CD3AK细胞治疗晚期恶性肿瘤疗效观察

为探索肿瘤免疫治疗的新方法，我们应用ＰＨＡ（１０μｇ／ｍｌ），ｒＩＬ－２（５００Ｕ／ｍｌ）和ＣＤ３Ａｂ（抗ＣＤ３单克隆抗体，２００ｎｇ／ｍｌ）共同激活，ｒＩＬ－２（５００Ｕ／ｍｌ）维持培养的自体人外周血单核细胞（ＰＢＭＣ）－ＣＤ３ＡＫ细胞治疗晚期恶性肿瘤，结果显示：（１）治疗有效率（ＰＲ＋ＭＲ）为３６．３６％，（２）治疗后Ｔ细胞亚群中ＣＤ８＋下降（Ｐ〈０．０５），ＣＤ３＋，ＣＤ４＋以及ＣＤ４＋／Ｃ     

酶偶联法测定红细胞谷胱甘肽过氧化物酶

根据酶偶联催化反应机理，通过二次作图法测定了过氧化物酶（Ｓ＿１）和Ｈ＿２Ｏ＿２（Ｓ＿２））的米氏常数（Ｋｍ），分别为０．０６９ｍｍｏｌ／Ｌ和０．１５ｍｍｏｌ／Ｌ。通过理论计算和实验分析确定Ｓ＿１的最适底物浓度为１．５ｍｍｏｌ／Ｌ，Ｓ－２最适底物浓度为２．２５ｍｍｏｌ／Ｌ。实验证明指示酶（Ｇ·Ｒ）用量应＞０．２５Ｕ／ｍｌ反应液，本法采用０．３９Ｕ／ｍｌ反应液并就ｐＨ、温度、Ｈｂ干扰等因素对实验影响进行了系统研究，优选了最佳条件。本法批内变异系数为３．８％，批间变异系数为５．２％。     

环孢霉毒A逆转急性髓系白血病多药耐药一例

报道一例急性髓系白血病（Ｍ＿（４ｂ）患者，经ＨＡＤ方案全量化疗两疗程无效，实验室检查示ｍｄｒｌｍＲＮＡ（＋），ｐ１７０阳性率３１％，多药耐药细胞群占４１．７６％，证实为多药耐药。第３疗程用环孢霉素Ａ（ＣｓＡ，４ｍｇ／ｋｇ，每日两次，第１～３天；２．５ｍｇ／ｋｇ，每日两次，第４～５天）加类似剂量的ＨＡＤ方案化疗，取得完全缓解，同时ｍｄｒｌｍＲＮＡ和ｐ１７０转阴，耐药细胞群消失。     

血清腺苷脱氨酸同工酶琼脂糖凝胶电泳测定法

介绍了一种用琼脂糖凝胶电泳法分离血清苷脱氨酸同工酶。利用脂糖凝胶缓冲液与电泳认的不连续性，成功地分离出人血清中的两条同工酶带ＡＤＡ１＋ｃｏ、ＡＤＡ２。并对底物液中各成分的浓度进行了选择。     

两点法测定腺苷脱氨酶及临床初步应用

应用Ｔｒｉｎｄｅｒ反应建立了两点法测定体液中腺苷脱氨酶。该方法应用方便，测定快速、灵敏、准确。对酶反应最佳条件进行了实验探讨，底物Ｋｍ为０．２６ｍｍｏｌ／Ｌ，最佳ｐＨ７．４，延滞期５分钟，５～１５分钟测得酶活性基本一致。批内ＣＶ２．０３％，批间ＣＶ３．６８％。５５例健康人血清腺苷脱氨酶（ＡＤＡ）２１．３９±４．１７Ｕ／Ｌ（±ｓ），３５例结核性胸腹水ＡＤＡ活性为６５．８３±１８．９２Ｕ／Ｌ（±ｓ）。     

血清α-醋酸萘酯酶同工酶琼脂糖凝胶电泳法及临床应用

为简化α－醋酸萘酯酶同工酶检查技术，建立琼脂糖凝胶电泳法。１０ｇ／Ｌ琼脂糖－ＰＶＰ和ｐＨ７．４０．１ｍｏｌ／ＬＴｒｉｓ－ＨＣｌ缓冲液，泳池ｐＨ８．６，μ＝０．０６巴比妥缓冲液，滤纸刺槽加样，电压１５０Ｖ，电流２ｍＡ／ｃｍ电泳４０ｍｉｎ，搭桥填充染色。染色液由α－醋酸萘酯ｐＨ６．２０．１ｍｏｌ／ＬＰＢ液和固蓝Ｂ盐组成，３７℃染色２０ｍｉｎ，醋酸漂洗比色。结果对照组（ｎ＝３０）α－ＡＮＥ同工酶谱带３～４条（Ｅ１、Ｅ１ａ、Ｅ２、Ｅ３）着色强度Ｅ３＞Ｅ１＞Ｅ１ａ＞Ｅ２，ｘＥ３占８８％，Ｅ１～Ｅ２１２％左右，相对电泳位置Ｅ１：ｐｒｅＡｌ／Ａｌ，Ｅ１ａ：Ａｌ／α１，Ｅ２：ｐｒｅ－α２，Ｅ３：α２／β，Ｒｆ分别为０．５４５、０．５２７、０．４３６、０．３６４。Ｅ３区组成复杂，用ＮＡＮＡ酶水解和ＷＧＡ亲加试验证明它富含ＳＡ和ＧｌｃＮＡＣ的一组不均一的糖蛋白。谱形异常的典型病例有Ⅰ型在症糖尿病和部分肝癌患者，它除有正常谱带外，前者多Ｅ４和Ｅ５，其色度比（％）Ｅ４０．１１４，Ｅ５０．１９８，相对电泳位置在β和β与Ｐｒｅ－γ之间，Ｒｆ＝０．２５４，０．１８２。肝癌病人谱带也多１～２条（Ｅ５和Ｅ６）位于Ａ／ｐｒｅ－γ和ｐｒｅ－γ，     

脐血CD3AK细胞体外抗肿瘤活性的实验研究

目的　探讨抗ＣＤ３ 单克隆抗体（ＡｎｔｉＣＤ３ＭｃＡｂ）＋ 重组人白细胞介素２（ｒＩＬ２） 激活的脐血杀伤细胞（ＣＤ３ＡＫ） 细胞对白血病细胞株Ｋ５６２ 、ＨＬ６０ 的杀伤作用。方法　采用间接玫瑰花结法测定脐血单个核细胞表面分化抗原,ＥＬＩＳＡ双抗夹心法测定肿瘤坏死因子α（ＴＮＦα）、ＩＬ６ 和ＩＬ８ ,用β液闪仪测定３Ｈ胸腺嘧啶核苷标记的靶细胞杀伤活性。结果　①经ＡｎｔｉＣＤ３ＭｃＡｂ＋ ｒＩＬ２ 激活的脐血单个核细胞免疫表型发生明显变化;②细胞因子水平较未激活组明显增高;③脐血ＣＤ３ＡＫ 细胞对Ｋ５６２、ＨＬ６０细胞均有杀伤作用,最佳杀伤条件：脐血单个核细胞浓度为１ ×１０６／ｍｌ,ＡｎｔｉＣＤ３ＭｃＡｂ １ μｇ／ｍｌ,ｒＩＬ２ １０００ Ｕ／ｍｌ,作用时间７２ 小时,效靶比１００∶１。结论　脐血单个核细胞能被ＡｎｔｉＣＤ３ ＭｃＡｂ＋ ｒＩＬ２ 激活为杀伤细胞,激活后有较强的细胞毒作用,且对白血病细胞株有明显的杀伤作用,该研究为应用活化脐血进行肿瘤的过继免疫治疗提供理论依据。     

两点法测定腺苷脱氨酶及临床初步应用

应用Ｔｒｉｎｄｅｒ反应建立了两点法测定体液中腺苷脱氨酶。该方法应用方便，测定快速，灵敏，准确。对酶反应最佳条件进行了实验探讨，底物Ｋｍ为０．２６ｍｍｏｌ／Ｌ，最佳ｐＨ７．４，延滞期５分钟，５－１５分钟测得酶活性基本一致。批内ＣＶ２．０３％，批间ＣＶ３．６８％。５５例健康人血清腺苷脱氨酶（ＡＤＡ）２１．３９±４．１７Ｕ／Ｌ（ｘ±ｓ），３５例结核性胸腹水ＡＤＡ活性为６５．８３±１８．９２Ｕ／Ｌ（ｘ±ｓ     

连续监测法测定血清山梨醇脱氢酶

以ＮＡＤ＋、山梨醇为底物，３７℃ｐＨ１０的甘氨酸／氢氧化钠为缓冲体系，建立血清山梨醇脱氢酶（ＳＤＨ）的连续监测法。ＮＡＤ＋、山梨醇和Ｚｎ２＋的最终浓度分别为０．４７、１９和１．９ｍｍｏｌ／Ｌ，ＫＮＡＤ＋、Ｋ山梨醇分别为０．０９和１．２ｍｍｏｌ／Ｌ。在此条件下，确定ＳＤＨ线性范围为０～１８０Ｕ／Ｌ，批内ＣＶ为３．９％，批间ＣＶ为５．２％，６０例健康成人血清ＳＤＨ正常参考值为０～３．１Ｕ／Ｌ。初步临床观察表明，急性肝损伤时该酶明显升高，肝外梗阻、心肌梗塞等非肝病患者血清ＳＤＨ一般不增高。     

静脉溶栓后与非溶栓后经皮冠状动脉内球囊成形术用于心肌梗塞的比较

为了比较静脉溶栓联合经皮冠状动脉内球囊成型术（ＰＴＣＡ）在心肌梗塞治疗中的作用，本文将３４例急性心肌梗塞患者分为静脉溶栓后ＰＴＣＡ（Ｕ＋ＰＴＣＡ）１４例和扩冠抗凝后ＰＴＣＡ（ＮＨ＋ＰＴＣＡ）２０例２组。２组在发病后分别静滴尿激酶１００方单位和连续静滴硝酸甘油肝素。２组在急性心肌梗塞后３周行冠脉造影，４周行ＰＴＣＡ。观察梗塞后再发心绞痛、冠脉狭窄程度、左室ＥＦ值、梗塞支ＰＴＣＡ时间和ＰＴＣＡ成功率。发现Ｕ＋ＰＴＣＡ组再发心绞痛５７％（８．４），ＮＨ＋ＰＴＣＡ组２０％（４／２０）；Ｕ＋ＰＴＣＡ组的梗塞支病变狭窄程度重于ＮＨ＋ＰＴＧＡ组（９０＋０．０８％：９６．９±４．２３％，ｐ＜０．０１）；Ｕ＋ＰＴＣＡ组左室ＥＦ值高于ＮＨ＋ｐＴＣＡ组（０．５０±０．０２∶０．４６±０．０４，ｐ＜０．０５）；Ｕ＋ＰＴＣＡ组梗塞支ＰＴＣＡ时间少于ＮＡ＋ＰＴＣＡ组（０．９１±０．２６小时：１．７３±０．５６小时，ｐ＜０．０１）；Ｕ＋ＰＴＣＡ组的成功率与ＮＨ＋ＰＴＣＡ组相同（９３％：９０％，ｐ＞０．０５）。     

酶循环法测定血清总胆汁酸

采用氧化型β－硫烟酰胺腺苷二核苷酸（Ｔｈｉｏ－ＮＡＤ）底物酶循环法测定血清总胆汁酸（ＴＢＡ）,对其方法学进行初步研究。该法灵敏度：试剂空白△Ａ４０５ｎｍ（１ｃｍ）０．００４／ｍｉｎ;５０μｍｏｌ／Ｌ△Ａ４０５ｎｍ（１ｃｍ）０．０５０／ｍｉｎ;平均回收率９９．２％;线性０￣１５０μｍｏｌ／Ｌ;精密度：批内ＣＶ〈１．０％;批间ＣＶ〈４．５％;该法（Ｙ）和偶联黄递酶比色法（Ｘ）比较：Ｙ＝０．８８Ｘ－１．     

家兔脑缺血再灌注损伤机制的研究

用家兔四动脉闭塞法建立急性完全性脑缺血后给予再灌注，观察缺血前后及再灌注后脑组织部分电解质和含水量、脑组织和血液丙二醛（ＭＤＡ）、环核昔酸（ｃＡＭＰ、ｃＧＭＰ）、血栓烷Ｂ＿２（ＴｘＢ＿２）、６－酮－前列腺素Ｆ＿（１α）（６－ｋｅｔｏ－ＰＧＦ＿（１α）含量、超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）和谷胱苷肽过氧化物酶（ＧＳＨ－Ｐｘ）活性改变。结果：再灌注后实验组脑组织Ｃａ￣（２＋）、ＭＤＡ、ＴｘＢ＿２和ｃＡＭＰ较对照组升高（Ｐ＜０．０５），ＧＳＨ－Ｐｘ活性、６－ｋｅｔｏ－ＰＧＦ＿（１α）含量降低（Ｐ＜０．０５）；实验组血液中ｃＡＭＰ含量高于对照组（Ｐ＜０．０５）。提示脑组织Ｃａ￣（２＋）过载、氧自由基增多、ｃＡＭＰ／ｃＯＭＰ和ＰＧＩ＿２／ＴＸＡ＿２比值异常在脑缺血再灌注损伤中起着重要的作用。     

脑脊液蛋白质氯烃基二甲基代苯甲胺比浊测定法

氯烃基二甲基代苯甲胺（ｂｅｎｚａｌｋｏｎｉｕｍｃｈｌｏｒｉｄｅ，ＢＡＣ）季胺化合物能与蛋白质反应形成浊度［１］，据此，用于脑脊液蛋白质含量的测定。１　材料与方法１．１　试剂１．１．１　ＢＡＣ贮存液　于９０ｍｌ蒸馏水中溶解ＢＡＣ（Ｓｉｇｍａ，Ｂ－６２９５）１１３ｍｇ，ＥＤＴＡ二钠盐３．６５ｇ，ＮａＯＨ８ｇ，然后用１ｍｏｌ／ＬＮａＯＨ调ｐＨ至１２．８，最终加蒸馏水至１００ｍｌ。１．１．２　ＢＡＣ应用液　取ＢＡＣ贮存液１份加０．１５ｍｏｌ／ＬｐＨ７．０磷酸盐缓冲液４份。１．１．３　蛋白标准液　总蛋白标…     

CA72—4在胃癌患者血清中检测的临床意义

探讨胃癌患者血清中肿瘤标志物ＣＡ７２４水平的表达及临床诊断价值。方法采用放射免疫法对５７例胃癌患者，２６例胃良性疾病及３０例正常人（健康助血员）进行了血清ＣＡ７２４水平的检测。结果胃癌、良性疾病及健康对照组血清中的ＣＡ７２４中位水平分别为５７（２５５～１５１５）Ｕ／ｍｌ、２１０（１６０～２６３）Ｕ／ｍｌ和１２１（０９１～１９２）Ｕ／ｍｌ，胃癌组较良性疾患及健康对照组，均达统计学上的显著意义（Ｐ＜００１）。以３７Ｕ／ｍｌ为界值，胃癌组与胃良性疾患的敏感度的分别为：６３２％（３６／５７）与７７％（２／２６），正常对照组中ＣＡ７２４水平均＜３７Ｕ／ｍｌ，胃癌组较良性疾病组及正常对照组的阳性率有显著性差异（Ｐ＜００１）。不同病理类型的胃癌阳性检出率也有差异，其中以未、低分化胃癌患者最高（１８／２５）７２％，浸润伴转移癌（１０／１４）７１４％，中高分化胃癌（７／１１）６３６％，其他胃癌如残胃癌、印戒细胞癌等（１／７）１４３％。结论ＣＡ７２４是一种具有临床诊断参考价值的胃癌标志物，其表达水平在不同病理类型中具有一定差别     

简便,灵敏的天冬氨酸转氨酶同工酶电泳法

以醋纤薄膜为载体，半胱氨酸亚磺酸为氨基供体，ｍ－ＰＭＳ和ＭＴＴ为显色剂，电泳分离天冬氨酸转氨酶同工酶ｍ－ＡＳＴ和Ｃ－ＡＳＴ。灵敏度达２．２Ｕ／Ｌ，批内重复性７．５Ｕ／Ｌ（ｎ＝１０）ＣＶ＝９．５％；２１．４Ｕ／Ｕ（ｎ＝１０）ＣＶ＝８．４％。用１４０Ｕ／Ｌｍ－ＡＳＴ作倍化稀释考核其线性，结果为Ｙ＝０．０８５２９＋０．９９６２Ｘ（理论值），ｒ＝０．９９９７。与Ｔｅｒａｎｉｓｈｉ法比较，Ｙ＝１．７５５８＋０．８３１１Ｘ（本法），ｒ＝０．８９４０。     

多重PCR在幽门螺杆菌检测及分型中的应用

应用多重ＰＣＲ同时扩增１６ＳｒＲＮＡ和ｃａｇＡ基因来检测幽门螺杆菌感染及其分型。ＰＣＲ产物经ＤＮＡ序列测定证实为转异性扩增，敏感度为１０＾２ＣＦＵ／ｍｌ。４８株Ｈｐ菌株中，Ｉ型菌株（ｃａｇＡ＋）２６株（５４．２％）；５５０份胃粘液标本，Ｈｐ阳性（１６ＳｒＲＮＡ基因＋）２１６份（４７．５％），其中Ｉ型Ｈｐ１３９份（５３．３％）。     

曲马多用于小儿术后硬膜外腔镇痛的临床研究

目的：比较曲马多、哌替啶用于小儿硬膜外腔术后镇痛效果和副作用。方法：对８０例（ＡＳＡＩ－Ⅱ级）行硬膜外麻醉的患儿随机分成４组行术后硬膜外腔镇痛。Ａ组（ｎ＝２０）曲马多１．５ｍｇ／ｋｇ＋０．１２５％布比卡因的镇痛液５ｍｌ,Ｂ组（ｎ＝２０）曲马多１ｍｇ／ｋｇ＋０．１２５％布比卡因的镇痛液５ｍｌ;Ｃ组（ｎ＝２０）哌替啶０．７５％ｍｇ／ｋｇ＋０．１２５％布比卡因镇痛液５ｍｌ;Ｄ组（ｎ＝２０）单纯０．１２５     

MDM2和p53基因蛋白在急性白血病细胞中表达及与化疗反应的关系

目的：研究人急性白血病（ＡＬ）细胞ＭＤＭ２及ｐ５３基因蛋白表达水平、它们的相互关系及对ＡＬ化疗反应预测的价值。方法：免疫组化方法检测ＭＤＭ２及ｐ５３蛋白。结果：①４６例ＡＬ细胞ＭＤＭ２蛋白阳性率为７１．７％，ｐ５３蛋白阳性率为２１．７％，无细胞类型不同的差别（Ｐ＞０．０５），复发难治组比初发未治组约高１倍；②ＭＤＭ２与ｐ５３蛋白呈反向表达者多见，以ＭＤＭ２（＋），ｐ５３（－）方式表达（６７．４％）高于同向方式表达（１５．２％）（Ｐ＜０．０１）；③ＭＤＭ２蛋白阴性者骨髓缓解（ＢＭＲ）率（６９．２％）高于阳性者（３３３％）（Ｐ＜０．０５），两种蛋白不同表达关系对化疗效应有影响；④ＡＬ患者４例中２例化疗后ＭＤＭ２蛋白转阴性，获ＢＭＲ，另２例则反之。结论：人ＡＬ细胞ＭＤＭ２蛋白阳性率高，ｐ５３蛋白阳性率低；在同一ＡＬ细胞中两者多呈反向表达，且不同表达方式对化疗有影响；在ＡＬ细胞中确实存在ＭＤＭ２（＋），ｐ５３（－）表达方式。ＭＤＭ２蛋白，特别是ＭＤＭ２蛋白与ｐ５３蛋白联检可能预测ＡＬ细胞对化疗的敏感性     

紫外线对犬动脉血栓中^125I纤维蛋白放射活性的影响

目的：探讨紫外线（ＵＶ）的溶栓效应。方法：３６只健康成年犬随机分为６组，复制左侧股动脉血栓模型，ＵＶ１、ＵＶ２、ＵＶ３（各５只）及ＵＶ＋ＵＫ（８只）４组均行胸腹部ＵＶ照射１次，剂量分别为４４７．７２ｍＪ／ｃｍ２×８００ｃｍ２，２２３．８６ｍＪ／ｃｍ２×２００ｃｍ２，１１９．９３ｍＪ／ｃｍ２×５０ｃｍ２，４４７．７２ｍＪ／ｃｍ２×８００ｃｍ２，其中ＵＶ＋ＵＫ组ＵＶ照射后即静脉给予ＵＫ（尿激酶）１４００单位／分钟；ＵＫ组８只（只给ＵＫ），观察血栓溶解及血栓中１２５Ｉ纤维蛋白放射活性的动态变化。结果：实验后２４小时时血栓溶通率ＵＶ１～ＵＶ３组及对照组（５只）均为０／５，ＵＫ组４／８，ＵＶ＋ＵＫ组７／８，血栓溶通时间ＵＶ＋ＵＫ组明显短于ＵＫ组（Ｐ＜０．０１）；ＵＶ１和ＵＶ２组血栓放射活性在ＵＶ照射后３～９小时间显著下降（Ｐ＜０．０１）；实验后７小时内血栓放射活性下降幅度依次为ＵＶ１组＜ＵＫ组＜ＵＶ＋ＵＫ组（Ｐ＜０．０１）。结论：强红斑量ＵＶ大面积照射犬皮肤对犬动脉血栓具有较弱的溶解作用，联合应用ＵＫ并ＵＶ照射后可增强对血栓溶解效应。     

琼脂糖凝胶电泳法测定血清肌酸激酶MB亚型

为建立快速简便的血清肌酸激酶ＭＢ（ＣＫ－ＭＢ）亚型（ＭＢ＿１和ＭＢ＿２）检测方法，以应用于急性心肌梗塞的早期诊断，采用ＤＹＹ－Ⅲ型电泳系统进行琼脂糖凝胶电泳，筛选出一种合适的不连续缓冲液体系。结果表明，应用上述条件和方法，恒流４０ｍＡ，起始电压２４０Ｖ，终末电压５００Ｖ，电泳２０分钟可很好地分离ＭＢ＿１和ＭＢ＿２，从血清分离到扫描测定的检测全过程仅需４５分钟；线性范围为ＣＫ－ＭＢ亚型活力１．９～９３．２Ｕ／Ｌ，批间变异系数＜７．５％；测定了３０名健康人血清，有５名可检出ＣＫ－ＭＢ及其亚型，其ＭＢ％为３．３％～４．５／，ＭＢ＿２／ＭＢ＿１比值为０．２９～０．６５。该方法具有较高的灵敏度，能检测出ＣＫ－ＭＢ含量极微的正常人血清中的ＣＫ－ＭＲ亚型，且避免了国外“Ｒｅｐ”电泳系统所需的高电压（１４００Ｖ）及昂贵的仪器设备，适合在国内临床推广使用。