杜鹃花叶片总RNA的改良CTAB法提取

目的 研究杜鹃花叶片总RNA的提取方法.方法 一种适合富含次生代谢产物的杜鹃花叶片总RNA的提取方法--改良CTAB法.采用CTAB作为去污剂,分别用氯仿和水饱和酚反复抽提以及高浓度NaCl沉淀,以去除蛋白质、多糖和次生代谢物等杂质,最后用无水乙醇沉淀获得总RNA.结果 该方法不仅使所获得的总RNA完整性好,纯度高,而且操作简单、快速、成本低廉.结论 该方法对杜鹃花等富含次生代谢产物的植物特别是富含多酚、多糖的材料的总RNA提取具有借鉴意义.     

四种提取重楼根茎总RNA方法的研究

目的 探索重楼根茎总RNA提取的最佳方法.方法 以重楼根茎为材料,比较研究了4种不同的RNA抽提方法如改良Trizol法、异硫氰酸胍法、改良CTAB法和SDS法提取总RNA的效果.结果 改良Trizol法提取的重楼根茎总RNA的电泳条带清晰,RNA完整性好,A260/A280比值在1.8 ～2.0之间,A260/A230比值在2.0 ～2.3之间,能够满足一般的分子操作要求;但异硫氰酸胍法、改良CTAB法和SDS法所提取的根茎总RNA有明显的DNA或蛋白质污染,并且均有一定程度的降解.结论 改良Trizol法方便、快捷、高效,可有效地从富含多酚和多糖的重楼根茎中分离出高质量RNA,为重楼进行基因克隆、cDNA文库构建等分子生物学研究奠定基础.     

改良CTAB法提取新疆一枝蒿干叶基因组DNA

目的:从自然干燥的新疆一枝蒿中提取高质量的基因组DNA,为该药材的分子生物学研究提供参考。方法:采用2种改良十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法与常规CTAB法提取新疆一枝蒿中基因组DNA,通过加适量聚乙烯吡咯烷酮(PVP)研磨样本,在核裂解前用细胞核裂解液(STE)洗涤多酚类和多糖类物质,利用95%乙醇室温沉淀DNA等措施。改良CTAB法2与1相比不用液氮研磨样本。通过琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度法和相关序列扩增多态性(SRAP)检测提取DNA的质量。结果:2种改良CTAB法所得DNA质量均优于常规CTAB法,DNA完整性较好,A260 nm/A280 nm在1.8~2.0,多糖类杂质去除较为干净。SRAP检验条带清晰、多态性良好。结论:2种改良CTAB法均适用于高质量新疆一枝蒿干叶基因组DNA的提取,得到的DNA纯度和完整性均较理想,可为后续分子生物学研究提供良好模版。     

桑寄生不同部位总RNA提取方法比较研究

目的：从桑寄生中提取高质量的RNA。方法：以桑寄生叶片、茎、花和种子为材料,采用TRIzol试剂盒法、改良TRIzol法、CTAB-LiCl法、CTAB-异丙醇法4种方法,比较不同材料及不同方法分离RNA的效果。结果：TRIzol试剂盒法和改良TRIzol法均不能有效的去除桑寄生中的多糖和蛋白质等杂质,不适合用于桑寄生RNA的提取;CTAB-LiCl法提取的RNA质量较高、完整性较好,可满足各种后续分子生物学实验的要求;CTAB-异丙醇法提取桑寄生RNA的效果虽然较好,但还达不到小RNA分析实验要求。结论：为桑寄生后续分子生物学研究提供基础,也为次生代谢物较丰富的药用植物RNA的提取提供参考。     

提取金荞麦愈伤组织总RNA的一种有效方法

目的:建立金荞麦愈伤组织总RNA提取方法.方法:采用CTAB法结合LiCl沉淀的改良方法提取RNA,紫外分光光度检测、0.8%非变性琼脂糖凝胶电泳检测,RNA的反转录等评价RNA质量.结果:提取的总RNA 28S和18S条带清晰,且A260/A280在1.9～2.0,以提取的RNA为模板反转录的cDNA长度范围较广(500bp～5 kb).结论:该方法提取出的总RNA质量能满足RT-PCR等分子生物学操作的要求,且简单、有效、经济,可用于金荞麦愈伤组织总RNA的提取.     

桑叶片总RNA提取方法的比较研究

目的 研究桑叶片总RNA的提取方法.方法 采用Trizol法、CTAB法及RNA prep prue Plant Kit提取试剂盒提取法,分别提取桑叶片中的总RNA,并通过紫外光谱、琼脂糖凝胶电泳及RT-PCR对提取效果进行分析比较.结果 3种方法均能从桑叶片中提取分离到总RNA,其中Trizol法能提取纯度较高、完整性较好的RNA,18S及28S带型清晰无弥散,A260/A280值为1.99,RNA产率为594.24μg/g,提取的总RNA适用于RT-PCR实验.结论 用Trizol法提取的桑叶片中总RNA可用于cDNA基因文库的构建及基因表达的差异分析.     

半夏块茎高质量总RNA提取的一种有效方法

目的：探讨一种有效提取半夏块茎总RNA方法。方法：以半夏试管苗的叶片、叶柄和块茎为试验材料，将常规的异硫氰酸胍提取植物总RNA的方法做了改进，在RNA 提取缓冲液中加入高浓度的β-巯基乙醇以除去酚类物质, 用酸酚/氯仿抽提去除蛋白质污染，以及利用异丙醇和醋酸钠联合沉淀多糖等手段，建立了一种简单实用的从富含多酚类和多糖等物质的植物材料中提取总RNA的方法。结果：该方法所提RNA的A₂₆₀/A_{230均大于2.0，A260/A280的值为1.7～2.0，电泳条带清晰，RNA完整性好。结论：利用本方法提取的半夏试管小块茎总RNA具有很高的质量和纯度，且得率很高，完全满足后续的DDRT-PCR和反向Northern blotting等分子生物学研究，而且简单经济、实验结果稳定，重复性好，适合富含多酚类和多糖等物质的药用植物组织总RNA 的提取。}     

金银花药材脱氧核糖核酸（DNA）提取方法的研究

目的：研究金银花药材总脱氧核糖核酸（DNA）的提取方法。方法：对经典的十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）法进行了改良,采用改良的CTAB法提取金银花药材的总DNA,通过紫外吸收、琼脂糖凝胶电泳检测其纯度和浓度。结果：用改良的CTAB法提取的总DNA的OD260/OD280比值在1.76-1.85之间,干药材提取率为89.8-325.4μg/g。结论：用改良CTAB法提取的基因组DNA纯度高,符合分子生物学的要求。     

党参根组织RNA提取的研究与优化

目的:建立党参根组织高质量总RNA的提取方法。方法:针对党参根组织多糖含量高的特点,比较了CTAB-LiCl,CTAB-PVP,改良Trizol法3种总RNA的提取方法。结果:CTAB-LiCl法无法提取得到总RNA,CTAB-PVP法提取的总RNA有多糖等杂质污染,改良Trizol法提取的总RNA无DNA及其它杂质污染,党参根组织的产量为120.8μg·g-1,A260"A280在1.8².0间,A260"A230大于2.0。结论:改良Trizol法操作简单,提取时间短,提取的RNA可以用于后续分子生物学研究。     

忍冬干叶基因组DNA提取方法的研究

目的：从变色硅胶干燥的忍冬叶片中提取高质量的基因组DNA。方法：分别采用常规CTAB法与改良CTAB法提取干叶的DNA，通过琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度法、酶切检测其质量，并与鲜叶的提取效果比较。结果：改良CTAB法所得DNA优于常规CTAB法，电泳条带清晰，完整性好，纯度高，能被EcoRⅠ完全酶切。从变色硅胶干燥的忍冬叶片中提取的DNA质量与鲜叶无明显差异，且产率更高。结论：改良CTAB法适合忍冬干叶基因组DNA的提取。     

不同采收期栀子有机酸类成分HPLC指纹图谱

目的:比较不同采收期栀子中有机酸类成分的HPLC指纹图谱,探讨该类成分在不同采收期内的动态变化。方法:采用Kromasil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以0.05%三氟乙酸水溶液-乙腈为流动相梯度洗脱,流速1.0 m L·min-1,检测波长327 nm,柱温40℃。运用相似度评价法对各样品指纹图谱进行化学模式识别研究。结果:以建立的栀子对照指纹图谱为基准,分别对不同采收期的样品图谱进行相似度评价,计算样品相似度为青栀子0.94~1.00,黄栀子0.81~0.92,红栀子0.53~0.74。结论:栀子中各有机酸类成分随采收期不同而各异,不同生长期内采集的样品中该类成分的积累具有一定规律。本研究所建立的方法可为栀子药材质量控制及实现规范化种植提供了科学参考。     

牛蒡子亚临界萃取后药渣中总木脂素的富集工艺优选

目的: 优选经亚临界萃取后牛蒡子药渣中总木脂素的富集工艺,为该药材资料的开发与利用提供参考. 方法: 以牛蒡子油得率、药渣中总木脂素含量为指标,通过单因素试验考察牛蒡子亚临界萃取溶媒.采用醇提水沉法富集牛蒡子药渣中木脂素类成分,通过单因素试验优选工艺条件.采用HPLC测定牛蒡子苷和牛蒡子苷元的含量,流动相乙腈(A)-0.1%磷酸水溶液(B)梯度洗脱(0~5 min,30%~35%A;5~13 min,35%~45%A;13~15 min,45%~48%A;15~20 min,48%~53%A;20~29 min,53%~80%A;29~40 min,80%~100%A),检测波长280 nm. 结果: 选择丁烷为萃取溶媒脱脂.最佳富集工艺为加8倍量70%乙醇回流提取3次,每次1 h,滤液减压回收至0.5 g·mL^-1,按药渣量加12倍量水沉淀,煮沸回流60 min;总木脂素纯度>50%,转移率>80%. 结论: 醇提水沉法适用于牛蒡子中总木脂素部位的富集纯化,优选的工艺稳定可行.     

正交试验优选宣木瓜总皂苷的提取工艺

目的:优选宣木瓜总皂苷的提取工艺。方法:以宣木瓜总皂苷得率为评价指标,通过单因素试验筛选提取方法,利用正交试验考察乙醇体积分数、提取温度、料液比及提取时间对宣木瓜总皂苷提取工艺的影响。采用UV测定总皂苷含量,检测波长550 nm。结果:最佳乙醇提取工艺为加20倍量80%乙醇于90℃提取3 h;宣木瓜总皂苷得率1.69%。结论:优选的提取工艺稳定可行,为宣木瓜系列产品的开发提供参考。     

自微乳浸提串联浊点浓缩分离蛇床子中香豆素类化合物的工艺优选

目的:建立利用自微乳浸提串联浊点浓缩分离蛇床子中香豆素类化合物的工艺.方法:以蛇床子素溶解量为指标,通过单因素试验筛选油相、乳化剂、助乳化剂,利用伪三元相图优化自微乳处方;以蛇床子素和总香豆素提取量为指标,采用U5(54)均匀试验考察浸提温度、时间、液固比和超声功率对提取工艺的影响,通过浊点浓缩分离自微乳提取液中香豆素类成份.结果:优选的微乳液处方为[聚乙二醇辛基苯基醚-正丁醇(5∶1)]-油酸乙酯-水(2.5∶0.5∶7);最优工艺参数为液固比20∶1,提取温度50℃,超声功率280 W,浸提时间60 min,蛇床子素和总香豆素的提取率分别达83.2％,91.19％;利用浊点浓缩方法处理自微乳提取液,油层中蛇床子素和总香豆素的回收率分别达90.33％,78.91％.结论:该工艺简单易行,适用于蛇床子活性成分的提取和浓缩分离.