死后5～36 h人脑细胞DNA降解含量的图像分析

目的通过对死后5～36 h脑细胞降解后残存DNA含量的定量分析来推断其早期死亡时间.方法选取32例已知死亡时间的人体脑组织,在死后5～36 h内每小时进行细胞学涂片、Feulgen-Vans染色,采用图像分析技术检测反映脑细胞核DNA含量的平均光密度、积分光密度、平均灰度等灰度参数,分析脑细胞残存DNA的含量与其对应的死亡时间的变化规律.结果在5～36 h内平均光密度、积分光密度随死亡时间的延长而逐渐减小、平均灰度逐渐增大,且其均值均与死亡时间显著性相关,并得出对应的回归方程.结论反映人脑细胞DNA含量改变的灰度参数均与死亡时间有明显的相关性,是推断早期人体死亡时间的有效的定量指标.     

Determination of the Early Time of Death by Computerized Image Analysis of DNA Degradation： Which Is the Best Quantitative Indicator of DNA Degradation？

This study evaluated the correlation between DNA degradation of the splenic lympho-cytes and the early time of death,examined the early time of death by computerized image analysis technique(CIAT) and identified the best parameter that quantitatively reflects the DNA degradation.The spleen tissues from 34 SD rats were collected,subjected to cell smearing every 2 h within the first 36 h after death,stained by Feulgen-Van's staining,three indices reflecting DNA content in splenic lymphocytes,including integral optical density(IOD),average optical density(AOD),aver-age gray scale(AG) were measured by the image analysis.Our results showed that IOD and AOD decreased and AG increased over time within the first 36 h.A stepwise linear regression analysis showed that only AG was fitted.A correlation between the postmortem interval(PMI) and AG was identified and the corresponding regression equation was obtained.Our study suggests that CIAT is a useful and promising tool for the estimation of early PMI with good objectivity and reproducibility,and AG is a more effective and better quantitative indicator for the estimation of PMI within the first 36 h after death in rats.     

应用单细胞凝胶电泳检测大鼠死后脾细胞核DNA降解与死亡时间的关系

目的:探讨应用单细胞凝胶电泳技术(SCGE)检测大鼠死后脾细胞核DNA降解与死亡时间的一般规律,为早期死亡时间的推断提供新的方法。方法:建立大鼠死亡模型,在死后27h内,每隔3h取脾组织样本进行单细胞凝胶电泳,用共聚焦显微镜摄取彗星图像,应用彗星图像分析软件(IMI1.0)进行图像分析,并作统计学分析。结果:大鼠死后,脾细胞在电泳图像上出现了明显的彗星形拖尾,其尾长(TL)、尾矩(TM)在一定的时间范围内(0～15h)随死亡时间的延长而逐渐增大,二者均与死亡时间(PMI)呈现一定的相关回归关系。结果:单细胞凝胶电泳技术可应用于早期死亡时间的推断;彗星图像分析软件为SCGE的结果分析提供了便利。     

青壮年猝死综合征脑干中缝背核5-羟色胺及5-羟色胺转运体免疫组化研究

目的 探讨5-羟色胺和5-羟色胺转运体在青壮年猝死综合征脑组织的表达及其意义.方法 运用免疫组织化学S-P法检测10例正常脑组织和8例青壮年猝死综合征脑组织中5-羟色胺和5-羟色胺转运体的表达水平,利用图像分析技术测量阳性细胞的平均光密度值.结果 青壮年猝死征死者脑干中缝背核5-羟色胺的平均光密度值低于正常脑组织,而5-羟色胺转运体的平均光密度值高于正常脑组织,差异均有统计学意义（P＜0.05）.结论 5-羟色胺及5-羟色胺转运体的变化参与青壮年猝死综合征的发病过程,可作为诊断青壮年猝死综合征的参考指标.     

兔急性肺损伤死后肝内血管内皮生长因子时序性变化的研究

目的研究大潮气量机械通气致兔急性肺损伤（ALI）12h后处死，死后肝微血管内血管内皮生长因子（VEGF）的动态变化。方法机械通气（VT60mL／kg，R50次／min）致急性肺损伤后12h处死兔，应用免疫组织化学染色（SABC法）和图像分析系统，观测死后不同时间点肝内微血管内皮细胞内vEGF的动态变化。结果对照组死后即刻肝内微血管内皮细胞胞浆vEGF呈弱阳性染色，死后2h阳性染色程度有轻度增加，但以后随PMI的延长VEGF逐渐减弱，死后18h呈阴性；试验组死后肝内微血管的内皮细胞胞浆VEGF呈强阳性表达，但随着PMI延长逐渐减弱，在死亡后0-24h减弱幅度较小，但21-36h阳性染色程度下降较快，直至死后42h随肝内微血管结构崩解而完全消失。结论大潮气量机械通气致急性肺损伤12h处死后，肝微血管内VEGF的变化在一定的时间段内与死亡时间呈现相关关系。     

P53基因在肝母细胞瘤中的表达及意义

目的 :探讨P5 3在肝母细胞瘤的表达情况。方法 :应用S -P法对 2 6例肝母细胞瘤行P5 3免疫组化染色 ,用显微图像分析仪测定阳性细胞百分率P/A(% )、平均光密度 (AOD)、积分光密度 (IOD)。结果 :P5 3在肝母细胞瘤中表达阳性率为 6 9.2 % (P <0 .0 1) ,P5 3的阳性表达水平 ,临床分期越晚越高 (P <0 .0 5 )。结论 :肝母细胞瘤的发生与P5 3蛋白异常表达有关 ,测定P5 3表达有助于判断预后。     

Image Analysis for Degradation of DNA in Retinal Nuclei of Rat after Death

The changes of retinal nuclear DNA content in rats after death was detected and the rela-tionship between degradation of retinal nuclear DNA and postmortem interval (PMI) was analyzed. Ninety healthy adult SD rats, female, weighing 250±10 g, were randomly divided into 15 groups. At 20 ℃, the retinal cells were withdrawn every 2 h within 0 to 28 h after death and stained with Feul-gen-Vans. Index of density (ID), integral absorbance (IA) and average absorbance (AA) in retinal nu-cleus were analyzed by image analysis system. And the obtained data were subjected to linear regres-sion analysis by using SPSS12.0 software. The results showed that in retinal nucleus, AA and IA were gradually declined with the prolongation of PMI, while ID had an increased tendency. Within 28 h after PMI, the regression equations were as follows: YAA=-0.009XAA 0.590 (R2=0.949), YIA=-0.097XIA 18.903 (R2=0.968), YID=0.122XID 2.246 (R2=0.951). It was concluded that retinal nuclear DNA after death in rats was degraded gradually and had a good correlation with PMI.     

褪黑素对大鼠脑内强啡肽水平的影响

目的观察褪黑素（MLT）对大鼠脑内某些镇痛相关核团内神经细胞的强啡肽样免疫反应强度的影响。方法实验大鼠分给药组及对照组,分别腹腔注射MLT110mg/kg或配药液,1h后灌注取脑、冰冻切片,进行免疫组化染色,计算机图像处理技术测定染色脑片积分光密度（IOD）值。结果给药组大鼠视上核、中缝背核内强啡肽样免疫阳性反应减弱,其IOD值显著减少（P<0.01）;给药组大鼠下丘脑室旁核、中脑导水管周围灰质腹外侧区、中缝大核的IOD值,与对照组比较差别无显著意义。结论MLT可致视上核、中缝背核内强啡肽含量减少。     

兔死后角膜瞳孔区域图像颜色的时序性变化规律

目的探讨个体死后角膜瞳孔区域图像颜色时序性变化规律,为死亡时间（PMI）推断提供一种无损、客观方法。方法构建 家兔空气栓塞和溺死死亡模型,在温度20 ℃、湿度30%的暗室内,于死后72 h内每隔2 h用数码相机获取兔角膜图像。通过计 算机图像处理技术（MATLAB）分割出角膜瞳孔区域图像,提取RGBHSV 6项图像颜色特征参数值并进行与PMI关系的回归分 析,同时比较不同死因对死后角膜瞳孔区域图像颜色变化的影响。结果不同死因死后72 h内,兔角膜瞳孔区域图像的R、G、B 值均随PMI呈上升趋势,与PMI拟合关系较好（P<0.01）,H、S、V值与PMI关系均无统计学意义（P>0.05);经比较,两种死因死后 兔角膜瞳孔区域图像R、G、B值的变化趋势一致,与PMI的相关性相近,空气栓塞组兔角膜瞳孔区域图像的R、G、B实测值总体 大于溺死组。结论个体死后角膜瞳孔区域图像颜色变化随PMI呈一定规律性,死因会影响死后角膜瞳孔区域图像颜色特征参 数值大小。研究建立的相关回归方程为无损、客观推断PMI提供参考依据。     

MMP-9表达在不同方法获得破骨细胞的比较研究

目的比较基质金属蛋白酶9（matrix metailoproteinase 9,MMP-9）表达在机械法获得破骨细胞（osteoclasts,OC）和诱导法获得破骨样细胞（osteoclast like cells,OLC）的差异,为体外培养OC提供实验依据．方法采用机械分离方法,从1d龄sD大鼠四肢长骨获得成熟OC;利用RANKL（100ng／mL）和M—CSF（100ng／mL）诱导RAW264．7细胞形成OLC．采用免疫细胞化学和原位杂交技术检测不同方法获得的OC和OLC MMP-9蛋白及其mRNA的表达．结果诱导法12d组的积分光密度和平均光密度均明显高于机械法3d组．结论诱导12d的OLC MMP-9及其mRNA表达的明显高于机械法3d,为OLC提供了进一步的实验数据．     

自然条件下盐酸吗啡对肥须亚麻蝇幼虫发育积温和头咽骨的影响

目的 自然条件下,通过盐酸吗啡对石家庄地区优势蝇种肥须亚麻蝇（Parasarcophaga crassipalpis）幼虫发育积温与头咽骨影响的研究,探讨利用积温和头咽骨形态学指征推断死后间隔时间（PMI）的可行性。方法 自然条件下,用不同剂量盐酸吗啡注射后处死的兔肉上饲养肥须亚麻蝇。观察并留取幼虫标本一次直至达到离食期。将幼虫烫死并保存。计算实验期间的日均温累加为积温（ADH）。体视显微镜下分离出幼虫头咽骨并在光学显微镜下观察、拍照。利用计算机图像分析系统对头咽骨的形态学指征进行测定。结果 (1) 自然条件下,盐酸吗啡一定程度上改变了肥须亚麻蝇幼虫的积温和历期。 (2) 自然条件下,幼虫头咽骨的骨化面积和平均光密度均随积温的增加而逐渐增高,直至三龄期结束。二者达到最大值的积温明显大于面积达到最大值的积温。结论 (1)自然条件下,盐酸吗啡显著改变了肥须亚麻蝇幼虫发育积温。故积温并非准确推断PMI的理想指标。(2)自然条件下,口钩和咽骨的骨化面积、平均光密度均随积温的增加呈现良好的线性趋势,并一直维持到三龄期后,此4项指标是推测PMI的理想指标。     

Changes of cerebral β-endorphin in rats treated with combination therapy of melatonin and electroacupuncture

Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏｅｘｐｌｏｒｅｔｈｅｓｔｒｅｎｇｔｈｅｎｉｎｇｏｆａｃｕｐｕｎｃｔｕｒｅａｎａｌｇｅｓｉｃｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｎｔｈｅｌｅｖ ｅｌｏｆβ ｅｎｄｏｒｐｈｉｎａｎｄｐｒｏｏｐｉｍｅｌａｎｏｃｏｒｔｉｎｍＲ ＮＡｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｔｈｅａｒｃｕａｔｅｎｕｃｌｅｕｓｏｆｈｙｐｏ ｔｈａｌａｍｕｓｉｎｒａｔｓｆｏｌｌｏｗｉｎｇｅｌｅｃｔｒｏａｃｕｐｕｎｃｔｕｒｅ（ＥＡ）ｃｏｍｂｉｎｅｄｗｉｔｈｍｅｌａｔｏｎｉｎ（ＭＥＬ）．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄｏｐｔｉｃａｌｄｅｎ…     

家兔玻璃体液铁、磷含量变化与PMI的相关性研究

目的研究死后家兔玻璃体液铁、磷浓度变化与死亡时间的关系,寻找一种精确推断PMI的方法。方法应用全自动生化分析仪检测样本中铁、磷含量,对所得数据进行统计学处理。结果家兔死后54h内眼玻璃体铁、磷元素与PMI显著相关,其单元回归方程分别为y=14.48-0.244x(x=PMI,y=Fe,r=-0.993)、y=-4.573+0.366x(x=PMI,y=Fe,r=0.965)、y=0.137+0.041x(x=PMI,y=P,r=0.975)。结论在54h内玻璃体液铁、磷含量变化可作为推断PMI的参考指标。     

大鼠脑挫伤DNA含量变化与损伤时间的关系

目的观察大鼠脑挫伤后DNA含量的时序变化规律。方法建立自由落体打击大鼠脑挫伤动物模型,采用Feulgen’s DNA染色方法,结合图像分析技术。结果损伤侧大脑皮质浅层和海马区平均积分光密度（IOD）变化呈：24h内迅速下降,24—96h有缓慢上升趋势;伤后24h内上述两区域平均积分光密度均与损伤时间呈线性关系,R^2分别为0．668和0．615。可导出直线回归方程。结论采用Feulgen’s DNA染色法结合图像分析技术观察伤后DNA含量变化,可以应用于脑损伤时间推断的研究,探索推断脑损伤时间的新方法。     

大鼠离体肝脏5′-NT和ACP活性与PMI的相关性研究

目的:探讨大鼠死后肝脏内5′-核苷酸酶(5-′Nu-cleotidase,下称5-′NT)和酸性磷酸酶(Acid phosphatase,下称ACP)活性变化与死后经过时间(Postmortem interval,PMI)的相关性。方法:应用分光光度法检测18℃和28℃下大鼠死后肝脏5-′NT和ACP的活性。结果:大鼠死后0~21 h,其肝脏内5-′NT由150 IU/L逐渐降至0,且与时间呈明显的负相关,回归方程为:PMI=23.18-0.774X5-′NT(r=-0.882,P<0.01);而ACP与时间无明显相关性。结论:5′-NT的降解规律可作为推断PMI的参考指标。     

人体死后不同时间玻璃体液化学成分的变化趋势

目的测定人死后玻璃体液化学成分含量,对多种化学指标进行分析,建立各自的回归方程,使玻璃体液检测能更广泛地应用于法医实践。方法用日本产OL YMPUS AU400自动生化仪对死后时间在0．5-216h的126例尸体玻璃体液中葡萄糖等11种成分的含量进行测定。结果①玻璃体液中葡萄糖、钠、氯随死后时间的延长而逐渐下降;尿素、肌酐、尿酸、钾、钙、镁、无机磷、微量蛋白随死后时间的延长而逐渐升高。葡萄糖、钾离子和无机磷与死亡时间的相关性好（r=-0．824,0．967,0．880）,而尿酸和微量蛋白则不能用于推断死亡时间（r=0．350,0．153）。②死后72h内,死亡时间的逐步回归方程为：Y=-35．15＋6．05X,R^2=0．957,X代表玻璃体液钾离子浓度。Y=-27．83＋5．49X1-1．35X2,R^2=0．960,X1、X2分别代表玻璃体液钾离子、葡萄糖浓度。Y=-16．37＋3．93X1-2．29X2＋5．36X3,R^2=0．966,X1、X2、X3分别代表玻璃体液钾离子、葡萄糖、无机磷浓度。结论①玻璃体液中葡萄糖等11种化学成分的含量随死后时间的延长而改变,其中钾离子在死后72h内与死亡时间最具有线性关系。②用逐步回归法建立多元回归方程推断死亡时间,可以提高对死亡时间估计的准确性。     

吲哚胺2,3-双加氧酶在子痫前期病人胎盘组织表达

目的探讨吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)在胎盘组织表达与子痫前期发病的关系。方法采用免疫组化法分别检测30例轻度子痫前期病人、30例重度子痫前期病人和38例正常晚孕妇女胎盘组织IDO蛋白表达,并采用Motic Med 6.0数码医学图像分析系统分析各组图片IDO阳性细胞的平均吸光度值;RT-PCR法检测各组孕产妇胎盘组织IDO mRNA的表达水平;彩色超声多普勒检测各组孕妇胎儿脐动脉血流阻力指数(RI),并分别测量各组新生儿出生体质量。结果各组孕产妇胎盘组织均有IDO蛋白表达,且主要表达于胎盘合体滋养细胞的胞质中,胎盘间质细胞及血管内皮细胞胞质中也可见少量表达。轻度子痫前期组及重度子痫前期组孕产妇胎盘组织IDO阳性细胞平均吸光度明显高于正常晚孕组,差异有显著性(F=462.895,q=3.474、11.002,P<0.01);重度子痫前期组高于轻度子痫前期组,差异有统计学意义(q=22.491,P<0.01)。轻度及重度子痫前期组胎盘组织IDOmRNA表达水平较正常晚孕组显著降低,差异均有统计学意义(F=90.032,q=8.457、16.913,P<0.01);且重度子痫前期组胎盘组织IDO mRNA表达水平明显低于轻度子痫前期组,差异有统计学意义(q=8.000,P<0.01)。子痫前期组孕产妇胎盘组织IDO mRNA表达水平与其胎儿脐动脉RI呈负相关(r=-0.445,P<0.01),与其新生儿出生体质量呈正相关(r=0.449,P<0.01)。结论子痫前期病人胎盘组织IDO表达下降可能是子痫前期发病的原因之一。     

法医学组织病理切片DNA的实时荧光定量分析

目的:运用TaqMan探针实时荧光定量扩增法,对法医学病理切片进行DNA定量分析,探讨切片组织类型、保存时间对DNA基因组的质量影响。方法:取14例尸检7个年龄段的新鲜组织样本,制作脑、心、肝、肾、脾、肺、肠等7类组织病理切片。以2个7阶拉丁方实验设计,将切片随机分组保存7 d、14 d、30 d、90 d、180 d、360 d、720 d。用硅珠法提取切片DNA,实时荧光PCR进行DNA定量。结果:同一类型组织的不同保存时间的切片DNA含量存在差异(P<0.01),保存1月以内的切片DNA含量下降不显著,半年以上的样本DNA含量下降明显;同一保存时间的不同组织类型之间的DNA含量存在差异(P<0.01),肺、肝、肾三种组织切片DNA含量相对较高;身源年龄组之间差异不显著(P>0.6)。结论:法医学病理组织切片DNA含量较低,为低拷贝模板,组织切片保存时间、组织类型是影响DNA质量的重要因素。     

转化生长因子-β1和血管内皮生长因子在浓缩生长因子各层中的分布及含量特点

目的：测定浓缩生长因子（concentrated growth factors,CGF）凝胶层与红细胞（red blood cells,RBC）层中转化生长因子-β1（transforming growth factor β1,TGF-β1）、血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）分布及含量,探究TGF-β1、VEGF在CGF凝胶层内的分布及含量与其促成骨效应的相关性并指导临床应用。方法：招募6名健康志愿者,采集静脉血制备CGF样品。免疫组织化学法观察CGF凝胶层与RBC层中TGF-β1、VEGF的分布并测定制备即刻的累积光密度值（integrated optical density,IOD）和平均光密度值（average optical density,AOD）。酶联免疫吸附（enzyme-linked immunosorbent assays,ELISA）测定制备即刻上清层与制备1 d后CGF凝胶层析出液中TGF-β1、VEGF的浓度。结果：TGF-β1与VEGF大量聚集于CGF凝胶层中,在RBC层中仅位于多核细胞胞浆和散在的血小板内;CGF凝胶层与RBC层的交界区域有大量血小板与白细胞聚集,并有较高的TGF β1表达;CGF凝胶层析出液中TGF-β1和VEGF的浓度分别为（55 236.78±3 686.34） ng/L和（610.99±148.81）ng/L,均显著高于上清层（20 710.20±4 523.14） ng/L和（335.20±51.69） ng/L（P<0.001）。结论：CGF凝胶层内含有大量TGF β1、VEGF,可发挥促进成骨与加速组织愈合的作用。在临床应用中建议应用时间宜早为佳,除整个CGF层外,可将上清层、CGF层与RBC层交界区域一并使用。     

死后小鼠肾组织细胞核DNA变化规律的研究

目的:研究DNA降解变化与死亡时间的关系,为法医学推断死亡时间提供一种比较准确可靠的新方法。方法:应用单细胞凝胶电泳(SCGE)技术结合荧光显微镜和专业的计算机图像分析技术,测定111只小鼠在死后72h内不同时间点小鼠肾组织细胞核头半径、尾长度、头DNA含量比例、尾DNA含量比例、尾矩、Olive矩、头面积、尾面积8项参数的变化值。结果:在个体死亡72h内,测定的8项参数指标中尾DNA含量比例、彗星尾长、尾矩、Olive矩、尾面积都呈增加趋势,头半径、头DNA含量比例、头面积均呈下降趋势。上述参数均与死亡时间具有高度的相关性。并将每个参数的测量值进行了多项式运算,获得了更能体现DNA降解趋势的二项式回归方程和多元回归方程,均具有高度的统计学意义(P均<0.01)。结论:应用本研究提供的72h内肾组织组织DNA变化与死亡时间之间呈线性关系的各组回归方程,为法医学推断死后经过时间提供了一种新的、客观的、精确的方法和参考依据。