肝豆状核变性ATP7B基因外显子突变研究

目的研究Wilson病（WD）ATP7B基因突变的特点,探讨WD基因诊断的意义和方法,并分析WD患者基因型和临床表型之间的关系。方法应用PCR产物直接DNA测序法对18例WD患者及其21例亲属的第8、12、14号外显子进行检测,分析临床袁型与ATP7B基因突变类型的关系。结果（1）3个外显子共发现7种类型突变,均为点突变,其中同义突变3种,错义突变4种;（2）Arg778Leu突变和Lys952Arg突变的患者与其无该点突变的患者比较,临床表现都未见明显差异。结论（1）产物DNA直接测序法可用于WD的早期诊断;ATP7B基因8号外显子778密码子是WD患者的高频突变位点;12号外显子952密码子可能是WD患者的高频突变位点;我们的实验未发现14号外显子基因突变;（2）Arg778Leu突变和Lys952Arg突变与临床表型在本研究中均未发现有相关性。     

苯丙氨酸羟化酶基因部分外显子突变研究

目的：探讨苯丙酮尿症(PKU)患者PAH基因突变特点。方法：用PCR—SSCP和PCR—DNA测序法对天津河北等地的70例无血缘关系并已确诊为PKU患者的基因组DNA进行PAH基因外显子3、5、6、7、10、11和12的突变基因分析。结果：70例PKU患者共140条染色体，共发现26种突变，含错义突变14种、无义突变5种、同义突变4种、剪接位点突变2种和缺失突变1种。除4种同义突变外，阳性突变率为64．28％。其中DelS70、R176X、R261X、L385L、IVS5nt 1g→a、A165D、G247R、Y325X、G344E和R413G占总突变种类的38．5％(10／26)。结论：天津河北等地的PAH基因突变类型复杂，有些常见突变的发生频率与以往报道的地域分布略有不同。     

肝豆状核变性患者ATP 7B基因外显子8、12、18的DNA测序突变

目的 对肝豆状核变性(WD)患者ATP7B基因外显子(exon)8、12、18进行PCR扩增测序,研究其突变特点.方法 对30例患者(WD组)和10例健康者(对照组)提取外周血基因组DNA,PCR扩增ATP7B基因外显子8、12、18相关片段,并对扩增产物进行测序和分析测序结果 .结果 对照组未见异常,WD组发现12例患者外显子8有突变,突变率为40.0%,测序发现有6例患者外显子Arg778leu呈复合杂合子突变;发现4例外显子12有突变,有2例患者存在双重突变,外显子18未检出突变.结论 WD的ATP7B基因外显子8、12为突变的热点区,18号外显子不是突变热点.     

慢性髓系白血病STI571耐药与Bcr-Abl基因点突变的关系

目的通过Bcr-Abl激酶ATP结合区测序分析,探讨慢性髓系白血病(CML)STI571耐药与Bcr-Abl基因点突变的关系。方法将CML患者分为对STI571耐药和非耐药两组,细胞系分为STI571耐药细胞系K562/G01、野生型K562/W细胞,进行骨髓单个核细胞或细胞系细胞Abl基因ATP结合区双向测序分析,了解Abl酪氨酸激酶ATP结合区点突变情况。PCR产物的序列长度为344bp,其中的180bp(98～277bp)为ABL激酶的第906～1085bpDNA序列片段,涵盖了Abl激酶的ATP结合区序列。结果K562/G01耐药细胞ABL激酶ATP结合区DNA测序与K562/W相同,与ABL激酶原序列相比,有两个同义点突变。在STI571耐药急变的CML患者骨髓单个核细胞Abl激酶ATP结合区测序结果发现:在8例耐药急变的患者中2例患者第944位核苷酸C→T单个碱基出现点突变,使苏氨酸(Thr)突变为异亮氨酸(Ile)。1例CML-CP的患者第1070碱基A→G替换,导致357位赖氨酸(Lys)→精氨酸(Arg)。结论Bcr/Abl融合基因ATP结合区的点突变是CML中STI571耐药的重要原因之一,对指导临床用药具有重要价值。     

1型糖尿病线粒体基因突变的研究

目的：探讨线粒体基因突变在天津地区1型糖尿病中的发生率及其与1型糖尿病的关系。方法：随机抽取30例1型糖尿病患者，27例健康者为对照组，提取其外周血总的DNA，以聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）及克隆法检测线粒体基因ND1、ND4及tRNA^LEU（UUR）3 243突变。结果：糖尿病组发现1例3394T→C突变（3．3％），1例12026 A→G突变（3．3％），1例tRNA^LEU（UUR）3 243A→G突变（3．3％）。对照组未发现线粒体基因突变者。2组间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：1型糖尿病中3 394T→C突变、12026A→G突变可能是线粒体基因变异的一种多态性表现，tRNA^LEU（UUR）3243A→G突变所致的线粒体糖尿病是1型糖尿病中的一种独特亚型。     

线粒体基因突变糖尿病的临床基因诊断技术

目的：了解线粒体基因突变在我国2型糖尿病（DM）人群中的存在情况，并为建立一种简便，快速的线粒体基因突变糖尿病的诊断方法提供基础。方法：采用PCR－RFLP方法对随机抽取的无亲缘关系的178例2型DM患者和150例健康对照的线粒体DNA突变热点区域tRNALeu(UUR)基因及其邻近区域内（nt2995-3494)4个位点，即nt3243,3316,3394,3426进行突变筛查。结果：在178例2例DM患者中发现5例nt3316G→A突变；对照组中未检出任何突变（P＜0．05），nt3316G→A突变频率为2．81％，突变使非极性的丙氨酸被极性的苏氨酸所取代（GCC→ACC），结论：nt3316G→A突变可能是2型糖尿病的易感因素之一，该方法简便易行，具有较高的特异性和敏感性，为线粒体基因突变糖尿病的临床诊断及群体筛查提供了基础。     

应用DHPLC筛查先天性巨结肠RET基因突变研究

目的：应用DHPLC方法筛查先天性巨结肠RET基因突变。方法：提取32例先天性巨结肠患者的全血DNA，聚合酶链反应后应用DHPLC方法分析11、13、15号外显子的基因表达情况。结果：DHPLC技术分析有13例出现双峰，经测序后有1例突变为Gln849Lys，在15号外显子上；有3例患者有基因多态性：1例为Ser667Ser，在11号外显子上；2例为Leu746Leu，在13号外显子上。结论：DHPLC是一种快速有效的基因突变筛查方法，RET基因的突变和基因多态性与先天性巨结肠的发生密切相关。     

山西省21-羟化酶缺乏症基因型与临床表型相关性分析

目的研究山西省21-羟化酶缺乏症患儿的基因突变,探讨基因型和临床表型的相关性。方法回顾性分析2014年1月至2016年10月山西省儿童医院收治的15例21-羟化酶缺乏症患儿的临床资料,采用Sanger测序法进行CYP21A2基因突变分析。CYP21A2基因检测结果与其临床表型进行比较,分析基因型与临床表型的相关性。结果 (1)本组15例患儿均为经典型患者,其中失盐型(SW)8例,单纯男性化型(SV)7例。(2)15例患儿共检测出7种突变,包括IVS2-13A/C>G、I172N、R356W、E3Δ8bp、c.1064G>A、c.141C>A、c.121C>T。最常见的突变为IVS2-13A/C>G(40%),其余常见突变依次为R356W(17%)、I172N(17%)及E3Δ8bp(7%)。SW最常见的突变为IVS2-13A/C>G和R356W,其等位基因频率分别达50%和19%。SV患者最常见的突变为I172N,其等位基因频率为36%。(3)SW、SV中基因型与临床表型的阳性预测值分别为88%、100%。结论 IVS2-13A/C>G、R356W、I172N为21-羟化酶缺乏症患儿常见突变,山西省热点突变为IVS2-13A/C>G。经典型患儿基因型与临床表型具有明显相关性。     

宁波地区乳腺癌BRCA1基因突变检测的研究

目的通过对宁波地区60例乳腺癌BRCA1基因突变检测,了解宁波地区乳腺癌患者BRCA1基因突变位点及携带分布情况。方法选择2014~2015年宁波市第七医院甲乳外科收治的无血缘关系原发性乳腺癌患者共60例。全部为女性,年龄22~69岁,平均43岁,静脉采血提取DNA,对BRCA1基因进行全长测序。BRCA1基因的突变通过DNA扩增并送交测序,结果经测序证实。统计分析BRCA1基因突变情况。结果 60例遗传性乳腺癌,共发现14例(23.33%)BRCA1基因突变,其中185 del AG(2例)、4956 AG(2例),1100del A(1T例),IVS17-1GT(1例),3449 ins A(1例),其余突变在BIC数据库中未见报道。在三阴性乳腺癌中BRCA1突变组织分期较晚,发病年龄偏早。结论宁波地区乳腺癌BRCA1基因突变率较高,多为移码突变;三阴性乳腺癌BRCA1突变的组织分期较高;在宁波地区BRCA1基因的185 del AG、4956 AG为BRCA1基因突变热点。     

一种新的脂蛋白脂肪酶基因突变(C562→T)

目的:筛查国人(天津地区)脂蛋白脂肪酶基因突变情况,并探讨其对血脂水平的影响。方法:利用聚合酶链反应-单链构象多态性分析技术,对386例患者(血脂正常组278例,血脂异常组108例)的脂蛋白脂肪酶基因进行突变筛查,对可疑突变的扩增样品进行DNA序列测定。结果:在386例样本中,检出1例外显子3C562→T(Leu103→Leu)同义突变杂合子。结论:新LPL突变(C562→T)的发现,对进一步阐述LPL结构与功能的关系有重要的参考价值。