mTOR和survivin在他莫昔芬诱导肝癌HepG2细胞凋亡中的作用

目的 探讨mTOR信号分子和凋亡抑制因子survivin在他莫昔芬处理的肝癌HepG2细胞中的表达变化.方法 采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot和双荧光素酶报告基因检测方法,检测HepG2细胞在他莫昔芬处理前后survivin的表达和p70S6K的活性;流式细胞仪检测细胞凋亡.结果 20μmol/L的他莫昔芬在诱导HepG2细胞凋亡的同时,可使survivin在HepG2细胞中的表达减少,同时下调了 p70S6K的活性.mTOR的特异性抑制剂雷帕霉素和他莫昔芬联合处理HepG2细胞后,HepG2细胞增殖率较对照组下降了 64.7%,差异有统计学意义(P＜0.05),同时survivin蛋白表达明显下降,而survivin mRNA表达无明显变化.结论 他莫昔芬和雷帕霉素能够协同下调HepG2细胞中survivin的表达,他莫昔芬下调HepG2细胞中survivin的表达可能是通过PI3K/Akt/mTOR信号通路调节其转录和转录后水平,进而诱导肝癌细胞凋亡.     

他莫昔芬协同丝裂霉素诱导HepG2细胞株凋亡和下调ERβ表达的实验研究

[目的]探讨他莫昔芬联合丝裂霉素对HepG2细胞株中ERβ表达、细胞生长及凋亡等影响。[方法]实验分他莫昔芬组、丝裂霉素组、两药联合组及对照组4组,MTT法、流式细胞仪检测他莫昔芬、丝裂霉素对HepG2细胞的生长抑制和细胞凋亡作用,免疫组化SP法及WesternBlot法检测上述4组作用后肝癌细胞ERβ蛋白的表达情况。[结果]与对照组相比,他莫昔芬、丝裂霉素及两药联合组均能抑制细胞生长,并且所有加药组均可诱导细胞凋亡,且联合组效果更明显。他莫昔芬、丝裂霉素及两药联合组均可下调ERβ的表达,两药联合组ERβ表达与丝裂霉素组、他莫昔芬组相比更低。[结论]他莫昔芬可协同丝裂霉素抑制肝癌HepG2细胞生长、诱导其凋亡,该作用可能与其下调HepG2细胞中ERβ的表达相关。     

枸橼酸他莫昔芬对人卵巢癌细胞增殖的影响

目的:观察枸橼酸他莫昔芬(Tamoxifen Citrate)对体外培养的人卵巢癌细胞SKOV-3增殖的影响.方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度(0、1、5、10、12、14、15、16、18、20nmol/L)的枸橼酸他莫昔芬在不同的时间点(24、48、72h)对SKOV-3细胞增殖的影响;采用流式细胞技术(FCM)分析不同浓度的枸橼酸他莫昔芬处理细胞24h和48h后对细胞凋亡的影响.结果:枸橼酸他莫昔芬对SKOV-3细胞的增殖具有明显的抑制作用,与对照组相比具有显著性差异(P＜0.05),并呈现剂量和时间依赖性.枸橼酸他莫昔芬能够诱导细胞凋亡,且凋亡率随着枸橼酸他莫昔芬浓度和处理时间的增加而升高(P＜0.01).结论:枸橼酸他莫昔芬可显著抑制SKOV-3细胞的增殖,其作用可能与其诱导细胞凋亡有关.     

PS341对他莫昔芬诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡影响及其机制的探讨

目的:研究蛋白酶体抑制剂PS341是否可增强他莫昔芬(TAM)诱导的乳腺癌细胞凋亡,并探讨可能的机制。方法:采用MTT方法测定细胞活力,采用流式细胞仪检测细胞凋亡,采用蛋白质印迹法检测Caspase-8的活化,PARP的裂解及死亡受体Fas蛋白的表达。结果:TAM以时间及浓度依赖的方式抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖,24及48h的IC50分别为25和6μmol/L,25μmol/L的TAM处理24h可诱导21.9%的MCF-7细胞发生凋亡,10nmol/L的PS341预处理后给予25μmol/L的TAM处理24h细胞凋亡增至34.6%,PS341与TAM均可轻微上调Fas的表达水平,两药联合应用后可显著上调Fas的表达水平,并明显增强线粒体外凋亡通路的活性。结论:PS341与TAM联合应用可通过上调Fas的表达水平,增强TAM诱导的乳腺癌MCF-7细胞凋亡。     

他莫昔芬诱导K562细胞凋亡的实验研究

 目的 观察他莫昔芬对体外培养的人白血病细胞系K562细胞增生抑制及诱导凋亡作用。方法 在体外设定的浓度梯度和作用时间下用他莫昔芬处理K562细胞,采用锥虫蓝拒染法计数活细胞数,并计算细胞生长率,Wright-Giemsa染色光镜观察细胞形态、琼脂糖凝胶电泳测定DNA梯带（DNA,ladder）、流式细胞仪（FCM）检测细胞凋亡率。结果 他莫昔芬能够抑制K562细胞增生;1 ~ 5μmol／L他莫昔芬可诱导K562他莫昔芬对体外培养的人白血病细胞系K562细胞。结论 他莫昔芬可抑制K562细胞生长,诱导其凋亡。     

他莫昔芬和甲孕酮对人卵巢癌细胞系增殖和凋亡的影响

目的：研究他莫昔芬和甲孕酮对人卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响。方法：用不同剂量的他莫昔芬和甲孕酮与人卵巢癌细胞系ＨＯ－８９１０体外培养９６ｈ，用苔盼蓝活细胞拒染法计活细胞数，免疫组化ＳＡＢＣ法检测癌细胞增殖核抗原（ＰＣＮＡ）表达情况，ＤＮＡ缺口原位末端标记方法（ＴＵＮＥＬ）检测细胞凋亡情况。结果：他莫昔芬和甲孕酮在０．１、１、１０ｕｍｏｌ均可使ＨＯ－８９１０活细胞数显著减少（Ｐ〈０．０１）；通过诱导细     

YM155对肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨YM155对肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响及可能的机制。方法:采用CCK-8法检测细胞生长抑制率；应用流式细胞仪检测细胞凋亡率的变化；Western blot法检测细胞中蛋白表达的变化，实时定量RT-PCR检测survivin mRNA表达的变化。结果:YM155对人肝癌HepG2细胞的生长抑制作用呈现剂量和时间依赖性。流式细胞术结果显示，HepG2细胞凋亡率明显升高,呈现剂量依赖性。YM155可引起survivin mRNA及蛋白表达下降，而caspase-3、caspase-9和PARP蛋白表达上升。结论:YM155可以抑制人肝癌HepG2细胞的增殖并促进其凋亡，其机制可能是通过激活caspase凋亡途径来实现。     

辣椒素通过氧化应激诱导HepG2肝癌细胞凋亡的研究

摘 要：［目的］ 观察辣椒素对HepG2细胞增殖和凋亡的影响及其分子机制。［方法］采用CCK8法观察辣椒素对HepG2细胞增殖的影响,流式细胞术和JC-1探针检测辣椒素对HepG2细胞凋亡率和线粒体膜电位的影响,采用DCFH-DA探针联合高内涵分析仪检测氧化应激表达水平的变化。［结果］ 辣椒素可剂量依赖性抑制HepG2细胞增殖、诱导细胞凋亡。200μmol/L辣椒素作用24h可引起HepG2 细胞明显坏死、脱落和漂浮。相比对照组,200μmol/L辣椒素明显降低HepG2细胞线粒体膜电位红绿荧光表达量比值（8.39±0.12 vs 4.23±0.04）。200μmol/L辣椒素可引起HepG2细胞内氧化应激水平上调1.78倍。使用还原剂维生素C抗氧化可恢复细胞活力,减轻凋亡。［结论］ 辣椒素剂量依赖性诱导人肝癌HepG2细胞凋亡,其机制与氧化应激水平过激活相关。     

流式细胞术分析苦参碱诱导人肝癌细胞HepG2凋亡

目的 为探讨苦参碱抑制HepG2增殖的机制。方法 以不同浓度苦参碱作用于HepG2细胞不同时间用PI及AnnexinV-FTTC-PI双标记两法检测凋亡细胞,结果 0.8,1.5,2.0g/L苦参碱处理细胞72h,细胞均出现了凋亡峰,凋亡细胞分别为10.57,16.37,10.85%细胞早期凋亡检测;2.0,1.5,3.0g/L苦参碱分别作6h、12h、12h,凋亡细胞分别达7.7,8.6,15.7%;当3.0g/L苦参碱作用12h,坯 煞费苦心细胞达21.9%。结论 一定浓度苦参碱可诱导HepG2细胞凋亡,凋亡与坏死相伴存在并呈剂量和时间依赖性。     

靶向survivin的siRNA联合三苯氧胺对乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的影向

目的观察靶向survivin的siRNA联合三苯氧胺对乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的影响.方法构建靶向survivin的siRNA真核表达载体,采用lipofec-tamineTM2000转染乳腺癌MCF-7细胞,采用MTT法检测靶向survivin的siRNA联合三苯氧胺对MCF-7细胞增殖的影响;采用流式细胞术检测靶向survivin的siRNA联合三苯氧胺诱导MCF-7细胞凋亡的作用.结果靶向survivin的siRNA和三苯氧胺均可抑制MCF-7细胞增殖并诱导其一定程度的凋亡;当联合应用靶向survivin的siRNA和三苯氧胺时,上述作用得到显著加强(P＜0.05).结论利用RNA干扰技术阻断survivin基因的表达可以显著增强MCF-7细胞对三苯氧胺的敏感性,靶向survivin的RNA干扰技术在乳腺癌的内分泌治疗中具有重要的潜在价值.     

去甲斑蝥素对肝癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究去甲斑蝥素(norcantharidin,NCTD)对人肝癌HepG2细胞增殖、凋亡和survivin表达的影响。方法:MTT法检测NCTD对HepG2细胞增殖的影响,Hochest33258染色、AnnexinV/PI染色、DNA琼脂糖电泳检测NCTD对HepG2细胞凋亡的影响,Western blotting检测NCTD对HepG2细胞survivin蛋白表达的影响。结果:NCTD可显著抑制HepG2细胞的增殖,呈质量浓度(5、10、20和40μg/ml)依赖性,40μg/ml NCTD作用48h时HepG2细胞抑制率达(81.27±3.25)%。NCTD作用HepG2细胞24h后,荧光显微镜下可见HepG2细胞出现核固缩和核裂解现象;DNA琼脂糖电泳显示,基因组DNA呈现典型的凋亡梯状图形;流式细胞术结果显示,5、10、20和40μg/ml NCTD作用后,HepG2细胞的凋亡率分别为(7.33±0.25)%、(18.23±1.19)%、(32.5±2.30)%和(48.23±1.17)%。Western blotting结果显示,随着NCTD作用剂量的增加,HepG2细胞中survivin蛋白的表达逐渐减少。结论:NCTD能抑制HepG2细胞增殖并促进其凋亡,其凋亡的发生与下调survivin蛋白的表达有关。     

survivin与细胞凋亡在肺癌中的研究进展

生存素(survivin)是凋亡抑制蛋白(IAP)家族成员之一,在肺癌中高表达,具有抑制凋亡功能.细胞凋亡与肺癌的发生发展及预后密切相关.survivin及细胞凋亡与肺癌的关系可能为肺癌的研究治疗提供新思路.

Abstract：

Survivin is one of inhibitors of apoptosis protein family members. It is highly expressed in lung cancer. Survivin can inhibit apoptosis. Apoptosis is closely related with development and prognosis in lung cancer. Survivin and apoptosis might become breakthrough point in treatment of lung cancer.     

NS-398对肝癌SMMC-7721和BEL-7402细胞凋亡和survivin、PTEN表达调节作用的研究

目的:研究应用NS398对肝细胞癌细胞株进行药物干预,探讨NS398对肝细胞癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:人肝细胞癌细胞株SMMC7721、BEL7402细胞常规培养。NS398取0、25、50、75、100μmol/L5个浓度组,每个浓度组选取24、48、72h三个作用时间点进行检测,观察NS398对各细胞株的作用。MTT法测定2种细胞株的增殖抑制情况,FCM检测对细胞周期和凋亡的影响,FCM定量检测COX2、survivin、PTEN的表达。结果:MTT法结果显示,NS398可以显著抑制SMMC7721、BEL7402细胞增殖。FCM检测结果显示,NS398分别使SMMC7721、BEL7402细胞G0/G1期比例显著降低;G2/M期细胞比例显著增高,S期细胞比例无明显变化,并引起了显著的细胞凋亡(P<0.001),并且呈时间依赖性和剂量依赖性。与对照组相比,NS398使COX2、survivin和PTEN蛋白表达显著下调并且呈时间和剂量依赖性关系(P<0.001)。结论:NS398通过诱导SMMC7721、BEL7402细胞株凋亡而抑制其增殖,可能部分通过下调survivin和PTEN途径实现的。     

Survivin反义寡核苷酸诱导K562/A02细胞凋亡的实验研究

背景与目的:Survivin是最近发现的凋亡抑制基因,与白血病的发生和耐药有关,反义寡核苷酸可抑制survivin表达,诱导凋亡,增加药物的敏感性。本研究探讨survivin反义寡核苷酸对白血病耐药细胞K562/A02生长、凋亡和半胱氨蛋白水解酶3的活性的作用。方法:以脂质体转染survivin反义寡核苷酸,以MTT、RT-PCR、流式细胞术、荧光分光光度计分别检测survivin反义寡核苷酸对K562/A02细胞的生长抑制、survivin mRNA表达、凋亡和半胱氨蛋白水解酶3的活性。结果:survivin反义寡核苷酸对K562/A02细胞的生长抑制呈浓度-时间依赖性,与对照组相比,survivin mRNA表达降低36.2%(P<0.05),半胱氨蛋白水解酶3的活性增加67.6%(P<0.05);K562/A02细胞的凋亡率明显增加(14.48±2.65%vs 2.39±0.47%,P<0.005)。结论:survivin反义寡核苷酸通过抑制survivin表达,上调半胱氨蛋白水解酶3活性而诱导凋亡。     

Quercetin promotes degradation of survivin and thereby enhances death-receptor-mediated apoptosis in glioma cells

The flavonoid quercetin has been reported to inhibit the proliferation of cancer cells, whereas it has no effect on nonneoplastic cells. U87-MG, U251, A172, LN229, and U373 malignant glioma cells were treated with quercetin (50-200 microM). Quercetin did not cause cytotoxicity 24 h after treatment. Combining quercetin with tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand (TRAIL) strongly augmented TRAIL-mediated apoptosis in U87-MG, U251, A172, and LN229 glioma cells; U373 cells could not be sensitized by quercetin to TRAIL-mediated apoptosis. TRAIL-induced apoptosis was enhanced by quercetin-induced reduction of survivin protein levels. Upon treatment with quercetin, the protein level of survivin was strongly suppressed in U87-MG, U251, and A172 but not in U373 glioma cells. Quercetin exposure resulted in proteasomal degradation of survivin. TRAIL-quercetin-induced apoptosis was markedly reduced by overexpression of survivin. In addition, upon treatment with quercetin, downregulation of survivin was also regulated by the Akt pathway. Taken together, the results of the present study suggest that quercetin sensitizes glioma cells to death-receptor-mediated apoptosis by suppression of inhibitor of the apoptosis protein survivin.     

苦参碱对淋巴瘤Raji细胞的增殖及survivin蛋白表达的影响

目的：研究苦参碱对淋巴瘤Raji细胞的生长抑制作用,并探讨其可能的作用机制。方法：MTT比色法测定细胞增殖抑制率;Hoechst33342荧光染色及电镜观察细胞形态及结构变化;免疫细胞化学染色法观察survivin蛋白表达的改变。结果：一定浓度苦参碱作用Raji细胞后,细胞增殖受到明显抑制,且抑制率呈浓度和时间依赖性;荧光显微镜下可见核浓缩,聚集,碎裂等典型的凋亡特征;电镜下可见到凋亡小体形成;免疫细胞化学染色法显示随着苦参碱作用浓度增加,survivin蛋白表达降低。结论：苦参碱在一定浓度范围内可以明显抑制恶性淋巴瘤Raji细胞增殖,并下调抗凋亡基因survivin的表达。     

靶向survivin的siRNA联合三苯氧胺对乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的影响

目的：观察靶向survivin的siRNA联合三苯氧胺对乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的影响.方法：构建靶向survivin的siRNA真核表达载体,采用lipofec-tamineTM2000转染乳腺癌MCF-7细胞,采用MTT法检测靶向survivin的siRNA联合三苯氧胺对MCF-7细胞增殖的影响;采用流式细胞术检测靶向survivin的siRNA联合三苯氧胺诱导MCF-7细胞凋亡的作用.结果：靶向survivin的siRNA和三苯氧胺均可抑制MCF-7细胞增殖并诱导其一定程度的凋亡;当联合应用靶向survivin的siRNA和三苯氧胺时,上述作用得到显著加强（P＜0.05）.结论：利用RNA干扰技术阻断survivin基因的表达可以显著增强MCF-7细胞对三苯氧胺的敏感性,靶向survivin的RNA干扰技术在乳腺癌的内分泌治疗中具有重要的潜在价值.