中性粒细胞弹性蛋白酶与急性肺损伤

1994年欧美ARDS联席会对急性肺损伤（ALI）和急性呼吸窘迫综合征（ARDS）的相关概念做出明确定义，此后，这一概念在基础研究及临床实践中不断得到修正。目前研究认为，ALI／ARDS是机体遭受严重创伤、休克、酸中毒及严重的感染如严重急性呼吸综合征（SARS）等因素引起的肺泡毛细血管膜弥漫性损伤而导致的肺水肿和微肺不张，临床表现为呼吸窘迫和顽固性低氧血症的综合征，ALI和ARDS具有相同的病理、生理改变，ARDS是严重的ALI.ALI／ARDS的病因各不相同，发病机制复杂。作为重要的炎性损伤因子，中性粒细胞弹性蛋白酶（neutrophil elastase，NE）是引起ALI的炎症级联反应的主要终效应因子，主要通过消化和降解细胞外基质及上皮连接结构导致肺损伤。本文对NE在ALI发病中所起的作用机制及治疗对策进行综述如下。     

清热燥湿方对急性肺损伤大鼠肺组织核转录因子-κB蛋白及mRNA表达的影响

目的 探讨清热燥湿方对脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤(ALI)大鼠肺组织核转录因子-κB(NF-κB)蛋白及mRNA表达的影响.方法 40只雄性Wistar大鼠按随机数字表法均分为对照组、模型组、地塞米松组、清热燥湿方组4组.地塞米松和清热燥湿方在LPS诱导ALI模型前预处理3 d.分别于制模后4 h和8 h采用免疫组化法和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测NF-κB的蛋白及mRNA表达,并进行肺组织病理观察.结果 与模型组相比,地塞米松组和清热燥湿方组4 h、8 h NF-κB蛋白染色阳性面积率[4 h:(3.40±0.39)%、(2.59±0.62)%比(4.28±0.55)%;8 h:(3.04±0.74)%、(2.60±0.11)%比(4.20±0.62)%]及mRNA表达[4 h:(12.88±2.28)×10-4、(3.07±2.63)×10-4比(44.82±9.27)×10-4;8 h:(3.30±2.64)×10-4、(1.53±1.51)×10-4比(26.07±3.81)×10-4]均明显降低(P＜0.05或P＜0.01).光镜下观察,模型组大鼠肺组织出现大片出血及坏死;清热燥湿方组大鼠肺组织病理损伤程度较模型组减轻.结论 清热燥湿方能减轻内毒素致ALI大鼠肺组织损伤,对肺损伤有保护作用,其机制可能与其能降低损伤肺组织NF-κB蛋白及mRNA表达有关.     

中性粒细胞弹性蛋白酶致急性肺损伤机制的研究进展

急性肺损伤（Au）和急性呼吸窘迫综合征（ARDs）是机体遭受严重创伤、休克、酸中毒及严重感染，如严重急性呼吸综合征（sARs）等因素引起的继发性弥漫性肺实质损伤，临床表现为呼吸窘迫和顽固性低氧血症。目前认为，ALI／ARDS发病的根本原因是肺内过度、失控的炎性反应。ALI和ARDS同属急性呼吸衰竭（ARF）范畴，是临床常见呼吸系统急危重症．其病因及发病机制错综复杂，致病环节多，病死率高，已成为临床危重病学研究的热点和难点。     

山莨菪碱对急性肺损伤肿瘤坏死因子-α的影响及意义

目的 研究创伤性急性肺损伤（ＡＬＩ）家兔体内肿瘤坏死因子（ＴＮＦ－α）的变化,探讨山莨菪菪碱（６５４－２）对创伤性ＡＬＩ及多器官功能障碍（ＭＯＤＳ）的防治作用及可能机制。方法 采用家兔创伤性ＡＬＩ模型,实验动物随机分为正常对照组（８只）创伤模型组（１０只）、６５４－２治疗组（１０只）。用ＥＬＩＳＡ方法检测不同时相点血浆中ＴＮＦ－α的呈。用免疫组织化学法结合原位定量分析检测肺、肝、心、肾组织ＴＮＦ－     

中性粒细胞弹性蛋白酶在重度脑损伤继发性肺损伤中的作用研究

目的 探讨中性粒细胞弹性蛋白酶(neutrophil elastase,NE)在重度脑损伤继发性肺损伤中的作用.方法 SD雄性大鼠50只,随机分为对照组(n=10)和损伤组(n=40),损伤组又分为2 h、6 h、24 h和48 h组,每组10只.分别测定各组大鼠脑组织含水量,血浆及支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中NE含量;BALF中白蛋白浓度;光学及电子显微镜观察肺组织病理改变.结果 6 h、24 h和48 h三组大鼠的脑组织含水量均明显增高,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01);在肉眼、光学、电子显微镜下,损伤组部分大鼠肺组织可见不同程度的充血水肿、中性粒细胞浸润、线粒体肿胀及绒毛消失等;脑损伤2 h血浆及灌洗液中NE含量开始升高,灌洗液中NE升高水平较血浆中NE明显;支气管肺泡灌洗液中白蛋白在伤后6 h 开始升高,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);NE变化水平与白蛋白、脑组织含水量均呈正相关(P<0.05).结论 重度脑损伤可导致不同程度的肺组织损伤,NE是脑损伤继发肺损伤的重要原因之一,早期监测血中NE含量可间接衡量肺损伤情况.     

肿瘤坏死因子-α与急性肺损伤／急性呼吸窘迫综合征

急性肺损伤，急性呼吸窘迫综合征（ALI／ARDS）为多种疾病所引起，发病机制错综复杂，目前虽然已有深入了解，但仍未完全阐明。多种效应细胞和炎症介质是参与MLI／ARDS两个主要因素。对ALI/ARDS的发病机制起关键作用。肿瘤坏死因子-α（TNF-α）属于炎症介质，是一种有多种生物学效应的细胞因子。研究表明肿瘤坏死因子-α是AH／ARDS发病机制的一个重要环节，已经成为治疗ALI/ARDS的靶心。本文以治疗ALI／ARDS为目的，在肿瘤坏死因子-α对AH／ARDS发病机制上作一综述。     

急性肺损伤患者血清中中性粒细胞弹性蛋白酶活性的变化

目的检测急性肺损伤(ALI)患者血清中中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)的活性,探讨其临床意义。方法选择符合ALI患者22例,健康对照组15例。计算动脉血氧分压(PaO2)与吸入气氧浓度(FiO2)比值,测定NE活性、α1抗胰蛋白酶α1AT)浓度和活性、白介素6(IL6)和白介素8(IL8)浓度等。结果ALI患者的NE活性、IL6和IL8均明显高于健康对照组,而α1AT活性较健康组降低(P<0.05)。ALI患者中死亡组(10例)的NE活性明显高于存活组(12例)(P<0.01)。而且ALI患者的血清NE活性与PaO2FiO2呈显著负相关(r=-0.874,P<0.01)。结论ALI患者的NE活性明显升高,α1AT活性显著降低,出现蛋白酶抗蛋白酶失衡,而且血清NE活性水平与患者的肺损伤严重程度和预后密切相关。     

中性粒细胞凋亡对急性胰腺炎相关性肺损伤的影响

目的 研究中性粒细胞（PMN）在急性胰腺炎相关性肺损伤（PALl）中自发性凋亡的变化及与肺损伤的相关性，探讨PMN凋亡在这一过程中的病理意义。方法 采用5％牛磺胆酸钠（TAC）逆行胆胰管注射造成大鼠急性出血坏死性胰腺炎（AHNP）模型。将36只实验动物随机分为AHNP组、假手术组及地塞米松（DXM）治疗组，3h后处死动物。从支气管肺泡灌洗液分离PMN，在体外分别孵育1、3、6h后，以Annexin V／PI双染色法测定其自发性凋亡率。取肺组织测定肺湿／干比值、髓过氧化物酶（MPO）含量及肺通透性指数，研究自发性凋亡率与肺损伤之间的相关性。结果 三组大鼠支气管肺泡灌洗液PMN的自发性凋亡率随体外孵育时间的延长而逐渐增加；在3、6h时，AHNP组均低于假手术组及DXM治疗组，而肺温／干比值、MPO含量及肺通透性指数则高于后两组。AHNP组3h凋亡率与肺温／干比值、MPO含量及肺通透性指数呈负相关。结论 肺PMN凋亡减低与PALI大鼠模型肺损伤成负相关，同时伴有活性增强，是PALI发生的重要原因；DXM可减轻PALI，与其促进PMN凋亡。     

急性肺损伤病人中性粒细胞凋亡变化的研究

目的　观察急性肺损伤 (ALI)病人中性粒细胞 (PMN)凋亡的发生以及与肺损伤的关系 ,并探讨其临床意义。方法　对 37例符合ALI诊断标准的病人 ,分离纯化肺灌洗液中的PMN ,应用流式细胞术测定PMN凋亡、坏死、存活细胞比例及呼吸瀑发功能的变化 ,设健康对照组 ,并观察与乳酸脱氢酶 (LDH)和胞浆游离Ca2 变化之间的关系。结果　ALI病人肺灌洗液中PMN凋亡比例显著降低 ,2 4h持续在低水平 (P <0 0 5 ,P <0 0 1) ;各检测点活细胞增多 (P <0 0 5 ,P <0 0 1) ;而灌洗液PMN的呼吸瀑发明显升高 ,8h达峰值 ,并持续升高 (P <0 0 1)。灌洗液中LDH水平 2～ 2 4h明显高于正常对照组 (P <0 0 5 ,P<0 0 1) ;PMN胞浆游离Ca2 各检测点显著增高 (P <0 0 5 ,P <0 0 1)。PMN凋亡与LDH水平呈显著相关性 (r =- 0 715 1,P <0 0 1) ;PMN凋亡与胞浆游离Ca2 的浓度有显著的相关性 ( r=- 0 6 0 39,P <0 0 1)。结论　ALI时PMN在肺组织中大量扣押 ,且正常的凋亡途径发生障碍 ,造成PMN持续处于激活状态及毒性内容物的持续释放 ,与肺组织的损伤有密切关系 ,并且PMN凋亡延迟可能与LDH、胞浆游离Ca2 的升高有关     

急性肺损伤患者中性粒细胞凋亡变化的研究

目的观察急性肺损伤(ALI)患者中性粒细胞(PMN)凋亡的发生以及与肺损伤的关系,并探讨其临床意义。方法对37例符合ALI诊断标准的患者,分离纯化肺灌洗液中的PMN,应用流式细胞术测定PMN凋亡、坏死、存活细胞比例及呼吸瀑发功能的变化,设健康对照组,并观察与乳酸脱氢酶(LDH)和胞浆游离Ca2 变化之间的关系。结果灌洗液中PMN凋亡比例显著降低,24h持续在低水平(P<0.05或P<0.01);各检测点活细胞增多(P<0.05或P<0.01);而灌洗液PMN的呼吸瀑发明显升高,8h达峰值,并持续升高(P<0.01)。灌洗液中LDH水平2～24h明显高于正常对照组(P<0.05或P<0.01);PMN胞浆游离Ca2 各检测点显著增高(P<0.05或P<0.01)。PMN凋亡与LDH水平有相关性(r=-0.7151,P<0.01),PMN凋亡与胞浆游离Ca2 水平有相关性(r=-0.6039,P<0.01)。结论ALI时PMN在肺组织中大量扣押,且正常的凋亡途径发生障碍,造成PMN持续处于激活状态及毒性内容物持续释放,与肺组织的损伤有密切关系,并且PMN凋亡延迟可能与LDH、胞浆游离Ca2 的升高有关。     

重庆地区汉族人肿瘤坏死因子-α基因的多态性与急性肺损伤

目的探讨重庆地区汉族人肿瘤坏死因子-α(TNF-α)基因-308位点的多态性与急性肺损伤(ALI)的相关性.方法对59例ALI患者用放射免疫分析法(RIA)测定TNF-α含量,用等位特异性聚合酶链反应(AS-PCR)方法分析血清TNF-α基因多态性变化,并与60名健康献血者对照.结果①ALI组TNF-α含量[(1.883±0.106)μg/L]显著高于对照组[(1.129±0.077)μg/L],t=30.16,P<0.01;②ALI组TNF-α(-308A)等位基因频率(33.9%)显著高于对照组(6.7%),P<0.01;③TNF-α等位基因频率增高与ALI的易感性相关联,比值比(OR)为7.368,95%可信限(CI)为0.370～8.620.结论重庆地区汉族人TNF-α基因-308位点的多态性与ALI相关联.     

创伤性脓毒症外周血中性粒细胞及组织中肿瘤坏死因子-αmRNA表达的变化

目的 探讨外周血中性粒细胞及组织中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）mRNA表达在创伤脓毒症中的作用。方法 采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测盲肠结扎穿孔术（CLP）大鼠外周血中性粒细胞及组织TNF-αmRNA的表达。结果 CLP术后外周血中性粒细胞中TNF-αmRNA表达逐渐增高,48h达峰值后开始降低,但仍明显高于正常对照组水平。组织TNF-αmRNA表达的增高首先局限于创伤局部（小肠12hP〈0．01,24h达峰值）,然后进入血循环．再转移至敏感器官肺和肝组织中（肺24hP〈0．01,48h达峰值;肝24h P〈0．05,48h达峰值）。结论 TNF-αmRNA表达的增高在脓毒症发病机制中起重要作用。     

地塞米松对家兔急性肺损伤早期中性粒细胞相关功能的影响

目的研究地塞米松对家兔急性肺损伤(ALI)早期中性粒细胞(PMN)相关功能的影响,为临床治疗提供理论依据。方法雄性新西兰家兔32只,随机对照组(N)8只,急性肺损伤组(L)10只,早期干预组(E)7只,预处理组(P)7只,建立内毒素ALI模型。E、P组分别于建模前、后一次性给予地塞米松2mg。结果L组在内毒素注射后血压、心率、pH、PMN下降明显。PMN表面CD11b表达强度进行性升高。E、P两组血压、心率降幅减小;CD11b表达强度的升高及3h血PMN计数下降被明显抑制;肺病理改变明显减轻。E组血压及PMN下降幅度大于P组。结论地塞米松对于感染中毒性休克有一定的改善作用,可以抑制ALI的发生、发展。在血压和外周血PMN计数两项指标上,实验结果表明激素的预处理对于实验动物有更好的保护作用。     

中性粒细胞在输血相关的急性肺损伤中的作用

中性粒细胞(polymorphonuclear neutrophil,PMN)是固有性免疫系统中重要的效应细胞.在激活状态下,PMN可以产生大量的超氧阴离子和活性氧(reactive oxygen species,ROS),这些分子具有很高的反应性,可以与细菌的细胞膜、核酸分子及蛋白质发生氧化还原反应,造成微生物的损伤和死亡[1].PMN的这种反应通常是很短暂的、大量的、足以处理感染和炎症反应而不至于对机体组织产生损伤.但是,当反应失控时,特别是当大量的PMN聚集在身体的敏感部位(如肺部微血管)时,可以造成机体正常组织的损伤和发生急性肺损伤(acute lung injury,ALI)[2,3].     

槲皮素对脓毒症急性肺损伤大鼠肿瘤坏死因子-α/白细胞介素-1β的影响

目的 观察槲皮素对脓毒症相关急性肺损伤(ALI)大鼠肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)的影响,以及槲皮素对脓毒症时的肺保护作用.方法 选用健康雄性Wistar大鼠35只,按随机数字表法分为对照组(5只)、模型组(10只)、槲皮素高剂量组(75mg/kg,10只)和槲皮素低剂量组(50mg/kg,10只).腹腔注射脂多糖(LPS)10mg/kg 2ml建立脓毒症ALI大鼠模型;对照组给予等量生理盐水.治疗组于制模前30min腹腔注射槲皮素.各组于制模后6、12、24h取血,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中TNF-α,IL-1β含量;于制模后24h腹腔注射水合氯醛麻醉并处死大鼠,取肺组织行苏木素-伊红(HE)染色观察组织病理学改变,取肺叶测定肺组织湿/干重比值(W/D比值).结果 与对照组比较,模型组制模后6h血清TNF-α(ng/L),IL-1β(ng/L)含量即明显升高(TNF-α:73.00±0.28比28.48±0.26,IL-1β:46.30±0.21比28.38±1.07,均P<0.01),肺W/D比值明显升高(5.710±0.025比3.860±0.034,P<0.01);与模型组比较,槲皮素低、高剂量组制模后6h TNF-α,IL-1β含量即明显下降(TNF-α:55.52±0.31、57.76±0.27,IL-1β:39.47±9.65、41.83±0.16,均P<0.05),肺组织病理改变明显好转,肺W/D比值明显下降(4.810±0.036、4.900±0.029,均P<0.05),两治疗组间炎症介质比较差异无统计学意义;高剂量组肺组织病理损伤改善程度明显优于低剂量组.结论 槲皮素可下调大鼠血清TNF-α,IL-1β含量,对脓毒症ALI大鼠的肺组织起保护作用.     

男性不育患者精浆中性粒细胞弹性蛋白酶浓度对精子质量的影响

目的探讨男性不育患者精子的质量与精浆中性粒细胞弹性蛋白酶的相关性。方法检测130例不育男性的中性粒细胞弹性蛋白酶浓度,根据精液中性粒细胞弹性蛋白酶浓度将研究对象分为三组,大于1 000ng/mL为A组,250~1 000ng/mL为B组,小于250ng/mL为C组,对各组精浆中的精液基本参数和生化指标(酸性磷酸酶、枸橼酸、锌和果糖)进行测定。结果 (1)A、B、C三组间,精液密度和精子活动率差异有统计学意义(P0.05),且中性粒细胞弹性蛋白酶浓度与精液密度(r=-0.43)和精子活动率(r=-0.37),精液体积及正常精子形态差异无统计学意义(P0.05);(2)A、B、C三组间,酸性磷酸酶、柠檬酸和锌浓度差异有统计学意义(P0.05),且中性粒细胞弹性蛋白酶的浓度与磷酸酶(r=-0.19)、柠檬酸(r=-0.17)和锌(r=-0.23)的浓度呈显著负相关,三组间果糖浓度差异无统计学意义(P0.05)。结论精液中性粒细胞弹性蛋白酶的水平与精液密度、精子活动率及生化指标参数(酸性磷酸酶、柠檬酸和锌)呈显著负相关,提示精液中性粒细胞弹性蛋白酶对精子的质量有负面的影响,进而影响男性的生育能力。     

基质金属蛋白酶-9和肿瘤坏死因子α在大鼠光气吸入性肺损伤中的表达及意义

目的：探讨基质金属蛋白酶-9（MMP-9）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）在大鼠光气吸入性肺损伤中的表达及意义。方法：SPF级SD大鼠（180~220g）50只,随机分为空气对照组和光气暴露组。建立大鼠光气吸入性肺损伤动物模型,并分别于光气染毒后2、46、、8h采用实时定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法测定MMP-9mRNA在肺组织中的表达含量,酶联免疫吸附试验（ELISA）法测定支气管肺泡灌洗液（BALF）中的TNF-α含量,同时对肺湿/干质量比,支气管肺泡灌洗液（BALF）中蛋白含量、中性粒细胞数以及肺组织病理学改变进行动态监测和对比分析。结果：与空气对照组相比,光气暴露组肺组织出现水肿、出血、炎性细胞浸润,随时间延长进一步加重。光气暴露组肺湿/干质量比值,BALF中蛋白含量、TNF-α含量、中性粒细胞计数均明显高于空气组（P〈0.05）;光气暴露各组MMP-9mRNA表达水平和BALF中MMP-9的表达明显高于空气对照组,随时间延长肺水肿加重（P〈0.01）。结论：基质金属蛋白酶的过度激活和表达及其与炎症因子相互影响在光气肺损伤过程中发挥重要的作用。     

重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白对油酸致大鼠急性肺损伤的保护作用

目的:探讨重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白(rh TNFR:Fc)对油酸致大鼠急性肺损伤的保护作用。方法:72只SD大鼠随机分为生理盐水组(对照组)、油酸组(OA组)和rh TNFR:Fc干预组,分为0.5、2、4、6 h亚组;OA组:尾静脉注射油酸0.04 m L/kg造成急性肺损伤,采集外周血、支气管肺泡灌洗液(BALF)及肺组织标本。rh TNFR:Fc干预组:第1、4天皮下注射rh TNFR:FC 0.6 mg/只,第7天注射油酸0.04 m L/kg,采集标本。对照组:尾静脉注射等量生理盐水并收集标本。肺组织HE染色,测定血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量、BALF多形核白细胞(PMN)计数;计算肺组织湿/干质量比、肺泡通透指数(LPI)。结果:OA组显微镜下肺间质充血、水肿,大量炎性细胞浸润,rh TNFR:Fc组肺损伤介于OA组和对照组之间;OA组大鼠血清TNF-α含量、BALF中PMN百分比、肺湿/干质量比、LPI均显著高于rh TNFR:Fc干预组和对照组(P<0.05)。结论:rh TNFR:Fc通过中和TNF-α,降低TNF-α生物活性,减少肺组织液渗出,对油酸引起的大鼠急性肺损伤有一定的保护作用。     

放射性肺损伤大鼠血清白细胞介素-6和肿瘤坏死因子-α的动态变化

目的:探讨放射性肺损伤大鼠血清细胞因子白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的动态变化。方法:64只雌性Wistar大鼠随机分为照射组(32只)和对照组(32只)。照射组用直线加速器以6 MV的X线照射大鼠右肺,每次3 Gy,每周2次,连续照射5周(累积剂量最高为30 Gy)。于首次照射后5、8、12和26周末分别从两组中各随机抽取8只大鼠,取眶静脉血行血清细胞因子放射免疫学检查。结果:照射组各时间点大鼠血清IL-6、TNF-α水平均较对照组低,其中IL-6在第8周末明显低于对照组(P<0.05),TNF-α在第5周末明显低于对照组(P<0.05),照射组于第12周末时IL-6和TNF-α逐渐恢复,至26周末虽略低于对照组,但差异无显著性。结论:血清细胞因子IL-6、TNF-α在照射后出现不同程度减低,然后逐渐恢复。提示放射性损伤过程中存在全身免疫抑制状态,血清IL-6、TNF-α变化有可能成为放射性肺损伤的预测指标。