青蒿琥酯对人结肠癌细胞HCT-8细胞凋亡和细胞周期的影响

目的:研究青蒿琥酯对人结肠癌HCT-8细胞凋亡和细胞周期的影响.方法:实验分为10,20,30 μmol·L-1青蒿琥酯处理组,阴性对照组和空白对照组.采用透射电镜和流式细胞仪检测青蒿琥酯对HCT-8细胞的凋亡诱导效果;采用流式细胞仪分析青蒿琥酯对HCT-8细胞周期的影响;采用Western blot印迹法检测青蒿琥酯对细胞凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2表达的影响.结果:经青蒿琥酯处理后,电镜下可见HCT-8细胞膜皱缩、染色质凝聚、核碎裂、凋亡小体形成.10,20,30 μmol·L-1青蒿琥酯处理组凋亡率分别为17.1％±3.8％,29.5％±5.1％,41.4％±5.8％,显著高于空白对照组5.1％±1.4％.P＜0.05.在20 μmol· L-1青蒿琥酯处理组,HCT-8细胞G0/G1期所占比例随着药物作用时间延长而增加,S期与G2/M期细胞所占比例则下降.10,20,30 μmol·L -1青蒿琥酯处理组Bax蛋白表达水平分别为0.20±0.03,0.40±0.05和0.50±0.08显著高于空白对照组(0.06 ±0.02),P＜0.05;Bcl-2蛋白表达水平未见明显变化,Bcl-2/Bax呈下降趋势.结论:青蒿琥酯可以抑制人结肠癌细胞HCT-8增殖,诱导细胞凋亡,其诱导凋亡作用机制可能与其阻滞结肠癌细胞周期和上调促癌基因Bax表达有关.     

青蒿琥酯诱导人胚肺成纤维细胞凋亡的分子机制研究

目的 研究青蒿琥酯对人胚肺成纤维细胞(HELF)系 HFL-I细胞株体外生长的影响,为青蒿琥酯抗纤维化提供实验依据.方法 采用CCK-8法检测青蒿琥酯对体外培养的HFL-I细胞的生长抑制作用,用流式细胞术测定细胞凋亡率; RT-PCR法测定Bcl-2 mRNA和Bax mRNA表达.结果 青蒿琥酯呈浓度依赖性抑制HFL-I细胞增殖,HFL-I细胞经青蒿琥酯作用后凋亡率明显增加(P<0.01),Bcl-2 mRNA的表达显著低于对照组,Bax mRNA的表达显著高于对照组.结论 青蒿琥酯具有抗肺纤维化作用,可能机制为通过下调Bcl-2 mRNA和上调Bax mRNA表达抑制HFL-I细胞增殖,促进HFL-I细胞凋亡.     

青蒿琥酯治疗肝癌的机理初探

目的：研究青蒿琥酯抗肝癌的作用机理。方法：检测拓扑异构酶活性，甲基绿－派络宁染色检测凋亡细胞，免疫组化方法观察Bax、Bcl-2的表达。结果：经青蒿琥酯处理的SMMC－7721细胞拓扑异构酶活性增强，青蒿琥酯处理后，凋亡细胞明显增加，免疫组化显示，青蒿琥酯组肿瘤标本Bax蛋白阳性细胞数增多，Bcl-2蛋白阳性细胞数减少。结论：青蒿琥酯抗肝癌作用机理可能为上调Bax基因，下调Bcl-2基因， 诱导癌细胞凋亡，同时影响拓扑异构酶活性。     

基于AMPK-mTOR信号通路探讨甲亢宁胶囊干预Graves病的影响

目的?观察甲亢宁胶囊对人甲状腺正常细胞Nthy-ori-3-1凋亡的影响，基于磷酸腺甙活化蛋白激酶（AMPK）-雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路探讨甲亢宁胶囊干预Graves病（GD）的影响。方法?M22诱导人甲状腺滤泡上皮细胞株（Nthy-ori-3-1）建立GD细胞模型，设对照组、模型组、空白血清组、甲亢宁含药血清低剂量组、甲亢宁含药血清中剂量组和甲亢宁含药血清高剂量组。CCK8检测甲亢宁含药血清高、中、低浓度干预Nthy-ori-3-1增殖的抑制率；ELISA检测各组细胞上清液中cAMP释放量；流式细胞术检测各组Nthy-ori-3-1细胞凋亡情况；qRT-PCR检测各组B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2-相关X 蛋白（Bax）、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶3（Caspase-3）mRNA表达；Western Blot检测Bcl-2、Bax、Caspase-3、AMPK、mTOR、p-AMPK、p-mTOR蛋白表达。结果?甲亢宁含药血清各剂量组Nthy-ori-3-1细胞凋亡率较模型组增高（P<0.05），且随着药物浓度升高，细胞凋亡率越高（P<0.05）。与对照组比较，模型组的cAMP释放量升高，Bax、Bcl-2、Caspase-3 mRNA表达量及蛋白表达升高，p-AMPK、p-mTOR蛋白表达升高（P<0.05，P<0.01）。与模型组比较，甲亢宁含药血清低、中、高剂量组cAMP 释放量减低，Bax、Caspase-3 mRNA及蛋白表达升高， Bcl-2 mRNA及蛋白表达、p-mTOR蛋白表达降低（P<0.01）；同时，甲亢宁含药血清中、高剂量组p-AMPK蛋白表达升高（P<0.01）。结论?甲亢宁含药血清促进细胞凋亡，对GD细胞凋亡的调控作用可能与通过激活AMPK-mTOR信号通路有关。     

青蒿琥酯对T细胞淋巴瘤细胞株凋亡诱导作用的实验研究

目的：探讨青蒿琥酯对T细胞淋巴瘤细胞株Jurkat细胞的凋亡诱导作用及其可能的作用机制。方法：采用Mrrll比色法检测青蒿琥酯对Jurkat细胞体外生长的抑制作用;细胞形态学、DNA琼脂糖凝胶电泳、DNA的PI染色等观察和检测Jurkat细胞的凋亡;Western-blot法检测Jurkat细胞凋亡过程中Bcl-2、Bax、Caspase-8和ICAD蛋白表达水平的变化。结果：青蒿琥酯对Jurkat细胞的生长有明显的抑制作用,且生长抑制率与药物作用浓度呈正相关（P〈0．01）,呈浓度依赖性;其增殖抑制作用与诱导细胞凋亡有关;随药物浓度的增高Bcl-2和ICAD蛋白表达量逐渐下降,而Bax蛋白表达上调,Caspase-8蛋白出现明显的剪切激活带。结论：青蒿琥酯具有诱导Jurkat细胞凋亡作用,既能通过线粒体途径又能通过外源性途径诱导Jurkat细胞凋亡。     

青蒿琥酯对U937细胞凋亡的诱导作用及其对Bcl-2、Bax、ICAD和Caspase-8表达的影响

目的：探讨青蒿琥酯对急性髓系白血病细胞株U937细胞的凋亡诱导作用及其可能机制。方法：采用MTT比色法检测青蒿琥酯对U937细胞体外生长的抑制作用;细胞形态学、DNA琼脂糖凝胶电泳、DNA的PI染色等观察和检测U937细胞的凋亡;Western-blot法检测U937细胞凋亡过程中Bcl-2、Bax、Caspase-8和ICAD蛋白表达水平的变化。结果：青蒿琥酯对U937细胞的生长有明显抑制作用,且生长抑制率与药物作用浓度呈正相关（P〈0.01）,呈浓度依赖性,48小时IC50值为24.48μg/ml;其增殖抑制作用与诱导细胞凋亡有关;随药物浓度的增高Bcl-2和ICAD蛋白表达量逐渐下降,而Bax蛋白表达上调,Caspase-8蛋白出现明显的剪切激活带。结论：青蒿琥酯具有诱导U937细胞凋亡作用,既能通过线粒体途径又能通过外源性途径诱导U937细胞凋亡。     

青蒿琥酯对热化疗诱导人结肠上皮细胞损伤的保护机制研究

目的:探讨青蒿琥酯对热化疗诱导人结肠上皮细胞损伤的保护作用,并对其作用机制进行初步研究。方法:体外原代培养人结肠上皮细胞,并将其分为正常对照组、热化疗组、热化疗+不同浓度青蒿琥酯组,利用顺铂联合温热(43℃)处理人结肠上皮细胞30 min,采用CCK8试剂检测不同浓度青蒿琥酯对人结肠上皮细胞增殖情况的影响,流式细胞仪检测青蒿琥酯对人结肠上皮细胞凋亡的影响,免疫印迹技术检测青蒿琥酯对ERK/P53信号通路蛋白及Bax、MDM2蛋白表达的影响。结果:热化疗导致人结肠上皮细胞发生凋亡,其中p-ERK、p-P53、Bax及MDM2蛋白表达水平均高于对照组(P0.05)。不同浓度青蒿琥酯作用热化疗处理的人结肠上皮细胞后,人结肠上皮细胞相对存活率显著升高并表现出药物浓度依赖性,细胞凋亡率降低呈剂量依赖性,同时p-ERK、p-P53、Bax及MDM2蛋白表达水平也显著降低。结论:青蒿琥酯对热化疗损伤人结肠上皮细胞具有保护作用,其作用机制可能与抑制ERK/P53信号通路活化和抑制促凋亡基因Bax及MDM2的表达有关。     

青蒿琥酯对骨髓瘤RPMI 8226细胞增殖、凋亡及对Survivin、Caspase-3、Caspase-7的影响

目的探讨青蒿琥酯对体外培养的人多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226的增殖、凋亡及对凋亡相关基因survivin及caspase-3、caspase-7表达的影响。方法采用MTT法检测青蒿琥酯对RPMI8226细胞增殖的抑制作用,光镜下观察细胞形态学变化,流式细胞仪分析细胞凋亡率,荧光定量PCR(FQ-PCR)检测survivin和caspase-3、caspase-7mRNA表达水平变化,Western blotting检验Survivin蛋白表达变化,应用Caspase-3/7试剂盒检测Caspase-3、Caspase-7蛋白活性。结果青蒿琥酯质量浓度从2.5μg/mL增加至50μg/mL时,青蒿琥酯体外对RPMI8226细胞的抑制率由33.55%增加到74.71%。细胞凋亡率呈剂量依赖性增加,50μg/mL青蒿琥酯诱导RPMI8226细胞最大凋亡率达(68.1±5.9)%。不同质量浓度青蒿琥酯干预48h后Survivin mRNA及蛋白表达水平明显降低,Caspase-3、Caspase-7mRNA及蛋白活性明显升高(P0.01)。结论青蒿琥酯对RPMI8226细胞有生长抑制和诱导凋亡作用,其机制可能与增强Caspase-3、Caspase-7活性,抑制抗凋亡分子survivin表达有关。     

青蒿琥酯诱导人胃癌细胞凋亡的分子机制研究

目的探讨青蒿琥酯对人胃癌HGC27细胞凋亡的影响及可能的分子机制。方法将HGC27细胞分为正常对照组、20 mg·L-1青蒿琥酯组、80 mg·L-1青蒿琥酯组、160 mg·L-1青蒿琥酯组,采用CCK8分别检测青蒿琥酯作用24、48和72 h后对HGC27细胞增殖的影响,流式细胞术检测青蒿琥酯对HGC27细胞凋亡的影响,Western blot检测青蒿琥酯对HGC27细胞中β-catenin、GSK-3β、c-Myc以及Caspase-3表达的影响。结果青蒿琥酯能抑制HGC27细胞增殖,与对照组相比,青蒿琥酯各浓度组的增殖抑制率显著升高(P0.05),且具有浓度-时间依赖性。青蒿琥酯能诱导HGC27细胞凋亡,与对照组相比,青蒿琥酯各浓度组的细胞凋亡率显著升高(P0.05),且具有浓度依赖性。Western blot检测发现青蒿琥酯能显著上调GSK-3β和Caspase-3的蛋白表达(P0.05),抑制β-catenin和c-Myc的蛋白表达(P0.05)。结论青蒿琥酯能明显抑制HGC27细胞的增殖,诱导细胞凋亡,这可能与其抑制Wnt/β-catenin信号通路活化有关。     

青蒿琥酯抑制人肝癌细胞株HepG2细胞生长及其机制的初步研究

目的：研究青蒿琥酯对人肝癌细胞株HepG2细胞增殖和survivin表达的影响,探讨青蒿琥酯影响肝癌细胞增殖的可能机制.方法：常规培养人肝癌细胞株HepG2,设立空白对照组;青蒿琥酯不同浓度组（3.125μg/ml、6.25μg/ml、12.5μg/ml、50μg/ml）,作用不同时间后用MTT法检测青蒿琥酯对人肝癌细胞株HepG2细胞增殖的影响,应用RT-PCR检测细胞survivin在mRNA水平的表达.结果：青蒿琥酯作用人肝癌细胞株HepG2后,与对照组比较细胞生长明显受到抑制（P〈0.05）,当青蒿琥酯浓度在12.5μg/ml时,survivin的表达（相对表达量为（0.75＋0.01）显著降低（P〈0.05）.结论：青蒿琥酯可通过下调survivin的表达来抑制肝癌细胞HepG2的生长.     

益心泰含药血浆对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞增殖、凋亡的影响及机制研究

目的探讨益心泰含药血浆对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的心肌成纤维细胞（CFs）增殖、凋亡的影响及 相关机制。方法将分化完全的CFs 随机分为空白血浆组、模型组、益心泰含药血浆组,每组6 个复孔。除 空白血浆组外,其余各组以AngⅡ（10-7 mol·L-1）诱导构建细胞增殖及纤维化模型。空白血浆组及模型组以15% 空白血浆培养,益心泰含药血浆组以15%益心泰含药血浆培养,干预24 h。采用CCK-8 法检测CFs 细胞增殖 情况;ELISA 法测定细胞中Ⅰ型胶原（CollagenⅠ）、Ⅲ型胶原（Collagen Ⅲ）及转化生长因子（TGF-β1）含量;流 式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期;Western Blot 法检测细胞中TGF-β1、B 细胞白血病/淋巴瘤-2（Bcl-2）及 Bcl-2 相关X 蛋白（Bax）的蛋白表达水平;RT-qPCR 法检测CFs 的增殖细胞核抗原（PCNA）、α-平滑肌肌动蛋 白（α-SMA）、CollagenⅠ/Ⅲ mRNA 表达水平。结果15%益心泰含药血浆对CFs 无明显的促细胞增殖或抑制作 用。与空白血浆组比较,模型组细胞G0/G1 期的细胞百分率明显降低（P＜0.01）,S 期和G2/M 期的细胞百分率 明显升高（P＜0.01）;细胞凋亡率有所下降,但差异无统计学意义（P＞0.05）;Ⅰ/Ⅲ型胶原含量及TGF-β1 水平 均显著升高（P＜0.01）;TGF-β1、Bcl-2 蛋白表达明显上调（P＜0.01）,Bax 蛋白表达明显下调（P＜0.01）; PCNA、α-SMA、CollagenⅠ/Ⅲ mRNA 表达水平均明显升高（P＜0.01）。与模型组比较,益心泰含药血浆组细胞 的G0/G1 期细胞百分率明显升高（P＜0.01）,S 期和G2/M 期的细胞百分率明显降低（P＜0.01）,细胞凋亡率明 显升高（P＜0.01）;Ⅰ、Ⅲ型胶原含量及TGF-β1 水平明显降低（P＜0.01）;TGF-β1、Bcl-2 蛋白表达明显下 调（P＜0.01）,Bax 蛋白表达明显上调（P＜0.01）;PCNA、α-SMA、CollagenⅠ/Ⅲ mRNA 表达水平均明显降 低（P＜0.01）。结论益心泰含药血浆能够抑制CFs 细胞增殖分化及纤维化,可能与其调控Bax/Bcl-2 平衡及 下调纤维化相关因子表达有关。     

青蒿琥酯通过miR-21/PTEN通路对人大肠癌CCL229细胞恶性生物学行为抑制作用的研究

目的探究青蒿琥酯对人大肠癌CCL229细胞恶性生物学行为抑制作用的机制。方法采用MTT法检测青蒿琥酯对CCL229细胞活力的影响;通过流式细胞术检测青蒿琥酯对CCL229细胞凋亡的影响;采用Transwell法检测青蒿琥酯对CCL229细胞侵袭能力的影响;采用克隆形成实验检测青蒿琥酯对CCL229细胞集落形成能力的影响;采用Western blotting法检测青蒿琥酯对CCL229细胞内自噬特异性蛋白如自噬效应蛋白(Beclin1)、轻链3-Ⅰ/Ⅱ蛋白(light chain 3-Ⅰ/Ⅱ,LC3-Ⅰ/Ⅱ)、自噬相关蛋白5(autophagy related protein 5,Atg5)、Atg5-Atg12复合物以及上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关蛋白如紧密连接蛋白(ZO-1)、上皮钙黏蛋白(epithelial cadherin,E-cadherin)、神经钙黏蛋白(neuronal cadherin,N-cadherin)、锌指转录因子(Slug)和第10号染色体同源缺失性磷酸酶-张力蛋白(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten,PTEN)表达的影响;采用qRT-PCR法检测青蒿琥酯对CCL229细胞内mi R-21 m RNA表达的影响;通过双荧光素酶报告基因实验验证miR-21与PTEN的靶向关系;考察过表达或抑制miR-21与PTEN对青蒿琥酯抑制CCL229细胞恶行生物学行为的影响。结果青蒿琥酯显著降低CCL229细胞存活率(P0.05、0.01、0.001),显著促进CCL229细胞凋亡(P0.001),显著抑制CCL229细胞侵袭和克隆形成能力(P0.001),显著上调CCL229细胞内Atg5-Atg12复合物、Atg5、Beclin1、LC3-Ⅰ/Ⅱ、ZO-1、E-cadherin表达水平(P0.05、0.01),显著下调N-cadherin和Slug蛋白表达水平(P0.05)。CCL229细胞内miR-21 mRNA高表达(P0.01),青蒿琥酯显著抑制CCL229细胞内miR-21 mRNA表达水平(P0.05)。过表达miR-21显著抑制青蒿琥酯对CCL229细胞的促凋亡作用(P0.001),显著减弱青蒿琥酯对CCL229细胞侵袭和克隆形成能力的抑制作用(P0.01),显著抑制青蒿琥酯对CCL229细胞Atg5-Atg12复合物、Atg5、Beclin1、LC3-Ⅰ/Ⅱ、ZO-1、E-cadherin表达水平的上调作用(P0.05、0.01),显著抑制青蒿琥酯对CCL229细胞N-cadherin和Slug蛋白表达水平的下调作用(P0.01);抑制miR-21则作用相反。PTEN是miR-21的下游靶基因,过表达miR-21显著抑制CCL229细胞内PTEN蛋白表达水平(P0.01),抑制miR-21显著上调PTEN蛋白表达水平(P0.01),过表达miR-21显著抑制野生型PTEN(WT-PTEN)质粒的荧光素酶活性(P0.01)。过表达PTEN与抑制miR-21表达对CCL229细胞作用一致,同时过表达miR-21和PTEN不会影响青蒿琥酯对CCL229细胞恶性生物学行为的抑制作用。结论青蒿琥酯能够通过调控miR-21和PTEN表达诱导CCL229细胞凋亡和自噬,并抑制细胞增殖和侵袭。     

红景天苷对急性心肌梗死大鼠心肌相关凋亡因子及Bax、Bcl-2、Caspase-3表达的影响

目的：探讨红景天苷对急性心肌梗死（AMI） 大鼠心肌相关凋亡因子及B 淋巴细胞瘤-2 基因（Bcl-2）、Bcl-2 相关X 蛋白（Bax）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Caspase-3） 表达的影响。方法：75 只健康SPF 级SD 大鼠,随机选择10 只作为假手术组,仅进行开胸、缝合处理;剩余65 只采用冠脉结扎诱导建立大鼠AMI 模型,剔除不合格模型后共有50 只标准大鼠AMI 模型,随机分为模型组、阳性对照组及红景天苷低、中、高剂量组,每组10 只。阳性对照组按10 mg/kg 的剂量给予卡维地洛;红景天苷低、中、高剂量组分别按12、24、36 mg/kg 的剂量给予红景天苷,均溶于10 mL 生理盐水灌胃给药;假手术组和模型组给予等量生理盐水灌胃。模型制备成功后次日开始灌胃,持续8 周。原位末端凋亡检测（TUNEL） 法检测心肌细胞凋亡情况,苏木精-伊红（HE） 染色法测定梗死面积,BCA 法测定Bcl-2、Bax、Caspase-3 蛋白表达,荧光定量PCR 法检测Bcl-2、Bax、Caspase-3 mRNA 相对表达。结果：与假手术组比较,模型组大鼠心肌细胞凋亡指数（AI）、心肌梗死面积、Bax、Caspase-3蛋白及mRNA 相对表达均增加（P＜0.05）,Bcl-2 蛋白及mRNA 相对表达均降低（P＜0.05）。与模型组比较,阳性对照组及红景天苷低、中、高剂量组大鼠心肌细胞AI、心肌梗死面积、Bax、Caspase-3 蛋白及mRNA 相对表达均降低（P＜0.05）,Bcl-2 蛋白及mRNA 相对表达均升高（P＜0.05）。与阳性对照组比较,红景天苷低、中剂量组大鼠心肌细胞AI、心肌梗死面积、Bax、Caspase-3 蛋白及mRNA 相对表达升高（P＜0.05）;Bcl-2 蛋白及mRNA 相对表达降低（P＜0.05）。结论：红景天苷可通过下调Bax、Caspase-3 的表达,上调Bcl-2 的表达,来减少细胞凋亡,缩小大鼠AMI 模型梗死面积。     

化痰散结中药对甲状腺细胞凋亡及Bax Bcl-2表达的影响

目的：研究化痰散结中药甲肿消对甲状腺细胞凋亡及Bax、Bcl-2表达的影响，探讨其治疗甲状腺肿大的作用机制。方法：甲肿消大鼠含药血清培养甲状腺FRTL细胞株，采用流式细胞仪检测细胞凋亡指数（AI％）；实时荧光定量PCR法检测Bax、Bcl-2的mRNA表达，Western—Blot检测其蛋白表达。结果：甲肿消可以显著升高细胞的凋亡指数；大剂量和中剂量组Bax的mRNA和蛋白表达明显升高，具有统计学意义，Bax／Bcl-2的mRNA比值有升高趋势，中剂量组差异显著（P〈0．05）。结论：化痰散结中药能促进甲状腺细胞凋亡，提示甲肿消治疗甲状腺肿大可能是通过促进细胞凋亡而实现，而Bax可能是其主要作用位点。     

青蒿琥酯纳米脂质体对人肝癌HepG2细胞抗血管生成作用的研究

目的: 探讨在青蒿琥纳米脂质体的干预下,血管内皮生长因子(VEGF)及血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR2)在HepG2中的表达,为肝癌的治疗提供理论依据。 方法: 取对数生长期HepG2细胞制成3×10⁵/mL单细胞悬液,接种于35 cm²培养皿中培养24 h后给药,分别设生理盐水对照组、青蒿琥酯原料药组、青蒿琥酯纳米脂质体组(浓度均为μmol·L^-1),药物作用24 h。采用RT-PCR法检测各处理组HepG2细胞中VEGF mRNA及VEGFR2 mRNA的表达水平;Western blotting法检测各处理组HepG2细胞中VEGF及VEGFR2的蛋白表达水平。 结果: 青蒿琥酯纳米脂质体组VEGF及VEGFR2 mRNA相对表达量为0.22±0.02,0.09±0.02;对照组为0.55±0.03,0.53±0.02;青蒿琥酯纳米脂质体组VEGF,VEGFR2蛋白相对表达量为0.33±0.06,0.25±0.06,对照组为0.95±0.03,0.78±0.03,(P<0.05)。青蒿琥酯纳米脂质体组与原料药组的VEGF及VEGFR2 mRNA表达和蛋白表达均低于对照组,且纳米脂质体组表达量低于原料药组。 结论: 青蒿琥酯纳米脂质体能够抑制肿瘤血管的生成达到抗肿瘤作用,且作用强于青蒿琥酯原料药,有应用于肝癌治疗的潜在价值。     

青蒿琥酯对人慢性粒细胞白血病K562细胞凋亡及Fas/FasL蛋白表达的影响

目的研究中药青蒿琥酯体外诱导K562细胞凋亡的作用及其Fas/FasL蛋白的表达。方法采用MTT法、光学显微镜、透射电镜技术、流式细胞术对青蒿琥酯诱导K562细胞凋亡进行了系统观察,并应用流式细胞术检测了Fas/FasL蛋白表达水平的改变。结果青蒿琥酯抑制K562细胞的增殖,IC50值为12.41μg/ml,其有时间、剂量-效应关系;50μg/ml的青蒿琥酯可诱导K562细胞凋亡,且具有时间-效应关系,同时上调K562细胞Fas蛋白的表达,下调FasL的表达。结论青蒿琥酯可诱导K562细胞凋亡,Fas/FasL表达的改变可能是青蒿琥酯诱导K562细胞凋亡的机制之一。     

活血消瘿方含药血清调控AMPK/mTOR通路对脂多糖诱导的甲状腺滤泡上皮细胞自噬和凋亡的影响

目的 探讨活血消瘿方含药血清对脂多糖(LPS)诱导的甲状腺滤泡上皮细胞(TFECs)自噬和凋亡的影响以及作用机制。方法 光学显微镜观察分离培养的SD大鼠TFECs细胞的形态;免疫荧光染色鉴定TFECs中特异抗原甲状腺球蛋白(Tg)。取对数生长期的TFECs,分为对照组、LPS组、含药血清组、含药血清+compound C(AMPK抑制剂)组、含药血清+MHY1485(mTOR激活剂)组,MTT法检测各组细胞活力;绿色荧光蛋白(GFP)标记质粒转染检测各组细胞自噬小体变化;流式细胞术检测各组细胞凋亡;western blot检测各组细胞中微管相关蛋白1轻链3(LC3)I、LC3II、Beclin1、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)及AMP活化蛋白激酶(AMPK)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路相关蛋白表达。结果 光学显微镜观察显示,TFECs形态为梭形、形态均一,且可成簇生长。免疫荧光结果显示,TFECs细胞质中可见较强的Tg荧光染色。与对照组比较,LPS组TFECs细胞活力、自噬小体数量、LC3II/LC3I、Beclin1、Bcl-2、p-AMPK/AMPK蛋白相对表达量显著降低,炎性因子IL-6 、TNF-α水平、细胞凋亡率、Bax、p-mTOR/mTOR蛋白相对表达量显著升高(P< 0.05);与LPS组比较,含药血清组TFECs细胞活力、自噬小体数量、LC3II/LC3I、Beclin1、Bcl-2、p-AMPK/AMPK蛋白相对表达量显著升高,炎性因子IL-6 、 TNF-α水平、细胞凋亡率、Bax、p-mTOR/mTOR蛋白相对表达量显著降低(P< 0.05);与含药血清组比较,含药血清+compound C组、含药血清+MHY1485组TFECs中相应指标与上述趋势相反。结论 活血消瘿方含药血清对LPS诱导的TFECs自噬的促进作用及细胞凋亡的抑制作用可能与激活AMPK/mTOR通路有关。     

绿原酸对TGF-β_1刺激人肝星形细胞凋亡的影响

目的:探讨绿原酸对TGF-β_1刺激人肝星形细胞凋亡的影响。方法:取指数生长期细胞,随机分为空白对照组、TGF-β_1组及绿原酸高、中、低浓度组,以MTT检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,实时定量PCR检测α-SMA、Bax、Bcl-2 mRNA的表达,免疫细胞化学检测α-SMA蛋白的表达,Western-blot检测Bax、Bcl-2蛋白表达。结果:10μg/L TGF-β_1刺激HSC细胞后,HSC-LX2细胞中α-SMA、Bcl-2 mRNA及蛋白表达显著升高,Bax mRNA及蛋白表达显著降低(P0.05)。与模型组比较,绿原酸高、中剂量组细胞活力、α-SMA、Bcl-2 mRNA及蛋白表达显著降低,细胞凋亡率、Bax mRNA及蛋白表达显著升高(P0.05或P0.01)。结论:绿原酸通过调控Bax、Bcl-2的表达,诱导活化的HSC-LX2凋亡,清除活化的肝星形细胞,抗肝纤维化。     

青蒿琥酯对硼替佐米耐药骨髓瘤细胞株的耐药逆转作用及机制

目的:探讨青蒿琥酯对硼替佐米耐药骨髓瘤(multiple myeloma,MM)细胞株的增殖抑制作用,并探讨其逆转骨髓瘤细胞耐药的作用机制。方法:采用硼替佐米浓度梯度递增法,以人MM细胞株NCI-H929为亲本,建立硼替佐米耐药的NCIH929细胞株NCI-H929BR。采用噻唑蓝(MTT)比色法检测青蒿琥酯对NCI-H929BR的增殖抑制及对硼替佐米的耐药逆转作用;流式细胞术检测细胞凋亡;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测核转录因子-κB p65(nuclear factor-κB p65,NF-κB p65)蛋白,磷酸化核转录因子-κB p65(phospho-nuclear factor-κB p65,NF-κB p-p65)蛋白,P糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp),B细胞淋巴瘤/白血病-2(B-cell lymphoma/leukemia-2,Bcl-2)蛋白以及Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)的表达变化。结果:采用浓度梯度递增法成功建立了硼替佐米耐药的NCI-H929细胞株NCI-H929BR,其耐药倍数为20.2倍。青蒿琥酯对NCI-H929BR有明显的增殖抑制作用,抑制效应呈浓度依赖性;硼替佐米(50 nmol·L-1)单药对NCI-H929BR无明显增殖抑制作用,青蒿琥酯(12.5 mg·L-1)单药的抑制率为(23.53±2.21)%(P0.05),两药联合的抑制率为(60.71±3.43)%(P0.01);青蒿琥酯处理后,NCI-H929BR的凋亡率上升,NF-κB p65,NF-κB p-p65,P-gp,Bcl-2表达下降,Bax表达上升,呈浓度依赖性。结论:青蒿琥酯可抑制NCI-H929BR的增殖,促进细胞凋亡,逆转其对硼替佐米的耐药性,下调NF-κB p65,p-p65,P-gp以及Bcl-2的表达,上调Bax的表达可能为其逆转肿瘤细胞耐药的作用机制。     

青蒿琥酯对佐剂性关节炎滑膜组织中凋亡因子Fas／FasL及Bcl-2／Bax表达影响的实验观察

目的观察青蒿琥酯对佐剂性关节炎滑膜组织中凋亡因子Fas/FasL及Bc l-2/Bax表达的影响。方法雄性W istar大鼠60只随机分为6组,空白组、模型组(对照组)、青蒿琥酯I组(高剂量组)、青蒿琥酯Ⅱ组(低剂量组)、青蒿琥酯加甲氨喋呤组及甲氨喋呤组。除空白组外,各实验组用完全弗氏佐剂制备成佐剂性关节炎模型。记录用药干预后各组关节肿胀指数,免疫组化法检测滑膜组织中凋亡相关因子Fas/FasL,Bc l-2及Bax的表达情况。结果各实验组关节肿胀指数明显降低,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。滑膜组织中Fas/FasL及Bax被上调,Bc l-2被下调,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论实验证实了青蒿琥酯有诱导佐剂性关节炎病情缓解的作用,上调滑膜组织中Fas/FasL及Bax,下调Bc l-2的表达而诱导滑膜细胞凋亡可能是其机制之一。