HPLC 电化学检测法用于黄芩苷和黄芩素大鼠血浆稳定性研究

目的：考察黄芩苷(BG)和黄芩素(B)在缓冲液及大鼠血浆中的稳定性，建立测定二者在大鼠血浆中含量的样品处理方法，并初步探讨二者在血浆中稳定性的影响因素。方法：采用HPLC电化学检测法，分别考察BG，B在不同条件下的稳定性及使二者稳定的条件。结果：BG，B在大鼠血浆中较在pH 74的缓冲液中更不稳定。在pH 74缓冲液中加入抗氧化剂可使BG和B的稳定性明显提高，剩余百分含量达到102%和100%；在大鼠血浆中加入抗氧化剂及1 mol·L-1 HCl可使BG和B的稳定性明显增加，剩余百分含量可分别达到98%和103%。结论：BG和B在pH 74缓冲液中的稳定性主要受氧化影响，BG和B在血浆中的稳定性不仅与氧化有关，还受血浆中的内源物质影响，最终确定每1 mL大鼠血浆中加入抗氧剂及100 μL 1 mol·L-1HCl为血浆样品的处理条件，此条件可使样品稳定。     

芦丁在不同介质中平衡溶解度的测定

目的测定芦丁在水、0．1mol·L^-1 HCl和不同pH值磷酸盐缓冲液中的平衡溶解度。方法，采用紫外分光光度法测定芦丁在水、0．1mol·L^-1 HCl和磷酸盐缓冲液中的浓度。结果37℃下，芦丁在水中的平衡溶解度为194．57mg.L^-1;在0．1mol．L^-1 HCl中的平衡溶解度为173．08mg·L^-1；在磷酸盐缓冲溶液中随缓冲液pH值增加（2．5—7．8），其溶解度由55．48mg·L^-1递增到521．08mg·L^-1。结论芦丁极微溶于水；芦丁的溶解度受介质的pH值影响大。     

黄芩提取物体外透皮介质的筛选研究

目的:筛选黄芩提取物透皮的最佳介质。方法:以黄芩苷为指标,从溶解性、稳定性、透皮速率3个方面进行综合考察。结果:黄芩提取物在pH6.8磷酸盐缓冲液中溶解度最好,在生理盐水中最差;低浓度时以pH6.8磷酸盐缓冲液和含40%PEG400的生理盐水溶液最稳定;pH6.8磷酸盐缓冲液作为透皮介质,黄芩苷透皮速率最大,PEG400加入则使黄芩苷的透皮速率降低。结论:黄芩提取物透皮介质以pH6.8磷酸盐缓冲液为佳。     

利用一种耐热耐糖β-葡萄糖苷酶制备黄芩素的研究

对利用一种耐热耐糖β-葡萄糖苷酶水解黄芩苷制备黄芩素进行了研究。该酶催化黄芩苷转化为黄芩素的反应能在醋酸-醋酸钠缓冲液中良好地进行,酶的最适pH 5.5,最适反应温度85 ℃,温度在85 ℃以下,pH 5~7.5酶的稳定性良好。酶的最大反应速率V_max为0.41 mmol·L^-1·min^-1,米氏常数K_m为3.31 mmol·L^-1。不同的金属离子对酶的活性有不同的影响,醋酸-醋酸钠缓冲液中的Na⁺对酶有活化作用。反应体系中葡萄糖醛酸浓度低于0.6 mol·L^-1时,对酶有活化作用,当单糖浓度大于0.6 mol·L^-1时,对酶有抑制作用,当单糖浓度达到1.2 mol·L^-1时,酶活抑制率为50%,糖耐受性较好。通过实验得出较佳反应条件为黄芩苷-酶液1 g : 0.2 mL,pH 5.5的醋酸-醋酸钠缓冲液,反应时间为10 h时,反应温度为85 ℃,酶解率可达97%。     

天钩降压胶囊中黄芩素对黄芩苷药动学的影响

目的：探讨天钩降压胶囊复方中黄芩素对黄芩苷在大鼠体内药动学的影响。方法：将18只SD大鼠随机分为A（天钩降压胶囊）组、B（黄苓苷）组、c（黄苓素）组,每组各6只。3组大鼠分别灌胃给予天钩降压胶囊（相当于黄芩苷38mg·kg-1）、黄芩苷单体（38mg·kg-1）和黄芩素（5．77mg·kg-1）,给药后于不同时间采集大鼠血浆,血浆样品经甲醇-乙腈（1：3）沉淀蛋白,采用高效液相色谱法测定黄芩苷含量。结果：天钩降压胶囊、黄芩苷和黄芩素单体灌胃给药后,大鼠血浆中黄芩苷血药浓度一时间曲线均呈双峰现象,通过整合药代动力学得知黄芩素权重系数是黄芩苷的1／2倍,在复方天钩降压胶囊药动学整合浓度中有很大贡献。结论：天钩降压胶囊中黄芩素对黄芩苷的药动学产生影响,为以后研究含有苷及苷元的复方药动学提供参考。     

黄芩苷稳定性研究

目的 研究黄芩苷在不同条件下的稳定性。方法 采用经典恒温法考察黄芩苷在不同的PH值水溶液、甲醇、乙醇和氯仿以及小鼠肺匀浆、小鼠肝匀浆、小鼠血浆和小牛血清中的稳定性。结果 黄芩苷在酸性环境中稳定，在碱性环境中不稳定，在上述有机溶剂中稳定，而在上述生物样品中不稳定。结论 黄芩苷在不同条件下稳定性不同，在实际应用中应加以考虑。     

HPLC法同时测定灌胃黄芩水煎剂后大鼠血浆中黄芩苷和汉黄芩苷的质量浓度及药动学研究

目的建立大鼠ig黄芩水煎剂后血浆中黄芩苷和汉黄芩苷的HPLC测定方法及药动学研究。方法大鼠ig黄芩水煎剂后,不同时间眼底静脉丛取血,制备血浆。血浆样品经甲醇沉淀蛋白,HPLC-UV测定血药浓度。色谱柱为Shim-packODS(250mm×4.6mm,5μm);流动相采用梯度洗脱,体积流量:1.5mL/min;检测波长:276nm。结果黄芩苷的线性范围为0.156~10μg/mL,汉黄芩苷的线性范围为0.109~7μg/mL,定量下限(LLOQ)分别为0.156和0.109μg/mL,日内和日间精密度(RSD)均小于15%,准确度(RE)为-6.82%~3.26%。大鼠ig黄芩水煎剂后,血浆中黄芩苷和汉黄芩苷血药浓度-时间曲线均存在双峰:黄芩苷的tmax1和tmax2分别为(12.0±4.5)min和(7.2±1.79)h;Cmax1和Cmax2分别为(5.29±1.96)和(4.49±2.12)μg/mL,汉黄芩苷的tmax1和tmax2分别为(14.0±9.0)min和(6.8±1.1)h;Cmax1和Cmax2分别为(1.38±0.16)和(1.62±0.71)μg/mL;黄芩苷的CL/F为(4.72±1.68)L/h,汉黄芩苷的CL/F为(3.04±0.98)L/h。结论该方法经考察符合生物样品的测定要求,可应用于大鼠体内黄芩苷和汉黄芩苷血药浓度的测定和药动学研究。大鼠ig黄芩水煎剂后血浆中黄芩苷和汉黄芩苷质量浓度存在双峰现象,黄芩苷的口服清除率大于汉黄芩苷。     

双相体系中固定化酶水解黄芩苷制备黄芩素的研究

该文研究了双相体系中固定β-葡萄糖苷酶水解黄芩苷制备黄芩素的最佳工艺条件并考察其产率,考察了黄芩素在多种有机溶剂中的溶解性及其在水与有机溶剂中的分配系数,确定了固定化酶催化黄芩苷酶解反应在醋酸缓冲液和氯仿组成双相体系中进行。以海藻酸钠为载体,用交联-包埋法固定化β-葡萄糖苷酶,并测定了其最适反应温度,最适反应pH,米氏常数,热稳定性和pH稳定性等酶学性质。比较了固定化酶在双相体系中水解黄芩苷的产率,得出最佳反应条件：pH 5.0的醋酸缓冲液和三氯甲烷组成的双相体系,反应温度50 ℃,反应时间10 h,黄芩素产率为85.28%。与单相反应体系相比,双相反应体系中反应速度和产率均有所提高。     

黄芩中黄芩甙与黄芩甙元的HPLC测定法

应用HPLC法，以黄芩甙、黄芩甙元为对照品，黄酮为内标，测定黄芩中黄芩甙和黄芩甙元的含量。实验表明，按确定的色谱条件，黄芩甙增样量0．15－0.78μg，黄芩甙元进样0．10－0．40μs，均可得良好线性关系。通过试验，选择了样品提取8方法和酶解时间。本法加样回收率为100．90％。重现性试验CV＝2．46％。测定了11批样品，并作酶解前后对比，可确定黄芩是否经过杀酶及杀酶保甙的效果。为考察黄芩的切制工艺及质量提供了较为先进的检测手段和准确、灵敏、快速的方法。     

黄芩汤中黄芩苷在大鼠体内的药代动力学研究

目的:研究黄芩汤中黄芩苷在大鼠体内的药代动力学规律。方法:大鼠灌胃黄芩汤后,用HPLC方法分析血浆中黄芩苷浓度,测定黄芩苷浓度的经时变化。结果:大鼠灌服黄芩汤4.5g/kg后,黄芩苷主要药代学参数分别为:tmax1=(20±7.07)min,tmax2=(6.4±0.94)h,Cmax1=(0.88±0.15)μg/ml,Cmax2=(1.33±0.22)μg/ml,t1/2=(7.22±1.5)1h,Vd=(21.75±6.2)l/kg,Cl=(2.07±0.19)l/kg.h。结论:本方法简单、灵敏、准确,可用于黄芩苷血药浓度分析及其药代动力学研究。     

Pharmacokinetic Study of Baicalein and Its Major Metabolites after iv Administration in Dogs

Objective To develop and validate a simple,rapid,sensitive,and reproducible HPLC method for simultaneous determination of baicalein and its metabolite baicalin in dog plasma and for the subsequent pharmacokinetic study after iv administration to dogs.Methods An accurate and reproducible HPLC-UV method was developed and validated for simultaneous determination of baicalein and baicalin in dog plasma,using luteolin as internal standard.The analytes were separated by an Agilent Zorbax SB-C18 column(250 mm × 4.6 mm,5 μm) and the column temperature was maintained at 40 ℃.The mobile phase was a binary mixture of acetonitrile and water(27:73) ,containing 0.05% phosphoric acid in water,with a flow rate of 1.0 mL/min.The UV detector was set at 276 nm.Results Linear relationships were validated over the range of 0.05-25 μg/mL for baicalein and 0.05-20 μg/mL for baicalin.The intra-and inter-day precision values for all samples were within 8.0%,using relative standard deviation.This method was successfully applied to the pharmacokinetic studies in dogs after iv administration of baicalein.Baicalein was converted to baicalin quickly.Cmax values were 21.13 μg/mL at 0.05 h for baicalein and 1.57 μg/mL at 0.5 h for baicalin,areas under the plasma concentration-time curve were 4.97 h·μg/mL for baicalein and 0.63 h·μg/mL for baicalin,and the elimination half-life is 0.50 h for baicalein and 0.75 h for baicalin,respectively.Conclusion The method is able and sufficient to be used in drug metabolism and pharmacokinetic studies of baicalein.     

黄芩素与黄芩苷大鼠体内药动学比较研究

 目的对黄芩素与黄芩苷的大鼠体内药动学行为进行比较研究。方法采用高效液相-电化学色谱法,对等摩尔剂量灌胃给药黄芩素和黄芩苷后,大鼠体内黄芩苷的血药浓度进行测定。结果灌胃给药黄芩素740μmol·kg^-1时,原型药完全被代谢,血浆中主要检测到代谢产物黄芩苷;分别灌胃给药等摩尔剂量的黄芩素和黄芩苷740μmol·kg^-1后,大鼠血浆中黄芩苷的药-时曲线均呈现双峰现象,ρ_max分别为14.63,10.92mg·L^-1和8.51,4.87mg·L^-1,AUC_0～24h分别为149.63和63.68mg·h·L^-1;黄芩素的相对生物利用度为235.9%。结论等摩尔剂量下黄芩素与黄芩苷的药动学行为具有显著差异,口服黄芩素比黄芩苷的达峰浓度高、生物利用度高。     

RP-HPLC测定黄芩素及其代谢产物黄芩苷大鼠血浆浓度

 目的建立用HPLC测定黄芩素/HP-β-CD包合物经大鼠尾静脉快速注射给药后,黄芩素及其代谢产物黄芩苷血浆浓度的方法。方法采用Agilent 1100 HPLC系统,Diamonsil^TMODS色谱柱,以甲醇和磷酸溶液组成的流动相梯度洗脱分离,以对羟基苯甲酸丙酯为内标,流速1.0 mL·min^-1,检测波长270 nm,柱温40℃,进样20μL检测。结果在本色谱条件下黄芩素、黄芩苷及其他代谢产物与杂峰分离良好;黄芩素和黄芩苷在0.05～15 mg·L^-1内呈线性关系;两者日间和日内精密度均低于11.6%;黄芩素和黄芩苷的最低检测浓度分别为0.03和0.05 mg·L^-1。结论该方法可在同一条件下同时检测黄芩素和黄芩苷,且简便、准确、可靠,可用于黄芩素/HP-β-CD包合物静注给药后,其主药黄芩素及其主要代谢产物黄芩苷的血药浓度测定。     

黄芩素药代动力学研究进展

黄芩为中国药典收载的常用中药材,具有悠久的用药历史,含有多种黄酮类化合物,其中黄芩素为常用中药黄芩中的主要活性成分之一。笔者通过对黄芩素在体内的药动学研究进行总结,发现:黄芩素胃肠道吸收较好,主要分布在肝、肾、肺等组织器官中;黄芩素在大鼠体内代谢物主要是葡萄糖醛酸结合物,后者又可经胆汁和肠黏膜转运至肠腔,形成再吸收;黄芩素口服后血浆原型药物浓度极低。目前针对黄芩素的药动学行为研究主要是通过其代谢物黄芩苷的测定来间接实现,由此使得黄芩素替代黄芩苷进行口服制剂研究也成为可能。     

高效液相色谱法测定黄芩愈伤组织中黄芩苷、黄芩素含量

目的:研究黄芩愈伤组织中黄芩苷,黄芩素的含量测定方法。方法:采用HPLC法测定黄芩愈伤组织中黄芩苷,黄芩素的含量。结果:黄芩愈伤组织中黄芩苷,黄芩素的含量分别为0.39%和0.051%。结论:建立了黄芩愈伤组织中黄芩苷,黄芩素的含量测定方法。     

高效液相色谱法测定不同产地黄芩中黄酮化合物的含量

目的 :测定不同产地黄芩中黄酮类化合物的含量 ,以评价其道地性。方法 :高效液相色谱法 (HPLC)。结果 :17个产地 25份样品中黄芩苷含量变化在 6%～19%、汉黄芩苷在 2%～8%、黄芩素在 0.1%～1.6%、黄芩新素在 0.01%～0.2%、汉黄芩素在 0.01%～0.3% ,粘毛黄芩素、木蝴蝶素为痕迹量或未检出。结论 :单纯以黄芩苷的含量来评价其质量是不够的 ,建议将黄芩苷与汉黄芩苷的含量比值在 3以下、黄芩苷与黄芩素、黄芩苷与汉黄芩素的含量比值在 20～50等参数列为质量控制指标。     

黄芩苷和黄芩素的大鼠在体肠吸收特性

 目的研究黄芩苷和黄芩素的肠吸收特性。方法采用大鼠在体肠吸收模型,以高效液相色谱法测定循环液中药物的浓度。结果不结扎胆管时,黄芩苷和黄芩素的吸收速率常数分别为(-0.0047±0.0134)h^-1和(0.4960±0.0512)h^-1;结扎胆管时,黄芩苷和黄芩素的吸收速率常数分别为(0.0239±0.0262)h^-1和(0.2106±0.0735)h^-1;结扎胆管,在单独以黄芩苷或黄芩素进行在体肠循环时,循环液中分别出现了随时间增加的黄芩素和黄芩苷;结扎胆管尾静脉注射黄芩素时,循环液中出现了黄芩苷。结论黄芩素比黄芩苷更适于口服给药;胆汁不但可以分泌黄芩苷,而且可以促进黄芩素的吸收;黄芩苷在肠内经过菌群代谢为黄芩素而被吸收,被吸收的或静脉注射的黄芩素可在体内还原为黄芩苷,并再被小肠分泌排出。     

栽培黄芩和野生黄芩化学成分比较研究

目的：比较栽培黄芩和野生黄芩化学成分的差异。方法：收集不同产地栽培和野生黄芩共30余批，采用高效液相色谱法建立黄芩药材的色谱指纹图谱，并对黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素进行含量测定；采用《中国药典》方法对黄芩的浸出物进行含量测定。结果：河北和内蒙古产的野生黄芩的液相指纹图谱色谱峰数较栽培品多；在95%的置信区间内，栽培黄芩含黄芩苷（15.89±1.52）%，黄芩素为（1.04±0.26）%，汉黄芩素（0.27±0.07）%；野生黄芩含黄芩苷（11.93±1.62）%，黄芩素（1.03±0.26）%，汉黄芩素（0.27±0.06）%；栽培黄芩的浸出物为（52.07±3.05）%，野生黄芩（41.21±2.86）%。结论：栽培黄芩和野生黄芩的指纹图谱略有差异；栽培黄芩中黄芩苷和浸出物的含量高于野生黄芩。     

PEG胁迫对黄芩黄酮类有效成分积累及相关基因表达的影响

目的:研究不同程度PEG胁迫对黄芩悬浮细胞中黄芩苷、黄芩素的积累及相关基因表达的影响.方法:采用HPLC法检测黄芩悬浮细胞中黄芩苷、黄芩素的含量,用酶标仪检测细胞内游离脯氨酸含量,并用半定量RT-PCR的方法对相关基因的表达进行分析.结果与结论:黄芩悬浮细胞内游离脯氨酸含量随PEG胁迫浓度升高而升高,10％ PEG胁迫黄芩悬浮细胞可以模拟干旱条件,提高悬浮细胞PAL基因表达量且会促进黄芩素的积累.20％ PEG胁迫提高了UBGAT基因的表达量,但同时APX酶活性的提高抑制了黄芩素参与清除活性氧,导致了黄芩素向黄芩苷的转化.     

葛根芩连汤中葛根和甘草对黄芩有效成分在大鼠肝代谢的影响

目的 研究葛根芩连汤中葛根和甘草对黄芩有效成分黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素在大鼠肝微粒体代谢的影响,探讨该复方配伍机制.方法 采用在体诱导-体外肝微粒体温孵方法,分别考察葛根芩连汤中葛根、甘草对黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素在大鼠肝微粒体中代谢的影响,利用超高效液相色谱(UPLC)法测定大鼠肝微粒体中黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素的量.结果 温孵时间黄芩苷在0～90 min,汉黄芩苷在0～60 min,黄芩素在0～10 min,汉黄芩素在0～40 min呈线性消除.对照组各成分代谢速率大小顺序为:黄芩素＞汉黄芩素＞汉黄芩苷＞黄芩苷.与对照组相比,葛根对汉黄芩苷、黄芩素的代谢具有抑制作用,对黄芩苷及汉黄芩素的代谢具有诱导作用;甘草对汉黄芩素的代谢具抑制作用,对黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素的代谢则呈现诱导作用.结论 黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素可以被大鼠肝微粒体代谢,葛根芩连汤中葛根、甘草对黄芩有效成分的代谢过程有影响.