片仔癀对人骨肉瘤MG63细胞相关凋亡蛋白表达的影响

目的观察不同浓度片仔癀对人骨肉瘤MG63细胞相关凋亡蛋白表达的影响。方法不同浓度片仔癀溶液干预人骨肉瘤MG63细胞24h后,采用Westernblot法检测各组骨肉瘤MG63细胞凋亡标志蛋白Caspase-3、Caspase-9、Bcl-2、Bax的表达。结果片仔癀通过内源性的线粒体途径,促进人骨肉瘤MG63细胞Caspase-3、Caspase-9的激活,诱导骨肉瘤细胞的凋亡,同时可以调节Bcl-2、Bax的表达,有剂量依赖性。结论片仔癀促进骨肉瘤MG63细胞凋亡可能通过调节相关凋亡蛋白表达而实现。     

三氧化二砷诱导骨肉瘤MG—63细胞凋亡的实验研究

目的：探讨三氧化二砷（As2O3)诱导骨肉瘤MG－63细胞凋亡的作用。方法：用MTT法、透射电镜、琼脂糖凝胶电泳等方法观察As2O3诱导MG－63细胞凋亡的作用。结果：As2O3可有效地抑制MG－63细胞增殖,随着药物浓度增高其抑制作用增强,且细胞出现典型的凋亡变化。DNA琼脂糖凝胶电泳出现凋亡特征性梯形条形。透射电镜下可见细胞核仁消失,染色质浓缩聚集于核膜下。结论：As2O3可诱导骨肉瘤细胞凋亡,其作用机制有待进一步探讨。     

Ⅱ型谷氨酰胺转氨酶对骨肉瘤MG-63细胞凋亡的抑制作用及其机制

目的：研究骨肉瘤MG-63细胞中Ⅱ型谷氨酰胺转氨酶（TG2）的抗凋亡作用,探讨其抑制肿瘤细胞凋亡的机制。方法：设计针对TG2的siRNA,建立骨肉瘤MG-63细胞体外缺氧培养模型,分为常氧组（细胞在常氧下培养）、单纯缺氧组（细胞在缺氧培养箱里培养）、对照siRNA缺氧组（转染对照siRNA后在缺氧培养箱里培养）和TG2 siRNA缺氧组（转染TG2 siRNA后在缺氧培养箱里培养）。观察各组骨肉瘤MG-63细胞在缺氧培养不同时间(6、12、24、48和72 h) 后Bax和Cyt C的表达及细胞凋亡率。微量滴定法检测TG2活性,RT-PCR法检测TG2和Bax mRNA表达水平,免疫组织化学法检测TG2和Bax蛋白在细胞内的分布,Western blotting法检测TG2、Bax和Cyt C蛋白表达水平,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果：与常氧组比较,单纯缺氧组和对照siRNA缺氧组细胞TG2活性、TG2 mRNA和蛋白表达水平明显增强(P<0.01),并随缺氧时间延长逐渐升高（P<0.01）;Bax mRNA表达水平变化不明显(P>0.05),但Bax蛋白表达水平明显下降(P<0.01),细胞胞浆和线粒体内Cyt C蛋白水平及细胞凋亡率无明显变化（P>0.05）。与单纯缺氧组和对照siRNA缺氧组比较,TG2 siRNA缺氧组细胞各时间点TG2 mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.01),Bax mRNA表达水平无明显变化（P>0.05）,Bax蛋白表达明显增加(P<0.01),胞浆内Cyt C蛋白水平明显增加(P<0.01),线粒体内Cyt C蛋白水平明显降低（P<0.01）,细胞凋亡率显著增加(P<0.01)。结论： TG2通过与Bax形成混合物而消耗Bax,阻止Cyt C释放至胞浆,从而抑制肿瘤细胞凋亡。     

芸香苷诱导K562细胞凋亡机制

目的研究芸香苷诱导白血病K 562细胞凋亡过程中caspase-3基因及细胞色素C的表达。方法体外培养白血病K 562细胞,M TT法观察细胞毒作用,测定IC50,Hoechst 33342/P I双荧光染色后,荧光显微镜下观察细胞核形态,流式细胞仪检测细胞周期,TR IZOL试剂提取K 562细胞RNA,核酸定量仪检测纯度,RT-PCR扩增,紫外透射检测扩增产物,扩增产物测序,观察caspase-3的表达,4×1-0 5m o l/L药物处理细胞后,分离细胞线粒体和胞浆,经SDS-PAGE电泳分离蛋白,W estern b lotting检测线粒体、细胞浆细胞色素C表达。结果芸香苷浓度为2×1-0 5、4×10-5、8×10-5m o l/L时,细胞生长受到显著抑制,并呈剂量依赖性;不同浓度芸香苷处理K 562细胞44h后,应用M TT比色法计算IC50为4×1-0 5m o l/L;4×10-5m o l/L芸香苷处理细胞24 h后,Hoechest 33342/P I双荧光染色可观察到明显核固缩、凝集等细胞凋亡表现;流式细胞仪检测芸香苷处理后G2期细胞显著增多(64.7%),DNA合成受抑,凋亡率增加;PCR产物经过琼脂糖凝胶电泳,紫外透射仪下明显观察到500 bp条带,产物经过序列测定证实芸香苷处理细胞诱导caspase-3基因的表达;W estern B lotting检测线粒体细胞色素C表达水平下调,细胞浆出现明显细胞色素C蛋白条带。结论芸香苷诱导K 562细胞caspase-3基因表达,细胞色素C通过线粒体膜进入胞浆,导致细胞线粒体功能异常,细胞发生凋亡,线粒体途径诱导白血病细胞凋亡是其作用机制之一。     

PDTC影响骨肉瘤U-2 OS细胞凋亡的研究

目的:观察在NF-KB抑制剂PDTC诱导骨肉瘤细胞发生凋亡的过程中,NF-KB活性抑制后,Livin和aspase-3表达水平变化.方法:以不同浓度(0、50、100、200、400 μmol/L)PDTC作用于骨肉瘤U-2 OS细胞不同时间(24小时,48小时)后,采用MTT法和流式细胞仪测定U-2 OS细胞凋亡,采用Western Blot检测U-2 OS细胞Livin和caspase-3蛋白表达.结果:①不同浓度PDTC作用24小时、48小时后对U-2 OS细胞生长有明显抑制作用,并呈时间、剂量依赖性.②50、100、200和400μmol/L PDTC作用24小时后的凋亡率与对照组相比差异有显著性,且各浓度组之间差异均有显著性(P＜0.01).③PDTC作用于U-2 OS细胞后可降低Livin蛋白的表达,增加caspase-3蛋白表达,呈现剂量依赖性.结论:PDTC可明显抑制人骨肉瘤U-2 OS细胞,并使细胞周期受到阻滞,进一步诱导肿瘤细胞凋亡,抑制细胞与诱导凋亡呈剂量依赖关系.     

NS398诱导人骨肉瘤细胞MG-63凋亡及对bcl-2蛋白表达的影响

目的研究环加氧酶-2（cyclooxygenase-2，COX-2）抑制剂NS398抑制人骨肉瘤细胞MG-63增殖及诱导其凋亡的效应和机制。方法MTT比色法观察NS398的细胞毒性作用及其浓度依赖性；透射电子显微镜观察细胞凋亡的形态学变化；琼脂糖凝胶电泳观察凋亡细胞DNA Ladder形成。流式细胞仪检测细胞凋亡率及与NS398作用时间的关系；Western blot测定bcl-2蛋白表达。结果不同浓度（0.1～100μmol／L）NS398均可使细胞生长受到抑制；电镜显示细胞呈典型的凋亡形态学变化；琼脂糖凝胶电泳显示凋亡细胞DNA Ladder形成；流式细胞术检测证实细胞凋亡率与NS398作用时间呈明显相关。Western blot检测显示随着NS398作用时间延长，可不同程度地降低bcl-2蛋白表达。结论NS398能抑制人MG-63细胞增殖，诱导细胞凋亡，其作用机制可能与调控bcl-2蛋白表达有关。     

科学家发现细胞凋亡的分子制动器

细胞色素C从线粒体释放是细胞凋亡的关键步骤.释放到细胞质的细胞色素C,在脱氧三磷酸腺苷（dATP）存在的条件下,能与凋亡相关因子1（Apaf-1）结合,使其形成多聚体,并促使半胱氨酸蛋白酶（caspase）9与其结合形成凋亡小体,caspase-9被激活,激活的caspase-9能激活其他的caspase如caspase-3等,从而诱导细胞凋亡.     

姜黄素对顺铂抑制人成骨肉瘤细胞MG63增殖的影响

目的研究姜黄素对顺铂抑制人成骨肉瘤细胞MG63增殖的影响。方法采用噻唑蓝比色法检测姜黄素和顺铂不同浓度组合时对MG63细胞增殖的影响,荧光倒置显微镜观察药物作用后细胞形态的改变,流式细胞术检测细胞凋亡率的改变。结果随着姜黄素和顺铂的药物浓度逐渐升高,单药对MG63细胞的增殖抑制率呈上升趋势(P<0.05)。两药联合作用后细胞明显变形、发泡,细胞凋亡数进一步增加,细胞排列更加紊乱,大量细胞脱落悬浮于培养液中。结论不同浓度的姜黄素对顺铂抑制人成骨肉瘤细胞MG63增殖的影响不一样,可以是拮抗、相加或协同。     

miR-499-5p调控AKT2基因对骨肉瘤MG63细胞凋亡和迁移的影响

目的 探讨miR-499-5p在骨肉瘤MG63细胞中的表达及其对MG63细胞凋亡和迁移的影响.方法 运用生物信息学软件TargetScan和miRanda对miR-499-5p和AKT2基因的靶向配对关系进行预测.未转染细胞设为空白对照组(control组),脂质体2000转染miR-499-5p模拟物为mimics组,转染干扰AKT2基因的siRNA为siRNA组.Real-time PCR检测3组细胞中miR-499-5p和AKT2 mRNA的表达情况,westernblot检测AKT2蛋白的表达情况,流式细胞术检测3组细胞凋亡情况,细胞划痕实验检测体外的迁移情况.结果 TargetScan和miRanda显示miR-499-5p和AKT2基因二者靶向配对良好.Real-time PCR检测结果表明转染mimics后,AKT2 mRNA的表达量降至(45.06±8.12)％,与control组(100％)比较,差异有显著性意义(P＜0.05).Western blot检测结果表明mimics组AKT2蛋白相对表达量为(0.32±0.05),与comtrol组(0.69±0.11)比较,明显降低,P＜0.05.流式细胞术和细胞划痕实验结果显示mimics组MG63细胞凋亡率(18.97±2.41)％及细胞划痕愈合率(63.54±5.43)％,与control组(10.35±2.56)％和(90.35±6.81)％相比差异均有显著性意义(P＜0.05).结论 miR-499-5p能够下调骨肉瘤MG63细胞中AKT2基因的表达,促进癌细胞的凋亡以及抑制细胞的迁移.     

抑癌基因PTEN对人骨肉瘤MG-63细胞凋亡的影响

目的探讨外源性PTEN基因稳定转染对人骨肉瘤MG-63细胞凋亡的影响。方法应用质粒pCMV-Tag3B-PTEN和pCMV-Tag3B空载体质粒,以脂质体转染法转染体外培养的人骨肉瘤细胞株MG-63,以未转染组为对照。应用RT-PCR分析目的基因表达,MTT法分析细胞生长增殖,An-nexinV—FITC和PI双染流式细胞术检测细胞凋亡,荧光染色法观察细胞形态。结果pCMV-Tag3B-PTEN转染组有外源目的基因的整合和相应mRNA表达。MTT检测表明,pC-MV-Tag3B-PTEN转染组转染组活细胞数低于未转染组和pCMV-Tag3B细胞转染组。流式细胞术显示pCMV-Tag3B-PTEN转染组凋亡率高于未转染组和pCMV-Tag3B细胞转染组。荧光染色观察到pCMV-Tag3B转染组部分细胞呈现典型的凋亡细胞形态。结论外源性PTEN基因稳定转染可诱导人骨肉瘤细胞凋亡。     

Survivin-shRNA对骨肉瘤MG-63细胞增殖、凋亡影响相关研究

目的:探讨Survivin-shRNA对骨肉瘤MG-63细胞增殖活性、凋亡指数、超微结构变化以及Survivin、VEGF、PCNA及CAS-3蛋白表达水平的影响。方法:骨肉瘤MG-63细胞培养成功后,重组腺病毒Survivin-shRNA转染。细胞以1∶5的比例进行稀释传代培养,挑选稳定转染的细胞并扩增培养用于进一步实验,Survivin-shRNA病毒载体转染的细胞为Survivin-shRNA组,阴性对照为GFP组和CON组。采用MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞凋亡指数,透射电镜观察细胞超微结构改变,Western blot法检测SUV、VEGF、PCNA及CAS-3蛋白的表达变化。结果:腺病毒介导的RNA干扰构建Survivin-shRNA载体,Survivin-shRNA组转染细胞的胞质及胞核可见绿色荧光,并伴有少量小颗粒物质。MTT结果显示:Survivin-shRNA对MG-63细胞增殖有明显抑制作用;流式细胞仪检测结果发现:Survivin-shRNA组与Control组和GFP组相比,细胞早期凋亡率增加,可见核碎裂、凋亡小体;透射电镜可见Survivin-shRNA对MG-63超微结构有明显作用,核固缩,微绒毛消失,染色质浓集靠近于核膜,并可见凋亡小体分离;Westtern blot分析显示:Survivin-shRNA抑制SUV、VEGF和PCNA蛋白的表达,增强了CAS-3蛋白在MG-63细胞中的表达水平。结论:Survivin-shRNA可抑制骨肉瘤细胞增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能是通过抑制肿瘤新生血管形成或通过调控CAS-3的表达、下调SUV信号通路来完成。     

紫杉醇脂质体诱导骨肉瘤细胞MG-63凋亡及其机制的研究

目的 探讨注射用紫杉醇脂质体对骨肉瘤细胞株的细胞毒作用及其作用机制.方法 以0、0.1、1、10、100μg/L浓度梯度的注射用紫杉醇脂质体培养基作用于骨肉瘤细胞株,通过四甲基偶氮唑蓝法(methy thiazolyh tetrazdium,MTT),倒置相差显微镜观察细胞形态,流式细胞分析技术检测细胞凋亡率,蛋白印迹(Western blot)技术分析细胞内增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的表达情况.结果 不同浓度药物作用于细胞48h后,细胞存活率下降;镜下细胞形态,从梭型趋于圆型,细胞内质聚集,细胞与细胞间距增大,随着药物浓度的逐渐加大,胞浆内颗粒也随之增多,细胞与平皿的附着力减弱,出现不等量的悬浮细胞.流式细胞仪结果显示随着药物浓度的增大,细胞凋亡率随之增高;Western blot显示PCNA的表达逐渐降低.结论 紫杉醇脂质体可以抑制骨肉瘤细胞株MG-63的生长,其机制可能与PCNA有关.     

三氧化二砷诱导骨肉瘤MG-63细胞凋亡的实验研究

目的 :探讨三氧化二砷 (As2 O3)诱导骨肉瘤MG 6 3细胞凋亡的作用。方法 :用MTT法、透射电镜、琼脂糖凝胶电泳等方法观察As2 O3诱导MG 6 3细胞凋亡的作用。结果 :As2 O3可有效地抑制MG 6 3细胞增殖 ,随着药物浓度增高其抑制作用增强 ,且细胞出现典型的凋亡变化。DNA琼脂糖凝胶电泳出现凋亡特征性梯形条形。透射电镜下可见细胞核仁消失 ,染色质浓缩聚集于核膜下。结论 :As2 O3可诱导骨肉瘤细胞凋亡 ,其作用机制有待进一步探讨     

bFGF对骨肉瘤细胞系U2-os细胞的促凋亡作用

目的:观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对骨肉瘤细胞系U2-os细胞增殖及生存的影响,探讨bFGF在肿瘤细胞发生发展中的作用。方法:以bFGF处理U2-os细胞,采用台盼蓝排除检测法及MTT法检测细胞存活及增殖情况;用Annexin V-EGFP/PI双染流式细胞术及DNA梯状带检测细胞凋亡情况。结果:bFGF呈浓度、时间依赖性降低U2-os细胞活力并诱导细胞凋亡。结论:bFGF可以诱导U2-os细胞发生凋亡,生长因子在细胞的生长调控方面具有双重作用。     

2-甲氧基雌二醇对骨肉瘤MG63细胞荷瘤小鼠的抑瘤作用及其机制

目的:探讨2-甲氧基雌二醇(2-ME)对骨肉瘤移植瘤的抑制作用、可能的分子机制及不良反应。方法:构建裸鼠皮下骨肉瘤模型,2-ME作用后,记录肿瘤的体积和质量;通过移植瘤HE、免疫组化、TUNEL染色,观察肿瘤组织的增殖抑制、诱导凋亡及Bcl-2、VEGF、Caspase-3的表达情况,检测2-ME对裸鼠肝肾功能的影响。结果:2-ME对肿瘤的体积和重量均有抑制作用,HE染色显示,实验组出现不同程度的肿瘤细胞密度减低;免疫组化结果表明,随着2-ME浓度的升高,肿瘤组织内Bcl-2、VEGF的表达逐渐下降,而Caspase-3的表达则逐渐升高;TUNEL结果表明2-ME诱导裸鼠移植瘤组织细胞凋亡;肝肾功能检测未见损害发生。结论:2-ME在体内能有效抑制骨肉瘤MG63细胞的增殖、诱导其凋亡,其抗骨肉瘤作用机制与Bcl-2、VEGF、Caspase-3相关,且未见明显毒副作用。     

α2整合素抗体对人类骨肉瘤MG63细胞迁移侵袭的影响

目的:细胞间黏附分子整合素的变化与肿瘤细胞的侵袭迁移之间有重要联系,文中进一步深入探讨α2整合素抗体对骨肉瘤细胞侵袭和迁移能力的影响,为预防骨肉瘤细胞的转移和辅助治疗提供理论依据. 方法:采用细胞迁移实验、细胞侵袭实验观察骨肉瘤MG63细胞在整合素α2单克隆抗体作用下瘤细胞迁移、侵袭能力的变化.迁移或侵袭的细胞通过结晶紫染色,100倍显微镜下计数. 结果:anti-α2阻断组细胞的迁移能力较对照组明显降低,侵袭能力较对照组明显减弱. 结论:α2整合素抗体在骨肉瘤细胞迁移侵袭过程中起着抑制作用.     

激光诱导骨肉瘤细胞凋亡的研究进展

激光疗法在骨与软组织切割、焊接，促进骨、神经和皮肤等组织修复再生，骨肿瘤的光动力治疗等方面的作用己得到肯定，但目前尚无诱导骨肉瘤细胞凋亡的研究报道问世。本文试对近年有关激光疗法的发展、作用机制、不同波长激光组织吸收特点、骨肉瘤细腔凋亡分子生物学特征以及光动力疗法诱导肿瘤细腔调亡的进展情况加以综述。     

尖锐湿疣细胞凋亡与caspase-3、bcl-2的表达

目的探讨尖锐湿疣（CA）细胞凋亡与easpase-3、bcl-2表达及其相互关系。方法对于33例CA、5例巨大CA和8例正常上皮用TUNEL法原位检测角质形成细胞（KC）的凋亡,以免疫组化法检测caspase-3、bcl-2的表达。结果在CA和巨大CA两组之间,凋亡指数（AI）、easpase-3及bcl-2的阳性表达率均无统计学差异（P〉0．05）。CA组的Al与easpuse-3的表达水平呈极显著正相关（r=0．48979,P〉0．0001）,与bcl-2的表达水平呈极显著负相关（r=0．51470,P〉0．0001）,caspctse-3与bcl-2的表达水平呈极显著负相关（r=0．70165,P〉0．0001）。结论CA的KC中存在着明显的细胞凋亡现象,caslxtse-3和bcl-2可能参与了CA细胞凋亡的调节机制。