参麦注射液对人脐静脉血管内皮细胞的作用研究

目的：研究参麦注射液对心血管系统疾病的作用机制。方法：用参麦注射液与人脐静脉血管内皮细胞(human umbilicalvein endothelial cell,ECV-304)共同培养后,采用MTT法及形态学方法观察参麦注射液对人脐静脉血管内皮细胞的作用。结果：发现不同浓度计量的参麦注射液对人脐静脉血管内皮具有增殖／抑制两种不同的效应,且成正相关关系。     

黄芪提取物对人脐静脉内皮细胞的促血管新生作用

目的:研究黄芪提取物(RAE)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的促血管新生作用。方法:以体外培养HUVEC为模型,XTT法及细胞计数法检测不同剂量黄芪提取物对细胞增殖的影响;细胞迁移实验检测加药后细胞迁移能力;采用Transwell chamber进行细胞侵入实验检测黄芪提取物对细胞侵入能力的影响;管形形成实验观察加入黄芪提取物后细胞分化情况。结果:XTT法检测HUVEC在黄芪提取物浓度为12.5μg/ml时产生最大增殖效应,增殖率为42.04%。细胞计数法测得在黄芪提取物浓度为25μg/ml时细胞数目比对照组增多124.64%。同时发现在黄芪提取物浓度为25μg/ml时能够最大能力地诱导细胞侵入和管形形成,其侵入率为66.68%,管形分枝点增值率为44.38%;而在浓度为12.5μg/ml时能够最大限度地诱导细胞迁移,迁移率为74.94%。结论:黄芪具有促进血管新生的作用。     

人脐静脉内皮细胞的体外培养

内皮细胞位于血管内壁，观在认为它是一个活跃的“内分泌器官”，参与了机体许多生理病理变化过程，是许多疾病（如动脉粥样硬化等）发生的始动机制。因此研究内皮细胞的功能及在疾病中的作用，可以从分子细胞角度进一步探讨疾病发生的本质，为治疗和预防疾病提供新的思路。为此，体外培养人体内皮细胞已成为完成科研任务的一个重要手段。新生儿脐带来源丰富，取材方便，目前已成为血管内皮细胞体外实验的的重要材料。在实验中、逐步摸索人脐静脉内皮细胞在体外培养的适宜条件，以确定内皮细胞体外生长繁殖的最佳环境，为进一步的研究提供重要手段。     

四妙勇安汤对人脐静脉血管内皮细胞ECV304的增殖作用

目的:以血清药理学的方法观察血四妙勇安汤对于培养人脐静脉内皮细胞ECV304增殖的影响,为治疗性血管新生的靶基因选择提供线索。方法:取对数生长期的内皮细胞,同步化于G0期,ELISA法检测BrdU的掺入;用流式细胞仪分析细胞周期各时相分布。结果:与空白血清对照组相比,10%的四妙勇安汤含药血清体积添加分数可显著提高BrdU的掺入量,促进DNA合成,提高ECV304细胞周期S期所占比例。结论:10%的四妙勇安汤含药血清能促进内皮细胞ECV304DNA合成,加快细胞周期进程,从而对其增殖具有促进的作用,可能具有血管生成的作用。     

鞣花酸体外抗人脐静脉血管内皮细胞血管生成

目的观察鞣花酸体外抗人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)血管生成作用,以及对PDGFB,JAK/STAT表达的影响。方法采用SRB法、划痕法及Matrigel体外成管实验分别考察鞣花酸对HUVEC增殖、迁移及小管形成的影响;采用逆转录-聚合酶链(RT-PCR)法、酶联免疫法(ELISA)法、免疫印迹法(Western blot)分别观察鞣花酸对HUVEC细胞PDGFB mRNA表达、对细胞上清中PDGFB分泌及对细胞中PDGFB、STAT3、p-STAT3蛋白表达水平的影响。结果鞣花酸能显著抑制HUVEC增殖、迁移和小管形成(P0.01或P0.05),其增殖抑制作用呈时间和浓度依赖性,迁移和小管形成抑制作用呈剂量依赖性。同时,鞣花酸能显著降低PDGFB基因和蛋白表达水平(P0.01或P0.05),降低STAT3蛋白的磷酸化水平(P0.01或P0.05),而对STAT3蛋白表达总量无变化。结论鞣花酸可能通过下调内皮细胞中PDGFB的表达并进一步抑制下游STAT3蛋白磷酸化来抑制血管生成。     

夏枯草抑制人脐静脉血管内皮细胞增殖的实验研究

目的探讨夏枯草（Spica Prunellae）对体外培养的人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）增殖的抑制作用，并从增殖细胞核抗原（PCNA）方面研究其抑制HUVEC增殖的作用机制。方法采用HUVEC为材料．取生长良好的HUVEC用于实验，利用100umol／L二氯化钴（CoCl2）诱导HUVEC增殖，同时分别将10mg／ml、20mg／ml、40mg／ml的夏枯草作用于增殖状态下的HUVEC24小时，进行以下的研究：①CCK-8法检测不同浓度夏枯草对HUVEC增殖的抑制程度；②流式细胞仪检测夏枯草对HUVEC核内PCNA蛋白表达的影响。结果①夏枯草明显抑制CoCl2诱导的HUVEC增殖，并且有剂量依赖关系。②夏枯草能够显著降低HUVEC核内PCNA蛋白表达，从而抑制细胞增殖，并具有剂量依赖关系。结论夏枯草能够明显抑制HUVEC的增殖。     

阿魏酸对人脐静脉血管内皮细胞ECV304的增殖作用

目的：观察阿魏酸对于培养人脐静脉内皮细胞ECV304增殖的影响,为治疗性血管新生的靶基因选择提供依据。方法：取对数生长期的内皮细胞,分为阿魏酸低、中、高浓度组,同步化于G0期,ELISA法检测BrdU的掺入;RT-PCR法检测血管内皮细胞生长因子（VEGF）mRNA的表达情况。结果：与对照组相比,不同浓度阿魏酸均可显著提高BrdU的掺入量,上调VEGFmRNA的表达,且在10^2ng/ml～10^4ng/ml之间呈一定的量效关系。结论：阿魏酸能显著促进体外培养的ECV304细胞的增殖,可能具有血管新生的作用。     

大鼠脑微血管内皮细胞的原代培养与鉴定

目的:探索纯度较高、相对经济简便的大鼠脑微血管内皮细胞分离和原代培养的方法。方法:取1～10 d SD大鼠脑皮质经胰蛋白酶消化后,通过不同孔径的筛网过滤,再用胶原酶2次消化获得的微血管内皮细胞进行培养,采用相差显微镜形态学观察及Ⅷ因子相关抗原免疫组化鉴定。结果:1～2 d细胞呈区域性单层贴壁生长,7～9 d呈典型的铺路卵石样征象,Ⅷ因子相关抗原免疫组化检测内皮细胞表达阳性,可见细胞的胞浆及核周呈棕黄色,胞核呈阴性,阳性细胞占绝大部分。结论:采用2次消化、2次过滤技术可以成功分离培养出较理想的大鼠脑微血管内皮细胞。     

川芎嗪对培养人脐静脉内皮细胞基因表达谱的影响

目的：研究川芎嗪对培养人脐静脉内皮细胞基因表达谱的影响，探讨川芎嗪保护内皮细胞的分子机制。方法：制备包含500个心血管疾病相关基因的寡核苷酸芯片；运用制备的心血管寡核苷酸芯片研究川芎嗪对培养人脐静脉内皮细胞基因表达谱的影响。结果：川芎嗪(40微克／毫升)作用培养内皮细胞24小时后，寡核苷酸芯片分析筛选出川芎嗪对内皮细胞的影响基因25个，其中上调基因7个，下调基因18个，包括一些与免疫、血管舒缩、细胞粘附、凝血、抗氧化、细胞生长、信号转导及物质代谢的相关基因。结论：川芎嗪在基因水平通过多环节调节内皮功能。     

蛇床子素对高糖诱导人脐静脉血管内皮细胞损伤的保护作用

目的研究蛇床子素对高糖诱导原代培养人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)炎症的保护作用。方法将HUVEC细胞分为对照组、高糖组、对照+蛇床子素组和高糖+蛇床子素组。培养5 d后,采用硝酸还原酶法测定细胞上清液中一氧化氮(NO),荧光酶标仪测定细胞内活性氧(ROS),并通过real-time PCR和Western blot法检测趋化因子CCL5及其受体CCR5 mRNA和蛋白的表达。结果高糖明显降低对照组细胞上清液中NO水平同时升高ROS,蛇床子素能增加高糖组细胞上清液中NO水平同时降低高糖组细胞内ROS;real-time PCR和Western blot结果显示蛇床子素可以降低高糖组细胞CCL5及其受体CCR5 mRNA和蛋白的表达量。结论蛇床子素对高糖诱导的人脐静脉血管内皮细胞的损害具有保护作用是与其抗氧化应激及抗炎作用有关。     

消渴通痹颗粒对高糖诱导的HUVEC屏障功能的影响及保护作用

目的:观察益气活血中药消渴通痹颗粒对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)屏障功能及紧密连接蛋白(ZO-1)、闭合蛋白(Occludin)表达的影响,探讨消渴通痹颗粒保护糖尿病周围神经病变内皮细胞屏障功能的作用及机理。方法:将不同浓度的消渴通痹颗粒含药血清和5.5 mmol/L葡萄糖作用于HUVEC 24 h,MTT法检测细胞的存活率,确定消渴通痹颗粒含药血清的给药浓度。根据葡萄糖的浓度和消渴通痹颗粒含药血清的浓度将实验分为正常对照组,高糖模型组和消渴通痹颗粒22.5 g/kg含药血清组。各组细胞传代8代～15代时,应用HRP检测HUVEC单层通透性;流式细胞术检测HUVEC凋亡;免疫荧光法、流式细胞术检测紧密连接蛋白ZO-1、Occludin的表达。结果:与正常对照组相比,5%、10%消渴通痹颗粒22.5 g/kg含药血清组的存活率明显升高(P<0.05),15%、20%消渴通痹颗粒22.5 g/kg含药血清组的存活率明显下降(P<0.05或P<0.01),故而确定消渴通痹颗粒含药血清的浓度为5%、10%、15%。与正常对照组相比,高糖模型组单层通透性增加,凋亡率显著上升,ZO-1、Occludin蛋白的表达减少、荧光信号减弱、边缘粗糙、细胞与细胞之间的连接有断裂(P<0.05或P<0.01)。与高糖模型组相比,5%、10%消渴通痹颗粒22.5 g/kg含药血清组单层通透性降低,凋亡率下降,ZO-1、Occludin的蛋白表达上调、荧光信号加强、边缘趋于光滑、细胞与细胞之间连接紧密(P<0.05或P<0.01);15%消渴通痹颗粒22.5 g/kg含药血清组单层通透性降低,凋亡率下降,Occludin蛋白表达下调、荧光信号减弱(P<0.05或P<0.01),ZO-1蛋白表达变化不明显(P>0.05)。结论:益气活血中药消渴通痹颗粒改善了高糖诱导的HUVEC细胞屏障功能,其机制可能与增加紧密连接蛋白ZO-1、Occludin的表达有关。     

高血压病血瘀证患者血清对人脐静脉内皮细胞活性和形态的影响

目的:研究高血压病血瘀证患者血清对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)细胞活性和形态学的影响,从而为从分子水平探讨保护VEC的作用机制奠定基础。方法:通过高血压病患者血清损伤正常培养的人脐静脉内皮细胞(CRL-1730),分别观察12 h、24 h、36 h各组血清对人脐静脉内皮细胞(CRL-1730)形态学的影响,并通过CCK-8法检测人脐静脉内皮细胞活性,流式细胞术检测人脐静脉内皮细胞CD31的阳性表达率。结果:实验各组与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.001);血瘀证组与非血瘀证组比较,差异有统计学意义(P<0.001),血瘀证组与正常组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。CD31的阳性率为85.12%。结论:人脐静脉内皮细胞在受到受试者血清中营养物质促进生长的同时,还受到血清中致伤因素的影响,高血压病血瘀证患者血清中的致伤因素与非血瘀证组和正常组比较,可能更多或更强。     

防己黄芪汤对脐静脉内皮细胞功能的影响

目的:防己黄芪汤对血管内皮生长因子(VEGF)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖、迁移、黏附、侵袭及管腔形成能力的作用.方法:VEGF(20μg·L-1)体外诱导HUVECs,加入不同质量浓度防己黄芪汤(0.25,0.5,1g·L-1)作用后,分别采用噻唑蓝(MTT)比色法、划痕修复实验、转移小室(transw...     

四妙勇安汤对缺氧人脐静脉内皮细胞的影响

目的观察四妙勇安汤对体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)缺氧损伤模型的影响。方法实验分为3组,即正常组、模型组、四妙勇安汤组,后2组建立体外细胞缺氧模型,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验观察四妙勇安汤对缺氧内皮细胞存活率的影响,测定四妙勇安汤对缺氧内皮细胞乳酸脱氢酶(LDH)漏出量的影响,并用免疫荧光法检测细胞中血管内皮生长因子(VEGF)生成量的表达。结果四妙勇安汤能显著增加MTT实验中各孔吸光度值,降低LDH漏出量,增加VEGF的生成量。结论四妙勇安汤具有保护缺氧的HUVEC损伤的作用,其作用机制与增加细胞活性、降低缺氧造成的细胞毒性、增加VEGF的表达、促进血管新生的作用有关。     

蒲黄提取物抗人脐静脉内皮细胞氧化损伤的研究

目的：研究蒲黄提取物对氧化低密度脂蛋白（Ox-LDL）诱导人脐静脉内皮细胞（HUVECs）脂质过氧化的影向。方法：体外培养人脐静脉内皮细胞,采用MTT法测定不同浓度蒲黄提取物对内皮细胞有无毒性。根据MTT法的结果,采用蒲黄提取物（10mg/L,50mg/L,100mg/L）预处理细胞24h,再加入100mg/L Ox-LDL造成细胞损伤,检测细胞培养液中乳酸脱氢酶（LDH）的活性、丙二醛（MDA）的含量及超氧化物歧化酶（SOD）的活力。结果：Ox-LDL损伤组LDH的活性、MDA的含量显著升高,SOD的活力显著降低,与正常对照组比较有显著差异（P〈0.05）;10、50、100mg/L蒲黄提取物可显著降低LDH的活性、MDA的含量,提高SOD的活力。结论：蒲黄提取物可通过抗脂质过氧化,清除自由基起到保护血管内皮细胞的作用。     

人脐静脉内皮细胞与成骨细胞共培养对成骨细胞功能的影响

目的:建立人脐静脉内皮细胞与人成骨细胞共育系,观察人脐静脉内皮细胞在共育系中对人成骨细胞功能的影响,进一步探讨人脐静脉内皮细胞对成骨细胞骨形成能力的影响。方法:采用二维共培养模型建立人内皮细胞/成骨细胞(1∶1)共育系,运用噻唑蓝比色法(MTT),分别在1d、3d、5d、7d时观察人脐静脉内皮细胞与成骨细胞单体培养以及共育系中的增殖情况;同时,运用蛋白免疫印迹方法(In cell western blot)分别测定人成骨细胞单体培养和共育系中骨保护素/破骨细胞分化因子配体(OPG/RANKL)蛋白的表达情况。采用方差分析比较不同状态下细胞增殖能力和蛋白表达的差异性。结果:从第3天开始,共育系中人成骨细胞的增殖能力明显优于成骨细胞单体培养;两者比较差异有统计学意义(P<0.05);于细胞培养第8天时分别测定人成骨细胞单体培养组和共育系中OPG/RANKL蛋白的表达,观察到共育系中(10.82±1.08)OPG蛋白表达量明显优于人成骨细胞单体培养组(6.65±0.43),两者比较差异有统计学意义(P<0.05);而共育系中(7.33±0.22)RANKL蛋白的表达含量与人成骨细胞单体培养(7.37±0.85)时表达无差异。结论:人脐静脉内皮细胞与人成骨细胞具有良好的相容性,两种细胞之间具有相互协同效应;人脐静脉内皮细胞可能通过促进OPG蛋白的表达来促进成骨细胞骨形成的作用。     

风湿祛痛胶囊对VEGF诱导的人脐静脉内皮细胞功能的影响

目的:观察风湿祛痛胶囊对血管内皮细胞生长因子(VEGF)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的增殖、迁移、黏附、侵袭和管腔形成能力的影响,以及对VEGF受体2(VEGFR2)的干预作用。方法:VEGF体外诱导HUVEC,加入风湿祛痛胶囊低、中、高质量浓度(0. 02,0. 1,0. 5μg·L-1)作用后,分别采用噻唑蓝(MTT)比色法、转移小室(transwell)法、黏附实验、细胞侵袭及管腔形成实验检测HUVEC的增殖活性、迁移、黏附、侵袭及管腔形成能力,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞中VEGFR2磷酸化水平和蛋白含量,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测VEGFR2 mRNA表达水平。结果:与正常组比较,VEGF诱导24,48 h后均能显著升高HUVEC的增殖活性(P 0. 01),诱导24 h能明显升高HUVEC的迁移、黏附、侵袭和管腔形成能力(P 0. 01),显著升高HUVEC中VEGFR2磷酸化及蛋白和mRNA表达水平(P 0. 01);与VEGF组比较,风湿祛痛胶囊低、中、高质量浓度组作用48 h均能明显抑制HUVEC增殖活性(P 0. 05,P 0. 01),作用24 h对VEGF诱导的HUVEC迁移、黏附、侵袭和管腔形成能力有明显抑制作用(P 0. 05),也能下调VEGFR2磷酸化及蛋白和mRNA表达水平(P 0. 05)。结论:风湿祛痛胶囊能降低VEGF诱导的HUVEC细胞增殖、迁移、黏附、侵袭及管腔形成能力,这一作用可能与其抑制VEGFR2的磷酸化、蛋白和mRNA表达水平有关。     

糖痹康对高糖损伤人脐静脉内皮细胞的保护作用

目的:观察糖痹康大鼠含药血清对高糖造成人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤的保护作用。方法:以CCK-8法观察不同浓度葡萄糖对人脐静脉内皮细胞活力的影响;根据实验结果选择葡萄糖浓度为5.55mmol/L组为正常组,葡萄糖浓度为25mmol/L组做为模型组。然后制备正常组,弥可保组,糖痹康组的大鼠含药血清,将含药血清作用于高糖损伤的人脐静脉内皮细胞,分为正常组、高糖模型组、高糖弥可保组、高糖糖痹康低、中、高剂量组,并通过测定培养液中丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)、一氧化氮(NO)含量与超氧化物歧化酶(SOD)活力,探讨糖痹康对血管内皮细胞损伤的保护作用。结果:与高糖模型组比较,糖痹康含药血清能减少细胞MDA、LDH释放量,提高SOD活力及NO含量。结论:糖痹康对高糖损伤的血管内皮细胞有一定的保护作用,间接的起到对周围神经的保护作用。