健康汉族人群MBL Exon I 54位密码子点突变及其血浆含量分析

目的 建立检测甘露(聚)糖结合凝集素(MBL)基因Exon I54位密码子点突变的方法,初步调查健康汉族人MBL基因54位密码子点突变的情况,检测其血浆MBL含量,探讨二者的相关性.方法 根据MBL基因序列设计引物,建立MBL基因点突变检测方法(即PCR-RFLP);用MBL Oligomer ELISA试剂盒测定出血浆MBL的浓度.结果 建立了特异、敏感的检测MBL基因54位密码子点突变的方法,测得健康汉族人该基因突变频率为0.23;血浆MBL含量的平均值为(1.99±1.51)mg/L;二者呈负相关(r=-0.62,P＜0.001).结论 所建立的测定MBL的PCR-RFLP方法,特异性高,重复性好,且较为灵敏(最低检出量为160pgDNA)检出健康汉族人MBL的基因点突变频率与其血浆含量,且二者呈负相关.     

健康汉族人群MBL ExonⅠ 54位密码子点突变及其血浆含量分析

目的建立检测甘露(聚)糖结合凝集素(MBL)基因ExonⅠ54位密码子点突变的方法,初步调查健康汉族人MBL基因54位密码子点突变的情况,检测其血浆MBL含量,探讨二者的相关性。方法根据MBL基因序列设计引物,建立MBL基因点突变检测方法(即PCR-RFLP);用MBL O ligom er ELISA试剂盒测定出血浆MBL的浓度。结果建立了特异、敏感的检测MBL基因54位密码子点突变的方法,测得健康汉族人该基因突变频率为0.23;血浆MBL含量的平均值为(1.99±1.51)mg/L;二者呈负相关(r=-0.62,P<0.001)。结论所建立的测定MBL的PCR-RFLP方法,特异性高,重复性好,且较为灵敏(最低检出量为160 pgDNA)检出健康汉族人MBL的基因点突变频率与其血浆含量,且二者呈负相关。     

等位基因特异性扩增法对MBL基因单核苷酸多态性分析

[目的]建立检测人甘露糖结合凝集素（MBL）基因外显子I54位密码子方法，进一步深入研究MBL基因突变引起调理吞噬缺损的机制、MBL分子的结构与功能关系及MBL在临床中的治疗应用价值。[方法]PCR扩增测定序列并建立MBL基因点突变检测方法，即PCR—ARMS方法。[结果]建立了检测MBLPCR方法，只需一步PCR反应和常规电泳技术就可以检测MBL基因的3种基因型：野生犁、突变型、突变杂合型。[结论]（1）建立的MBLPCR—ARMS测定点突变的方法具有较好的特异性、重复性、灵敏度；（2）以该法调查健康汉族人的基因突变频率0.1602。     

反复呼吸道感染儿童血浆MBL水平及基因突变特征

目的探讨血浆甘露聚糖结合凝集素（MBL）水平及基因多态性与儿童反复呼吸道感染（RRTI）的关系。方法选择110例RRTI儿童及111例健康儿童（均为汉族）为研究对象。应用酶联免疫吸附试验（ELISA）方法检测其血浆MBL水平,聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）方法检测MBL基因第一外显子54密码子、57密码子基因型和多态性。结果 RRTI儿童血浆MBL水平显著低于健康儿童组（t=7.19,P〈0.01）;各年龄段RRTI儿童血浆MBL水平均明显低于同年龄段健康儿童组（t=2.15～3.55,P〈0.05、0.01）,但RRTI儿童各年龄段间比较差异无显著性（P〉0.05）。RRTI组MBL水平低下者检出率（23%）显著高于健康儿童组（6%）（χ2=9.12,P〈0.01）,MBL基因第一外显子54密码子基因型GGC/GGC、GGC/GAC、GAC/GAC分别对应高、中及低血清MBL水平。RRTI组MBL基因第一外显子54密码子等位基因GAC及GGC/GAC型突变杂合子频率显著高于健康儿童组（χ2=4.47～5.64,P〈0.05）。两组均未检出57密码子突变个体。结论 MBL缺陷是RRTI的重要原因,与低MBL水平相关的MBL基因第一外显子54密码子等位基因GAC是儿童RRTI的危险因素。     

新疆哈萨克及维吾尔族SLE和RA患者MBL基因多态性调查

目的 对新疆哈萨克及维吾尔族人群中系统性红斑狼疮(SLE)及类风湿关节炎(RA)患者甘露糖结合凝集素基因54位密码子点突变进行测定并分析.方法 PCR-RFLP.结果 42例哈萨克族SLE患者基因频率:0.536(GGC),0.464(GAC);24例维吾尔族SLE患者基因频率:0.667(GGC),0.333(GAC);22例哈萨克族RA患者基因频率:0.614(GGC),0.386(GAC);15例维吾尔族RA患者基因频率:0.733(GGC),0.267(GAC).结论 MBL不同的基因型和这些疾病发生可能存在相关.     

MBL基因多态性及血清MBL浓度与狼疮性肾炎的关系

目的探讨狼疮性肾炎(LN)与甘露聚糖结合凝集素(MBL)基因第一外显子54位密码子和启动子序列多态性及血清MBL浓度的关系。方法用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)分析技术和序列特异性引物PCR(SSP-PCR)技术分析对照组(n=40)和LN组(n=49)MBL第一外显子54位密码子及启动子区-550的H/L和-221的X/Y多态性。用ELISA法测定血清MBL浓度。结果LN组MBL第54位密码子GAC等位基因频率高于对照组(0.173vs0.112),但无显著性差异;启动子单倍型LX显著高于对照组(P(0.05);对照组GGC/GGC基因型和启动子HY/HY型的血清MBL浓度显著高于LN组(P<0.05～0.01)。LN组和对照组中血清MBL浓度低于1000μg/L者分别为40.8%和17.5%,两组相比有显著性差异(P(0.05)。结论LN患者血清MBL浓度显著降低与MBL基因启动子LX型增加有关。     

中国人肝豆状核变性基因突变热点区的快速检测

目的 探讨中国人肝豆状核变性(Wilson's disease,WD)患者和携带者基因突变热点区的简便、准确的检测方法。方法 采用聚合酶链反应．限制性酶切多态性技术(PCR-RFLP)对35例WD患者和50例健康体检者检测中国WD基因——P型铜转运三磷酸腺苷酶(ATP7B)外显子8的密码子778位基因突变。结果 35例WD患者共检出4例778位突变纯合子和ll例杂合子,纯合子检出率11．4％,杂合子检出率31．4％。50例正常对照中无一例突变。结论 ATP7B基因8号外显子778位是中国人WD的高频突变点,PCR-RFLP法具有简便、准确的优点。     

甘露糖结合凝集素基因多态性与妊娠糖尿病的关系

摘要:目的：探讨甘露糖结合凝集素(MBL)基因外显子上的52、54、57密码子以及其启动子区域 550位点多态性与妊娠糖尿病(GDM)发病的关系。 方法：选取GDM患者、正常妊娠对照各75例,检测血糖、血压、血清MBL水平,并用基因测序法检测并分析MBL基因外显子上的52、54、57密码子以及启动子区域 550位点的序列特征。 结果：GDM组和正常妊娠对照组MBL基因外显子上的54位密码子和启动子区550位点存在多态性,并且其对应的等位基因频率存在统计学差异（χ²分别为5.811和6.475,P<0.05）,Logistic回归分析显示其突变型为GDM的危险因素。正常妊娠对照组血清MBL水平高于GDM组（t=3.10,P<0.05）。54位密码子位点的野生型、杂合型、纯合突变型血清MBL水平差异有统计学意义（F=81.939,P<0.05）。 结论: MBL基因外显子上的54密码子及启动子区 550位点多态性位点与南京地区汉族GDM有关。     

应用焦磷酸测序法检测进展期结直肠癌中K-ras基因点突变

目的建立基于焦磷酸测序技术(Pyrosequencing)的结直肠癌K-ras基因点突变的检测方法,并应用于进展期结直肠癌及其转移灶中K-ras基因突变的检测。方法提取116例Ⅳ期结直肠癌及11例转移灶中的DNA,进行PCR扩增后应用Pyrosequencing法检测K-ras基因12及13密码子点突变。结果 116例Ⅳ期结直肠癌中有29例检出K-ras基因点突变,突变率为25.0%,在所有29例突变病例中12密码子点突变率为82.8%(24/29),13密码子点突变率为17.2%(5/29),所有11例转移灶的K-ras基因均与其原发病灶相一致。结论 Pyrosequencing能准确、快速、高通量地进行K-ras基因点突变测定,适合大规模临床标本检测,有利于指导结直肠癌尤其是转移性病变的个体化治疗。     

K-RAS基因突变的套式PCR检测及其在大肠癌中的应用

目的探讨高敏感性K-RAS基因点突变检测方法在大肠癌临床的应用价值。方法用套式聚合酶链反应结合限制性片段多态性分析(PCR-RFLP)检测大肠癌组织及其癌旁组织K-RAS基因第12密码子点突变。结果癌组织K-RAS基因第12密码子点突变率为12%(4/34),表现为GGT→GAT和GGT→GTT,癌旁组织无K-RAS突变。伴有12密码子突变的大肠癌以隆起型为主,患者年龄较大,均属C和D期。结论大肠癌患者K-RAS基因突变与患者的年龄、肿瘤的大体形态和患者Dukes分期等临床病理参数有关。     

免疫学检验与临床

082066蒙古族与回族人群MBL结构基因型及其与血浆蛋白浓度的关系／梁园…∥中国免疫学杂志．-2008,24（4）．-328～331用ELISA法检测血浆甘露聚糖结合凝集素（MBL）浓度,用序列分析法分析MBL基因外显子1区52、54和57密码子的单核苷酸多态性,分析内蒙古自治区蒙古族人群和宁夏回族自治区回族人群血浆MBL的结构基因型,并探讨其与血浆蛋白浓度的关系。     

一个汉族脊柱-骨骺发育不良伴进行性假性类风湿样骨发育不良家系WISP3基因突变筛查

目的:观察常染色体隐性遗传病脊柱-骨骺发育不良伴进行性假性类风湿样骨发育不良(PPD)患者的临床特征及影像学表现,并筛查致病基因WISP3的突变类型。方法:采用聚合酶链反应(PCR)和基因组DNA直接测序技术,检测一个非近亲婚配PPD家系4名家庭成员外周血标本中的WISP3基因编码区DNA序列,同时选择100名健康志愿者进行该位点突变检测。结果:该家系中先证者的WISP3基因存在一个新的纯合突变p.Glu243AspfsX13,表现为第5外显子缺失7个碱基(GAAAAGA)。该突变导致243位密码子编码谷氨酰胺变为编码天冬酰胺,其后因产生移码突变而使终止密码子提前产生,氨基酸编码终止在p.256位。先证者的父亲、母亲和姐姐均为该突变杂合子。同时,在100名健康志愿者中进行该基因突变检测,均未发现上述突变。结论:①p.Glu243AspfsX13纯合突变为导致该疾病的一个新突变;②WISP3基因的p.Glu243AspfsX13突变是导致我国汉族人PPD发生的一种突变类型。     

结核分枝杆菌临床分离株利福平耐药表型及rpoB基因型分析

目的分析结核分枝杆菌(mycobacterium tuberculosis,MTB)临床分离株利福平(rifampin,RFP)耐药表型及rpoB基因突变关系,阐明MTB RFP耐药株rpoB基因突变特征。方法采用改良罗氏培养基比例法检测387株MTB临床分离株对RFP敏感性,并进行rpoB基因测序。对经测序rpoB基因511位和533位密码子突变株进行RFP最小抑菌浓度(MIC)检测。结果比例法检测387株MTB临床分离株中1,98株RFP耐药株,189株RFP敏感株。rpoB基因测序结果表明1,98株比例法RFP耐药株中1,92株(96.97%)发生rpoB基因突变,涉及16种单位点和24种双位点密码子联合突变类型,单位点和双位点密码子联合突变率分别为84.34%(167/198)和12.63%(25/198),其中发现1种单位点和21种双位点密码子联合突变新类型。最常见的突变位点为531位(51.01%)、526位(21.21%)和516位(7.07%)密码子。6株(3.03%)耐药株在rpoB测序范围内未见突变。189株比例法RFP敏感株中,174株(92.06%)在rpoB基因测序范围内未见突变1,5株(7.94%)发生突变,其中7株CTG511CCG(Leu→Pro)突变和6株CTG533CCG(Leu→Pro)突变。511位和533位密码子突变株MIC检测结果提示其突变与低度耐RFP相关。结论所得数据及一些新的发现为进一步研究MTB RFP耐药机制、研制快速新型分子药敏试验方法提供理论和实际应用依据。     

胰液K-ras12密码子点突变联合胰液CA19-9水平与胰腺癌的复发关系

目的：探讨胰液中K-ras12基因密码子点突变和胰液CA19-9水平与胰腺癌术后复发的关系。方法：采用内镜ERCP从胰管收集的胰液标本，测定48例临床及手术证实的胰腺癌患者胰液CA19-9水平，并采用聚合酶链反应-限制性片断长度多态性分析（PCR-RFLP）检测胰液K-ras基因12密码子点突变，分析K-ras12密码子点突变及胰液CA19-9水平与胰腺癌术后复发的关系。结果：（1）胰液中K-ras12密码子点突变率为54.17%，与肿瘤大小密切相关（P〈0.05）。K-ras12密码子点突变阳性、阴性表达病例3年复发率分别为61.90%和38.10%。（2）胰液CA19-9高水平且K-ras12密码子点突变阳性组3年复发率为62.5%，而胰液CA19-9低水平且K-ras12密码子点突变阳性组3年复发率为30.0%，两者有显著差异检测（P〈0.05）。结论：联合胰液中K-ras12密码子点突变和胰液CA19-9水平可作为判断胰腺癌术后复发的有效指标，多因素分析对判断胰腺癌术后复发更有价值。     

张家口地区回族中小学生甘露糖结合凝集素基因外显子I 52位密码子基因频率特征分析:与汉族健康人群的对照

目的了解张家口地区回族中小学生甘露糖结合凝集素基因外显子I52位密码子基因突变频率.方法[1]于2003-08选择张家口地区康保县处长地乡回族中学和米家营小学回族学生100人,男61人,女39人.于2003-10张家口市中心血站献血人员169人作为对照,男122人,女47人,均为汉族.所有纳入对象均为健康人群,且对检测指标均知情同意.[2]进行甘露糖结合凝集素外显子I 52位密码子基因突变的序列特异性引物聚合酶链式反应检测.[3]计数资料差异比较采用χ2检验.结果[1]回族人群100人,汉族人群169人,均进入结果分析,无脱落者.[2]回族中小学生100人,野生型为100人(100%);基因频率CGT为1.汉族人群169名汉族人52位密码子的野生型为161人(95.3%),突变杂合型为8例(4.7%),基因频率分别为CGT为0.976 3;TGT为0.023 7.回族中小学生甘露糖结合凝集素外显子I 52位密码子基因度明显低于汉族人群(P＜0.05).结论血清甘露糖结合凝集素外显子I 52位密码子的点突变频率在不同的民族略有差异,汉族突变度显著高于回族.     

MBL ExonI54位点和NFκB1-94ins/del ATTG基因多态性与急性白血病患者化疗后粒细胞缺乏性发热的相关性研究

目的:探讨汉族人群的甘露聚糖结合凝集素(mannan-binding lectin,MBL)结构基因第1外显子第54位点和NFκB1基因启动序列-94ins/del ATTG基因多态性与初诊急性白血病患者首次化疗后发生粒细胞缺乏性发热的相关性。方法:检测汉族人群初诊急性白血病(M3型除外)接受首次化疗患者的MBL ExonI 54位点和NFκB1-94ins/del ATTG基因多态性分布,分析两种基因多态性与急性白血病患者首次化疗后发生粒细胞缺乏性发热的相关性。结果:共检测76例患者,并未发现MBL ExonI 54位点和NFκB1-94ins/del ATTG基因多态性与急性白血病患者化疗后粒细胞缺乏性发热相关,差异无明显统计学意义(P0.05);而且急性白血病患者化疗后粒细胞缺乏性发热组的MBL ExonI 54位点和NFκB1-94ins/del ATTG的不同基因型与患者的性别、年龄、不同疾病类型、首次化疗后疾病状态和化疗后的粒细胞缺乏性程度均无明显相关性(P0.05),但MBL ExonI 54位点突变(GGC54GAC)患者发生粒细胞缺乏性发热持续时间比无突变患者发生粒细胞缺乏性发热持续时间长(5 d vs 3 d P0.05)。结论:MBL ExonI 54位点和NFκB1-94ins/del ATTG基因多态性与汉族人群急性白血病患者首次化疗后发生的粒细胞缺乏性发热无关,但MBL ExonI 54位点突变(GGC54GAC)患者粒细胞缺乏性发热的持续时间更长。     

健康蒙古族人血浆MBL浓度测定及其临床意义

目的　检测健康蒙古族人群血浆MBL的浓度。方法　用EDTA Na2 抗凝血浆,ELISA检测。结果　 <40岁组血浆中的MBL含量为(2. 962±1. 833)mg/L; 40~60岁组血浆MBL含量为 (2. 580±2. 040)mg/L; >60岁组血浆MBL含量为 (1. 063±1. 233)mg/L。结论　>60岁组血浆MBL水平显著低于≤60岁组。男女性别间MBL水平无显著差异。     

等位基因特异性PCR法快速检测结核分枝杆菌常见耐药突变基因

摘要：目的：建立一套同步检测结核分枝杆菌(MTB)常见耐药突变基因的等位基因特异性PCR（AS-PCR）检测体系,以间接判断对利福平（RFP）与异烟肼（INH）的耐药性。 方法：用AS-PCR技术同步检测58株MTB临床分离株rpoB基因516位、526位和531位,katG基因315位及inhA基因-15位密码子突变,并与DNA测序结果进行比对。 结果：AS-PCR法对RFP耐药株检出率为95.1%（39/41）,其中rpoB基因531位、526位、516位点突变分别检出28株、10株、2株,包括531位与526位联合点突变1株;未检出突变的2株RFP耐药株经测序验证1株未发生突变、1株发生533位点突变;RFP敏感株均未检测到突变。AS-PCR法对INH耐药株检出率为86.5%（45/52）,其中katG基因315位点突变43株、inhA基因-15位点突变2株,未检出突变的7株INH耐药株经测序验证未见突变;INH敏感株均未检测到突变。 结论：等位基因特异性PCR能够快速检测MTB常见突变基因,具有较高的敏感性与特异性,快速经济、操作简便。     

人β3-肾上腺素能受体基因第64位密码子突变频率的检测

目的建立一种简便、准确、实用的人β３－肾上腺素能受体基因第６４位密码子突变频率的检测方法。方法应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）特异性扩增β３－肾上腺素能受体基因含编码６４位氨基酸的基因序列，扩增产物用限制性内切酶ＢｓｔＯＩ酶切，聚丙烯酰胺凝胶电泳后，观察酶切位点的限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰ）图谱。结果运用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ法检测了１７４名汉族人β３－肾上腺素能受体基因第６４位密码子点突变，其中野生型纯合子频率为６９．５％，杂合子频率为２７．６％，突变型纯合子频率为２．９％。突变等位基因频率为０．１７。结论该方法简便、快速、准确，适合于一般实验室检测及大规模的人群调查。     

结核杆菌异烟肼表型耐药与katG基因突变相关性研究

目的:探讨结核分支杆菌异烟肼(INH)表型耐药与KatG基因密码子315位和463位基因改变的相关性。方法:采用基因直接测序法对结核分支杆菌分离株KatG基因进行分析。结果:132株异烟肼耐药菌株中68株KatG基因密码子315位有基因突变,突变率51.52%(68/132),野生型密码子315AGC(Ser)突变成ACC(Thr)60株,AAC(Asn)6株,ACA(Thr)1株,GGC(GIy)1株。133株INH敏感菌株未发现KatG 315位基因突变。132株INH耐药菌株中123株KatG基因密码子463位有基因突变,突变率为93.18%,野生型密码子463CGG(Arg)突变成CTG(Leu)123株;133株敏感菌株中114株KatG基因密码子463位有基因突变,突变率为85.71%,野生型密码子463 CGG(Arg)突变成CTG(Leu)114株。结论:①KatG基因315位密码子突变是菌株异烟肼表型耐药的重要分子基础,以Ser315Thr错义突变为主。②KatG基因463位密码子突变与异烟肼耐药表型没有相关性,不是结核杆菌异烟肼耐药的分子标志。该位点突变可能是基因多态性,与结核菌治疗带来的选择性压力无关。