用荧光强度反映Cbfal活性成骨细胞模型的构建

目的 构建稳定表达由60SE2启动子驱动的增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的MG63细胞株,并筛选出能反映Cbfal活性的细胞株.方法 合成60SE2启动子的序列,并将其构建到T载体中:然后通过双酶切得到启动子片段;与去除CMV启动子的报告基因载体pEGFP-Nl的酶切片段连接,构建真核表达载体;并转染到MG63细胞系,经G418筛选得到了稳定转染60SE2-EGFP基因的MG63细胞株.用不同浓度的IGF-I和VD,处理,通过EGFP荧光强度分析,ALP活性测定,筛选出能够响应IGF-I和VD3的细胞株.结果 构建了pUC-60SE2扩增载体和p60SE2-EGFP真核表达载体,通过稳定转染以及IGF-I、VD_3筛选获得一株荧光强度随IGF-I和VD_3处理而增强的细胞株.OSE-MG63.结论 构建了能反应Cbfal活性的成骨细胞模型,为进一步研究微重力对Cbfal的转录活性及信号传导途径的影响奠定了基础.