用基因芯片研究糖尿病大鼠心肌组织中基因差异表达

在正常大鼠和糖尿病大鼠心肌组织中，以基因芯片技术测定S-腺苷蛋氨酸合成酶、精氨酸酶及氧化应激相关基因的表达。结果显示在糖尿病大鼠心肌组织中S-腺苷蛋氨酸合成酶、精氨酸酶基因的表达上调，氧化应激相关基因的表达下调，这些变化可能与糖尿病心肌病的发病机制有关。     

糖尿病性心肌病大鼠心肌组织中氧化应激相关基因和能量代谢相关基因的表达及其意义

目的 比较正常大鼠和糖尿病性心肌病大鼠心肌组织中基因表达的差异，探讨糖尿病性心肌病的发病机制。方法 (1)实验大鼠分为2组，正常对照组6只，糖尿病性心肌病组6只；(2)从心肌组织中抽提mRNA，经逆转录分别用Cy3、Cy5荧光标记，获得两组动物来源的cDNA探针；(3)cDNA探针与基因表达谱芯片杂交，结果由扫描仪扫描并用软件进行分析统计。结果 氧化应激相关基因和能量代谢相关基因的表达水平在糖尿病性心肌病时明显下调。结论 氧化应激和能量代谢障碍在糖尿病性心肌病发病机制中起重要作用。     

应用基因表达谱芯片研究高果糖大鼠胰岛素抵抗相关基因

目的 比较正常大鼠和高果糖大鼠骨骼肌组织基因表达差异,探讨胰岛素抵抗的发病分子机制.方法 实验大鼠分为正常对照组和高果糖组;从大鼠骨骼肌组织抽提mRNA,经逆转录分别用Cy3、Cy5荧光标记,获得两组动物来源cDNA探针;cDNA探针与4096条大鼠cDNA基因表达谱芯片杂交,扫描,重复2次实验,通过计算机数据处理.结果 筛选出胰岛素抵抗差异表达的基因共140条,基因上调有62条,基因下调有78条.结论 从骨骼肌组织中筛选出大量的差异表达基因,这些基因可能参加了胰岛素的发生发展过程.     

牛磺酸对糖尿病大鼠心肌组织肾素—血管紧张素系统的抑制作用

为探讨牛磺酸对糖尿病的治疗作用，在链脲佐菌素所致糖尿病大鼠模型中观察了大鼠心肌组织肾素血管紧张素系统（ＲＡＳ）的变化以及牛磺酸的治疗作用。结果表明，糖尿病大鼠较正常大鼠心肌组织ＲＡ，ＡＣＥ活性显著升高（Ｐ＜０．０１），ＡＴＩ和ＡＴＩＩ含量均明显增加（Ｐ＜０．０１）。牛磺酸治疗组大鼠较未治疗组大鼠上述各项指标均有不同程度的降低，其中ＡＣＥ活性和ＡＴＩ，ＡＴＩＩ含量的改变差异有显著性（Ｐ＜０．０５，Ｐ＜０．０１），ＲＡ改变差异无显著性。提示：心肌组织ＲＡＳ功能亢进参与糖尿病性心肌病发病过程。牛磺酸抑制心肌组织ＲＡＳ功能对减轻糖尿病心肌损害具有一定的临床治疗意义。     

葡萄糖对心肌细胞游离钙的影响

大量临床及流行病学资料表明，随着糖尿病的发生发展，冠心病发生率日趋增高，但糖尿病患者没有明显微血管病变时也可出现心力衰竭，提示糖尿病性心肌病存在［1，2］。迄今为止，糖尿病性心肌病发生的确切机制尚不清楚，我们观察葡萄糖对培育心肌细胞内游离钙的影响，旨在探讨糖尿病性心肌病的可能发病机制。材料和方法1．主要试剂与材料：DMEM培养基（Gibco产品）；CollagenaseIV（胶原酶IV，美国Sigma产品）；Fura－2／AM（钙荧光探针指示剂，美国Sigma产品）；其余试剂为国产分析纯。2．心肌细胞培养：取10只2～3天龄的乳鼠心脏，…     

急性乙醇性胃黏膜损伤中三磷酸腺苷合成酶6和8亚基的表达

乙醇是导致胃黏膜损伤的一个常见因素，它可通过多种机制损伤胃黏膜，氧自由基（oxygen free radical，OFR）对胃黏膜的氧化应激作用是其中的一个重要方面。线粒体是细胞内最易受乙醇作用而损伤的细胞器，其中线粒体DNA（mitochondrial，mtDNA）又是细胞内乙醇相关氧化应激的主要目标。mtDNA三磷酸腺苷（ATP）合成酶6和8基因表达产物ATP合成酶6和8蛋白是ATP合成酶F。部分的两个组分，通过调控质子转运而调节ATP合成，决定细胞内ATP的含量。在乙醇引起的胃黏膜损伤中，氧自由基是否影响mtDNAATP合成酶的表达，干扰胃黏膜细胞能量代谢尚不清楚。本研究采用乙醇灌胃制备急性胃黏膜损伤动物模型，旨在探讨氧自由基和能量代谢调控基因在急性乙醇性胃黏膜损伤中的作用。     

乙型肝炎病毒相关的肝硬化患者外周血单个核细胞基因表达谱的研究

目的分析乙型肝炎病毒（HBV）相关的肝硬化患者外周血单个核细胞的基因表达谱，探索慢性HBV相关的肝硬化形成的分子机制。方法应用含14 000条人体cDNA的微阵列芯片和来自外周血单个核细胞的标记cDNA，分析了10例慢性HBV相关肝硬化患者和10例健康人基因表达谱。通过应用GenePix 4000B扫描仪和ImaGene3．0分析软件比较Cy5标记的慢性HBV相关肝硬化来源cDNA与Cy3标记的健康人来源cDNA的杂交结果，获得个体基因的相对表达比值。结果和14 000条基因中，差异表达的基因有199条，占1．42％。其中108条基因表达水平上调，91条基因表达水平下调。这些差异表达的基因主要为细胞信号转导．细胞周期和代谢、凋亡及炎症相关类基因。结论HBV相关肝硬化发病过程中，发观众多基因的差异表达，为进一步阐明慢性HBV相关的肝硬化形成的分子机制提供基础。     

病毒性心肌病小鼠心肌线粒体基因表达变化

目的观察实验性病毒性心肌病小鼠心肌线粒体基因表达变化情况,探讨线粒体基因表达变化在病毒性心肌病中的发病作用。方法用柯萨奇病毒B3m反复增量感染Balb/c小鼠,建立心肌病动物模型,用包容35 852条基因的cDNA微矩阵芯片分析心脏组织特异的mRNA表达,筛选出明显差异表达的线粒体相关基因。采用原位末端脱氧核糖核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)观察心肌细胞凋亡情况。结果共有31个心肌病小鼠心肌线粒体能量代谢相关基因、心肌细胞线粒体凋亡及相关调节基因明显差异表达。心肌病小鼠心肌细胞凋亡的数目明显高于对照组(t=8.85,P<0.01)。结论心肌线粒体功能受损伴有心肌细胞凋亡发生是病毒性心肌病的重要发病机制。     

表达谱芯片技术在罗勒多糖抗肿瘤机制研究中的应用

目的探讨表达谱芯片技术在罗勒多糖抗肿瘤机制研究中的价值与作用。方法建立荷NuTu-19卵巢癌大鼠模型共20只,10只予罗勒多糖（2．5mg／kg）连续灌胃50d（药物组）,另10只予等量生理盐水灌胃50d（对照组）。以腹水量、腹腔脏器转移程度积分判断各组肿瘤生长及转移情况。分别用Cy3-dUTP、Cy5-dUTP标记两组癌组织cDNA,与含有2000点的大鼠基因表达谱芯片杂交。结果对照组与药物组共有168条基因出现差异表达。结论表达谱芯片技术可以快速确定药物作用的可能机制． 并为进一步研究提供重要信息。     

褪黑素抗糖尿病所致心肌损伤的作用研究

目的 探讨褪黑素（melatonin，MLT）在链脲佐菌素（streptozotocin，STZ）诱导的糖尿病（DM）大鼠心肌损伤中发挥的作用。 方法 将30只成年雄性SD大鼠随机分为对照组、DM模型组和MLT治疗组。大鼠连续5 d腹腔注射STZ（50 mg/kg）诱导糖尿病大鼠模型，造模成功后腹腔注射MLT（30 mg/kg）治疗8周。8周后，尾静脉取血检测大鼠空腹血糖和血清胰岛素水平；心脏超声检测各组大鼠心脏功能；HE和Masson染色检测心肌组织形态变化；原位末端标记法（TUNEL）检测心肌细胞凋亡；ELISA试剂盒检测血清和心肌组织氧化应激相关体液因子水平和炎症因子水平。 结果 与对照组相比，糖尿病大鼠血糖升高、血清胰岛素水平降低，心脏超声结果显示糖尿病大鼠心脏收缩舒张功能降低，HE和Masson染色显示糖尿病大鼠心肌细胞形态紊乱、胶原聚集，TUNEL法检测结果显示糖尿病大鼠心肌细胞凋亡增加，ELISA法检测结果显示糖尿病大鼠血清MDA水平明显增加、SOD、CAT水平明显减少，炎症因子TNF-α和IL-1β水平明显增加；与DM模型组相比，MLT治疗组大鼠血糖水平明显降低、血清胰岛素水平明显增加，治疗组大鼠心脏收缩和舒张功能、心肌形态的紊乱和胶原的产生均有所改善；心肌细胞凋亡明显减少，血清的MDA水平减少、SOD、CAT的水平增加，TNF-α和IL-1β的水平也有明显减少。 结论 MLT具有减轻糖尿病所致心肌损伤的作用，其作用机制是否与其发挥抗氧化活性尚需进一步研究证实。     

用基因表达谱芯片研究人正常胃和胃癌中与发育相关基因的价值

用8464条人cDNA制成表达谱芯片,利用胃和胃癌组织的mRNA,通过逆转录方法将Cy3和Cy5两种荧光分别标记到两组cDNA上,利用这种cDNA探针与表达谱芯片进行杂交后扫描,通过计算机分析判定基因是否在上述组织中存在差异表达,结果示在197条与生长发育相关的基因中,存在差异表达的共10条,上调的8条（0．095％）,下调的2条（0．024％）,应用这种方法识别出的基因对胃癌的诊断和治疗具有重要的潜在价值。     

用基因芯片研究卡托普利对糖尿病心肌病变大鼠心肌组织表达谱的影响

含4000个基因的基因芯片与荧光标记心肌mRNA杂交结果显示，卡托普利能够改善糖尿病所损害的心肌的能量供应，减轻氧化应激、炎症反应、间质纤维化和增生，还能对抗细胞凋亡，对心肌起保护作用。     

Differential gene expression between chronic hepatitis B and C hepatic lesion

BACKGROUND & AIMS: Complementary DNA (cDNA) microarray technology allows simultaneous expression analysis of hundreds to thousands of genes. We applied the cDNA microarray technique to clarify gene expression profiles in chronic viral hepatitis tissue lesions. METHODS: We made cDNA microarrays consisting of 1080 human cDNAs and analyzed gene expression using labeled cDNAs prepared from 6 normal, 12 chronic hepatitis B, and 14 chronic hepatitis C liver tissues. Relative expression ratios of individual genes were obtained by comparing hybridization of Cy5-labeled cDNAs from chronic hepatitis lesions and Cy3-labeled cDNA from normal liver tissue. RESULTS: Hierarchical clustering analysis of the gene expression profiles in 26 patients showed that the patients were clustered into 2 groups with respect to similarities in differentially expressed genes. Hepatitis B and C virus infection, but not age, sex, or histology of hepatitis, were significant factors determining clustering (P < 0.05). In hepatitis B tissue lesions, genes involved in inflammation were predominant, whereas in hepatitis C, expression of anti-inflammatory response genes was relatively dominant. CONCLUSIONS: These findings shed new light on the possible differential molecular mechanisms in the pathogenesis of hepatitis caused by hepatitis B virus and hepatitis C virus infection, from which hepatocellular carcinoma frequently develops.     

应用基因芯片技术研究甲状腺乳头状癌的基因表达

目的　应用基因芯片技术研究甲状腺乳头状癌 (PTC)和正常成人甲状腺组织基因的差异表达。方法　分别用Cy5和Cy3两种不同的荧光染料通过逆转录反应将PTC组和对照组甲状腺组织的mRNA分别标记成探针 ,并与载有一组靶基因的基因表达谱芯片进行杂交。通过扫描荧光强度 ,计算机软件分析 ,寻找两组差异表达基因 ,并用RT PCR、免疫组化对其中两条基因进行验证。结果　共有 65条差异表达基因 ,其中表达增加的有 48条 (2 .0倍以上 ) ,表达降低的有 17条 (0 .5倍以下 )。RT PCR、免疫组化结果与芯片扫描结果一致。结论　基因芯片是筛选PTC与正常成人甲状腺组织差异表达基因的有效方法。通过筛选所得差异基因提示 ,PTC的发病涉及细胞外基质、细胞因子、受体信号转导等多个方面。     

基因表达谱芯片筛选破裂性腹主动脉瘤组织中的差异表达基因

目的采用表达谱基因芯片技术筛选破裂性腹主动脉瘤组织中的差异表达基因。方法选取破裂性腹主动脉瘤组织标本6例,以年龄、性别构成、动脉瘤直径等相仿的6例未破裂腹主动脉瘤作对照。抽提总RNA,纯化mRNA后逆转录制备杂交探针,采用含有4 096种人类基因全长cDNA的表达谱芯片进行差异表达谱分析,通过Northern blot或Western blot反向验证部分差异表达基因。结果在破裂性腹主动脉瘤组织中发现差异表达基因共有124条,上调的基因89条,下调的基因35条;共存性基因有42条,其中上调基因29条,下调基因13条。差异表达的基因有与基质代谢、炎性因子及粘附分子、细胞凋亡、原癌基因或抑癌基因、细胞信号和传递蛋白、细胞骨架和运动蛋白相关基因表达密切相关的多种基因参与。通过Northern blot等方法反向验证基质金属蛋白酶9和金属蛋白酶组织抑制剂2基因,证实在腹主动脉瘤组织中存在基质金属蛋白酶9和金属蛋白酶组织抑制剂2的mRNA及蛋白产物的差异表达。结论应用表达谱基因芯片筛选破裂性腹主动脉瘤中的差异表达基因,可能为其发病机制及防治的研究提供新思路。