实时荧光探针定量PCR在小儿沙眼衣原体肺诊断中的临床应用研究

目的 观察荧光定量PCR在小儿沙眼衣原体肺炎诊断中的应用价值及探讨不同年龄阶段小儿沙眼衣原体(CT)肺炎的临床特点.方法 将我院2004年1～12月份收治60例小儿CT肺炎做研究对象,根据年龄分组,对各组患儿均通过咽拭子或吸痰法获取标本,进行CT-DNA定量分析;回顾性总结分析60例CT肺炎.结果 60例标本中,106 拷贝数5例,105拷贝数6例,104拷贝数10例,103拷贝数39例;小婴儿CT肺炎往往无发热性肺炎,易合并细菌感染;3岁以上儿童则易出现发热、肺部体征大多阴性,而X线多表现为节段性肺炎,其临床经过类似支原体肺炎.结论 1.实时荧光定量PCR检测CT-DNA是诊断小儿沙眼衣原体肺炎最直接、最客观的指标.2.CT肺炎在不同年龄阶段的临床表现存在显著差异.     

实时荧光定量PCR检测沙眼衣原体的研究

目的采用TaqMan探针建立检测沙眼衣原体的实时荧光定量PCR（real-time PCR）方法。方法根据沙眼衣原体外膜蛋白A的基因（ompA）序列设计引物和探针,以克隆的ompA部分基因片段作DNA模板,建立实时荧光定量检测方法。结果建立的荧光定量PCR检测方法的最低检出限为5 copies/反应,检测线性范围100～107线性关系良好（r2=0.997）,比巢式PCR敏感100倍;且与鹦鹉热衣原体、淋球菌、解脲脲原体、大肠杆菌等病原菌DNA以及人基因组DNA均无交叉反应,表明该方法具有良好的特异性。以巢式PCR作参比,建立的荧光定量PCR法检测沙眼衣原体的阳性符合率为100.00%,阴性符合率为95.09%,总符合率为96.81%。结论建立的检测沙眼衣原体实时荧光定量PCR具有特异性强和敏感性高的特点,可快速检测样本中微量沙眼衣原体DNA,适用于对沙眼衣原体进行大规模筛选。     

荧光定量PCR对不育症患者解脲支原体和沙眼衣原体感染情况的研究

目的用实时荧光定量PCR(FQ-PCR)定量检测不孕不育患者解脲支原体(UU)、沙眼衣原体(CT)基因,观察UU、CT感染情况与不孕不育的关系,探讨实时荧光定量PCR在不孕不育患者诊断和治疗中作用。方法采用FQ-PCR技术检测标本402份。结果 UU阳性率是32.8%,其中男性UU阳性率是21.4%,女性UU阳性率是44.3%。CT阳性率是16.2%,其中男性CT率是11.4%,女性CT率是20.9%。UU感染率在男性、女性患者有极显著性差异(P<0.01),而CT感染率在性别之间有显著性差异(P>0.05)。结论解脲支原体(UU)、沙眼衣原体(CT)是引起男女不育的主要原因之一,实时荧光定量PCR检测UU、CT基因具有操作简单、反应时间短、重复性好、结果客观准确、敏感性和特异性好等优点,其结果对临床诊断、治疗有一定指导意义。     

实时荧光定量PCR检测泌尿生殖道感染患者沙眼衣原体的临床应用

沙眼农原体（chlamydiatrachomatis,CT）是一种独立寄生于细胞内的微生物,含DNA和RNA,革兰染色阴性,只能在细胞内繁殖。CT是近年来最常见的性传播疾病病原体之一,主要引起男女泌尿生殖道感染,园此也越来越受到人们的注意。随着荧光定量PCR技术的发展,该技术已广乏运用于临床。     

荧光定量PCR检测稽留流产患者沙眼衣原体和解脲支原体结果分析

目的探讨沙眼衣原体（CT）和解脲支原体（UU）感染与孕妇稽留流产的相关性,以及荧光定量PCR在稽留流产病因检测中的应用价值。方法采用荧光定量PCR检测稽留流产患者宫颈分泌物标本中的CT-DNA和UU-DNA的含量。结果 138例稽留流产患者中72例感染CT或UU,总检出率53.62%,其中CT阳性率21.74%,UU阳性率42.03%,混合感染10.14%。与正常人群对照差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论泌尿生殖系统CT和UU的感染与稽留流产有密切相关性,荧光定量PCR对稽留流产患者CT和UU的检测简单、快速、准确。     

荧光定量PCR检测沙眼衣原体及临床应用

目的：用荧光定量聚合酶链反应（FQ－PCR）检测沙眼衣原体的含量,探讨FQ－PCR在衣原体性尿道炎诊断中的价值。方法：应用荧光探针标记引物的荧光定量聚合酶链反应对172例疑为沙眼衣原体感染患者标本进行检测,并与常规PCR（电泳－EB染色）进行比较。结果：FQ－PCR阳性率为19．8％,常规PCR法为20．9％,两法符合率为63．9％。女性宫颈分泌物标本FQ－PCR阳性为29．2％,常规PCR法为16．7％;男性分泌物FQ－PCR阳性率为16．9％,常规PCR法为13．8％。FQ－PCR特异性较常规PCR法高。结论;FQ－PCR在扩增中实时在线检测,并选择理想的标准曲线做出较精确的临值分析,具有较高的特异性和敏感性,对病原体的诊断有一定的临床意义。     

实时荧光定量PCR的应用体会

对于病毒的监测和疾病的诊断,定性检测已不能满足临床需要,实时荧光定量PCR技术(realtime quantitative PCR)于1996年由美国Aplied Biosystems公司推出.     

荧光定量聚合酶链反应检测宫颈炎患者沙眼衣原体感染的临床应用

目的了解宫颈炎患者沙眼衣原体的感染状况。方法采用荧光定量聚合酶链反应技术,对426例宫颈炎患者沙眼衣原体的感染状况进行了检测。结果在上述426例宫颈炎患者中检测出沙眼衣原体阳性标本60例,阳性率为14.08%(60/426)。结论在宫颈炎患者中沙眼衣原体有较高的感染率。     

新生儿肺炎患儿沙眼衣原体PCR检测研究

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测沙眼衣原体（ＣＴ）ＤＮＡ，８４例新生儿肺炎患儿的咽拭子中共检出２１例，阳性率２５．Ｏ％。其中剖宫产儿阳性率１６．６％（２／１２）；经产道产儿阳性率２６．４％（１９／７２）；早产、低体重儿阳性率５０％（５／１０）；而对照组２０例健康新生儿无１例检出。提示新生儿是ＣＴ感染的高危群体；其感染ＣＴ以通过孕妇产道获得为主，但也有宫内感染；早产、低体重儿最易被ＣＴ感染，ＰＣＲ检测ＣＴ感染具有快速、敏感、特异的优点，有广阔的应用前景。     

实时荧光定量PCR在细胞因子mRNA检测研究中的应用

RR-FQ-PCR技术是一种最新PCR技术,具有特异性强、灵敏度高、重复性好、定量准确、速度快、全封闭反应等优点.本文就RT-FQ-PCR概念、原理、方法、研究进展及其在细胞因子mRNA检测中的应用等作一综述.     

实时荧光定量PCR在检测人ANP基因表达的应用

目的建立心房钠尿肽（ANP）基因mRNA表达水平的实时荧光定量PCR检测方法,并对该方法进行初步评价。方法以基因表达产物为模板,建立实时荧光定量PCR检测方法,对样本中的心房钠尿肽含量进行相对定量,比较不同样本组的基因表达水平。结果所建立的实时荧光定量PCR方法熔解曲线中熔解峰单一。肺癌患者胸腔样本的ANP含量为对照样本的4.68倍,血清样本为对照样本的16.03倍。结论所建立的ANP实时荧光定量PCR检测方法具有较高的特异性。肺癌患者胸腔液和血清中ANP的含量明显增高。     

一种新型沙眼衣原体核酸检测试剂的临床应用探讨

目的通过对比实验,对新型沙眼衣原体(CT)核酸检测试剂(以下简称"一步法试剂")的临床使用进行评估。方法用1例CT强阳性样本进行梯度稀释,用新型沙眼衣原体免核酸提取的荧光定量PCR检测试剂和市场上最为稳定的煮沸法试剂分别进行检测,考评其精确度与灵敏度。用一步法试剂与煮沸法试剂对345例临床收集的样本进行CT DNA定性检测并对比其结果。结果强阳性样本梯度稀释实验显示,一步法试剂的检测结果重复性好,灵敏度高;一步法试剂与煮沸法试剂的阳性一致性百分比为98.78%,阴性一致性百分比为99.24%,总一致性百分比为99.13%。对此结果进行Kappa检验一致性分析,结果 Kappa值=0.976,表明一步法试剂与煮沸法试剂检测的结果具有很好的一致性。结论一步法试剂与已上市的煮沸法试剂检测结果具有很好的一致性,并且操作简单、结果准确,符合临床检测要求,具有较高的临床应用价值。     

荧光定量PCR检测新疆地区不孕不育患者UU、CT结果分析

目的利用实时荧光定量PCR技术了解新疆地区不孕不育患者解脲支原体（UU）和沙眼衣原体（CT）感染情况,通过对实验结果的统计学处理分析不孕不育与UU、CT感染率及感染量之间的关系,方法采用实时荧光定量PCR技术检测新疆地区不孕不育患者及能正常生育人群解脲支原体-DNA和沙眼衣原体-DNA含量并进行统计学分析。结果不孕不育患者UU-DNA阳性率52.18%,CT-DNA阳性率3.65%,正常对照组则分别为46.08%、1.00%,两组间的差异显著性有统计学上的意义,不孕不育组UU和CT的感染率明显高于对照组（P〈0.05）。不同性别,不用民族的UU阳性检出率不同。结论新疆地区不孕不育患者中UU和CT感染是引起男女不孕不育的重要原因之一,且女性UU阳性率高于男性,维吾尔族UU阳性率高于其它民族。     

实时荧光定量PCR在检测孕妇血HCMV感染中的研究

目的探讨实时荧光定量PCR(FQ-PCR)检测孕妇血中巨细胞病毒(HCMV)感染的应用。方法采用FQ-PCR技术,对临床疑为HCMV病毒感染的326名孕妇(观察组)和健康孕妇(对照组)210名进行检测。结果观察组和对照组的检出率分别为42.33%、3.81%,观察组HCMV感染率明显高于对照组(χ2=95.6305,P<0.01),两者之间有显著差异。结论FQ-PCR检测HCMV具有方法简单、快速、特异性强、定量准确等优点,应推荐作为检测孕妇血中HCMV感染的首选方法。     

肝螺杆菌TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR快速检测方法的建立及应用研究

目的 建立特异、敏感、快速检测肝螺杆菌的TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR方法.方法 针对肝螺杆菌flaB 基因的保守区设计特异性引物和探针,建立肝螺杆菌TaqMan MGB探针实时荧光定最PCR方检测方法,验证方法的特异性、敏感性和稳定性.对2008-2011年期间采集的1081份临床样本中的肝螺杆菌进行检测,同时进行分离培养和常规PCR检测.结果 建立的TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR方法对肝螺杆菌的检测具有高度的特异性,对幽门螺杆菌、空肠弯曲菌、泰泽氏菌、侵肺巴斯德氏菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌均无交叉反应,检测的灵敏度达8.3拷贝.标准曲线显示各浓度范围内具有良好的线性关系,相关系数为0.999,斜率为-3.227,TaqManMGB探针实时荧光定量PCR效率为100％.对1081份临床样本进行检测,TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR和常规PCR均能检出86份肝螺杆菌阳性样本,而细菌分离培养则仅检出4份阳性.结果显示,建立的TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR方法比细菌分离培养方法更敏感,能够直接从临床样本中检出肝螺杆菌DNA,检测时间仅为2h.结论 研究建立的TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR方法具有可靠、特异、敏感的特点,适用于肝螺杆菌的快速检测.     

FQ-PCR检测不孕不育患者解脲支原体和沙眼衣原体

目的观察解脲支原体和沙眼衣原体的感染与不孕不育的关系。探讨实时荧光定量PCR技术在不孕不育患者的诊断和治疗中的作用。方法采用实时荧光定量PCR技术检测45对不孕不育夫妇女性宫颈分泌物、男性精液或前列腺标本中的解脲支原体-DNA和沙眼衣原体-DNA含量。结果不孕不育患者解脲支原体-DNA阳性率37.78%,沙眼衣原体-DNA阳性率28.89%,解脲支原体或沙眼衣原体的总感染率为52.22%,正常对照组则分别为15.00%、8.33%、20.00%,两组间有显著性差异。不孕不育组中解脲支原体的感染率明显高于沙眼衣原体（P〈0.05）。女性患者解脲支原体DNA载量和沙眼衣原体-DNA载量均高于男性患者（P〈0.05）。结论解脲支原体和沙眼衣原体是引起男女不孕不育的重要原因之一。荧光定量PCR技术用于诊断引起不孕不育的解脲支原体或沙眼衣原体泌尿生殖道感染是完全可靠的。     

实时荧光定量PCR检测幼儿腹泻腺病毒

目的:建立实时荧光定量PCR方法,并检测腺病毒Ad40或Ad41感染的粪便标本。方法:用T-A克隆技术构建含腺病毒基因的载体作为标准模板,采用Taqman探针标记技术,建立实时荧光定量PCR方法。采集幼儿腹泻标本248例,分别用直接免疫荧光法和实时荧光定量PCR检测腺病毒Ad40和Ad41,比较两种方法的阳性检出率。结果:实时荧光定量PCR灵敏度和准确度(95.60%和96.80%)均高于直接免疫荧光法(78.5%和82.40%)(P0.05),而两者特异度差异无统计学意义(97.30%vs 96.70%,P0.05)。248例待检样本,直接免疫荧光法检出率为2.42%(6/248),实时荧光定量PCR检出率为7.66%(19/248),明显高于直接免疫荧光法(χ2=3.675,P0.05)。结论:成功建立实时荧光定量PCR检测腺病毒Ad40或Ad41方法。其灵敏度、准确度和阳性检出率经均优于直接免疫荧光法,且简便快速。     

实时荧光定量PCR技术在致病菌检测中的应用

目的本文将实时荧光定量PCR(Real-time Q-PCR)法检查致病菌与细菌培养法作比较,探讨对指导临床诊断治疗的意义。方法采用Real-time Q-PCR法和细菌培养法对100份标本进行6个微生物项目的检测,并比较两种方法的灵敏度、特异性和准确性。结果 Real-time Q-PCR法检测结果与细菌培养法,除完全符合的19例标本之外,另有8例用细菌培养法为阴性的标本,用Real-time Q-PCR法检测为阳性。结论 Real-time Q-PCR法较细菌培养法具有准确性好、灵敏度高、特异性强和检测快速等优点,是快速筛查致病菌的理想检测方法之一。     

沙眼衣原体感染的PCR诊断和分型

沙眼衣原体(CT)是一种专性细胞内寄生苗，可引起宫颈、尿道、直肠、鼻咽和结膜等部位的粘膜感染。宫颈感染可逆行至宫内膜和输卵管从而引起盆腔炎、肝周围炎、不育症和异位妊娠。妊娠期感染可影响新生儿，造成新生儿结膜炎和婴儿肺炎。在男性，最常见的性传播疾病之一——非淋菌性尿道炎约40—50%为CT感染所致，CT并可引起同性恋者的直肠炎．除泌尿生殖道感染外，CT是沙眼的病原体，沙眼仍是发展中国家的致盲病因之一。     

荧光定量聚合酶链反应检测精液中沙眼衣原体

用荧光定量聚合酶链法对126名男性不育患者和60名正常生育男性的精液进行了沙眼衣原体检测,男性不育组阳性率为19.8%,生育组阳性率为5.0%,两组比较有显著差异。