NgR1复合物的实验研究进展与干扰策略

成年哺乳动物周围神经系统损伤后可有效再生,但中枢神经系统损伤后却很难再生。在分子途径促进损伤中枢神经系统轴突再生的研究中,发现了3种髓磷脂相关抑制性蛋白：Nogo、髓鞘相关糖蛋白（myelinassociatedglycoprotein,MAG）、少突胶质细胞髓鞘糖蛋白（oligodendroeytemyelinglycoprotein,OMgp）在中枢神经系统损伤后发挥着抑制轴突生长的作用,并发现Nogo—A、MAG、OMgp存在于中枢白质的髓鞘内外环和少突胶质细胞的表面,通过与共同受体NgR1特异性结合诱导生长锥塌陷并抑制轴突生长。进而提出了通过阻断NgR1复合物及其下游的信号转导途径来促进神经元轴突再生的设想。本文拟对近年来关于NgR1复合物的研究加以综述。     

中枢髓鞘衍生轴突生长抑制因子与NgR

MAG、Nogo 和 OMgp 是三种抑制成年哺乳动物中枢神经轴突再生的髓鞘内活性分子,分布于中枢神经系统髓鞘膜中,通过 NgR 抑制轴突生长,可能在中枢神经系统损伤后康复中起主要作用。本文综述了其结构、生物学活性、相互作用的可能机制及可能的临床应用价值。     

RhoA与神经轴突的生长

成年哺乳动物中枢神经系统（CNS）轴突损伤后很难再生的一个重要原因是损害局部环境中存在一些生长抑制因子，目前发现轴突生长抑制因子Nogo—A，髓鞘相关糖蛋白（MAG）和少突胶质细胞髓鞘糖蛋白（OMGP）均通过相同的受体NgR介导，在p75的参与下，影响细胞内RhoA信号通路抑制神经轴突再生。现将RhoA与神经轴突生长研究进展进行简要综述。     

RhoA与神经轴突的生长

成年哺乳动物中枢神经系统(CNS)轴突损伤后很难再生的一个重要原因是损害局部环境中存在一些生长抑制因子,目前发现轴突生长抑制因子Nogo-A,髓鞘相关糖蛋白(MAG)和少突胶质细胞髓鞘糖蛋白(OMGP)均通过相同的受体NgR介导,在p75的参与下,影响细胞内RhoA信号通路〔1-3〕抑制神经轴突再生。现将RhoA与神经轴突生长研究进展进行简要综述。1RhoA概述RhoGTPases是一类小GTPases,分子量为20-30KD,属于Ras超家系中的一类,已经发现的有8个亚群,共22个种〔4-6〕。RhoGTPases以结合GDP(无活性)和结合GTP(有活性)的方式发挥主要的分子开…     

Nogo与中枢神经再生

Nogo基因编码三种蛋白质:NogoA、NogoB、NogoC,它们对损伤后中枢神经系统(CNS)的再生具有抑制作用,Nogo受体(NgR)是一种糖基醇磷脂结合蛋白,是Nogo的一种功能性细胞表面受体,神经营养因子受体p75NTR是NgR的共受体,三者的相互作用介导了Nogo的中枢神经抑制活性。本文概述了Nogo、NgR和p75NTR在CNS再生抑制中的作用机制,各自的重要性,抑制的调节机制,以及目前研究的突破和疑点,并展望了未来研究和应用的前景。     

星形胶质细胞的区域异质性对多发性硬化髓鞘再生的影响

多发性硬化(MS)是发生于中枢神经系统的脱髓鞘疾病，髓鞘再生终止所引起的神经变性是疾病进展的重要原因。星形胶质细胞(ASTRs)在髓鞘再生中发挥着重要作用，其在灰质和白质存在明显的区域异质性。本文对ASTRs在健康和反应性状态下的区域异质性，以及这种异质性对MS髓鞘再生的影响进行综述，以期为髓鞘再生的治疗提供思路。     

Nogo-A与NgR研究的新进展

Nogo-A的活性部位可能有两个,位于两个疏水区域之间的Nogo-66和氨基末端到第一个疏水结构域这部分肽链,即amino-Nogo;NgR属糖基磷脂酰肌醇锚定蛋白,具有多个富亮氨酸的重复结构。Nogn-A主要表达于中枢神经系统,位于在投射神经元和形成髓鞘的少突胶质细胞中,在胞膜,胞质和胞核中都存在。许多研究表明,Nogo-A和NgR在轴突生长的过程中就有表达;细胞核上免疫金标记的Nogo-A主要存在于染色体的核小体上,表明它可能与基因转录有关;Nogo-A的表达与一些髓鞘形成有关的因子如α-微管蛋白 髓鞘基础蛋白(MBP)的表达有密切联系,这也暗示Nogo-A可能与髓鞘形成有关。通过进一步研究阐明它的功能是有必要的。     

实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠脑组织Nogo-A和NgR的变化

背景：Nogo-A蛋白是一种中枢神经系统髓鞘相关轴突再生抑制因子,与其受体作用可抑制轴突再生。 目的：观察实验性自身免疫性脑脊髓炎（Experimental Autoimmune Encephalomyelitis,EAE）大鼠侧脑室周围Nogo-A和NgR蛋白的动态变化,探讨Nogo-A和NgR蛋白在EAE发生发展中的可能作用机制。 设计、单位、时间：随机对照动物研究。试验于2008年9月至11月在湖南省人民医院临床研究所进行。 材料：6~8周龄清洁级雌性Wistar大鼠60只,体重（180±10）g,由湖南农业大学动物科技学院实验动物养殖场提供。 方法：60只大鼠随机分为EAE组和对照组各30只,各组再分为6个亚组,每组5只大鼠,分别于免疫后11天、13天、15天、18天、24天、30天处死各亚组大鼠取脑。采用免疫组化方法测定2组大鼠侧脑室周围白质Nogo-A和NgR蛋白在不同时间点表达情况。 主要观察指标：通过免疫组化后阳性细胞数计数观察侧脑室周围Nogo-A和NgR表达水平。 结果：EAE组在免疫第11天Nogo-A蛋白表达升高,第13天下降,后又升高,第30天仍高于对照组;EAE组NgR蛋白在第13、15、18表达升高。 结论：Nogo-A和NgR蛋白可能在EAE的发生发展中起重要作用     

影响多发性硬化髓鞘再生的因素及其机制

多发性硬化(MS)是常见的中枢神经系统(CNS)炎性脱髓鞘性疾病,目前认为MS是一种自身免疫性疾病,是细胞免疫与体液免疫共同参与导致的以脑和脊髓白质损伤为主的疾病.由于在人类成体前脑有大量少突胶质细胞前体细胞(OPC),另外在MS脱髓鞘斑内亦存在OPC,少突胶质细胞及其前体OPC是MS中髓鞘再生的主要来源.目前越来越多的研究认为髓鞘再生是MS治疗中非常有前景的方向,但是要达到有效的、有治疗作用的髓鞘再生,首先必须了解影响髓鞘再生的各种因素,理解控制髓鞘形成和髓鞘再生的确切机制.现就近年来这方面的研究进展综述如下.     

神经干细胞移植促进鼠脊髓损伤后髓鞘结构的修复

目的 观察神经干细胞移植治疗对鼠脊髓损伤后髓鞘结构修复的作用并探讨其作用机制。方法 制备鼠T10脊髓损伤模型,体外培养、诱导鼠神经干细胞,定量评价神经干细胞移植对脊髓损伤后髓鞘结构修复的影响。结果 与对照组相比,神经干细胞移植组明显地增强了蛋白前脂蛋白信使核糖核酸(PLP mRNA)的表达,促进了髓鞘碱性蛋白(MBP)性的髓鞘再生和髓鞘结构的修复。结论 神经干细胞移植通过增强髓鞘的再生而促进了脊髓损伤后髓鞘结构的修复,是急性脊髓损伤一种有效的治疗方案。     

Nogo-A及其受体与癫痫大鼠海马苔藓纤维发芽的关系

目的研究神经轴突再生抑制因子Nogo-A及其受体NgR蛋白在癫痫大鼠海马细胞内的表达水平,探讨Nogo-A及NgR与癫痫大鼠海马苔藓纤维发芽(mossy fiber sprouting,MFS)发生、发展的关系,为进一步明确癫痫发病机制提供研究依据。方法采用红藻氨酸(KA)颈部皮下注射法建立大鼠癫痫模型。(1)采用链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶(SP)法对大鼠海马中Nogo-A及NgR蛋白进行检测,并用图像分析仪对染色结果进行分析;(2)应用Timm's硫化银法对大鼠海马脑片进行染色,并对结果进行半定量分析。结果(1)实验组Nogo-A蛋白表达与对照组差别无显著性意义(P>0.05);(2)注射KA后4h NgR蛋白表达降低,至造模后7d,NgR蛋白表达升高至正常水平,实验组与对照组之间比较,组内、组间表达均有显著性差异(P<0.01);(3)Timm's硫化银染色结果显示:最早在造模2w后可见海马苔藓状纤维发芽,染色结果为淡染,至造模后2个月发芽脑片染色为深染。结论红藻氨酸造模后癫痫大鼠海马Nogo-A蛋白表达无改变;NgR蛋白表达在造模初期呈现降量调节;癫痫大鼠海马苔藓状纤维发芽的发生可能与NgR蛋白水平...     

NgR在实验性自身免疫性脑脊髓炎中的表达及NgR(310)ecto-Fc的干预作用

目的 探讨NgR(310)ecto-Fc在实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)中的干预作用及其作用机制.方法 90只Lewis大鼠按随机数字表法分为3组,即A组(未治疗)、B组[开始免疫后第1天即给予NgR(310)ecto-Fc进行治疗]及C组[刚发病即给予NgR(310)ecto-Fc进行治疗],每组各30只.采用免疫组化法观察各组实验大鼠脊髓组织中NgR的表达变化及阳性细胞计数,同时观察干预前后临床评分变化.结果 免疫后第15天、第25天B、C两组平均临床评分(3.020±1.017,1.365±0.127;2.853±0.958,1.275±0.092)较A组(4.476±1.525,1.894±0.135)明显降低,比较差异有统计学意义(P＜0.05);B组和C组之间平均临床评分比较差异无统计学意义(P＞0.05).所有实验大鼠的脊髓组织中均可见NgR的表达;免疫后第15天、第25天B、C两组NgR阳性细胞计数(79.07±10.31,45.89±4.77;70.47±7.40,40.63±4.15)较A组(101.12±11.97,62.95±7.11)明显减少,比较差异有统计学意义(P＜0.05);B组与C组NgR阳性细胞计数比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 NgR(310)ecto-Fc能够减轻EAE模型的临床症状,可能是其通过抑制NgR的表达,从而同时封闭3个髓磷脂相关抑制因子(Nogo-A、MAG及OMgp)的作用,到达促进轴突再生的作用.     

Nogo与轴突再生

目的：Nogo-A作为多种抑制神经突再生的成员之一,主要存在于少突胶质细胞(oligodendrocytes)和中枢神经(central nervous system,CNS)髓磷脂中Nogo在成年CNS损伤后,在抑制轴突再生和代偿性纤维生长中发挥重要作用。最近研究发现在损伤大鼠和小鼠脊髓中体内应用Nogo中和抗体、Nogo受体(Nogo-66receptor,NgR)或阻断信号通路后受体Rho-A和ROCK均可导致轴突再生,并伴有功能的改善和恢复。     

中枢神经系统炎性脱髓鞘损伤髓鞘再生的细胞学治疗

多发性硬化（MS）损伤的病理特征是髓鞘脱失。髓鞘再生近年来被认为是自身免疫性脱髓鞘疾病，尤其是MS治疗中非常有前景的方向。髓鞘再生治疗可分为内源性和外源性，所以大量的临床和实验研究都集中于通过外源性移植细胞或通过促进内源性再生机制来获得中枢神经系统脱髓鞘区域的髓鞘再生，并均取得一定的成功。本文对近年来MS髓鞘再生的细胞学治疗的现状和神经科学背景及再生髓鞘治疗的将来可能发展方向进行了评述。     

Nogo-A/NgR通路参与缺血预处理对局灶性脑缺血的神经保护作用

目的研究Nogo-A/NgR通路参与缺血预处理(IPC)对局灶性脑缺血的神经保护作用。方法雄性成年SD大鼠随机分为:对照组(C)、缺血预处理组(IPC)、Tat-NEP1-40组和Tat-β-Gal组。大脑中动脉栓塞(MCAO)10min作为IPC,IPC组在IPC后72h建立MCAO致局灶性脑缺血模型。再灌注24h后,对所有动物行神经功能缺损评分(NDS),并处死大鼠取脑,应用2%TTC染色测定梗死容积和免疫组化研究Nogo-A和NgR表达变化。结果与C组比较,IPC组显著改善局灶性脑缺血再灌注后24h大鼠的NDS[2(1.5~3)和1(0~2)](P<0.01)、减少脑梗死容积[(309.65±54.61)mm3和(65.09±26.06)mm3](P<0.01),NgR拮抗剂NEP1-40可部分逆转IPC的神经保护作用(P<0.01),而其溶剂β-Gal对IPC的神经保护作用无明显影响。免疫组化显示Nogo-A和NgR阳性细胞主要位于MCAO后导致的缺血区域,缺血后24h大鼠缺血区域Nogo-A和NgR表达明显增强,IPC可抑制缺血引起的Nogo-A和NgR表达增强。结论Nogo-A/NgR通路可能参与IPC诱导的脑缺血耐受,保护脑缺血性损伤。     

以NgR为靶点治疗脊髓损伤的研究进展

NgR是最近发现并克隆的一种糖基磷脂酰肌醇（GPI）锚定膜蛋白，因其在髓磷脂抑制轴突再生信号转导过程中特殊的靶分子效应，日益受到重视。以NgR为靶点促进脊髓轴突再生的尝试为中枢神经系统（CNS）损伤的治疗提供了有益的启示。     

中枢神经再生的分子基础

由于Nogo、髓磷脂相关糖蛋白以及少突胶质细胞-髓磷脂糖蛋白等抑制神经再生因子的发现,对中枢神经系统再生的分子机制研究也有了较大进展,发现这三种结构互不相关的蛋白都通过NgR/p75NTR复合体发挥作用。在细胞内,不管是NgR/p75NTR复合体传导的外源性髓磷脂抑制,还是神经元的内源性再生机制,都要经过Rho的调节,而后者又受到环磷酸腺苷的调节,这条通路目前被认为是中枢神经再生的主要信号传导通路。     

大鼠脑缺血再灌注后Nogo-A及其受体mRNA和蛋白表达的变化

目的探讨脑缺血再灌注后大鼠缺血中心区及周围区大脑皮质髓鞘相关的抑制分子Nogo-A及其受体NgR的mRNA和蛋白表达的变化规律及意义。方法采用线栓法制作大鼠脑缺血再灌注模型,分为假手术对照组、缺血2h再灌注6h、12h、24h、48h、72h、7d和14d组．通过HE染色进行病理观察,逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)的方法检测mRNA,免疫组织化学的方法检测蛋白表达,观察脑缺血再灌注后缺血中心区及周围区大脑皮质Nogo-A及其受体NgR的变化。结果Nogo-A mRNA及蛋白表达在缺血中心区6h即有下降(与对照组相比,P＜0．05),并随再灌注时间延长表达逐渐减少,24h降低最为明显并持续至14d；而缺血周边区,再灌注48h前无显著性变化．72h表达增加(与对照组相比,P＜0．05),7d增加更为显著,14d降至正常。NgR mRNA及蛋白表达在缺血中心区再灌注6h后开始下降(与对照组相比,P＜0．05),48h降低最为明显；而缺血周围区NgR mRNA及蛋白表达在各个时间点无显著变化(P＞0．05)。结论脑缺血后灶周Nogo-A mRNA及蛋白表达增加持续至再灌注后7d以上,针对其表达的规律进行干预可能成为脑梗死后改善轴突生长的有效措施；灶周NgR的表达无显著变化,显示Nogo-A的作用尚有其他受体介导。     

嗅鞘细胞修复脊髓损伤轴突髓鞘化的研究与进展

髓鞘的完整性是保证其包裹的轴突具备正常生理功能的前提，脊髓的损伤往往伴有不同程度的髓鞘损伤，因此如何使损伤的轴突重新获得髓鞘化成为损伤轴突再生的关键。早期对嗅鞘细胞的研究表明，嗅鞘细胞可以促进并参与损伤脊髓的髓鞘再生，从而达到使损伤轴突再生，恢复其生理功能目的。然而随研究的广泛深入，近期得出了不同的结论，即嗅鞘细胞并不参与损伤轴突的再次髓鞘化，其促进轴突髓鞘化并生长的机制需进一步研究。     

Nogo-54m、Nogo-54及Nogo-66在中枢神经再生研究的新进展

目前对Nogo蛋白的中枢神经生长抑制作用及其机制的研究较多,国内外主要集中于对Nogo-66的研究,Nogo-66是Nogo蛋白中一段长66个氨基酸的多肽,与其特异性受体(NgR)结合具有介导抑制轴突再生的作用。近年设计出了与Nogo-66有相似特性的模仿物Nogo-54及其拮抗物Nogo-54m,对中枢神经再生研究具有重大意义,本文综述了Nogo-54,Nogo-54m,Nogo-66的结构及其功能