共培养1周将复合物置于气-液界面继续培养。于不同时间段取材。行组织学、超微结构及免疫组织化学检测。结果接种表皮角质形成细胞在“FB-PGA”复合物表面1周后可见2～3层连续的HK在复合物上生长良好；4周时PGA已部分降解，表皮分层分化较完善，抗involucrin染色阳性，透射电镜观察可见表皮细胞分层分化良好。细胞的相邻面有桥粒连接。结论 采用组织工程技术可以在体外构建双层、有活性的人工皮肤；组织工程皮肤具有和正常皮肤相似的组织学特征及生化成分。     

表皮干细胞活性复合皮肤修复裸鼠全层皮肤缺损

目的用表皮干细胞和成纤维细胞作为种子细胞，研制一种增殖能力强具有表皮、真皮的组织工程化人工复合皮肤。方法从幼儿包皮中分离表皮干细胞，用胶原Ⅳ纯化、富集表皮干细胞，接种在3T3细胞滋养层上，将体外传代培养的表皮干细胞和真皮成纤维细胞分别接种在经冷冻干燥及戊二醛交联的I型胶原基质网架的两侧，在液面下培养2周后，改为气-液界面培养，构建复合皮肤，移植到裸鼠全层皮肤缺损处，以表皮细胞胶原海绵复合皮肤和无细胞接种的胶原海绵膜作为对照。术后进行大体观察，在第7、14、21天取材行组织学、免疫组织化学及电镜观察。结果用表皮干细胞构建的复合人工皮肤增殖能力强，新生的皮肤瘢痕轻，形态满意，创面愈合的速度和质量均优于对照组。结论在胶原海绵上用表皮干细胞构建的复合人工皮肤增殖能力强，较好地解决了种子细胞的老化问题，可望成为一种较为理想的皮肤替代物。     

角质细胞与成纤维细胞混合移植修复裸鼠全层皮肤缺损的初步报告

目的：利用组织工程原理探讨修复全层皮肤缺损的理想方式。方法：以裸鼠为动物模型,在皮肤全层缺损区域分别移植纤维蛋白胶(n=10),纤维蛋白胶角质细胞悬液（n=10）,纤维蛋白胶成纤维细胞悬液（n=10）以及纤维蛋白胶角质细胞成纤维细胞悬液（n=10）,术后每天对伤口进行大体观察,第5,7,10,14,21,35d,分别取材活检行组织学及免疫组织化学检查。结果：移植有角质细胞组（2和4组）的创面愈合快,术后10d组织学提示创面完全上皮化,抗人特异性HLA－1型抗原、抗involucrin染色和抗Ⅶ型胶原染色阳性证明新生上皮由移植的人角质细胞形成,抗involucrin染色阳性又证明角质细胞分化成熟有角质层形成,抗Laminin染色、抗Ⅶ型胶原染色阳性提示早期基底膜形成。组织学检查提示第4组新生上皮有许多类似皮钉样结构。结论：培养的角质细胞,成纤维细胞结合纤维蛋白胶移植到创面上后,可以形成复层分化良好、接近正常结构和功能的新生成肤组织。     

Use of autologous tissue engineered skin to treat porcine full-thickness skin defects

Iinn irteiaceln ta uyteoagrrsa,ft sk iann dgra fatlilnoggr hafats e pvroelvpaedra tfiroonms th toebiosynthetic and tissue-engineered living skinreplacements.The production of bioengineered humantissues has led to fascinating diversity of medicalapplications,notably for permanent burn woundcoverage.1For a few decades,various skin substituteshave been introduced for extensive full-thickenss burnmanagement,and also provided new approaches forreconstructive surgery.2-7In addition,allografting ofcu…     

组织工程技术修复皮肤缺损的动物实验

目的　探索应用组织工程技术修复包括皮下组织的皮肤缺损的方法。方法　长枫杂交仔猪 2 0只 ,取腹部 2cm× 2cm全厚皮肤 ,酶消化法获取表皮细胞与成纤维细胞。经原代培养 ,将处于对数生长期的表皮细胞、成纤维细胞分别与 30 %氧化异丙烯F 1 2 7(pluronicF 1 2 7)混匀成细胞悬液后 ,种植于聚羟基乙酸 (polyglycolicacid ,PGA)形成细胞 生物材料复合物 ,用于修复自体背部直径 4cm皮肤缺损 ,以单纯生物材料 (PGA 30 %氧化异丙烯F 1 2 7)修复作为对照组。术后 1、2、4、8周取材 ,通过组织学方法评价新生组织。结果　实验组 :第 1周 ,形成含表皮与真皮两层结构的组织工程化皮肤 ;第 2周 ,表皮与真皮均较前增厚 ;第 8周 ,组织工程化皮肤的结构与正常皮肤相似 ,仅缺乏毛发、毛囊和汗腺等附属器。对照组 :则无皮肤形成 ,仅见大量肉芽组织。结论　以原代培养的表皮细胞与成纤维细胞作为种子细胞 ,PGA 30 %氧化异丙烯F 1 2 7为细胞载体的方法可修复皮肤缺损。     

骨髓基质干细胞复合藻酸钙凝胶修复全层半月板无血运区缺损

目的 观察骨髓基质干细胞复合藻酸钙凝胶注射式修复全层半月板无血运区缺损的效果.方法 2008年6月至2009年2月制造成年山羊半月板前角无血运区全层缺损模型.以自体骨髓基质干细胞复合可注射藻酸钙凝胶修复半月板缺损(Ⅰ组),同时设立单纯载体组(Ⅱ组)和空白对照组(Ⅲ组).术后4、8、16周处死动物,行大体观察,组织学观察、电镜观察和MRI检查并比较修复效果.结果 Ⅰ组缺损完全被修复组织填充,结合紧密,与正常半月板组织相似,在4～16周效果逐渐改善,大体观察优于其他各组.光镜见细胞随凝胶纤维排列分布,载体纤维间隙大多为细胞分泌基质所充填,细胞排列密集,基质分布均匀.透射电镜见Ⅰ组细胞呈软骨细胞样形态,细胞突起较多,细胞器丰富,细胞为不同走向排列的纤维包绕.MRI检查发现Ⅰ组修复效果较好.结论 骨髓基质干细胞复合藻酸钙凝胶注射可有效地修复全层半月板无血运区缺损.     

Repair of necrosis and defects of penile skin with autologous free skin flap

We described a 27-year-old case of avulsion and traumatic degloving of penile with extensive penis skin necrosis.Under general anesthesia,donor skin was partially resected from lower limbs according to defect area of penile skin.Then shear the shape of graft was sheared,sutured to hostage skin defect and enswathed with tension.The posto-perative appearance and function of the penis were satisfactory.It is suggest the homologous free skin flap fromlower limbs is suitable for penile skin repair and beneficial to patient resulting in satisfactory erection and shape.(Asian J Androl 2006 Nov;8:741-744)     

局部皮瓣在唇颊部软组织缺损中的应用

目的 探讨应用局部皮瓣修复唇、颊部软组织缺损的临床疗效.方法 根据唇、颊部软组织缺损的范围,设计相应的局部皮瓣转移修复缺损.自2008年11月至2010年10月,对36例唇、颊部皮肤软组织病变切除后造成的缺损患者进行修复.结果 术后随访患者3～6个月,皮瓣完全成活,供、受区切口均愈合良好,瘢痕不明显,修复效果满意.结论 局部皮瓣修复唇、颊部软组织缺损是临床上实用有效的方法,且美容效果良好.     

Treatment of full-thickness chondral defects with autologous chondrocyte implantation

Autologous chondrocyte implantation (ACI) is a reproducible treatment option for large full-thickness symptomatic chondral injuries with appropriate knowledge of technique and patient selection. It provides a cellular repair that offers a high percentage of good to excellent clinical results over a long follow-up period. It is applicable over a wide range of chondral injuries from simple to more complex lesions. It is essential that the intra-articular environment be as close to normal as possible for successful cartilage repair. Coexisting knee pathology must be aggressively treated. ACI does have a prolonged postoperative rehabilitation course necessitated by the biologic nature of the repair, and patients must be able to comply with the rehabilitation and temporary restrictions required for a successful outcome.     

阴股沟皮瓣修复手部软组织缺损

应用吻合血管的阴股沟游离皮瓣修复手部软组织缺损１３例均获得成功，效果满意。该皮瓣薄，皮下脂肪少，移植后外形不臃肿，供区隐蔽，创面可直接缝合，是修复手部软组织缺损的理想供区。     

阴股沟皮瓣修复手部软组织缺损

应用吻合血管的阴股沟游离皮瓣修复手部软组织缺损13例均获得成功,效果满意。该皮瓣薄,皮下脂肪少,移植后外形不臃肿,供区隐蔽,创面可直接缝合,是修复手部软组织缺损的理想供区。     

Skin substitutes with noncultured autologous skin cell suspension heal porcine full-thickness wounds in a one-stage procedure

Clinical application of skin substitute is typically a two-stage procedure with application of skin substitute matrix to the wound followed by engraftment of a split-thickness skin graft (STSG). This two-stage procedure requires multiple interventions, increasing the time until the wound is epithelialised. In this study, the feasibility of a one-stage procedure by combining bioengineered collagen-chondroitin-6-sulfate (DS1) or decellularised fetal bovine skin substitute (DS2) with autologous skin cell suspension (ASCS) in a porcine full-thickness wound healing model was evaluated. Twelve full-thickness excisional wounds on the backs of pigs received one of six different treatments: empty; ASCS; DS1 with or without ASCS; DS2 with or without ASCS. The ASCS was prepared using a point-of-care device and was seeded onto the bottom side of DS1, DS2, and empty wounds at 80 000 cells/cm². Wound measurements and photographs were taken on days 0, 9, 14, 21, 28, 35, and 42 post-wounding. Histological analysis was performed on samples obtained on days 9, 14, 28, and 42. Wounds in the empty group or with ASCS alone showed increased wound contraction, fibrosis, and myofibroblast density compared with other treatment groups. The addition of ASCS to DS1 or DS2 resulted in a marked increase in re-epithelialisation of wounds at 14 days, from 15 ± 11% to 71 ± 20% (DS1 vs DS1 + ASCS) or 28 ± 14% to 77 ± 26 (DS2 vs DS2 + ASCS) despite different mechanisms of tissue regeneration employed by the DS used. These results suggest that this approach may be a viable one-stage treatment in clinical practice.