PCR-ELISA测定结核分枝杆菌DNA临床应用评价

目的评价聚合酶链反应-酶联免疫吸附试验(PCR-ELISA)测定结核分枝杆菌DNA临床应用价值.方法用PCR-ELISA测定436例肺结核、172例非结核病人痰标本中的结核分枝杆菌DNA,并结合临床诊断和痰菌检查对实验结果进行分析.结果 436例活动性肺结核病人本法最终阳性341例,阳性率78.21%,其中痰菌阳性病人本法阳性率为97.07%,痰菌阴性病人阳性率为55.33%(109/197);而172例对照患者只有3例假阳性,假阳性率1.74%.结论本法测定痰液结核分枝杆菌DNA对肺结核的诊断具有很高的敏感性和特异性,尤其对痰菌阴性的活动性肺结核病人具有重要辅助诊断价值.     

PCR—ELISA测定结核分枝杆菌DNA临床应用评价

目的　评价聚合酶链反应 酶联免疫吸附试验 (PCR ELISA)测定结核分枝杆菌DNA临床应用价值。方法　用PCR ELISA测定 436例肺结核、172例非结核病人痰标本中的结核分枝杆菌DNA ,并结合临床诊断和痰菌检查对实验结果进行分析。结果　 436例活动性肺结核病人本法最终阳性 341例 ,阳性率 78.2 1% ,其中痰菌阳性病人本法阳性率为 97.0 7% ,痰菌阴性病人阳性率为 5 5 .33 % (10 9/ 197) ;而 172例对照患者只有 3例假阳性 ,假阳性率 1.74%。结论　本法测定痰液结核分枝杆菌DNA对肺结核的诊断具有很高的敏感性和特异性 ,尤其对痰菌阴性的活动性肺结核病人具有重要辅助诊断价值     

3种检测乙型肝炎病毒方法的比较及临床应用

目的探讨3种检测乙型肝炎病毒(HBV)方法的比较和临床应用。方法采用微粒子酶免疫分析(MEIA)法和酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清HBV标志物,实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)法检测HBV-DNA。结果 MEIA法与ELISA法检测HBV血清学结果的符合率较高,经χ2检验,两种测定方法所得结果差异无统计学意义(P>0.05);Ⅰ组的HBV-DNA阳性率显著高于其他组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 MEIA法联合FQ-PCR法或者ELISA法联合FQ-PCR法应用,为临床提供HBV感染、复制及传染性的判断,对于疗效的分析具有重要价值。     

PCR—ELISA检测TB—DNA方法学建立及临床应用评价

目的 建立PCR－ELISA检测TB－DNA的方法学，探讨其最佳实验条件及优化组合，结合涂片法、培养法和PCR电泳法评价其临床应用价值。方法 常规PCR引物用地高辛标记，使扩增产物带有地高辛标记成分，再通过亲和素－生物素系统把生物素标记探针包被在固相聚丙乙烯微孔中，通过固相探针与TB－DNA扩增产物进行杂交与碱性磷酸酶标记的抗地高辛抗体反应，经NPP显色后测其A405nm值的大小，与同样操作处理的不同浓度标准菌株A值比较，推出样品中TB－DNA含量。结果 建立该法的最佳实验条件为PCR循环次数为35次，杂交温度为42℃，杂交时间为1h，探针浓度为0.2uM，包被浓度为10μg/ml。经北京胸部肿瘤结核病医院、北京胸科医院及中国人民解放军第309医院三家医院621例临床标本验证，其中结核组464例，该法检出率为57．3％（266／464），而涂片法仅为31．7％（147／464），培养法为35．8％（166／298），PCR电泳法检出率为45．7％（212／464），各法比较存在显差异（P＜0．01）。结论 本法作为结核病的一项免疫学和分子生物学检测指标，具有较高的临床推广应用价值。     

5种结核分枝杆菌检测方法的临床应用价值研究

目的评价5种结核分枝杆菌检测方法对肺结核的辅助诊断价值。方法统计2018年1-10月在广州医科大学附属第一医院住院的患者,分为临床诊断肺结核患者和临床诊断非结核普通住院患者共209例,用结核培养法、PCR-荧光探针法、结核感染T淋巴细胞酶联免疫斑点试验(T-SPOT.TB)法、抗酸染色法、利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术(Xpert MTB/RIF)法分别进行检测,比较这5种方法在临床诊断中的价值。结果结核培养法、抗酸染色法、PCR-荧光探针法、T-SPOT.TB法、Xpert MTB/RIF法阳性率分别为16.8%、23.4%、39.2%、53.0%、52.2%。结核培养法灵敏度为52.17%,特异度为100.00%;抗酸染色法灵敏度为42.45%,特异度为96.67%;PCR-荧光探针法灵敏度为76.00%,特异度为97.98%;T-SPOT.TB法灵敏度为91.67%,特异度为79.80%;Xpert MTB/RIF法灵敏度为99.09%,特异度为100.00%。结论Xpert MTB/RIF法是最值得推荐的方法,也是唯一可以作为诊断结核感染的分子生物学方法,如果能够联合这几种方法,可以快速、准确地对结核感染进行诊治。     

两种方法联合检测乙型肝炎病毒的临床意义

自从HBV发现以来，检测方法不断更新，应用最广泛的是ELISA。随着荧光定量PCR的建立，对HBV的数量与ELISA检测的各种模式研究很多。众多文献的相关报道不十分一致，为此我们对500例经ELISA检测血清HBV—DNA定量与HBV模式、血清AST、ALT、HA、IV关系进行了分析，现报道如下。     

荧光定量PCR法检测乙肝病毒DNA和乙肝病毒标志物检测的临床价值分析

目的 探讨荧光定量PCR法(FQ-PCR)检测乙肝病毒DNA(HBV-DNA)和乙肝病毒标志物(HBV-M)ELISA法检测的临床价值。方法 选取2013年4~12月在该院检测的653例乙肝患者,先采用ELISA法对其血液标本进行HBV-M模式定性检测,检测顺序为乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)、乙肝表面抗体(HbsAb)、乙型肝炎e抗原(HbeAg)、乙型肝炎E抗体(HbeAb)、乙肝表面核心抗体(HbcAb);再采用FQ-PCR法进行HBV-DNA定量检测,观察不同HBV-M模式检测结果。结果 HBsAg、HbeAg、HbcAb检测同时阳性简称“大三阳”。大三阳[1(+)、3(+)、5(+)模式]和[1(+)、3(+)模式]的HBV-DNA阳性率分别为97.97%、94.74%,显著高于其他模式的HBV-DNA阳性率(P<0.05)。大三阳的HBV-DNA表达水平(5.59×106±2.42×105)copies/mL,明显高于其他模式(P<0.05)。结论 联合HBV-M定性及HBV-DNA定量检测,对临床早期诊断及用药具有重要指导价值。     

荧光定量 PCR 法检测乙肝病毒 DNA 和乙肝病毒标志物检测的临床价值分析

目的：探讨荧光定量 PCR 法（FQ-PCR）检测乙肝病毒 DNA（HBV-DNA）和乙肝病毒标志物（HBV-M）ELISA 法检测的临床价值。方法选取2013年4～12月在该院检测的653例乙肝患者,先采用 ELISA 法对其血液标本进行 HBV-M 模式定性检测,检测顺序为乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）、乙肝表面抗体（HbsAb）、乙型肝炎 e 抗原（HbeAg）、乙型肝炎 E 抗体（Hbe-Ab）、乙肝表面核心抗体（HbcAb）;再采用 FQ-PCR 法进行 HBV-DNA 定量检测,观察不同 HBV-M 模式检测结果。结果 HB-sAg、HbeAg、HbcAb 检测同时阳性简称“大三阳”。大三阳[1（＋）、3（＋）、5（＋）模式]和[1（＋）、3（＋）模式]的 HBV-DNA 阳性率分别为97．97％、94．74％,显著高于其他模式的 HBV-DNA 阳性率（P ＜0．05）。大三阳的 HBV-DNA 表达水平（5．59×10^6±2．42×10^5）copies/mL,明显高于其他模式（P ＜0．05）。结论联合 HBV-M 定性及 HBV-DNA 定量检测,对临床早期诊断及用药具有重要指导价值。     

聚合酶链反应-微孔板杂交技术用于结核分枝杆菌的检测

目的建立结核分枝杆菌的ＰＣＲ酶联免疫吸附测定（ＥＬＩＳＡ）方法，使ＰＣＲ结果判定更加客观。方法我们使用玻璃粉吸附提纯模板ＤＮＡ，将ＰＣＲ引物５′端标记生物素，用ＰＣＲ产物与微孔板中预先包被的克隆靶基因杂交，然后用酶标链霉亲和素与杂交体中的生物素结合，最后用酶底物与所标记酶进行显色反应，通过测定其吸光度来判断结果。结果所建立的ＰＣＲＥＬＩＳＡ检测法可提高检测的灵敏度和特异性。对５０份来自结核病人高度怀疑有结核分枝杆菌的标本检测表明，ＰＣＲＥＬＩＳＡ检出２２份阳性，比抗酸染色法（７／５０）、培养法（１３／５０）和ＰＣＲ电泳法（１８／５０）检出率高，而２０份证实无结核分枝杆菌的标本，几种方法检查均为阴性。结论该法可敏感、特异和客观地检测临床标本中的结核分枝杆菌。     

一种新型结核分枝杆菌感染快速检测方法的应用

目的探讨酶联免疫斑点试验（ELISPOT）快速诊断结核病的价值。方法选取15例确诊为活动性肺结核的患者和100例入境人员的外周抗凝全血标本,采用ELISPOT检测试剂盒（TSPOT-TB）测定结核杆菌特异抗原刺激反应的效应T淋巴细胞数量。结果TSPOT-TB检测结核病的敏感性为93．3％,特异性为100．0％,阳性预测值为100．0％,阴性预测值为81．8％。采用该方法检测的结核潜伏感染率与病例来源呈密切相关,而与年龄和性别无相关性。结论TSPOT-TB的敏感性和特异性均较高,可用于结核感染的快速检测,但无法判断结核的活动性或潜伏感染。     

噬菌体生物扩增法快速检测结核分枝杆菌的临床应用

目的探讨噬菌体生物扩增法（料-aB）快速检测结核分枝杆菌的临床应用价值。方法对108例肺结核患者痰标本进行噬菌体裂解试验，并与集菌涂片，BacT／ALERT 3D检测仪法相比较。结果噬菌体裂解法阳性率59．3％（64／108），与集菌涂片法28．7％（31／108）、BacT／ALERT3D检测仪法43．5％（47／108）相比差别有显著意义。结论PhaB快速、简便、灵敏、特异，有助于结核分枝杆菌的检测，可用于结核病的快速诊断。     

结核分支杆菌链霉素耐药基因的杂交检测

目的 探讨耐链霉素（Sm）结核分支杆菌的编码基因rpsL和ms的扩增以及突变情况。方法 采用PCR扩增技术对23株敏感株，32株耐药株，25例临床结核病人痰标本进行rpsL、ms基因扩增；并利用寡核苷酸探针反相斑点杂交技术对23株敏感株，32株耐药株，25例临床结核病人痰标本进行rpsL、ms基因突变检测。结果 23株敏感株、32株耐药株rpsL、ms基因扩增均阳性，阳性率100％；25例临床结核病人痰标本中rpsL基因扩增阳性率为72％，ms基因扩增阳性率为56％；rpsL基因突变率依次分别为4．3％、65．6％，50％；ms基因突变率依次分别为0、12．5％、7．2％。结论 耐链霉素（Sm）菌株的基因突变率明显高于药物敏感株；PER．寡核苷酸探针反相斑点杂交技术以其简便、快速、灵敏的特性能够为临床检测结核分支杆菌对链霉素（Sm）的耐药性提供初步依据。     

免疫磁珠捕获联合PCR-ELISA定量检测结核分枝杆菌的方法学研究

目的采用免疫磁珠捕获(IMC)联合双内标PCR-ELISA(IMC-PCR-ELISA)技术,建立定量检测结核分枝杆菌的方法。方法制备能够特异性捕获结核分枝杆菌的免疫磁珠(Dynabeads)。并根据结核分枝杆菌Mtp40基因序列以及结核分枝杆菌复合体群IS6110序列,设计2对特异性引物(上游引物的5′端用生物素修饰),以及2条与PCR扩增片段等长的内参照片段(其与扩增模板在引物区的序列相同)和3套捕获探针(3′端用地高辛标记)。先通过免疫磁珠特异性捕获结核分枝杆菌,再联合双内标PCR-ELISA技术检测结核杆菌。结果采用IMC-PCR-ELISA技术定量检测结核分枝杆菌,全过程约4h,检测限为5×103 copies/mL,当低内标模板浓度在30~70copies/mL,高内标模板浓度在8 000~12 000copies/mL时,计算出的浓度与实际加入的目的模板浓度之间有良好的线性关系(r2=0.998),未发现非特异性反应。结论成功建立了IMC-PCR-ELISA定量检测结核分枝杆菌的方法,此方法具有快速、灵敏、特异、可定量的特点。     

噬菌体生物扩增法快速检测结核分枝杆菌的临床应用

目的 探讨噬菌体生物扩增法（Phab）快速检测结核分枝杆菌的临床应用价值。方法 应用Phab、BACTEC-460检测仪及厚涂片法共同检测206例痰标本。结果 58例涂片阳性、BACTEC-460培养阳性的标本中．Phab检测阳性55例（94．8％）;47例涂片阴性、BACTEC-460、培养阳性的标本中,Phab检测阳性35例（74．4％）;101例涂片阴性、BACTEC-460培养阴性的标本中,Phab检测阳性25例（24．8％）。结论 Phab快速、简便、灵敏,有助于结核分枝杆茵的快速检测,可用于结核病的初步诊断,但测定条件的选择非常重要。     

结核分枝杆菌蛋白抗原诊断试剂的临床价值研究

目的研究和评估基于结核分枝杆菌蛋白抗原(TB-SA)研制的结核诊断试剂盒在结核病诊断中的应用价值。方法运用胶体金法分别检测结核组、非结核其他呼吸系统疾病组、健康对照组血清TB-SA结核抗体。结果 TB-SA结核抗体检测结核的灵敏度为72.2%,特异度95.8%,检测结核病患者阳性率(72.2%)明显高于涂片法(44.9%)和培养法(37.1%),差异均有统计学意义(P0.05)。结论 TB-SA抗体检测具有较好的敏感性和特异性,对结核病诊断和鉴别诊断有较高的临床应用价值。     

噬菌体裂解法快速检测胸水中结核分枝杆菌的研究

目的探讨噬菌体裂解法快速检测胸水中结核分枝杆菌的临床应用价值。方法应用噬菌体裂解法和涂片法、L-J培养法对116例临床确诊胸水结核患者的胸水标本进行结核杆菌的检测。结果噬菌体裂解法阳性率79．3％（92／116）,与涂片法31．9％（37／116）相比有显著差异（P〈0．05）,与L-J培养法74．1％（86／116）相比无显著差异（P〉0．05）。结论噬菌体裂解法检测结核分支杆菌具有灵敏度高、特异性强、快速、简便、安全等优点,并且检测出的是活菌。     

结核分枝杆菌感染者白细胞介素4和白细胞介素17A的检测

目的检测隐性结核感染者、活动性结核患者及健康人群白细胞介素(IL)-4和IL-17A水平。方法选择已确诊的活动性结核患者、隐性结核感染者及健康对照者,且所有入组者均注射过卡介苗。采用流式细胞术测定血清中的IL-4和IL-17A的水平。结果与正常对照组和隐性感染组比较,活动性结核组血清中的IL-4及IL-17A水平明显降低:IL-4(1.85±1.43)μg/L、(1.77±1.16)μg/L和(0.85±0.94)μg/L(P0.05);IL-17A(1.06±1.29)μg/L、(0.91±1.08)μg/L和(0.09±0.16)μg/L(P0.01);但正常对照组与隐性感染组之间IL-4、IL-17A比较差异均无统计学意义(P0.05)。结论可以根据结核分枝杆菌感染后产生IL-4和IL-17A的水平来区分活动性结核感染和隐性结核感染及健康人群。     

1011株结核分支杆菌耐药趋势研究

目的探讨本市结核分支杆菌的耐药趋势。方法根据世界卫生组织(WHO)耐药指南要求,使用WHO推荐的比例法,对本院2005～2008年的经鉴定为结核分支杆菌的菌株做异烟肼(INH)、链霉素(SM)、利福科(RFP)、乙胺丁醇(EMB)4种药物的药敏试验。结果共入选涂阳患者1062例,其中培养阳性1012例(非结核分支杆菌1例),耐药菌株564例,总耐药率55.8%,初始耐药率为49.5%,耐多药率为21.0%。获得性耐药率为69.3%,耐多药率为38.1%。结论本市结核病控制工作任务艰巨,耐药和耐多药情况需要密切关注。     

噬菌体裂解法检测结核杆菌药物敏感性的研究

目的利用结核分支杆菌噬菌体裂解法检测结核杆菌对利福平、异烟肼、链霉素敏感性。方法选用传统方法判定为利福平、异烟肼、链霉素的耐药或敏感菌株,采用噬菌体裂解法检测其对以上三种药物的敏感性,对比其特异性和敏感度。结果运用噬菌体裂解法检测结果显示,异烟肼药物浓度为1μg/ml时,其灵敏度为87.0%,特异度为93.3%,与传统方法的符合率为92.0%;链霉素药物浓度为4μg/ml时,其灵敏度为96.2%,特异度为92.0%,与传统方法的符合率为92.9%;利福平药物浓度为5μg/ml时,其灵敏度为91.4%,特异度为96.2%,与传统方法的符合率为94.7%。结论采用噬菌体裂解法检测结核杆菌药物敏感性简便易行,灵敏度、特异度高,与传统方法比较符合率较高,便于临床推广。     

基因芯片在分枝杆菌菌种鉴定及结核耐药基因检测的诊断价值

目的探讨基因芯片检测系统在分枝杆菌菌种鉴定及耐药基因检测中的临床应用价值。方法应用基因芯片技术对疑似结核病和非结核分枝杆菌病患者的痰液、尿液、胸腹腔积液、脑脊液和穿刺液等标本进行核酸检测;并对分枝杆菌阳性样本进行利福平及异烟肼的耐药基因检测。结果 91例标本中共检出结核分枝杆菌复合群16例,非结核分枝杆菌2例（戈登分枝杆菌1例、偶然分枝杆菌1例）,分枝杆菌检出总阳性率为19.8%（18/91）,其中结核分枝杆菌占17.6%（16/91）,非结核分枝杆菌占2.2%（2/91）;不同标本类型检出阳性率有差别,由高到低依次为穿刺脓液（33.3%）、痰液（24.0%）、胸腹腔积液（18.8%）、脑脊液（16.7%）和尿液（15.8%）。有57例患者同时进行了基因芯片法和涂片抗酸染色法检测,其中芯片法有16例阳性,阳性率为28.1%（16/57）,涂片法有3例阳性,阳性率为5.3%（3/57）,两种方法比较,差异有统计学意义（P〈0.01）。18例分枝杆菌阳性标本进一步进行耐药基因检测,有4例发生耐药基因突变,其中2例（1例戈登分枝杆菌）为利福平耐药相关基因,ropB基因526位点发生C→G突变,1例为ropB基因531位点发生C→T突变,还有1例为异烟肼耐药相关基因,inhA基因启动子-15位点发生C→T突变;没有检测到多重耐药株。结论基因芯片技术适用于不同标本类型的分枝杆菌菌种鉴定及耐药基因检测,操作简便快速,灵敏度高,特异性好。