TNP—470、顺铂联合应用抗人舌癌生长的实验研究

目的：研究血管生成抑制剂TNP－470对人舌癌生长的抑制作用。方法：MTT法 定TNP－470、顺铂（CDDP）对体外培养人舌癌Tca8113细胞增殖的抑制作用。用Tca8113细胞形成裸鼠肿瘤皮下移植模型,移植二周后腹腔注射用药,TNP－470（30mg/kg)隔日一次,共七次,CDDP（5mg/kg)一周二次,共四次,同期测量肿瘤体积和裸鼠体笪“移植四周后处死动物,检测肿瘤体积和主要脏器。结果：TNP－470作用Tca8113细胞的半数抑制浓度（IC50）为70．79μg/ml。TNP-470 CDDP组抑瘤率分别为31．7％、40．3％和65．6％,实验组与对照组之间抑瘤率有显著性差异（P＜0．05）,TNP－470＋CDDP组抑瘤效果最佳,结论TNP－470对人舌癌体内生长有一定抑制作用,联合应用CDDP可进一步提高治疗效果。     

血管生成抑制剂TNP-470抑制腺样囊性癌转移的实验研究

目的观察血管生成抑制剂TNP-470对人涎腺腺样囊性癌肺转移的抑制作用.方法将腺样囊性癌ACC-M细胞接种于裸鼠尾静脉(1×106/鼠).将20只裸鼠随机分成对照组和治疗组,自第2天起分别给予溶剂(3%酒精)和TNP-470(40mg/kg),隔天给药1次,共用4周.接种后6周末处死动物,检测对照组和治疗组的肺转移率及含转移灶的肺重量,观察转移情况.结果对照组和治疗组肺转移率分别为90%和40%(P＜0.025);含转移灶的肺重量分别为0.2138g±0.0667g和0.1685g±0.0445g(P＜0.05).结论血管生成抑制剂TNP-470能明显抑制腺样囊性癌的肺转移.     

TNP-470抗人涎腺腺样囊性癌裸鼠肺转移作用的实验研究

肿瘤生长需依赖新生血管生成以维持其营养及代谢要求 ,抗肿瘤血管生成可成为控制肿瘤生长和转移新的治疗途径。我们观察血管生成抑制物TNP 4 70不同应用时间对肺高转移性涎腺腺样囊性癌 (ACC M )在裸鼠体内生长和转移的抑制作用 ,探讨其作用机理 ,为临床试验提供参考依据。1 材料与方法 :①动物实验 :ACC M细胞 (上海第二医科大学附属第九人民医院口腔外科肿瘤生物实验室建立并提供 )经裸鼠尾静脉注射形成肿瘤肺转移动物模型。 4 5只裸鼠随机被分成接种后第 1、7、14天用药组及对照组。用药组动物分别给予皮下注射 30mg/kg的TNP 4 70 …     

血管生成抑制剂与化疗联合对裸鼠腺样囊性癌移植瘤生长的影响

目的　探讨单独使用血管生成抑制剂及其与化疗药联合对腺样囊性癌裸鼠移植瘤生长的影响。方法　 BABL/C nu/nu裸小鼠接种腺样囊性癌Acc-M细胞系48 h后分6组:对照组;单纯皮下注射TNP-470低、中、高剂量组;单纯腹腔注射5-Fu组;中剂量TNP-470加5-Fu联合治疗组,分别用药治疗,观察治疗效果。瘤组织标本行血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)免疫组化染色及透射电镜观察。结果　TNP-470 100 mg/kg 组,TNP-470 30 mg/kg与5-Fu 50 mg/kg联合使用组有显著抑瘤效果;电镜下见凋亡瘤细胞增多。各实验组均有 VEGF、bFGF的不同程度表达。结论　血管生成抑制剂可抑制腺样囊性癌生长,但因其生长相对缓慢,敏感性不及肉瘤等生长快、血供丰富的肿瘤明显,与化疗药联合使用可达到较好的协同作用。     

复发性涎腺腺样囊性癌裸鼠移植瘤模型的建立及其生物学特性

目的建立人复发性涎腺腺样囊性癌裸鼠移植瘤动物模型。方法将人复发性涎腺腺样囊性癌组织块,进行裸鼠皮下接种、传代,建立裸鼠移植瘤模型,并对其进行光镜、电镜、免疫组织化学及染色体分析。结果人复发性腺样囊性癌组织块移植于裸鼠后,获原代移植成功。2年期间移植瘤在裸鼠之间共连续传代4代,移植BALB/C裸鼠5只,平均潜伏期44.33天。经光镜、电镜、免疫组织化学观察发现移植瘤与其原发肿瘤结构特征一致。染色体检查为亚中着丝点染色体,符合人类体细胞核型。结论成功建立人复发性涎腺腺样囊性癌裸鼠移植瘤模型并传代,移植瘤保留了原发肿瘤的组织学特征和染色体核型。     

减毒沙门菌体内介导基因转移对ACC-M抑制的实验研究

目的:观察构建含有Tip30与人IFN-γ基因的真核表达及共表达质粒的重组减毒伤寒沙门菌对腺样囊性癌肺转移抑制作用。方法:4周龄BALB/Cnunu雄鼠25只,随机分成5组,每组5只,其中对照组5只(PBS)、单纯减毒沙门菌组5只(SL7207)、携带人IFN-γ基因减毒沙门菌治疗组5只(SL7207/pCI-IFN)、携带Tip30基因减毒沙门菌治疗组5只(SL7207/pCI-Tip30)、携带Tip30与人IFN-γ基因的真核共表达质粒的重组减毒沙门菌治疗组5只(SL7207/pCI-Tip30/IFN),均于尾静脉接种高转移腺样囊性癌(ACC-M)细胞。10d后对照组裸鼠口服PBS,其余各治疗组口服相应的减毒沙门菌,隔周1次,共3次。检测:裸鼠肺转移肿瘤细胞内IFN-γ、Tip30的表达、肿瘤生长体积、瘤体重量、带瘤存活期。结果:在治疗组裸鼠肺转移肿瘤细胞胞浆内有对应表达IFN-γ、Tip30;各治疗组均较对照组肿瘤生长慢,肿瘤体积小,重量轻,抑瘤率高,带瘤存活期长;携带基因治疗组较SL7207治疗组肿瘤生长慢,肿瘤体积小,重量轻,抑瘤率高,带瘤存活期长;联合基因治疗组较单基因治疗组肿瘤生长慢,肿瘤体积小,重量轻,抑瘤率高,带瘤存活期长。结论:减毒伤寒沙门菌不仅能作为载体介导基因对腺样囊性癌肺转移有抑制作用,而且自身对腺样囊性癌肺转移也有抑制作用。联合基因较单基因抑制效果好,有协同作用。     

生存素小干扰RNA对人腺样囊性癌ACC-2细胞移植瘤体生长的抑制作用

目的观察生存素（Survivin）小干扰RNA（siRNA）在体内是否能抑制腺样囊性癌移植瘤体的生长。方法裸鼠体内注射稳定转染靶向Survivin基因的shRNA真核表达载体pGenesil-shRNA-Survivin后的人腺样囊性癌细胞株ACC-2,观察移植肿瘤生长情况,以空白对照组及阴性质粒对照组作为对照。处死裸鼠后测量移植瘤体积;采用苏木精-伊红染色病理证实移植瘤后,免疫组织化学法检测移植瘤的Survivin蛋白表达情况,半定量RT-PCR检测Survivin mRNA表达情况。结果处死裸鼠后测量移植瘤体积表明,pGenesil-shRNA-Survivin组移植瘤体积明显减小;其Survivin mRNA及蛋白表达明显降低（P<0.05）。结论siRNA能在体内明显抑制腺样囊性癌Survivin的表达,Survivin siRNA能有效抑制腺样囊性癌裸鼠体内移植瘤的生长。     

涎腺腺样囊性癌裸鼠转移灶细胞时相分析及定量形态学研究

本研究利用流式细胞仪及Ｖｉｄａｓ自动图象分析系统，检测了涎腺样囊性裸鼠肺转移灶细胞周期时相分布及其定量形态学参数，结果表明：肺转移灶细胞Ｓ期明显低于皮下移植癌细胞，而Ｇ０／Ｇ１期高于皮下移植癌，肺转移灶细胞之核浆比，核面积，核周长，等效径，形态因子等定量形态学参数提示肺移灶细胞趋向高分化。本研究结果对于解释涎腺腺样囊性癌临床生物学行为及制定临床治疗计划均有重要意义。     

涎腺腺样囊性癌裸鼠肺转移灶细胞时相分析及定量形态学研究

本研究利用流式细胞仪及Ｖｉｄａｓ自动图象分析系统，检测了涎腺腺样囊性裸鼠肺转移灶细胞周期时相分布及其定量形态学参数，结果表明：肺转移灶细胞Ｓ期明显低于皮下移植癌细胞（Ｐ＜０．０１），而Ｇ０／Ｇ１期高于皮下移植癌；肺转移灶细胞之核浆比、核面积、核周长、等效径、形态因子等定量形态学参数提示肺转移灶细胞趋向高分化。本研究结果对于解释涎腺腺样囊性癌临床生物学行为及制定临床治疗计划均有重要意义。     

TIP30对ACC-M裸鼠移植瘤抑制作用

目的:观察肿瘤抑制基因TIP30对涎腺腺样囊性癌高转移细胞(ACC-M)致裸鼠移植瘤生长的抑制作用.方法:设计CMV启动子序列的特异引物及Taqman探针进行实时PCR,制备AdTIP30/ACC-M病毒液.BALB/c nu/nu鼠30只(4周龄,体重18～20 g),随机分3组,各10只,AdTIP30/ACC-M、ACC-M及AdLaeZ/ACC-M分别注射小鼠背部皮下,观察肿瘤生长情况.结果:实时PCR测定AdTIP30/ACC-M病毒滴度为3.01×1010/ml,AdTIP30/ACC-M组移植瘤出现时间要比ACC-M组及AdLacZ/ACC-M组推迟4 d,肿瘤生长缓慢(P＜0.01).结论:实时PCR测定重组腺病毒滴度快速、简便、滴度高.抑癌基因TIP30能够显著抑制涎腺腺样囊性癌高转移细胞在裸鼠体内生长.     

Experimental study of the effect of TNP-470 on human salivary adenoid cystic carcinoma cell in vitro]

OBJECTIVE: To investigate the effects of TNP-470 on human salivary adenoid cystic carcinoma cell line ACC M in vitro. METHODS: Cell proliferation was assessed by MTT assays and dye exclusion counting. Morphological changes of apoptosis were observed with fluorescent microscope. DNA ladder, apoptosis rate and cell cycle were examined by DNA agarose gel electronphores and fluorescence flow cytometry (FCM), respectively. RESULTS: The 50% inhibitory concentrations (IC50) of TNP-470 on ACC-M cells proliferation by MTT assays and dye exclusion counting were 40.68microg/ml and 46.38microg/ml. Apoptosis were observed by fluorescent microscope. DNA electrophoresis for the cells treated with TNP-470 showed brighter DNA ladder; Sub-G1 peak and G2/M arrest were also determined by FCM (P<0.01). CONCLUSION: TNP-470 has the effect of inducing apoptosis in ACC-M cells in vitro, which may be one of its antitumor mechanisms.     

白血病抑制因子受体在人涎腺腺样囊性癌细胞系中的表达

目的 :探讨白血病抑制因子受体 (LIFR)与人涎腺腺样囊性癌转移的相关性。方法 :以涎腺腺样囊性癌细胞系ACC 2及其肺高转移株ACC M作为研究肿瘤转移分子机制的模型 ,应用RT PCR技术和免疫组化方法检测LIFR的表达。结果 :RT PCR检测表明LIFRmRNA在肺高转移细胞株ACC M细胞中的表达低于在ACC 2细胞中的表达 ,免疫组化检测表明LIFR蛋白在ACC M细胞中表达降低。结论 :LIFR在涎腺腺样囊性癌转移过程中可能发挥抑制作用。     

腺样囊性癌肺转移模型的动态观察

目的通过增强型绿色荧光蛋白（pEGFP-1）的转化和导入ACC—M细胞株，筛选出ACC-M-GFP细胞，并在模拟的肺环境下，建立腺样囊性癌肺转移灶的动态观察模型。方法利用基因转化技术制备高纯度的pEGFP-1真核表达质粒。利用阳离子脂质体介导的基因转染技术培养ACC—M-GFP细胞。体内接种4周后建立模拟肺环境，并用激光共聚焦显微镜观察。结果从接种的第2周开始，随接种时间延长，荧光细胞集落的数量和荧光强度逐渐增加，到第4周时荧光表达强烈，多数成片分布。观察结果同时显示仅有极少数的转移细胞有能力形成集落。结论成功建立了腺样囊性癌肺转移灶的动态观察模型，这一模型为早期转移肿瘤细胞的捕获和分析提供了较好的平台。     

P-选择素单抗抗唾液腺腺样囊性癌细胞裸鼠肺粘附的研究

目的观察P-选择素单克隆抗体(MonoantibodytoP-selectin,PS1)对腺样囊性癌肺高转移细胞肺粘附的抑制作用。方法裸鼠尾静脉注射P-选择素单抗后,经尾静脉注射氚标胸腺嘧啶核苷(3HTdR)标记的ACC-M细胞,分别检测细胞注射后2h、6h、18h的单位重量肺、肝组织每分钟核素脉冲数(CPM)。结果空白对照组单位重量肺组织在2h、6h、18h的CPM值分别是1875.75±11.53、1644.50±27.20和1466.50±125.95;P-选择素单抗组肺组织2h、6h、18h的CPM值分别是941.50±68.47、875.00±47.06和787.25±65.38。相同时间P-选择素单抗组肺组织CPM值明显低于对照组,两组间有显著性差异(P<0.001)。空白对照组单位重量肝组织的CPM值与P-选择素单抗组相比,2h、6h、18h各相同时间两组间无显著性差异(P>0.05)。结论P-选择素单抗静脉应用后,可减少肺组织内ACC-M细胞的粘附数量,但对相同时间肝组织内ACC-M细胞数量无显著影响。P-选择素单抗可能在抑制腺样囊性癌肺转移中发挥作用     

nm23-h1抑制腺样囊性癌高转移细胞株肺转移的实验研究

目的:研究nm23-h1对腺样囊性癌细胞株(adnoid cystic carcinoma cell line-M,ACC-M)的肺转移是否具有抑制作用。方法:20只裸鼠,随机分为两组,实验组每只裸鼠经尾静脉注入5×106个用阳离子脂质体介导nm23-h1质粒体外转染所得阳性表达的ACC-M细胞,对照组注入等量的未转染ACC-M细胞,1周及4周时处死动物获取肺标本,常规组织学观察。结果:1周时实验组未见转移,而对照组有少量小转移灶;4周时实验组肺内仍未见转移灶,对照组可见大量灰白色转移结节。结论:nm23-h1对ACC-M的肺转移具有抑制作用。     

肝素抗涎腺腺样囊性癌细胞裸鼠肺血管粘附研究

目的　通过观察肝素对人涎腺腺样囊性癌肺高转移细胞株 (ACC -M )细胞在裸鼠肺、肝组织的粘附影响 ,证实其对腺样囊性癌肺高转移细胞肺粘附的抑制作用。方法　裸鼠腹腔注射肝素后 ,经尾静脉注入氚标胸腺嘧啶核苷 (3 HTdR)标记的ACC -M细胞 (3 H -ACC -M ) ;分别检测细胞注射后 2h、6h、18h肺、肝组织单位重量的每分钟同位素脉冲数 (CPM )。结果　单位重量肺组织每分钟放射性计数CPM值 :空白对照组 2h、6h、18h分别为 1875 .75± 11.5 3、164 4.5 0± 2 7.2 0和 14 66.5 0± 12 5 .95 ;2 0 0单位肝素组 2h、6h、18h分别为 912 .0 0± 118.5 5、918.0 0± 44 .0 6和 766.60± 77.66。同一时间肝素组肺组织CPM值明显低于对照组 ,有显著性差异 (P <0 .0 0 1)。单位重量肝组织CPM值在空白对照组和肝素组的相同时间点无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论　肝素腹腔注射后可明显降低肺组织内ACC -M细胞对血管内皮细胞粘附数量 ,但对相同时间肝组织内ACC -M细胞粘附数量无显著影响 ,提示肝素具有抑制腺样囊性癌肺转移的作用     

腹膜腔注射肝素对ACC-M细胞在裸鼠肺、肝组织分布的影响

目的　通过观察腹膜腔注射肝素对ACC-M细胞在裸鼠肺、肝组织的分布特点,研究其对腺样囊性癌肺高转移细胞肺粘附的抑制作用。方法　实验裸鼠腹腔注射肝素后,经尾静脉注入氚标胸腺嘧啶核苷(3HTdR)标记 ACC-M细胞,分别检测注射后2 h、6 h、18 h肺、肝组织单位重量的每分钟同位素脉冲数(CPM)。结果　裸鼠单位重量肺组织3H-ACC-M在不同时间由高到低依次是空白对照组2 h、6 h、18 h,肝素组6 h、2 h、18 h。相同时段肝素组明显低于对照组,两组间有显著性差异(P<0·001)。单位重量肝组织3H-ACC-M在不同时间由高到低依次是空白对照组为2 h、6 h、18 h,肝素组为2 h、6 h、18 h,相同时段两组间无显著性差异(P>0·05)。结论　肝素腹腔注射后可减少肺组织内ACC-M细胞数量,但对相同时段肝组织内ACC-M细胞数量无显著影响,肝素可能在抑制腺样囊性癌肺转移中发挥作用。     

Tip30基因修饰的ACC-M细胞裸鼠体内致瘤性观察

目的:观察肿瘤抑制基因Tip30修饰后的人涎腺腺样囊性癌高转移细胞(ACC鄄M)所致裸鼠移植瘤体内生长的变化。方法:BALB/Cnu/nu鼠30只(4周龄,体重18￣20g),随机分3组,各10只;Tip30基因修饰的ACC鄄M细胞(AdTIP30/ACC鄄M)、野生型ACC鄄M细胞(wt/ACC鄄M)及对照基因LacZ修饰的ACC鄄M细胞(AdLacZ/ACC鄄M)分别注射小鼠颌下区皮下,观察肿瘤生长情况及小鼠存活时间。结果:(1)经TIP30基因修饰组肿瘤出现的时间比野生型对照组及基因对照组晚3d,且肿瘤生长缓慢(P<0.01);(2)存活时间显示,基因修饰组(53.0±3.3)d,有2只长期存活;野生型对照组(26±2.2)d;对照基因组(29±2.4)d。结论:抑癌基因Tip30能够显著抑制人涎腺腺样囊性癌细胞在裸鼠体内的生长,延长荷瘤小鼠存活期。     

高转移涎腺腺样囊性癌ACC-M细胞侵袭羊膜的实验研究

为了研究高转移涎腺腺样囊性癌ＡＣＣ－Ｍ细胞侵袭ＩＶ型胶原的能力，本文采用Ｂｏｙｄｅｎ小室，以人羊膜为靶组织，以涎腺腺样囊性癌ＡＣＣ－２细胞和高转移克隆株ＡＣＣ－Ｍ细胞作为侵袭细胞，观察二种细胞的体外侵袭行为。结果表明二种细胞对羊膜均有不同程度的侵袭作用，但在时间上ＡＣＣ－Ｍ具有较强的侵袭能力，为进一步研究提供了实验模型。     

The biological behaviour of human adenoid cystic carcinoma cells transduced with interleukin-2-gene

Adenoid cystic carcinoma (ACC) of the salivary glands is a highly infiltrative malignant tumour with a tendency for lung metastasis. Gene therapy could be a potentially effective therapy for ACC and its metastasis. The aims of the study were: To transduce interleukin-2 (IL-2) gene into an ACC cell line with predisposition for lung metastasis (ACC-M); to compare the bioactivity of the gene-transduced cells and the parent cell line in vitro and in vivo. The IL-2 gene was transduced via a bicistronic retroviral vector into the ACC-M cells. The growth rate and DNA cell cycles of the parent ACC-M, the control viral vector AmGCEN, and the gene transduced AmIL-2 cell cultures were compared quantitatively and by flow cytometry, respectively. The tumourigenic ability of the three cell lines was verified by inoculation in athymic nude mice. The tumours developed were extracted and compared quantitatively and histologically. There was no difference in the growth rate and the DNA count between the ACC-M, AmGCEN, and AmIL-2 cell cultures. In the animal experiment, both the ACC-M and AmGCEN cells stimulated lung metastasis in all the mice, whereas there was no tumour found in the 1 x 10(6) AmIL-2 cells inoculation. On 3 x 10(6) AmIL-2 cells stimulation, three out of six mice developed tumours but the mass and volume of the tumours were smaller than the other two groups. Under light microscopy, the ACC-M tumours were mainly poorly differentiated with minimal cellular matrix, whereas the AmIL-2 tumours were well differentiated with ample matrix. The transduction of IL-2 gene can reduce the tumourigenicity of ACC-M cells and induces tumour cell differentiation in mice. The IL-2 gene can be a potential effective gene for the treatment of adenoid cystic carcinoma of salivary glands and its lung metastasis.