动脉平滑肌细胞体外培养模型及生长特点

目的 探讨胎儿动脉导管、主动脉及肺动脉平滑肌细胞体外培养方法,明确不同平滑肌细胞的原代和传代后生长情况。方法 采用改良贴壁法一玻片压迫组织贴壁方法进行胎儿动脉导管、主动脉及肺动脉平滑肌细胞的原代培养,并将细胞进行传代后培养,同时对各细胞的生长进行观察。结果 ①采用改良贴壁法可使原代细胞良好生长,动脉导管的平滑肌细胞无论是从组织块游出时间还是生长呈“峰一谷”样时间和细胞首次传代时间都比肺动脉和主动脉的要长;②在细胞的继代培养期,动脉导管平滑肌的生长周期长于主动脉,主动脉的平滑肌生长周期长于肺动脉。结论 动脉导管、主动脉及肺动脉平滑肌细胞体外生长存在差异。     

胎儿动脉平滑肌细胞培养方法的研究

目的：对胎儿动脉平滑肌细胞（ｈＡＳＭＣ） 培养方法进行研究。方法：贴块法、酶解法、贴块＋ 酶解法。结果：３ 种方法成功培养了胎儿动脉平滑肌细胞，培养的细胞呈典型“峰 谷”样生长，透射电镜下可见胞浆内含有肌丝束及其相联的致密体。结论：贴块法培养ｈＡＳＭＣ生长周期较长，但成功率较高；酶解法的消化程度不易掌握，但其生长周期较前者短４～５ ｄ；二者相结合法的贴块培养细胞从组织块中迁移萌出时间比常规贴块法短１ ～２ ｄ。     

胎儿动脉平滑肌细胞培养方法的研究

目的：对胎儿动脉平滑肌细胞培养方法进行研究。方法：贴块法，酶解法，贴块＋酶解法。结果：３种方法成功培养了胎儿动脉平滑肌细胞，培养的细胞呈典型“峰－谷”样生长，透射电镜下可见胞浆内含有肌丝束及其相联的致密性。结论：贴块法培养ｈＡＳＭＣ生长周期较长，但成功率较高，酶解法的消化程度不易掌握，但其生长周期较前者短４￣５ｄ；二者相结合法的贴块培养细胞从组织块中迁移萌出时间比常规贴块法短１￣２ｄ。     

成人肠系膜动脉平滑肌细胞培养的探讨

目的研究成人肠系膜动脉血管平滑肌细胞的生物学特性及培养方法.方法运用贴块法进行成人肠系膜动脉血管平滑肌细胞的培养,并用倒置显微镜进行形态学观察和用免疫组化对培养细胞进行鉴定.结果运用贴块法成功培养了成人肠系膜动脉血管平滑肌细胞,培养的细胞呈典型"峰谷"样生长,免疫组化S-P法检测α-平滑肌肌动蛋白单克隆抗体(α-SMActin)表达,确认为人血管平滑肌细胞(hVSMC).经传代培养至3～5代,细胞生长特性未见异常改变.结论贴块法培养的成人肠系膜动脉血管平滑肌细胞生长稳定性好,且培养与纯化能同步进行.     

大鼠腹主动脉平滑肌细胞的培养与鉴定

目的 探讨一种简单、经济获取腹主动脉血管平滑肌细胞的方法,为相关研究提供实验材料.方法 应用改良组织贴块法进行原代培养,胰酶消化传代,运用自然纯化法进行细胞纯化,并使用相差显微镜和SP试剂盒对细胞进行形态学观察以及免疫组化鉴定.结果 90%的组织块接种存活,培养细胞呈典型的"谷峰状"生长,免疫荧光化学技术检测显示胞浆内α平滑肌肌动蛋白阳性表达.结论 本法简便可靠,短期内可获大量高纯度、功能良好的血管平滑肌细胞.     

关于动脉平滑肌细胞培养的几个问题

平滑肌细胞异常增殖及其从动脉中层向内膜迁移过程是动脉粥样硬化和血管成形术后再狭窄等心血管疾病的重要发病因素。血管平滑肌细胞(ＶＳＭＣ)常用于多种与平滑肌细胞生长增殖有关疾病的发病机理及药物作用机制的研究 ,提高培养成功率 ,增强细胞功能稳定性 ,提高细胞质量是进行ＶＳＭＣ的分子生物学研究的重要条件。作者采用组织贴块法取材于大鼠主动脉中膜进行培养。通过实践和摸索 ,提出几点看法 ,现讨论如下。1　组织块大小边缘密度翻面时间观察时间对原代细胞萌发的影响　　对于贴块法的原代培养来源 ,由于细胞并非直接获得 ,而是从组…     

人脐动脉平滑肌细胞培养方法的探讨

目的研究人脐动脉血管平滑肌细胞的培养方法.方法运用贴块法进行人脐动脉血管平滑肌细胞的培养,并用倒置显微镜进行形态学观察和用免疫组化对培养细胞进行鉴定.结果运用贴块法成功培养了人脐动脉血管平滑肌细胞,培养的细胞呈典型"峰谷"样生长,免疫组化S-P法检测α-平滑肌肌动蛋白单克隆抗体(α-SMActin)表达,确认为人血管平滑肌细胞.经传代培养至3～5代,细胞生长特性未见异常改变.结论贴块法培养的人脐动脉血管平滑肌细胞生长稳定性好,且培养与纯化能同步进行.     

胎兔动脉导管平滑肌细胞氧敏感性钾通道mRNA的表达

目的:建立胎兔动脉导管平滑肌细胞的体外培养方法,并检测其细胞膜氧敏感性钾通道亚型(Kv1.5)mRNA的表达。方法:采用组织块改良贴壁法(玻片压迫组织块贴壁方法)进行胎兔动脉导管平滑肌细胞的体外原代培养,并行免疫组织化学法对培养的细胞进行鉴定,用RT-PCR的方法检测其细胞膜氧敏感性钾通道亚型(Kv1.5)的表达。结果:经10-14 d培养后,培养皿底及盖玻片上铺满梭状细胞,免疫组织化学法鉴定确认为胎兔动脉导管平滑肌细胞,其细胞膜存在Kv1.5基因表达。结论:植块改良贴壁法可以成功的进行胎兔动脉导管平滑肌细胞的体外培养,且本法简便、可靠,短时间内可以获得大量细胞,从而为动脉导管未闭发病机制的研究奠定了实验基础。同时,动脉导管平滑肌细胞膜上存在氧敏感性钾通道mRNA的表达,从而为从氧敏感性钾通道层面来研究动脉导管未闭的发生机制提供了实验基础。     

动脉粥样硬化模型小鼠血管平滑肌细胞原代培养及鉴定

目的:介绍动脉粥样硬化模型小鼠血管平滑肌细胞(VSMC)原代培养及鉴定的方法。方法:分离载脂蛋白E基因敲除小鼠主动脉,组织贴块法获得原代平滑肌细胞,免疫荧光及免疫组化方法检测细胞的纯度和分化状态。结果:培养第3天时,可见自组织块周围长出少量梭形或长梭形细胞,至培养2周细胞融合成片,呈"峰、谷"状生长。肌动蛋白免疫组化及荧光染色显示,细胞传至第6代后纯度在98%以上,证实应用此方法分离原代VSMC可以满足平滑肌体外功能实验的需求。结论:应用组织贴块法培养小鼠VSMC,操作简单,结果稳定,纯度较高,具有推广应用价值。     

人脐动脉平滑肌细胞体外培养

目的 建立人脐动脉血管平滑肌细胞的体外培养方法.方法 运用植块贴壁法进行人脐动脉血管平滑肌细胞的体外原代和传代培养.倒置相差显微镜和免疫荧光染色方法对培养细胞进行鉴定.结果 原代和传代培养的细胞生长良好,光镜下细胞呈长梭形"峰-谷"样生长,具有典型的平滑肌细胞特征.经传代培养至第5代,细胞生长特性未见异常改变;经考马斯亮兰R250及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)免疫荧光染色检测,证实为平滑肌细胞.结论 植块贴壁法可成功进行人脐动脉血管平滑肌细胞的体外培养,传代后细胞生物学特征稳定,为慢性肾病并发心血管疾病的机制研究奠定了实验基础.     

成人动脉平滑肌细胞体外培养模型的建立

目的：建立成人动脉血管平滑肌细胞（hVSMC)体外培养模型,并保持体外传代培养过程中hVSMC生物学特性的稳定。方法：运用改良的植块贴壁法,在植块贴壁过程,培养基选取,换液时间及培养液用量等多个关键环节进行改进,成功建立了成人hVSMC体外培养模型,并用光镜和透射电镜对培养细胞进鉴定和形态学观察。结果：培养的细胞生长良好,光镜下呈长梭形及“峰与谷”样生长,透射电镜下可见肌丝,密斑及密体,具有典型的hVSMC特征,经传代培养至35代,细胞生长特性未见异常改变,结论：改良植块贴壁法能使hVSMC原代培养的时间明显缩短,传代后hVSMC生物学特征的稳定性好,细胞扩增量大,且培养与纯化能同步进步。     

兔血管平滑肌细胞体外培养及生长特性研究

目的 体外分离培养兔血管平滑肌细胞(VSMC)并观察其生长特征.方法 采用酶消化结合贴壁法原代培养兔胸主动脉来源的VSMC并传代,倒置显微镜观察和免疫荧光染色法鉴定培养细胞;锥蓝法、绘制生长曲线、MTT法和划痕法分别测定VSMC传代细胞的成活率及其生长、增殖和迁移能力.结果 原代培养5 d后,VSMC从组织块边缘长出,传代细胞呈典型"峰-谷"状生长,胞质内α-平滑肌肌动蛋白免疫荧光染色阳性;细胞成活率为96%;生长曲线近似"S"形;细胞生长第3～5 d内光密度值变化较明显;无血清培养的VSMC在24 h内划痕宽度变化最显著.结论 体外培养的兔动脉平滑肌细胞为收缩表型且活性高,生长3～5 d细胞增殖活力较强,无血清培养的细胞在24 h内迁移能力最强,为心血管疾病研究提供了良好的实验材料.     

兔血管平滑肌细胞体外培养及生长特性研究

目的体外分离培养兔血管平滑肌细胞（VSMC）并观察其生长特征。方法采用酶消化结合贴壁法原代培养兔胸主动脉来源的VSMC并传代,倒置显微镜观察和免疫荧光染色法鉴定培养细胞;锥蓝法、绘制生长曲线、MTT法和划痕法分别测定VSMC传代细胞的成活率及其生长、增殖和迁移能力。结果原代培养5d后,VSMC从组织块边缘长出,传代细胞呈典型＂峰-谷＂状生长,胞质内α-平滑肌肌动蛋白免疫荧光染色阳性;细胞成活率为96%;生长曲线近似＂S＂形;细胞生长第3～5d内光密度值变化较明显;无血清培养的VSMC在24h内划痕宽度变化最显著。结论体外培养的兔动脉平滑肌细胞为收缩表型且活性高,生长3～5d细胞增殖活力较强,无血清培养的细胞在24h内迁移能力最强,为心血管疾病研究提供了良好的实验材料。     

Differences in the primary culture, purification and biological characteristics between endothelial cells and smooth muscle cells from rat aorta

Objective: To investigate the differences of primary culture, purification and biological characteristics between endothelial cells and smooth muscle cells from rat aorta. Methods: Endothelial cells were obtained using the vascular ring adherence, collagenase digestion method and an improved vascular ring adherence method, while smooth muscle cells were separated from tissue sections of rat aorta. Clones of endothelial cells were selected by limiting dilution assay. Both cell types were identified using specific cell immunofluorescent markers,and phase contrast microscopy was used to observe the morphological disparity between endothelial cells and smooth muscle cells at the single cell and colony level. Cell proliferation was determined by the cell counting kit-8. Differences between endothelial cells and smooth muscle cells were evaluated in trypsin digestion 6me, attachment time and recovery after cryopreservation. Results: Endothelial cells were obtained by all three methods. The improved vascular ring method provided the most reproducible results. Cells were in good condition, and of high purity. Smooth muscle cells were cultured successfully by the tissue fragment culture method. Clonal expansion of singleendothelial cells was attained. The two cell types expressed their respective specific markers, and the rate of proliferation of smooth muscle cells exceeded that of endothelial cells. Endothelial cells were more sensitive to trypsin digestion than smooth muscle cells. In addition, they had a shorter adherence time and better recovery following cryopreservation than smooth muscle cells. Conclusion: The improved vascular ring method was optimal for yielding endothelial cells. Limiting dilution is a novel and valid method for purifying primary endothelial cells from rat aorta. Primary rat endothelial cell and vascular smooth muscle cell cultures exhibited different morphological characteristics, proliferation rate, adherence time, susceptibility to trypsin digestion and recovery after cryopreservation. Our research can be a good foundation for further application in the regeneration of blood vessel.     

二十二碳六烯酸对低氧性肺动脉高压大鼠肺动脉平滑肌细胞凋亡的影响

目的:观察二十二碳六烯酸(DHA)在动物整体水平的抗大鼠肺动脉高压作用及其对肺动脉平滑肌细胞凋亡的影响。方法:将雄性SD大鼠随机分为常氧组、低氧组、低氧DHA处理组,每组7只。大鼠缺氧肺动脉高压模型采用慢性间歇性低氧方法建立,通过右心导管法测定大鼠平均肺动脉压,精确称左右心室质量计算右心室指数,测定肺动脉平滑肌细胞凋亡率和Caspase3、Caspase9活性。结果:与常氧组比较,低氧组大鼠平均肺动脉压和右心室指数均明显升高(PPPP结论:DHA具有抗大鼠肺动脉高压作用,其机制与促进肺动脉平滑肌细胞凋亡有关。     

组织块重复贴壁使用在原代细胞培养中的实验意义

目的旨在提高采用人脐静脉组织块贴壁法进行平滑肌细胞原代培养组织块的重复利用率,进而缩短采用细胞培养进行实验的培养周期。方法以改良人脐静脉平滑肌细胞贴壁培养法为基础,当原代培养细胞(对照组)进行第1次细胞传代后,将培养组织块再次接种于新培养瓶中继续培养(实验组),分别记录两组细胞爬出时间、第1次传代时间、以及第1次传代后24、48、72、96h的细胞计数,通过倒置显微镜对两组细胞进行形态学观察,采用抗α-actin免疫细胞化学方法,对两组传代细胞的类型和性质进行鉴定。结果与对照组比较,实验组细胞爬出时间及第1次传代时间均明显缩短(P<0.05);两组第1次传代后24、48、72、96h细胞计数差异均无统计学意义(P>0.05);两组细胞形态经α-actin鉴定差异无统计学意义。结论人脐静脉组织块重复贴壁培养后,经传代其细胞数量、细胞形态与原代组织块贴壁培养的细胞差别均无统计学意义。     

组织块贴壁法行SD大鼠肺内动脉段平滑肌细胞的原代培养及其鉴定

目的研究采用组织块贴壁法进行SD大鼠肺内动脉段平滑肌细胞（PASMCs）原代培养的方法特点及其生物学特性。方法将SD大鼠消毒后剖开胸腹腔,无菌下取出心肺组织,然后分离出肺血管段,用组织块贴壁法培养,倒置相差显微镜观察细胞形态、普通免疫组织化学法（SP法）和免疫荧光法进行细胞鉴定。结果组织块贴壁法培养的SD大鼠PASMCs为典型的＂峰-谷＂样生长状态,细胞的胞核较大,免疫组织化学法和免疫荧光法检测α-actin均为强阳性表达,免疫荧光法检测传至三代以后的细胞纯度可达98%以上,传代细胞生长未见明显异常改变。结论在不使用显微技术情况下,用组织贴块法成功培养大鼠PASMCs,得到稳定生长、纯度高的PASMCs,且培养与纯化可以同时进行,可获得稳定传代的细胞。     

雷帕霉素聚乳酸-聚乙醇酸共聚物纳米粒子对人脐动脉平滑肌细胞细胞周期时相、p27蛋白表达及细胞增殖的影响

目的 评估本实验室自制包载雷帕霉素(RPM)的聚乳酸-聚乙醇酸共聚物(PLGA)纳米粒子(NPs)对离体培养的人脐动脉平滑肌细胞(HUASMC)细胞周期时相、p27蛋白表达和细胞增殖的影响.方法 按不同浓度RPM-PLGA NPs设定药物作用组,并设立RPM组、PLGA组和M231培养基及平滑肌细胞生长添加剂(M231-SMGs)组作为对照.采用细胞免疫组织化学染色比较不同处理组HUASMC p27蛋白表达阳性率和表达水平的差异,流式细胞技术评价各处理组对HUASMC细胞周期时相的影响,噻唑蓝(MTT)比色法观察不同浓度RPM和RPM-PLGA NPs对HUASMC存活率的影响.结果 10μg/L及以上浓度的RPM和50 μg/L及以上浓度的RPM-PLGA NPs可明显抑制HUA-SMC生长,并呈浓度依赖性.细胞计数绘制生长-时间曲线显示,100μg/L RPM和500μg/L RPM-PLGA NPs作用于HUASMC 24h后细胞计数值明显低于M231-SMGs对照组;单纯PLGA NPs对细胞生长无明显影响;与PLGA组和M231-SMGs培养基对照组相比,RPM组和RPM-PLGA NPs组G_0/G_1期细胞比例明显增多,S期及G_2/M期细胞比例明显减少(P均<0.01),但两组间细胞周期时相比例差异无统计学意义(P>0.05).细胞免疫组织化学染色结果显示,100μg/LRPM和500μg/L RPM-PLGA NPs组的HUASMC p27蛋白表达阳性率和表达水平与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05),但均较PLGA组和M231-SMGs培养基组明显增加(P<0.01).结论 RPM-PLGA NPs抑制体外培养的HUASMC生长效果与RPM相似,并可显著抑制体外培养HUASMC p27蛋白表达,阻抑其细胞周期进程于G1/S期而抑制其细胞增殖.     

一种改良成人肺动脉平滑肌细胞的培养方法

目的：探讨成人肺动脉平滑肌细胞（pulmonaryarterialsmoothmusclecells,PASMCs）体外培养及培养效率的方法。方法：在无菌条件下,取3ctn左右肺动脉,去除内膜后,剪成1mm×1mm大小的组织块,贴块法培养,在高糖DMEM／F121：1培养基中加入血小板衍生长因子（PDGF）10／g／L培养hPASMCs,采用倒置显微镜观察细胞形态,免疫荧光法鉴定a一平滑肌肌动蛋白（smoothmuscle—Ct—actin,SM—a—actin）和钙调蛋白calponin。结果：采用改良组织块培养,克服了hPASMCs体外培养休眠期过长的缺点,稳定获得纯度达98％以上,细胞呈长梭型,生长致密时排列成相互平行的束状,未见明显异形的细胞,SM-0t-actin和calponin阳性。结论：该改良方法能成功分离和培养出纯度较高的成人肺动脉平滑肌细胞,且重复性好,细胞常量大,简便而有效。