伏马毒素B_1酶联免疫分析方法研究

伏马毒素B1是由串珠镰刀菌属产生的毒性较大的一种真菌毒素,国内外对检测伏马毒素B1的酶联免疫吸附分析方法进行了许多研究。本文主要对酶联免疫分析中的完全抗原制备、抗体的制备以及酶联免疫检测形式进行概述。     

044 伏马毒素B1酶联免疫分析方法研究

伏马毒素B1是由串珠镰刀菌属产生的毒性较大的一种真菌毒素,国内外对检测伏马毒素B1的酶联免疫吸附分析方法进行了许多研究.本文主要对酶联免疫分析中的完全抗原制备、抗体的制备以及酶联免疫检测形式进行概述.     

抗黄曲霉毒素M1抗体制备及检测方法建立

目的制备针对黄曲霉毒素M1的单克隆抗体并建立针对黄曲霉毒素M1的间接竞争酶联免疫吸附试验检测方法。方法利用B细胞杂交瘤技术。建立能分泌抗黄曲霉毒素M1单克隆抗体的杂交瘤细胞株，制备抗黄曲霉毒素M1单克隆抗体，建立间接竞争酶联免疫吸附试验检测方法。结果研制出1株能特异性分泌抗黄曲霉毒素M1单克隆抗体的杂交瘤细胞株，命名为2F2。该单克隆抗体的Ig亚类为IgG1，亲和常数为2．8×10^-11mol／L。该抗体与黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2和黄曲霉毒素M2等结构类似物有微弱的交叉反应，具有较高的特异性。在此基础上建立了间接竞争酶联免疫吸附试验检测方法。该方法的最低检出浓度为0．07ng／ml。校正曲线的线性范围为0．02～2ng／ml，线性方程y=-0．4364x＋0．2693（R^2=0．9949）。方法的加标回收率为72．5％～131．3％。结论制备了具有高特异性和亲和力的抗黄曲霉毒素M1单克隆抗体，并建立了快速、灵敏的针对黄曲霉毒素M1的酶联免疫吸附试验检测方法。     

黄曲霉毒素B1的检测方法

黄曲霉毒素具有毒性大,致癌力强,样品中含量低等特点,而黄曲霉毒素B1是全部黄曲霉毒素中毒性最强的,这要求检测方法灵敏度高,特异性强,集分离与检测为一体。目前黄曲霉毒素B1测定的方法有薄层层析法、高效液相色谱法、酶联免疫吸附法等。所有这些方法主要是根据黄曲霉毒素B1的化学结构和生物特性结合仪器来对黄曲霉毒素B1进行定性、定量的分析,使之更加完善。笔者就目前使用较多,受人们关注的几个代表性方法作如下讨论。     

伏马菌素B1免疫学检测方法的建立

目的建立应用单克隆抗体的伏马菌素B1(fumonisin B1,FB1)间接竞争酶联免疫吸附检测方法.方法利用B淋巴细胞杂交瘤技术制备抗FB1单克隆抗体,建立FB1间接竞争酶联免疫吸附方法.结果建立稳定分泌抗FB1毒素单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分泌的抗体为IgG1亚类,分子量150KD,腹水稀释度为12.0×108,亲和常数为6.72×109L/mol.FB1间接竞争酶联免疫吸附方法的最低检出浓度为5μg/L,校正曲线的线性范围50～500μg/L,线性方程Y=-0.582X+1.793(r=0.99,P＜0.05);与脱氧雪腐镰刀菌烯醇、玉米赤霉烯酮、T-2毒素均无交叉反应.回收率71.89%～112.95%,平均回收率100.23%.结论所建立的检测方法具有快速、简便、灵敏的特点,可满足实际工作需要.     

MB-Ⅳ型酶标仪在黄曲霉毒素B1酶联检测方法中的应用

本文主要介绍MB—Ⅳ型酶标仪应用北京营养源研究所真菌实验室、北京百林康源生物技术有限公司生产的黄曲霉毒素B1(AFB1)酶联免疫检测试剂盒能很好的满足对黄曲霉毒素B1定量分析的要求。从数据统计分析所得标准抑制曲线的结果来看,与Bio-Rad450型全自动酶标仪的负相关系数十分接近,有很好的可比性。并适用于各种通用型ELISA试剂。     

某部不同采购食品中黄曲霉毒素B1含量测定及分布调查

目的检测某部采购食品中黄曲霉毒素B1的含量,了解黄曲霉毒素B1在不同种类食品间的分布情况。方法选取5个食堂3大类食品(谷物、植物油和酿造类)共计68份样本,用酶联免疫吸附法(ELISA)进行定量测定,用统计学方法对数据结果进行分析。结果黄曲霉毒素B1 ELISA标准曲线相关系数r在0.99以上,样本加标回收率在96.22%~115.09%之间;68份样本合格率为98.53%;谷物、植物油和酿造类食品黄曲霉毒素B1含量均值分别为0.168 7、0.125 7、0.323 1μg/kg,差异有统计学意义(F=16.96,P0.01),其中谷物类食品中黄曲霉毒素B1含量显著高于其他两类。结论该部采购食品中黄曲霉毒素B1含量合格率高,但仍有个别食品存在安全隐患,应加强食品采购、储存和加工等各个环节的监督管理,重视食品安全监测。     

赭曲霉毒素A的酶联免疫吸附法检测

用酶联免疫吸附法检测食品等的真菌毒素的方法学研究进展很快。本文主要针对检测赭曲霉毒素Ａ的方法,包括抗原、抗体的制备方法及酶联免疫吸附法的进展做一综述性介绍。     

免疫亲和柱净化-酶联免疫吸附法检测普洱茶中黄曲霉毒素B_1

目的 建立普洱茶中黄曲霉毒素B1（AFB1）的免疫亲和柱净化-酶联免疫吸附检测方法。方法 粉碎后的普洱茶样品经三氯甲烷提取,水浴挥干后用甲醇-PBS溶解,样品液通过黄曲霉毒素B1免疫亲和柱净化洗脱,在450nm波长使用酶联免疫试剂盒（ELISA）定量检测黄曲霉毒素B1含量。结果 该方法在2.0~100.0μg/kg浓度范围内百分吸光率和浓度对数呈良好的线性关系,相关系数达0.999 8,样品最低检出限为1.0μg/kg,重复测定相对标准偏差为4.72%,3个水平（1.0、10.0、50.0μg/kg）的样品加标回收率为83.00%~104.90%。结论 本法具有简单、快速、高效等优点,适用于普洱茶复杂样品的AFB1定量检测。     

免疫亲和柱净化-酶联免疫吸附法检测普洱茶中黄曲霉毒素B1

目的建立普洱茶中黄曲霉毒素B1(AFB1)的免疫亲和柱净化-酶联免疫吸附检测方法。方法粉碎后的普洱茶样品经三氯甲烷提取,水浴挥干后用甲醇-PBS溶解,样品液通过黄曲霉毒素B1免疫亲和柱净化洗脱,在450nm波长使用酶联免疫试剂盒(ELISA)定量检测黄曲霉毒素B1含量。结果该方法在2.0~100.0μg/kg浓度范围内百分吸光率和浓度对数呈良好的线性关系,相关系数达0.999 8,样品最低检出限为1.0μg/kg,重复测定相对标准偏差为4.72%,3个水平(1.0、10.0、50.0μg/kg)的样品加标回收率为83.00%~104.90%。结论本法具有简单、快速、高效等优点,适用于普洱茶复杂样品的AFB1定量检测。     

酶联免疫吸附试验在微囊藻毒素检测中的应用进展

微囊藻毒素(MCs)是蓝绿藻属产生的一类密切相关的环状七肽毒素,其毒性主要表现在特异性抑制细胞内的蛋白磷酸酶(分别为PP1和PP2A)。目前有关微囊藻毒素分析检测的研究方法有高效液相色谱(HPLC)、质谱(LC-MS)、蛋白磷酸酶抑制试验(PPIA)和酶联免疫吸附试验(ELISA)等,本文主要介绍了应用酶联免疫吸附法检测MCs的研究进展,并对ELISA在天然水中检测微囊藻毒素的应用前景进行了展望。     

竞争性酶联免疫法在黄曲霉毒素B_1含量测定中的应用

目的对竞争性酶联免疫法测定食品中黄曲霉毒素B1的方法进行试验和探讨,为推广此法提供科学依据。方法应用竞争性酶联免疫法测定试验回收率和精密度,并与国标方法相比较。结果加标回收玉米粉回收率为81%～91%,花生仁为74%～94%,对花生仁样品加入10μg/kgAFB1,连续测定10次,PSD为6.40%。结论该方法具有较高的准确度和精密度,同时具有快速,低成本和适于大批量检测的优势,适合推广,但对特定类别样品需要进行调节pH值,脱脂等前处理。     

麻痹性贝类毒素ELISA快速检测方法的建立

[目的]建立应用酶联免疫技术检测麻痹型贝类毒素的快速方法。[方法]在福建沿海厦门、莆田、宁德三市的零售市场采集织纹螺68份，应用R-Biopharm试剂盒检测麻痹性贝类毒素。[结果]应用酶联免疫试剂盒检测麻痹性贝类毒素，全部实验过程在1h之内完成。检测限50μg／kg，灵敏度2．5μg／kg。[结论]应用酶联免疫技术检测麻痹性贝类毒素简单、快捷，不需要昂贵的设备，对于监控海产食品的麻痹性贝类毒素具有重要的现实意义。     

酶联免疫吸附法测定葡萄酒中的AF TB1的假阳性问题探讨

测定食品中AFB1(黄曲霉毒素B1)的酶联免疫吸附法(ELISA)已列为国标法(GB/T5009.22-96)[1],此方法具有灵敏、快速、准确的优点,可以简化提取、纯化步骤,并可一次测定大批样品.     

ELISA法测定酸性食品中黄曲霉毒素B1的方法探讨

黄曲霉毒素B1 在自然界广泛存在,具有强烈的致癌性,所以国内外对其限量标准以及检验方法都做了严格和深入的研究,但是常用的检验方法步骤繁琐,费时费力,消耗大量的试剂,且灵敏度低,随着科学技术的发展,酶联免疫方法在检验黄曲霉毒素B1 方面得到了应用,大大提高了检验速度、检出限,降低了成本,对于一般的样品可加提取液直接测定,具有很高的灵敏度,但是由于该方法是生物化学法,具有对酸对盐敏感的特点,若直接加提取液测定会造成假阳性,本文探讨了解决该问题的方法。1　材料与方法1.1　材料和仪器　黄曲霉毒素B1 测试盒由江苏省微生物研究所…     

艰难梭菌培养联合酶法检测毒素蛋白(A/B)的临床应用价值探索

目的通过对艰难梭菌培养及毒素检测方法比较,建立艰难梭菌培养联合酶法检测毒素蛋白(A/B)的检测流程,评估其临床应用。方法收集2015年-2017年住院腹泻患者粪便标本852份,采用显色培养法(ChromID~(TM))培养艰难梭菌,阳性菌株用酶联免疫荧光法检测其毒素蛋白A/B(Clostridium difficile toxins A and B,CDAB);用酶联免疫荧光法检测毒素蛋白A/B及阳性菌株,用PCR方法检测其tcdA和(或)tcdB基因进行比较,运用检出率、灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值进行效能评价。结果 852例粪便标本经显色培养共分离菌108株,粪便直接酶法A/B毒素蛋白检出率为5.99%(51/852);阳性菌株联合酶法检测A/B毒素蛋白检出率为10.92%(93/852);108株阳性菌株联合PCR方法93株表达tcdA~+tcdB~+;6株表达tcdA~-tcdB~+;9株未表达,为tcdA~-tcdB~-;阳性菌株用酶法检测毒素蛋白A/B结果93株阳性,15株阴性,且93株阳性经PCR检测基因均表达tcdA~+tcdB~+;以PCR检测艰难梭菌毒素基因作为参考方法,培养阳性菌株联合酶法、粪便直接酶法检测毒素蛋白A/B的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值分别为93.94%、100%、100%、60%和51.52%、100%、100%、15.79%;一致性检验Kappa值分别为0.721和0.150。结论显色培养后阳性菌株联合酶法检测艰难梭菌毒素蛋白A/B可以提高艰难梭菌检出率,与PCR毒素基因检测有较好一致性,操作简单,具有较好的临床应用价值。     

食品中黄曲霉毒素高效液相色谱法测定

黄曲霉毒素是具有极强致癌性的次生代谢产物,主要存在于粮油制品中。食品中黄曲霉毒素的检测方法主要有薄层色谱法、酶联免疫法、液相色谱法等。薄层色谱法操作繁琐,而酶联免疫法特异性差。本研究对粮食、坚果样品经乙腈—水进行净化提取,色谱柱纯化、浓缩、衍生,对黄曲霉毒素     

stx-PCR方法、Vero细胞毒性试验和酶联免疫试剂盒3种方法检测产志贺毒素大肠埃希菌的评估

目的评价stx-PCR方法、Vero细胞毒性试验和酶联免疫试剂盒3种方法在检测产志贺毒素大肠埃希菌的特异性和敏感性的差异。方法运用stx-PCR方法、Vero细胞毒性试验和酶联免疫试剂盒分别对29株大肠埃希菌参考菌株和45株食品分离大肠埃希菌株进行检测。结果 stx-PCR方法可以判定50株菌携带stx基因,同时Vero细胞毒性试验可以判定这些菌株具有细胞毒性,两者的一致性为100%;酶联免疫试剂盒能判定其中38株菌具有志贺毒素。结论 3种方法都具有很好的特异性。stx-PCR方法和Vero细胞毒性试验较酶联免疫试剂盒具有更高的敏感性,试剂盒适用于食源性疾病暴发事件中产志贺毒素大肠埃希菌的快速筛选,stxPCR方法推荐作为实验室常规快速检测方法,Vero细胞毒性试验是检测产志贺毒素大肠埃希菌是否具有志贺毒素生物学活性的金标准方法。     

艰难梭菌在高风险科室医院感染流行趋势研究

目的探讨高风险科室住院患者中艰难梭菌感染或定植流行趋势,为艰难梭菌有效预防与控制措施的提出提供理论依据。方法收集2014年9月医院感染高风险科室住院的128例患者肛拭子标本,经厌氧培养,通过VIDAS荧光酶联免疫技术进行艰难梭菌毒素A/B检测,利用多重PCR技术进行艰难梭菌毒素基因检测,并对艰难梭菌阳性患者的临床病理特征进行分析。结果 128例患者中艰难梭菌培养阳性22例,阳性率17.19%;22株艰难梭菌中有21株为A/B毒素表型呈阳性,占95.45%,1株未检出A/B毒素;22例艰难梭菌培养阳性患者均为无症状携带者,其中90.91%的患者近期使用过抗菌药物。结论医院感染高风险科室的产毒艰难梭菌检出率较高,应注重该类患者的艰难梭菌监测和有效预防控制措施的落实。     

黄曲霉毒素免疫化学分析方法研究进展

1前言，黄曲霉毒素(Aflatoxin，AFT)是真菌毒素中毒性最大的一种，是世界上公认的最强化学致癌物质，可引发动物的肝癌、胃癌、肾癌等，被WHO癌症研究机构划定为Ⅰ类致癌物。在天然污染的食品中存在的黄曲霉毒素以B1污染最多见，其毒性和致癌性也最强。要严格控制食品中黄曲霉毒素的含量，必须要有快速、灵敏、准确、有效的分析测定方法作保证。近10年来，对快速测定黄曲霉毒素的方法研究有很大的进展，其中以免疫化学法的发展最快，尤其是特异性黄曲霉毒素抗体的获得使酶联免疫吸附法得到广泛应用。