卵巢颗粒细胞高尔基体磷酸化蛋白3表达对颗粒细胞凋亡及卵母细胞发育潜能的影响

目的:探讨卵巢颗粒细胞高尔基体磷酸化蛋白3(Golgi phosphoprotein 3,GOLPH3)表达对颗粒细胞凋亡及卵母细胞发育潜能的影响。方法:收集2016年5月—2017年4月因输卵管性不孕行体外受精-胚胎移植(IVF-ET)助孕的80例患者的卵巢颗粒细胞,根据妊娠结局分为临床妊娠组40例、未妊娠组40例。采用免疫细胞化学、蛋白质印迹(Western blotting)方法检测2组患者颗粒细胞GOLPH3、Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白的表达,采用实时聚合酶链反应(real-time PCR)方法检测2组患者GOLPH3、Bcl-2、Bax、Caspase-3基因表达,并进行相关性分析。结果:GOLPH3、Bcl-2、Bax、Caspase-3在2组颗粒细胞中均有表达,其中临床妊娠组GOLPH3、Bcl-2的表达高于未妊娠组(P0.05),而Bax、Caspase-3的表达低于未妊娠组(P0.05)。相关性分析显示,GOLPH3表达与Bcl-2表达呈显著正相关(P0.001),与Bax、Caspase-3表达呈显著负相关(均P0.001),与优质胚胎数、优质囊胚数、可利用胚胎数呈显著正相关(均P0.001)。结论:卵巢颗粒细胞中GOLPH3表达水平可能通过Bcl-2、Bax、Caspase-3凋亡信号转导通路调控颗粒细胞凋亡作用,并进而对卵母细胞的发育潜能产生影响。     

罗格列酮对2型糖尿病大鼠心肌细胞凋亡及其基因表达的影响

目的　观察 2型糖尿病大鼠心肌细胞凋亡率、凋亡调控基因Bax、Bcl-2的表达变化及罗格列酮的干预作用。方法　8周龄SD大鼠高热量饮食一月后 ,腹腔注射小剂量链脲佐菌素 (STZ 3 0mg/kg) ,成模后分别于 12、2 4周宰杀动物 ,采用光镜、原位末端标记法、流式细胞术检测心肌细胞凋亡及心肌Bax、Bcl -2表达水平。结果　糖尿病大鼠心肌凋亡细胞数明显增多 ,Bax蛋白表达显著上调 ,Bax/Bcl-2比值增加 (P均 <0 0 1) ,Bcl -2蛋白表达有所下降 ,但无统计学意义。罗格列酮干预组凋亡率降低 (P <0 0 1) ,升高的Bax蛋白表达下调 ,降低的Bcl -2蛋白表达上调 ,但与糖尿病未治疗组均无统计学差异 (P >0 0 5 )。结论　心肌细胞凋亡在糖尿病大鼠心肌病变进程中起一定作用 ,罗格列酮可抑制心肌细胞凋亡 ,但与Bax、Bcl -2的调控关系不大。     

多囊卵巢综合征患者BMP15及其受体BMPRⅡ异常表达对颗粒细胞增殖的影响

目的 探讨PCOS患者卵泡液中BMP15及其受体BMPRⅡ的异常表达对颗粒细胞增殖的影响及对IVF结局的影响. 方法 将216例行体外受精-胚胎移植技术(IVF-ET)或卵胞质内单精子显微注射(ICSI)助孕治疗的患者分为PCOS组(138例)与正常排卵组(78例),分析两组的临床及IVF指标,检测并比较两组卵泡液BMP15及颗粒细胞的BMPRⅡ、Bcl-2及Caspase-3的表达水平,采用流式细胞仪对患者颗粒细胞的凋亡率进行检测分析. 结果 两组MⅡ卵率、受精率、优质胚胎率、临床妊娠率比较,差异无统计学意义;PCOS组年龄、BMI指数、基础性激素E2、LH、获卵数及T水平高于对照组,可移植胚胎率、PRL、基础FSH水平及Gn用量低于对照组,差异均有统计学意义.PCOS组颗粒细胞凋亡细胞的DNA含量高于对照组,卵丘颗粒细胞内Bcl-2转录水平低于对照组,而Caspase-3及BMPRⅡmRNA转录水平高于对照组,差异均有统计学意义.PCOS组卵泡液中BMP15低于对照组,差异有统计学意义. 结论 PCOS患者体内卵源性因子BMP15及其受体BMPRⅡ的异常表达可能是影响颗粒细胞增殖能力的原因之一.     

Bcl-2/Bax蛋白表达与星形细胞瘤恶性程度的相关性研究

目的　探讨星形细胞瘤中Bcl -2和Bax蛋白表达与其恶性程度的关系。方法　用免疫组织化学法和原位缺口末端标记 (TUNEL)法分别检测 10例正常脑组织和 80例经病理证实的不同恶性程度的星形细胞瘤中Bcl-2、Bax蛋白表达阳性率和凋亡细胞百分率。结果　正常脑组织中未见Bcl -2和Bax蛋白阳性表达 ,且凋亡细胞百分率仅为 (0 6± 0 1) % ;不同恶性程度的星形细胞瘤间Bcl-2、Bax蛋白表达阳性率和凋亡细胞百分率的差异有显著性 (P <0 0 5 ) ,且随着恶性程度的增高 ,Bcl -2蛋白表达阳性率有降低的趋势 ,而Bax蛋白表达阳性率和凋亡细胞百分率均有升高的趋势。相关分析显示 ,星形细胞瘤的恶性程度与Bax蛋白表达阳性率和凋亡细胞百分率呈正相关 (r =0 90 1,P <0 0 5 ) ,而与Bcl-2蛋白表达阳性率呈负相关 (r =-0 93 2 ,P <0 0 5 )。结论　Bcl -2、Bax蛋白表达阳性率和凋亡细胞百分率可能与星形细胞瘤的恶性程度有关     

重度妊娠高血压综合征患者血清诱导的脐血管内皮细胞凋亡失衡与肿瘤坏死因子的关系

目的：探讨重度妊娠高血压综合征(简称妊高征)患者血清对体外培养的脐血管内皮细胞(HUVEC)凋亡和对抑／促凋亡基因Bcl-2／Bax表达的影响以及与肿瘤坏死因子α(TNFα)的关系。方法：体外培养HUVEC，加入重度妊高征患者血清和TNFa作为处理因素，免疫细胞化学检测Bcl-2／Bax蛋白表达；流式细胞仪做凋亡细胞记数；扫描电镜观察细胞变化。结果：轻重度妊高征患者血清处理后的HUVEC Bcl-2／Bax表达失衡，凋亡细胞数增加，扫描电镜可见经TNFα处理后的内皮细胞变圜，微绒毛消失，密度增高，可见凋亡小体。结论：TNFα可诱导体外培养的脐血管内皮细胞凋亡，并可引起凋亡相关基因Bcl-2／Bax表达失衡，可能是引起妊高征血管内皮细胞损伤的原因之一。     

铝致大鼠海马神经细胞凋亡及对Bcl-2和Bax表达的影响

[目的]探讨铝对大鼠海马神经细胞凋亡及Bcl-2、Bax表达的影响。[方法]健康雄性SD大鼠40只,按体重随机分为4组:生理盐水组(对照组)、Al3+2.5mg/kg组、Al3+5mg/kg组、Al3+10mg/kg组。AlCl3溶液腹腔注射染毒,60d后处死,用TUNEL法检测细胞凋亡,免疫组化法测Bcl-2、Bax的表达,并用图像分析系统进行结果分析。[结果]随着染铝剂量的增高,大鼠海马神经细胞凋亡指数升高,存在剂量-效应关系(P<0.05)。各染铝组Bcl-2表达下降,Bax表达显著升高,Bcl-2/Bax逐渐下降,存在剂量-效应关系(P<0.05);海马神经细胞凋亡指数与Bcl-2呈负相关(r=一0.924,P<0.01),与Bax呈正相关(r=0.804,P<0.01),与Bcl-2/Bax表达比值呈负相关(r=-0.872,P<0.01)。[结论]铝可以诱导大鼠海马神经细胞凋亡,其机制可能与Bcl-2表达下调,Bax表达上调以及Bcl-2/Bax表达比值下降有关。     

重度妊娠高血压综合征患者血清诱导的脐血管内皮细胞凋亡失衡与肿瘤坏死因子的关系

目的:探讨重度妊娠高血压综合征(简称妊高征)患者血清对体外培养的脐血管内皮细胞(HUVEC)凋亡和对抑／促凋亡基因Bcl-2／Bax表达的影响以及与肿瘤坏死因子α(TNFα)的关系。方法:体外培养HIJVEC,加入重度妊高征患者血清和TNFα作为处理因素,免疫细胞化学检测Bcl-2／Bax蛋白表达;流式细胞仪做凋亡细胞记数;扫描电镜观察细胞变化。结果:轻重度妊高征患者血清处理后的HUVEC Bcl-2／Bax表达失衡,凋亡细胞数增加,扫描电镜可见经TNFα处理后的内皮细胞变圆,微绒毛消失,密度增高,可见凋亡小体。结论:TNFα可诱导体外培养的脐血管内皮细胞凋亡,并可引起凋亡相关基因Bcl-2／Bax表达失衡,可能是引起妊高征血管内皮细胞损伤的原因之一。     

Nano-Se对镉致睾丸间质细胞凋亡保护作用的研究

目的探究纳米硒(nano-selenium,Nano-Se)通过调节Bax/Bcl-2比值对镉(cadmium,Cd)致小鼠睾丸间质细胞(TM3)凋亡的保护作用。方法试验分为5组,即对照组、镉染毒组、低剂量纳米硒组、中剂量纳米硒组和高剂量纳米硒组。其中镉染毒剂量为20μmol/L;纳米硒处理剂量分别为5、10和20μmol/L。采用CCK-8检测细胞活力,Hoechst染色检测凋亡,通过Western Blot检测Bax和Bcl-2蛋白的表达以及Bax/Bcl-2比值的变化情况。结果:与对照组相比,Cd能使TM3细胞形态改变,造成细胞损伤,导致细胞活力明显下降(P0.05),使Bax/Bcl-2比值明显升高(P0.05)诱发TM3细胞凋亡。而与Cd组相比,Nano-Se能够抑制Cd对TM3细胞的毒性作用,提高细胞活力(P0.05),降低Bax/Bcl-2比值(P0.05)和TM3细胞的凋亡水平。结论 Nano-Se对Cd致TM3细胞毒性损伤具有保护作用,可能降低TM3细胞中Bax/Bcl-2比值,从而抑制TM3细胞凋亡。[营养学报,2019,41(6):601-605]     

多囊卵巢综合征患者BMP-7异常表达对颗粒细胞增殖的影响

目的探讨PCOS患者颗粒细胞内BMP-7的异常表达对颗粒细胞增殖的影响。方法将44例行体外受精-胚胎移植技术(IVF-ET)或卵胞质内单精子显微注射(ICSI)助孕治疗的患者分为PCOS组(33例)与正常排卵对照组(11例),检测并比较两组颗粒细胞的BMP7、Bcl-2及Caspase-3的表达水平,采用流式细胞仪对患者颗粒细胞的凋亡率进行检测分析。结果与两组腰臀比(WHR)及超排天数比较,差异无统计学意义;PCOS组年龄、FSH及Gn用量均低于对照组,而BMI、LH、E_2、T值高于对照组,差异均有统计学意义。PCOS组颗粒细胞凋亡细胞的DNA含量高于对照组,卵丘颗粒细胞内Bcl-2低于对照组,Caspase-3转录水平PCOS组高于对照组,差异均有统计学意义,而两组BMP7转录水平差异无统计学意义。结论 PCOS患者颗粒细胞内BMP7的异常表达可能是影响颗粒细胞增殖能力的原因之一。     

亚砷酸钠对人正常肝细胞凋亡及Bax和Bcl-2 mRNA和蛋白表达的影响

目的探讨亚砷酸钠对人正常肝(L-02)细胞凋亡及Bax、Bcl-2 m RNA和蛋白表达的影响。方法将L-02肝细胞分别暴露于含0(对照)、50、100、150μmol/L亚砷酸钠的培养基中暴露24 h。采用MTT法检测L-02肝细胞的存活率,采用流式细胞术检测L-02肝细胞凋亡率,采用RT-PCR的方法检测Bax、Bcl-2 m RNA相对表达情况,采用Westernblotting方法检测L-02肝细胞中Bax、Bcl-2蛋白的表达情况。结果与对照组相比,各浓度亚砷酸钠染毒组L-02细胞的存活率均较低,凋亡率均较高,差异均有统计学意义(P0.05);且随着亚砷酸钠染毒浓度的升高,L-02细胞的存活率呈下降趋势,而凋亡率上升趋势。与对照组相比,各浓度亚砷酸钠染毒组L-02细胞中Bcl-2、Bax m RNA和蛋白的表达水平均较高,100μmol/L亚砷酸钠染毒组Bcl-2 m RNA/Bax m RNA值也较高,而150μmol/L亚砷酸钠染毒组Bcl-2 m RNA/Bax m RNA值及50、150μmol/L亚砷酸钠染毒组Bcl-2蛋白/Bax蛋白值均较低,差异均有统计学意义(P0.05)。结论亚砷酸钠可抑制L-02肝细胞的生长,诱导细胞凋亡的发生;其机制可能与Bcl-2家族的激活有关。     

小剂量地塞米松不能改善体外受精-胚胎移植治疗过程及结局

目的:探讨小剂量地塞米松是否改善IVF-ET促排卵过程及其妊娠结局。方法:按照随机原则,将88例(88个周期)进行体外受精-胚胎移植(IVF-ET)治疗的,并因输卵管所致的不孕患者分为观察组(促排卵同时加用小剂量地塞米松,n=36)和对照组(常规IVF治疗,不加用地塞米松,n=52),比较两组的促排卵天数、Gn用量、获卵数、优质胚胎率、受精率、生化及临床妊娠结局。结果:观察组(运用小剂量地塞米松组)与对照组相比,各项参数值均无明显差异(P>0.05)。结论:运用小剂量地塞米松并不能改善因输卵管因素所致的不孕患者的IVF-ET促排卵过程和妊娠结局。     

35岁以上不孕妇女IVF-ET的临床分析

目的:分析35岁以上不孕妇女接受IVF-ET治疗的结局,以更好的指导临床。方法:回顾性分析2004年6月~2006年12月在我院接受IVF-ET助孕治疗的98例35岁以上妇女的临床资料。结果:根据年龄分为<40岁组和≥40岁组,两组患者在获卵数,受精率,种植率和生化妊娠率方面差异有统计学意义(P<0.05);根据基础FSH值分为≤12mIU/mL组,12~20mIU/mL组和20.1~32mIU/mL组,3组在周期取消率、Gn用量和获卵数方面差异有统计学意义(P<0.05)。结论:基础FSH与年龄相比,年龄更能预测IVF的成功率。没有理由把基础FSH值升高的高龄妇女排除在IVF治疗之外,通过IVF治疗她们仍然有受孕的可能。     

CD9、GPI-AP在卵母细胞表面的表达及其在精卵融合中的作用

目的:探讨CD9(cluster of differentiation9)、CPI-AP(glycosylphosphatidy-linositol anchored proteins)在卵母细胞膜表面的表达及其在精卵融合过程中的作用。方法:用免疫组化法测定CD9和GPI锚定蛋白在正常和未受精卵细胞膜上的表达,通过加入单克隆抗体观察其对受精率的影响,并计算阳性表达率与受精率的关系。结果:①CD9、GPI-AP主要在正常卵母细胞表面表达,在未受精卵母细胞呈低表达,CD9及GPI-AP在正常卵母细胞膜表面的阳性表达率(70.0%,63.3%)明显高于未受精卵母细胞膜表面的阳性表达率(24.0%,28.0%),差异有统计学意义(P0.005)。②随着CD9及GPI-AP单克隆抗体的浓度增加,受精率显著下降,提示CD9在精卵融合中起着重要的作用,且呈剂量依赖性。③受精率与卵母细胞表面CD9、GPI-AP阳性表达率具有相关性(P0.05)。结论:CD9、GPI-AP在精卵融合过程中起重要作用,其检测对精卵融合的发生有预测意义。     

双侧输卵管切除术对卵巢反应性的影响

目的:探讨双侧输卵管切除术在体外授精-胚胎移植(IVF-ET)中超促排卵对卵巢储备功能的影响。方法:以双侧输卵管积水或双侧输卵管异位妊娠行双侧输卵管切除术的患者33例为研究组,以同期双侧输卵管堵塞的不孕患者70例为对照组,比较两组患者IVF术超促排卵周期中促性腺激素(Gn)用量、用药天数、获卵情况、受精率及妊娠率。结果:两组的促性腺激素(Gn)用量及用药天数均衡,研究组的卵泡数、获卵子数小于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),但受精率与妊娠率两组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论:输卵管切除术对IVF-ET妊娠率无显著影响,但会降低卵巢的储备功能。因此输卵管切除术的实施对需要保留生育功能的患者要慎重。     

过氧化物还原酶4蛋白对小鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响及机制

目的:探讨过氧化物还原酶4(Prdx4)蛋白对小鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响及相关机制.方法:免疫荧光明确Prdx4在人卵巢颗粒细胞(KGN)中的定位;利用Prdx4小干扰RNA(siRNA)转染小鼠卵巢颗粒细胞,以空白组作为对照,蛋白质印迹法检测Prdx4表达水平以验证干扰效果,并检测2组颗粒细胞凋亡相关因子[B细胞淋巴...     

骨形态发生蛋白15调控卵泡发育及与生殖内分泌疾病的关系

骨形态发生蛋白15（bone morphogenetic protein 15,BMP15）作为卵母细胞分泌因子,在调控卵泡发育过程中起着重要的作用。BMP15通过协同双调蛋白、上调卵丘扩张基因的表达,促进卵母细胞发育成熟;BMP15能增加颗粒细胞对卵泡刺激素（follicle-stimulating hormone,FSH）的敏感性,刺激颗粒细胞中Kit配体的表达从而促进颗粒细胞的增殖分化;BMP15通过调节卵泡凋亡相关因子的表达抑制卵泡闭锁;BMP15还可通过调节FSH受体及下游Smad信号通路介导对类固醇激素的调节。BMP15表达降低或基因突变,可能通过诱导颗粒细胞凋亡,阻碍早期卵泡发育及卵子发生过程,介导多囊卵巢综合征、早发性卵巢功能不全等多种疾病的发生。综述BMP15在卵泡发生过程中的作用及与相关生殖内分泌疾病的最新研究进展。     

MIS,IGF-Ⅱ对人卵巢黄素化颗粒细胞分泌功能的影响

目的:探讨MIS,IGF-Ⅱ对人卵巢黄素化颗粒细胞分泌雌激素的影响。方法:体外受精-胚胎移植(IVF-ET)患者经阴道超声引导下取卵,剥离卵母细胞周围的颗粒细胞作体外培养,培养48h后更换无血清培养基,在有或无卵泡刺激激素(FSR)的作用下,分别加入基因重组人苗勒氏管抑制因子(rhMIS)及人胰岛素样生长因子Ⅱ(rhIGF-Ⅱ)作用于颗粒细胞,于培养后第4、6、8、10天收集培养液测定雌二醇(E2),观察rhMIS及rhIGF-Ⅱ对体外培养的颗粒细胞分泌E2的影响。结果:在无FSH作用下,rhMIS对颗粒细胞分泌E2无明显影响(P>0·05),rhIGF-Ⅱ刺激颗粒细胞分泌E2量增加(P<0·05);加入FSH后,rhMIS的明显抑制颗粒细胞E2分泌量(P<0·05),rhIGF-Ⅱ明显增加颗粒细胞E2的分泌(P<0·05)。结论:MIS和IGF-Ⅱ可单独或协同FSH刺激颗粒细胞甾体激素的分泌,对卵泡的生长发育及卵母细胞的分化成熟起着微观调控作用。     

人卵母细胞玻璃化冷冻的分子表达变化

卵母细胞冷冻技术是体外受精助孕的重要组成部分,是保存女性生育力的主要途径,卵母细胞冷冻保存易对卵母细胞造成不可逆损伤。卵丘细胞对卵母细胞体外成熟过程具有重要作用,在冷冻过程也可能受损伤。目前已知玻璃化冷冻/解冻对卵母细胞（包括成熟与未成熟卵母细胞）的影响,可改变卵母细胞正常发育必需基因的表达,如卵母细胞成熟（GDF9、BMP15）、凋亡（Bax、Bcl-2）、细胞骨架（CK8、ACTB）、细胞周期（CCNA1、MCM10）、缝隙连接（GJA1）、发育能力（HDAC1、STAT3、SMARCAL1和DNMT3B）、脂质代谢（cGMP）等方面的改变。就卵母细胞玻璃化冷冻前后的分子及基因变化进行阐述,为卵母细胞玻璃化冷冻提供更好的理论基础和实验依据。     

氢醌对人白血病细胞凋亡及相关蛋白Bcl-2、Bax及Caspase-3表达的影响

目的 研究氢醌对白血病细胞株U937细胞凋亡及相关蛋白Bcl-2、Bax及Caspase-3表达的影响。方法 用不同浓度的氢醌处理U937细胞24 h、48 h后,采用MTT法来检测细胞增殖抑制率;经瑞-吉染色后,观察细胞形态变化;采用流式细胞仪检测细胞凋亡;采用免疫印迹法检测Bcl-2、Bax及Caspase-3蛋白表达。结果 (1)U937细胞的增殖抑制率随氢醌作用时间及浓度的增加而增加,呈时间-剂量依赖性(P<0.05);(2)氢醌作用后,部分细胞体积增大,胞浆中有空泡,胞核发生畸形;(3)流式细胞术结果显示,细胞凋亡率随着氢醌作用时间及浓度的增加而增加,呈时间-剂量依赖性(P<0.05);(4)免疫印迹结果显示,与空白组相比较,染毒48h时,细胞Bax蛋白的表达量增加(P<0.05),而Bcl-2蛋白表达量减少(P<0.05),Bcl-2/Bax比值下降(P<0.05),染毒24 h时,细胞Caspase-3蛋白的表达量增加(P<0.05);与染毒24 h各组相比较,染毒48 h时细胞Caspase-3蛋白的表达量随时间延长呈增加趋势(P<0.05)。结论 氢醌可以诱导U937细胞凋亡,其机制可能与调控凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax及Caspase-3的表达有关。