肾综合征出血热(HFRS)病毒McAb在临床早期诊断中应用的研究

本研究用间接荧光抗体试验检测77例临床诊断为HFRS病人外周血白细胞中病毒抗原。阳性率为50.7％,在早期病例中(第2—5病日)阳性率为64.3％(27/42),并发现病日越早、病情越重,阳性率越高。在间接免疫荧光中应用了抗HFRS病毒MCAb 4B_9、4E_7、3H_4株。抗原阳性者与3种McAb表现为5种反应类型,不同McAb对抗原的检出率也不相同。将McAb组合可提高阳性检出率。在抗原阳性早期患者中,急性期血清特异性IgM抗体阳性率为96.3％。将HFRS抗原检测和急性期IgM测定联合应用,可提高HFRS早期诊断的阳性率和准确性。     

肾综合征出血热病毒单克隆抗体在临床早期诊断中应用的研究(简报)

本研究是用第四军医大学微生物教研究建立的4B_9、4E_7、3H_4三种肾综合征出血热病毒单克隆抗体(HFRSMcAb),以间接免疫荧光技术(IFAT)检测HFRS病人外周血白细胞中HFRS病毒抗原,并对该McAb在临床诊断中的应用进行了初步研究。 一、IFAT的阳性率和反应的特异性 共检测临床诊断HFRS病人73例。标本采集于第2—26病日。其中IFAT反应阳性35例,阳性率47.95％。在73例病人中,早期(第2—5病日)患者38例,阳性24例,阳性率     

双McAb-ELISA夹心法检测HFRS病毒血凝素抗原的实验研究

作者采用抗HFRS病毒血凝素McAb和HRP标记的同一种McAb,建立了检验HFRS病毒血凝素抗原的双McAb-ELISA夹心法。经取代试验和抗原阻断试验均证明本法具有高度特异性,重复性也良好。用本法和血凝试验平行地检测了10批粗提HFRS陈株感染鼠脑的血凝素抗原,检出率分别为100％和70％,而前法滴度明显高于后法(GMT 1:506和1:26),有显著性差异(P<0.01)。用本法检验了10种从不同疫区不同宿主分离的HFRS病毒株的感染鼠脑或Vero—E6培养上清,结果均为阳性,虽血凝素抗原滴度高低不一,却再次说明不同HFRS病毒株血凝素之间有群共同性,因此本法在HFRS的临床诊断,流行病学监测,疫苗效价鉴定中都有实用价值,可取代血凝试验。     

微斑免疫酶技术在检测肾综合征出血热病毒及其特异抗体中的应用

本文报道一种简便且快速的方法—微斑免疫酶技术(MPIPA),检测Vero-E6细胞培养的肾综合征出血热(HFRS)病毒及其特异抗体,并与免疫荧光技术(IFA),酶联免疫吸附技术(ELISA)进行比较。结果,本法用于检测HFRS患者血清IgG抗体和抗HFRS病毒单克隆抗体(McAb),其敏感性介于ELISA和IFA之间;用于检测Vero—E6细胞培养的病毒,阳性结果比IFA和细胞病变(CPE)出现早。MPIPA具有简单,快速、敏感性高、特异性好,结果易判定诸优点,便于基层医疗单位推广应用,适合于临床HFRS血清标本的检测和血清流行病学调查。     

MbAb-ELISA间接夹心法检测HFRS患者血清中血凝抑制抗体的研究

为了防治肾综合征出血热(HFRS)需要建立一种在试管内检测特异的保护性抗体的方法。本文采用抗HFRS病毒血凝素单克隆抗体(McAb)和粗制HFRS病毒血凝素抗原,建立了一种McAb-ELISA间接夹心法。经取代试验,抗体阻断试验都表明有高度特异性。以本法曾检测了63例临床诊断为HFRS患者血清中血凝抑制抗体,同时平行地与血凝抑制试验比     

重链可变区基因随机CDR3ScFv噬菌体抗体库的构建及筛选

目的构建VH 基因随机CDR3ScFv噬菌体抗体库 ,并筛选抗HFRS病毒NP抗原的噬菌体抗体。方法采用随机引物PCR法扩增抗HFRS病毒mAb1A8的VH 基因 ,并与1A8VL 基因共同克隆入噬菌粒表达载体 pHEN1后 ,构建VH 基因随机CDR3ScFv基因库。继用辅噬菌体VCSM13超感染后得到噬菌体抗体库 ,然后用HFRS病毒抗原进行筛选。随机挑取筛选的菌落超感染 ,用夹心ELISA检测超感染上清。结果获得库容量约为107 噬菌体抗体库。夹心ELISA的结果表明 ,筛选出的噬菌体抗体可与HFRS病毒NP抗原特异性结合。结论成功地构建了库容量较高的ScFv噬菌体抗体库 ,并获得可与HFRS病毒NP抗原结合的噬菌体抗体。     

抗猪流行性腹泻病毒单克隆抗体细胞系的建立及初步应用

用提纯的猪流行性腹泻病毒抗原免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与NS—1骨髓瘤细胞融合,用酶联免疫吸附试验间接法筛选出阳性孔经3～4次克隆化,阳性率达100％后扩大培养,液氮及超低温冰箱保存。建立了1D_8、5D_7、4B_1、2B_8、1A_4五株抗猪流行性腹泻病毒的单克隆抗体杂交瘤细胞系。接种BALB/c小鼠,10天左右收取腹水,用ELISA检测培养上清液     

流式微球载体技术在检测肾综合征出血热患者血清特异性抗体和细胞因子中的应用

目的:建立流式微球载体技术(FMA)检测肾综合征出血热(HFRS)患者血清抗HFRS 病毒特异性抗体IgM和IgG及细胞因子含量的新方法.方法:选择28例临床确诊的HFRS患者及20例健康人血清标本,FMA定量检测抗HFRS 病毒IgM和IgG;定量检测细胞因子IL-6和TNF-α.检测结果与ELISA法进行比较.结果:FMA检测HFRS患者抗HFRS病毒IgM和IgG的阳性率分别为92.85%和71.43%,健康对照组的抗体阳性率(假阳性率)为0;HFRS患者血清IL-6和TNF-α的含量分别为(532.62±397.19) ng/L和(392.68±177.68) ng/L,明显高于健康对照组(38.77±20.32)ng/L (P<0.01)和(15.91±6.91) ng/L(P<0.01).ELISA法检测HFRS患者抗HFRS病毒IgM和IgG的阳性率分别为71.43% 和50.00%,健康对照组的抗体阳性率(假阳性率)为0;HFRS患者血清IL-6和TNF-α的含量分别为(256.46±102.51) ng/L和(45.63±5.32) ng/L,高于健康对照组(53.8±19.21) ng/L(P<0.01)和(5.81±3.58) ng/L(P<0.01).结论:建立了FMA法对HFRS患者的特异性抗体和IL-6和TNF-α的检测,其灵敏度明显优于ELISA法,为HFRS的临床诊断和病理机制研究提供了新的方法.     

肉毒杆菌A型毒素杂交瘤细胞系的建株及其初步应用(简报)

肉毒毒素的检测在平战时都具有重要意义。鉴于目前所用动物免疫血清A、B型毒素之间常有明显交叉反应;而单克隆抗体具有特异性高、易于控制质量等优点,我室在已建立B型毒素型特异性单克隆抗体杂交瘤细胞系基础上,又以A型类毒素免疫BALB/C小鼠,取脾脏与SP2/O骨髓瘤细胞融合。获得8个阳性孔,以有限稀释法进行克隆化,通过ELISA法筛选与鉴定,得到两株(H_6、E_1株)单克隆抗体杂交瘤细胞系。经五次克隆化,阳性率100％。并制备了培养上清和免疫腹水,初步鉴定结果:培养上清中抗体效价为H_6株10~(-2)E_1株10~-     

双McAb-ELISA夹心法检测HFRS病毒血凝素抗原的实验研究

本文作者采用抗肾综合征出血热(HFRS)病毒血凝素单克隆抗体(McAb)和辣根过氧化物酶标记的同一McAb,建立了检验HFRS病毒血凝素抗原的双McAb-ELISA夹心法。经取代试验和抗原阻断试验均证明本法有高度特异性。与各种正常对照抗原试验均为阴性,     

ELISA间接法检测肾综合征出血热患者血清中特异性抗体

以亲和层析法提取的HFRS 病毒结构蛋白为特异性抗原,建立了检测HFRS 病人血清中特异性IgM 抗体的ELISA 间接法。首先用方阵法找到抗原的最适反应浓度为25μg/ml,血清最低滴度为1∶1000。特异性反应表明,包被的病毒结构蛋白只能与     

细胞因子及特异性抗体的检测在肾综合征出血热诊断中的意义

探讨检测血清细胞因子及肾综合征出血热(HFRS) 病毒特异性抗体IgM和IgG的含量在HFRS发病机制及诊断中的意义.选择24例HFRS患者及30例健康人血清标本,采用生物素-亲和素-酶免疫技术检测IL-2、IL-6和TNF-α,ELISA方法检测血清HFRS病毒特异性抗体IgM和IgG,并对其进行统计学分析. 结果显示, ELISA法检测HFRS患者抗HFRS病毒IgM和IgG的阳性率分别为75.00 % 和50.00 %,健康对照组的抗体阳性率为零;HFRS患者血清IL-2、IL-6、TNF-α的含量分别为10.88±2.31pg/mL、256.46±102.51pg/mL和45.63±5.32pg/mL,高于健康对照组0.59±0.24pg/mL(P＜0.01)、53.8±19.21 pg/mL(P＜0.01)和5.81±3.58 pg/mL(P＜0.01). 结论 :HFRS患者血清IL-2、IL-6和TNF-α及血清特异性抗体IgM和IgG的含量较健康人明显升高,检测这些指标对该病发病机理、诊断及预后评价有一定意义.     

单克隆抗体酶联免疫吸附试验在结核性脑膜炎诊断中的初步应用

应用单克隆抗体酶联免疫吸附试验检测38例结核性脑膜炎，33例其它脑膜炎在112例非脑膜炎患者脑脊液中的结核杆菌抗原和抗体。结果脑脊液结核抗原阳性率为81．6％，假阳性率为2．8％；结核抗体阳性率为86．6%，假阳性率为3．4％．提示本法可作为结核性脑膜炎有效的辅助诊断方法。动态观察尚可为疗效判断提供依据。     

单克隆抗体亲和层析法纯化HFRS病毒结构蛋白

用抗肾综合征出血热(HFRS)病毒单克隆抗体(McAb)5H5与CNBr活化的Sepharose 4B偶联,制成免疫吸附柱,并使粗纯化HFRS病毒抗原(从HFRS病毒感染乳鼠脑中提取)遗过免疫吸附柱。用3M硫氰酸钾洗脱与McAb特异性结合的抗原,结果可见到一个高而窄的蛋白洗脱峰,用McAb-ELISA间接夹心法从与此峰相应的洗脱物中检出了较高的抗原滴     

双单克隆抗体ELISA间接夹心法检测HFRS病毒抗原的实验研究

本文建立了检测HFRS病毒抗原的双McAb ELISA间接夹心法。用该法和IFAT分别观察感染细胞培养上清中或细胞中HFRS病毒抗原的动态变化,结果IFAT检出细胞内病毒抗原的高峰在感染后第8天,而FLISA检测感染上清中病毒抗原则在第14天才达高峰。另外,检测179份人工感染HFRS病毒的乳鼠脑、肺组织标本,结果ELISA和IFAT的阳性检出率分别为72.1％和68.2％,前者略高于后者(配对资料X~2检验,P<0.05)。买验结果表明,双McAb ELISA间接夹心法是一种特异、敏感、简便的方法,不仅可用于HFRS病原学研究中检测可溶性抗原,也适用于流行病学调查中检测大量鼠肺标本。     

禽流感病毒血凝素H5特异性单克隆抗体的制备及ELISA捕获法的建立

目的 制备和鉴定禽流感病毒(H5N1)血凝素(H5)特异性单克隆抗体(mAb),建立H5抗原的双抗体夹心ELISA捕获法.方法 以H5血凝素和携带H5全长基因的质粒免疫Balb/c小鼠制备mAb,利用血凝抑制(HI)实验筛选和鉴定,通过竞争抑制试验分析抗体识别表位,并采用抗体配对试验筛选捕获抗体和检测抗体,建立测定H5抗原的双抗体夹心ELISA捕获法.结果 获得16株特异性针对H5的单克隆抗体,与A型流感病毒H1、H3、H7、H9和B型流感病毒的血凝素无HI交叉反应,对H5血凝素的血凝抑制效价为1:100～1:51 200;通过配对实验,建立以单克隆抗体H5M9为捕获抗体,辣根过氧化物酶标记单克隆抗体H5M11为检测抗体的双抗体夹心ELISA;检测多株H5N1病毒和H5血凝素的最低检出值为1/32血凝单位,检测A型流感病毒H1N1、H3N2、B型流感病毒以及H7、H9血凝素均为阴性.结论 建立了一种灵敏度高、特异性强的测定H5抗原的ELISA捕获法,可应用于禽流感病毒H5N1感染的实验室早期诊断.     

霍乱弧菌单克隆抗体诊断应用的研究——Ⅱ.酶标霍乱弧菌单克隆抗体快速检测霍乱弧菌的实验研究

本文就所获得的12株霍乱弧菌单克隆抗体中有种特异性的三株(2B_1H_1C_6,2B_1H_1F_6及2B_1H_1F_3)单克隆抗体及抗霍乱弧菌多克隆抗体,作酶标抗体直接法和间接法,对霍乱弧菌模拟标本进行快速检测,探究在临床诊断应用中的价值。结果表明,酶标McAb较酶标多克隆抗体敏感,前者在10~4/ml菌时可以检出,后者要在10~4～10~6/ml菌时才能检出;同时表明酶标间接法比直法敏感,特异性实验结果显示酶标单克隆抗体对10株霍乱弧菌有很高的     

广州市2009年肾综合征出血热监测分析

目的分析广州市肾综合征出血热（HFRS）的流行特征和规律,探讨防制对策。方法采用人间疫情监测、健康人群抗体水平监测、宿主动物监测方法,其中实验室用间接免疫荧光法检测血清特异性IgG抗体,直接免疫荧光法检测鼠肺汉坦病毒（HV）抗原。结果共报告HFRS71例,死亡1例,发病率为0.69/10万,病死率为1.41%;排查病例抗体阳性率为16.14%（188/1165）,健康人群抗体阳性率为0.50%（2/400）;鼠密度为4.60%（361/7856）,鼠肺抗原阳性率为8.31%（30/361）,鼠血清抗体阳性率为7.43%（26/350）,优势鼠种为褐家鼠。结论广州市HFRS疫情形势较为平稳,但仍然存在病例数上升的压力,应加强疫情监测,落实防鼠灭鼠为主的综合性预防控制措施。     

抗狂犬病病毒CVS-11株单克隆抗体的制备及鉴定

目的 制备抗狂犬病毒单克隆抗体,为建立快速准确的狂犬病毒抗原检测方法奠定基础.方法 将狂犬病病毒CVS-11株纯化浓缩后免疫6～8周龄雌性BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,经细胞克隆和间接ELISA筛选,获得稳定分泌抗狂犬病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株.小鼠腹腔注射法制备大量单克隆抗体并测定腹水效价,用G蛋白亲和层析柱进行纯化,间接ELISA法和间接荧光法鉴定单克隆抗体的类型、特异性及敏感性.结果 细胞融合率达100%,经克隆筛选获4株稳定分泌抗狂犬病病毒抗体的杂交瘤细胞株,其腹水效价分别为1×104,1×105,1×104和1×105;4株单抗均为IgG类型且特异性好.结论 制备的单抗具有良好特异性和敏感性.     

一对高亲和力抗人肌钙蛋白Ⅰ单克隆抗体的制备及鉴定

目的 获取抗人肌钙蛋白Ⅰ（cTnI）的单克隆抗体（McAb）.方法 以人cTnI作为抗原,免疫Balb/c小鼠,通过杂交瘤技术制备了抗人cTnI高亲和力、高特异性单克隆抗体.随后采用间接ELISA法测定抗血清效价,用protein G亲和纯化法纯化抗体,抗原竞争ELISA法鉴定抗体亲和力,SDS-PAGE法鉴定纯度,Western blotting鉴定抗cTnI单克隆抗体的特异性,竞争ELISA法分析抗原结合位点.结果 筛选出9株稳定分泌抗cTnI的单抗杂交瘤细胞株,其中A3、A9两株免疫球蛋白亚类均为IgG2a,分泌的抗体纯度高,与CK-MB、cTnT无交叉反应,效价均为：1：1024000,亲和力分别为4.21×10^8mol/L、1.07×10^8mol/L,抗原结合位点不同.结论 成功制备出了一对高亲和力、高特异性抗人cTnI单克隆抗体.