桑叶片总RNA提取方法的比较研究

目的 研究桑叶片总RNA的提取方法.方法 采用Trizol法、CTAB法及RNA prep prue Plant Kit提取试剂盒提取法,分别提取桑叶片中的总RNA,并通过紫外光谱、琼脂糖凝胶电泳及RT-PCR对提取效果进行分析比较.结果 3种方法均能从桑叶片中提取分离到总RNA,其中Trizol法能提取纯度较高、完整性较好的RNA,18S及28S带型清晰无弥散,A260/A280值为1.99,RNA产率为594.24μg/g,提取的总RNA适用于RT-PCR实验.结论 用Trizol法提取的桑叶片中总RNA可用于cDNA基因文库的构建及基因表达的差异分析.     

灰毡毛忍冬花蕾总RNA提取方法的研究

目的:探讨灰毡毛忍冬花蕾总RNA提取的有效方法。方法:采用SDS法、Trizol法、普通试剂盒法、改良CTAB法、多糖多酚试剂盒法、改良多糖多酚试剂盒法提取灰毡毛忍冬花蕾总RNA并比较其效果。结果:SDS法、Trizol法和普通试剂盒法均不适用于本样品总RNA的提取;改良CTAB法、多糖多酚试剂盒法、改良多糖多酚试剂盒法均能有效去除蛋白质、多糖多酚及DNA,OD260/280为1.86-2.00,OD260/230为1.96-2.63,电泳条带清晰,RNA完整性好,且通过RT-PCR扩增能获得特异性条带。但以多糖多酚试剂盒法提取效果最佳。结论:改良CTAB法、多糖多酚试剂盒法、改良多糖多酚试剂盒法均适合灰毡毛忍冬花蕾总RNA提取,完全满足后续RT-PCR等分子生物学研究。     

提取金荞麦愈伤组织总RNA的一种有效方法

目的:建立金荞麦愈伤组织总RNA提取方法.方法:采用CTAB法结合LiCl沉淀的改良方法提取RNA,紫外分光光度检测、0.8%非变性琼脂糖凝胶电泳检测,RNA的反转录等评价RNA质量.结果:提取的总RNA 28S和18S条带清晰,且A260/A280在1.9～2.0,以提取的RNA为模板反转录的cDNA长度范围较广(500bp～5 kb).结论:该方法提取出的总RNA质量能满足RT-PCR等分子生物学操作的要求,且简单、有效、经济,可用于金荞麦愈伤组织总RNA的提取.     

四种提取重楼根茎总RNA方法的研究

目的 探索重楼根茎总RNA提取的最佳方法.方法 以重楼根茎为材料,比较研究了4种不同的RNA抽提方法如改良Trizol法、异硫氰酸胍法、改良CTAB法和SDS法提取总RNA的效果.结果 改良Trizol法提取的重楼根茎总RNA的电泳条带清晰,RNA完整性好,A260/A280比值在1.8 ～2.0之间,A260/A230比值在2.0 ～2.3之间,能够满足一般的分子操作要求;但异硫氰酸胍法、改良CTAB法和SDS法所提取的根茎总RNA有明显的DNA或蛋白质污染,并且均有一定程度的降解.结论 改良Trizol法方便、快捷、高效,可有效地从富含多酚和多糖的重楼根茎中分离出高质量RNA,为重楼进行基因克隆、cDNA文库构建等分子生物学研究奠定基础.     

适用于SSR分析的广西莪术DNA提取方法考察

目的:获取适用于广西莪术简单序列重复(SSR)分析的高质量DNA,为该品种的遗传多样性研究提供参考。方法:选择广西莪术嫩叶为材料,采用经典十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法和改良CTAB法提取广西莪术总DNA,考察手工和机器研磨的差异性,采用UV检测DNA浓度和纯度,DNA作为模板进行聚合酶链反应(PCR)扩增,引物选择clest SSR-01,clest SSR-03,clest SSR-06,clest SSR-08,clest SSR-14,clest SSR-15,利用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测DNA扩增效果。结果:改良CTAB法所提DNA的A260 nm/A280 nm1.8~2.0,蛋白质、多糖、RNA等物质去除较彻底,DNA符合PCR扩增结果要求,使用姜黄属通用引物能扩增出清晰条带。经典CTAB法所提DNA的A260 nm/A280 nm1.50~1.60,含较多杂质,无法用于PCR扩增等分子生物学研究。结论:改良CTAB法提取所得DNA质量较好,可有效去除次生代谢产物对DNA的干扰,适用于广西莪术SSR分子标记和遗传多样性分析。     

破布木果基因组DNA不同提取方法比较研究

目的采用不同方法对维药破布木果基因组DNA进行提取,为破布木果基因组DNA的研究提供参考。方法采用改良CTAB(十六烷基三乙基溴化铵)法和改良SDS(十二烷基磺酸钠)法提取破布木果基因组DNA,并采用分光光度法和琼脂糖凝胶电泳技术检测提取DNA的纯度和浓度。结果分光光度法检测结果表明,用改良CTAB法提取的基因组DNA纯度优于改良SDS法,无蛋白质和RNA污染。琼脂糖凝胶电泳结果表明,2种方法提取得到的基因组DNA电泳图谱均有明显的主带出现,但改良SDS法提取的基因组DNA降解较多。结论改良CTAB法可以提取相对较高质量的破布木果基因组DNA。     

大黄总RNA提取方法的研究

目的建立大黄根中总RNA提取的方法,为后续的分子生物学研究打下基础。方法以新鲜的大黄根为材料,分别采用Trizol法、常规CTAB-LiCl法、改良CTAB-LiCl法、通用型试剂盒法提取总RNA,利用琼脂糖凝胶电泳、微量紫外分光光度计和实时荧光定量PCR检测总RNA的纯度、完整性和产量。结果除CTAB-LiCl法外,Trizol法和通用型试剂盒法均不能从大黄根中提取出总RNA。同时,常规CTAB-LiCl法不稳定,所提总RNA有一定程度的降解。采用改良CTAB-LiCl法所提取的总RNA量大,纯度、完整性及质量均较好。结论改良CTAB-LiCl法对大黄等富含多酚、多糖类药材的总RNA提取具有一定的借鉴意义。     

金银花药材脱氧核糖核酸（DNA）提取方法的研究

目的：研究金银花药材总脱氧核糖核酸（DNA）的提取方法。方法：对经典的十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）法进行了改良,采用改良的CTAB法提取金银花药材的总DNA,通过紫外吸收、琼脂糖凝胶电泳检测其纯度和浓度。结果：用改良的CTAB法提取的总DNA的OD260/OD280比值在1.76-1.85之间,干药材提取率为89.8-325.4μg/g。结论：用改良CTAB法提取的基因组DNA纯度高,符合分子生物学的要求。     

改良CTAB法提取新疆一枝蒿干叶基因组DNA

目的:从自然干燥的新疆一枝蒿中提取高质量的基因组DNA,为该药材的分子生物学研究提供参考。方法:采用2种改良十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法与常规CTAB法提取新疆一枝蒿中基因组DNA,通过加适量聚乙烯吡咯烷酮(PVP)研磨样本,在核裂解前用细胞核裂解液(STE)洗涤多酚类和多糖类物质,利用95%乙醇室温沉淀DNA等措施。改良CTAB法2与1相比不用液氮研磨样本。通过琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度法和相关序列扩增多态性(SRAP)检测提取DNA的质量。结果:2种改良CTAB法所得DNA质量均优于常规CTAB法,DNA完整性较好,A260 nm/A280 nm在1.8~2.0,多糖类杂质去除较为干净。SRAP检验条带清晰、多态性良好。结论:2种改良CTAB法均适用于高质量新疆一枝蒿干叶基因组DNA的提取,得到的DNA纯度和完整性均较理想,可为后续分子生物学研究提供良好模版。     

中麻黄基因组DNA不同提取方法的比较

目的:比较不同DNA提取方法,选择最适于中麻黄基因组的方法.方法:采用改良CTAB,SDS法、试剂盒法提取中麻黄基因组DNA;用琼脂糖凝胶电泳法和紫外分光光度法检测所得总DNA的得率和纯度,并进行ISSR-PCR扩增检测.结果:3种方法均可从新鲜中麻黄中提取出产量较高的基因组DNA,但其中改良CTAB法提取的总DNA纯度高,质量好,扩增产物的电泳条带也较明显;SDS法和试剂盒法提取的总DNA质量差,不适用于下游分子生物学实验.结论:改良十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法为中麻黄基因组DNA提取的最佳方法,该方法提取的基因组DNA适用于中麻黄基因组PCR扩增和其他分子生物学研究.     

开口箭DNA提取方法比较

目的:筛选从开口箭不同类型材料中提取DNA的最佳方法。方法:采用十二烷基磺酸钠(SDS)法,改良SDS法,十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法和改良CTAB法4种方法分别对开口箭的新鲜茎、硅胶干燥茎、烘干茎、新鲜叶片和硅胶干燥叶片这5类材料进行DNA提取。从DNA的完整性、纯度、得率等方面对DNA进行比较,确定开口箭不同材料DNA提取的最适方法。结果:采用改良CTAB法提取的硅胶干燥茎和叶片的A_{260 nm}/A_{280 nm}均在1.8~1.9,纯度最高,且完整性较高,提取效果较其他方法更佳;其余材料则均有不同程度的污染, 新鲜叶片的A_{260 nm}/A_{280 nm}普遍很低。结论:从硅胶干燥叶片和茎的开口箭材料中更容易提取出纯度高、完整度好的DNA。改良CTAB法是适合开口箭DNA提取的有效方法,通过改良CTAB法从硅胶干燥叶片和茎的开口箭中更容易提取纯度高、完整度好的基因组DNA。     

复方血脂宁中4种药材对二苯乙烯苷稳定性的影响

目的:考察复方血脂宁中4种药材提取液对二苯乙烯苷稳定性的影响,探究该复方的配伍规律。方法:采用UPLC考察不同条件下二苯乙烯苷单体及其在复方各药材提取液中含量随时间的变化规律,流动相甲醇(A)-0.1%甲酸水溶液(B)梯度洗脱(0~2 min,10%~25%A;2~9 min,25%~35%A;9~12 min,35%~40%A;12~40 min,40%~90%A),流速0.2 m L·min-1,柱温45℃,检测波长280 nm。利用化学反应动力学方法计算二苯乙烯苷在不同环境下的降解反应动力学参数,表征其半衰期(t1/2)和降解活化能。结果:二苯乙烯苷单体及其在不同药材提取液中的降解均遵循一级反应动力学规律,在p H 8.3条件下,二苯乙烯苷单体的降解速率常数(K)0.037 5 h-1,t1/2=18.48 h,该成分在山楂提取液中的K=0.012 3 h-1,t1/2=56.35 h,其他3种药材提取液也在不同条件下表现出对二苯乙烯苷的促稳作用。结论:复方血脂宁中药材配伍可不同程度地提高二苯乙烯苷的稳定性,其中以山楂效果最为显著,从稳定性角度探究了中药复方配伍的合理性。     

基于1H-NMR代谢组学分析山楂不同炮制品对食积症的影响

目的:采用~1H-NMR技术的血清代谢组学方法,并结合传统生化指标分析,研究炮制对山楂促消化作用的影响。方法:实验动物喂饲特制高蛋白、高热量饲料复制食积模型,以小鼠小肠推进率和大鼠胃肠道激素水平作为药效学指标,应用~1H-NMR测定大鼠血清,结合多元统计分析方法对比给予大鼠净山楂、炒山楂、焦山楂后血清代谢物的变化,比较各炮制品对食积模型大鼠的治疗作用。结果:山楂各炮制品组对于食积因素引起的小鼠肠推进障碍及胃肠激素分泌紊乱均有改善作用,且以焦山楂组改善效果最为显著。大鼠血清代谢组学结果显示,模型组与空白组存在明显的代谢差异,根据S-plot图的变量重要性投影(VIP)值、单因素ANOVA以及受试者工作特征曲线(ROC曲线)下的面积(AUC)筛选出3-羟基丁酸,甘油磷酰胆碱(GPC),N-乙酰糖蛋白,O-乙酰糖蛋白,氧化三甲胺,丙氨酸,乙酸,谷氨酸,谷氨酰胺,肌酸,亮氨酸,乳酸,葡萄糖共13个与食积相关的生物标志物。比较给药后山楂各炮制品组引起的代谢变化,发现焦山楂组对O-乙酰糖蛋白、谷氨酰胺和GPC的回调趋势更接近空白组,其余代谢产物组成与净山楂组和炒山楂组基本一致。结论:山楂炮制后消食导滞作用存在一定差异,焦山楂改善食积疗效最为显著,可能主要通过调节胃肠动力障碍及能量代谢等发挥作用。     

山茱萸炮制过程中美拉德反应的理化参数变化

目的:从美拉德反应的角度出发,阐明山茱萸的炮制机制。方法:采用不同炮制方法处理山茱萸,分析反应体系的理化参数变化。在炮制过程中不同时间点分别测定p H以指示酸碱变化,紫外分光光度法检测炮制过程中的褐变程度,HPLC检测美拉德反应产物5羟甲基糠醛(5-HMF)的含量变化。结果:山茱萸炮制前12 h,p H降低,A284和A420增大,5-HMF含量升高显著,12 h后变化趋势变缓,24 h后趋于稳定。结论:从美拉德反应入手研究山茱萸炮制过程,不仅有助于从新的角度揭示炮制的机制,也为山茱萸炮制工艺的优化提供了科学的依据。     

山茱萸药材鲜品与干品总DNA提取方法比较

目的:探讨山茱萸药材鲜品与干品总DNA的提取方法,比较鲜、干品总DNA质量,为以后的研究奠定基础。方法:采用改良CTAB法A,B和经典SDS法,提取山茱萸药材鲜品和干品总DNA,对其进行DNA含量测定和电泳检测。结果:改良CTAB法A提取山茱萸药材鲜品与干品总DNA的OD260/OD280比值在1.7~1.9之间,电泳条带清晰,无拖尾,对山茱萸药材鲜品与干品DNA进行综合比较,结果显示鲜品获得的DNA质量高于干品。结论:改良的CTAB法A是分离高质量完整DNA的方法简便、快速,该方法得到的DNA适合下一步分子生物学研究。     

微波消解-ICP-AES法对不同产地牛蒡子无机元素分析与评价

目的：测定20批不同产地牛蒡子无机元素的含量。方法：采用微波消解法处理样品,电感耦合等离子发射光谱（ICP-AES）同时测定26种元素含量,采用主成分分析法对不同产地牛蒡子无机元素的含量进行分析和综合评价。结果：不同产地牛蒡子含有12~14种无机元素,其中K,Al,Fe,S,Zn,Cu 6种元素含量较丰富;主成分分析选择4个因子,并对不同产地牛蒡子进行综合评价,其综合评价函数为F=0.298 74F₁+0.257 56F₂+0.144 49F₃+0.135 19F₄,结果发现浙江、河北和吉林3个产地的牛蒡子样品的综合排序为1~3位,表明从无机元素考虑这3个产地牛蒡子样品品质较好。结论：该方法快速、简便,数据准确可靠,可为不同产地牛蒡子的质量分析和综合开发利用提供参考。     

基于灰色关联-TOPSIS法评价不同产地山楂质量

目的 采用灰色关联-TOPSIS法对不同产地山楂质量进行评价。方法 建立高效液相色谱波长切换法同时测定山楂药材中绿原酸、表儿茶素、金丝桃苷、异槲皮苷、芦丁、槲皮素、牡荆素、牡荆素葡萄糖苷和牡荆素鼠李糖苷9种成分含量,并采用灰色关联-TOPSIS法进行分析,对收集的湖北、安徽、河北、山东、河南、山西、陕西7个产地山楂进行质量评价。结果 建立含量测定方法快速、灵敏、准确,通过灰色关联-TOPSIS分析表明,山东、河南、安徽产地的山楂质量较优。结论 该方法为山楂药材的质量控制和评价以及中药新药研究过程中山楂产地的选择提供依据。