不脱钙骨组织包埋技术的改进

在骨组织切片上同时进行组织形态学计量与免疫组化有较大难度。这是因为常用的包埋介质石蜡只能用于不含钙或含钙很少的组织,而骨组织富含钙盐,所以必须先脱钙。脱钙的骨组织可做免疫组化与原位杂交,但骨小梁的结构遭到了破坏,不能进行组织形态学计量,从而丢失了骨的生长与钙化方面的信息。塑料包埋的不脱钙骨组织虽能行组织形态学计量,却难以兼顾免疫组化与原位杂交。因此,建立一种可靠的、简便的且同时适应于三者的不脱钙骨组织包埋方法是骨病理学研究的关键。     

HPV6B/11原位杂交和免疫组化双重染色

ＨＰＶ6Ｂ/ 1 1原位杂交和免疫组化双重染色指同一组织切片上用原位杂交和免疫组化同时进行实验及显色〔1～ 3〕。利用不同底物 ,显示不同颜色 ,原位杂交用ＮＢＴ/ＢＣＩＰ为底物呈紫蓝色 ,免疫组化用ＤＡＢ为底物呈棕色 ,使待测核酸靶序列和待测蛋白质均能理想显色 ,克服了实验标本空间和样本的误差。1　材料与方法1 1　材料　地高辛标记检测ＨＰＶ6Ｂ/ 1 1型双链ＤＮＡ(ｄｓＤ ＮＡ)探针及碱性磷酸酶标记抗地高辛抗体Ｆａｂ片断 (Ａｎｔｉ ＤＩＣ ＡｇＦａｂ)检测系统 ,ＮＢＴ/ＢＣＩＰ显色系统 (Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ…     

石蜡切片与冰冻切片在胰腺原位杂交中的应用与比较

石蜡切片与冰冻切片在胰腺原位杂交中的应用与比较赵春芳，李枫，郭雯媛（河北医科大学组织胚胎教研室石家庄０５００１７北京医科大学组胚系北京１０００８３）胰腺经石蜡包埋，切片在原位杂交过程中不易脱片，而且能较好地保存组织中的ＲＮＡ和微细结构。１材料与方法取...     

三种粘片剂及不同烘烤温度和时间对免疫组化切片的影响

免疫组织化学染色过程中 ,因步骤多、微波高温修复、37℃孵育等因素 ,常出现脱片问题 ,造成染色的失败 ,浪费人工及试剂。为了解决脱片问题 ,同时又不使抗原或抗体受到破坏 ,我们选取了经免疫组化染色确定为强、中、弱三种反应强度的标本 ,分别用硌矾明胶、APES( 3- Amino PropyltriethoxySilane)、多聚赖氨酸 ( Poly- L - L ysine)三种粘片剂处理切片 ,再将切片经 37℃、5 0℃、6 0℃三种烘烤温度分别烤片 1 hr、2 hr、3hr、4hr及 1 2 hr,使用同样方法及程序染色 ,观察切片的肉眼观、粘贴程度及抗原抗体保存情况 ,结果为 :1.三种粘片剂…     

DPX封片胶在牙组织免疫组化染色防脱片中的作用

目的:研究DPX封片胶在牙组织免疫组化染色中的防脱片效果。方法:狗上前牙EDTA脱钙、常规石蜡包埋、切片、脱蜡、水洗、干燥后,用DPX封片胶在组织边缘和玻片上涂抹一圈,37℃烤干DPX封片胶,EnVision技术观察IL-1、基质金属蛋白酶1(MMP-1)、MMP-9的表达。结果:DPX封片胶处理后的切片,经微波抗原修复后,切片上的组织完整没有边缘脱落破损现象。免疫组化染色后,组织形态基本完整,相应分子表达定位准确,染色结果清晰。结论:DPX封片胶在牙齿等含钙组织免疫组化染色中有良好的防脱片作用。     

在一张玻片上连续附片标记多种抗体的方法

随着对肿瘤生物学本质的认识及免疫组化技术的发展 ,越来越多的抗体被推广应用。科研工作中对同一病例的组织研究 ,使用单一或几种抗体已不能满足要求 ,往往需一组抗体 ,这样便增加了免疫组化检查的实际操作。针对此现象 ,我们摸索了这套在一张载玻片置放数张切片 ,各自标记不同抗体的方法 ,报道如下。1　材料和方法1.1　自制防溢画蜡笔 ,包埋用石蜡 ,临床待检的石蜡组织和防脱处理的载玻片 ,待标记的免疫组化试剂。1.2　 (1)常规连续切片 ,每张玻片上据蜡片的大小 ,彼此相隔适当距离 (0 3～ 0 5ｃｍ左右即可 )后连续置放切片 (一般可置放…     

针对组织工程多孔生物陶瓷的组织学技术优化探讨

目的 改进硬组织切片技术以适应生物陶瓷材料在骨组织工程中的研究.方法 探索硬组织切片的厚度、漂片温度、裱片方法、烤片温度和时间的最佳组合,针对阳离子防脱载玻片的使用条件进行反复比较,通过改进操作流程中的关键技术和需避免的问题,摸索出阳离子载玻片在硬组织切片裱片中的最佳应用条件,克服了硬组织切片制作技术中标本易破碎、切片易脱落及染色时染料容易吸附的缺点.结果 通过技术探索与改进,生物陶瓷支架材料体内植入后的类骨修复体标本的硬组织切片能保持其杂化后的组织结构与比较完整的材料结构,可进行Masson三色染色、苏木精-伊红(HE)及甲苯胺蓝染色.染色后镜下观察显示支架内杂化生长的组织结构完整、细胞形态清晰、切片质量好、生物陶瓷支架脱片少.荧光显微镜可观察到类骨修复体钙沉积现象完整.结论 改善了传统硬组织切片技术处理生物陶瓷材料时易于破坏组织-材料结构的缺点.改进的硬组织切片技术适应生物陶瓷材料在骨组织工程领域研究.     

胶体金技术及其发展和应用

本文主要介绍了胶体金技术的基本应用及其发展,包括应用胶体金在同一组织切片上进行免疫组化定位、银加强胶体金标记法、使用生物素化探针进行原位杂交后用胶体金技术检测(包括振动切片的包埋前法及超薄切片杂交法)以及胶体金双标记法。这些方法都是在最初的胶体金技术的基础上发展起来的,既继承了优点,又进一步进行了改良,使之广泛应用于各种理论及临床研究课题上。本文同时还简介了应用这些新技术在各个领域中的研究成果。     

双标记法检测乙型和丙型肝炎病毒双重感染的肝组织 …

目的 研究乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）与丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）双重感染者肝组织内两种病毒的分在体内的分布特点和相互关系。方法 用免疫组化和原位杂交法分别检测了ＨＢＶ的核酸及抗原和ＨＣＶ的核酸及抗原,对其中乙型肝炎核心抗原,对其中乙型肝炎核心抗原与ＨＣＶ ＲＮＡ同时阳性的组织进一步做了同一切片的双标记染色。     

生物素标记探针原位杂交法检测细胞滴片和组织切片中人乳头状瘤病毒

生物素标记探针原位杂交法检测细胞滴片和组织切片中人乳头状瘤病毒邢鲁奇，马钧，刘鸿瑞，司静懿使用国产生物素缺口平移法标记ＤＮＡ试剂盒对扩增、提取和纯化的人乳头状瘤病毒（ＮＰＶ）ＤＮＡ进行标记，制备ＨＰＶＤＮＡ探针，建立了原位杂交检测细胞滴片、冰冻切片和...     

高温高压处理在消除双重免疫组化染色交叉反应中的应用

双重免疫组化染色可以在同一张组织切片上清晰地观察到2种不同抗原的表达,更便于病理医生进行观察及诊断.然而,在进行双重免疫组化染色的时候,常常会因为后一种免疫染色所用的抗体系统可能与前一种染色所用的抗体系统发生交叉反应,影响观察,失去双重免疫组化染色的准确性和意义[1].     

脑组织切片免疫组化技术中防止脱片制作方法

在做人脑组织病检及小鼠、大鼠等小动物要取材脑组织的实验中,因为脑组织本身的组织结构,化学组成等因素,按常规取材、固定、脱水方式,做成组织切片再做免疫组织化学染色时,切片经抗原修复和缓冲液的长时间浸泡后,往往会部分或全部从载玻片上脱落,严重影响实验操作的进行与染色结果的判断~([1-3]).经过查阅资料多次摸索,本技术组总结出一套脑组织切片制片方法,可以有效防止脑组织切片免疫组化技术中组织切片脱片的发生.     

微波技术在制作牙体组织切片中应用

牙体组织由牙釉质、牙本质、牙骨质3种钙化的硬组织和1种牙髓组织组成。因其十分坚硬,渗透性极差,脱钙、浸蜡时间均较长,制作完整的切片较困难。我们在制作牙体组织切片的实际工作中体会到采用微波技术处理牙体组织,制作常规石蜡切片及进行免疫组化染色过程中,注意在关键环节上的处理,可缩短制作周期,并获得令人满意的效果。     

微波脱水组织的免疫组化研究

组织标本微波脱水、透明和浸蜡是近来发展起来的新技术。它具有快速、简便,保持良好的组织细胞形态结构等特点,对临床病理快速诊断具有重要意义。然而,在脱水过程中微波辐射对细胞内抗原的保存及免疫活性的影响尚缺乏详细的研究。本文选用20种单克隆及多克隆抗体对微波脱水的石蜡包埋组织进行了免疫组化研究,并与常规脱水法比较,以探讨微波辐射对组织细胞内抗原的影响,为该技术在免疫组化中的应用提供科学依据。     

胃癌高通量组织芯片及切片制作经验技巧总结

正利用术后病理蜡块组织样本切片染色是非常重要的研究方法之一,常见的如免疫组化,原位杂交等研究方法,定性或半定量检测组织中蛋白或基因的表达。然而蜡块组织的切片过程对组织造成一定的消耗和破坏,不利于术后病理存档保存,限制了其研究应用。组织芯片(tissue chip,Tc)又称组织微阵列(tissue microarray,TMA),是将数十个到上千个的不同个体组织样本,有序地排列在同一张     

酶联免疫、免疫组化和原位杂交检测EB病毒的比较研究

EB病毒(Epstein-Barr)感染与鼻咽癌等肿瘤的发生密切相关.我们采用酶联免疫、免疫组化法和EBER原位杂交法检测血清和肿瘤石蜡切片中EB病毒表达,并对3种检测方法进行了比较研究.     

原位PCR防脱片方法的选择及应用

原位ＰＣＲ防脱片方法的选择及应用肖莎朱新生郭琳琅原位ＰＣＲ是ＰＣＲ与原位杂交两种方法的结合，其最大的特点就是将附在载玻片上组织切片内的靶基因原位扩增、原位检测、原位观察。这对于探明靶基因与病变发生发展的关系十分重要。然而原位ＰＣＲ步骤多，时间长，其间...     

抗体鸡尾酒法在免疫组织化学标记中的应用

肿瘤组织常含有多种抗原成分,要在一张切片上同时显示多种组织抗原,往往需要采用双标记或三标记方法。然而,反复在一张切片上进行操作容易引起脱片,从方法学角度看也颇为费时费力。为此,作者设计了抗体鸡尾酒标记法,用p53／CD34标记了325例肺、食管、胃肠、膀胱及子宫等部位的上皮性肿瘤,同步显示p53表达水平、微血管密度及脉管受累情况;用p63／α-平滑肌肌动蛋白(SMA)标记了15例乳腺病变组织,显示肌上皮细胞的基本结构。     

介绍一种改良脱钙液在骨组织制片中的应用

骨、含有骨质的肿瘤及钙化组织和骨髓穿刺组织很坚硬,将其制成几微米切片相当困难,常用的方法是先经脱钙处理,使其变软后再切片,所以脱钙是这类组织制作病理切片的关键技术.脱钙液和脱钙方法很多,传统方法脱钙一般用硝酸,其效果不稳定,骨组织脱钙不足,切片破碎甚至切不成片且极易脱片;骨组织脱钙过度,破坏组织的形态结构和细胞成分的性质,造成细胞核不着色或着色很浅,从而影响对病变组织的病理诊断.已有学者对此进行了改进[1~4], 但目前尚无公认的理想方法.为此我们在工作中反复摸索,结合Plank-Rycho脱钙液总结出一套改良的脱钙液并获得了满意效果,现将此方法介绍如下.     

微波辐射DAB胶体银免疫酶染色增敏法

微波辐射ＤＡＢ胶体银免疫酶染色增敏法张谷孙文勇免疫组织化学技术应用于肿瘤相关抗原标记，尤其是淋巴瘤的癌基因或受体等检测时，由于组织制备过程中抗原的破坏、丢失，或者组织本身仅有微量抗原，其最终的细胞免疫反应结果往往很弱。这给肿瘤明确诊断带来很大的困难。...