ω-3多不饱和脂肪酸对糖尿病大鼠学习记忆的影响

目的:研究ω-3多不饱和脂肪酸(PUFA)对糖尿病(DM)大鼠学习记忆能力的影响及分子机制.方法:18只成年雄性SD大鼠分为对照组(control)、糖尿病组(DM)和PUFA治疗组(DM+ PUFA).利用链脲佐菌素腹腔注射的方法制备DM模型,DM+ PUFA大鼠给予60 d的PUFA饮食,利用水迷宫实验检测大鼠学习...     

ω-3多不饱和脂肪酸对大鼠心室肌细胞动作电位的影响

目的探讨ω-3多不饱和脂肪酸对大鼠心室肌细胞动作电位（AP）的影响。方法①在自制心脏灌流装置上，采用三步法行逆行主动脉灌流获得单个耐钙心肌细胞；②以全细胞膜片钳技术分别记录加入10、20、40、60、80、100、120和200μmol·L^-1ω-3多不饱和脂肪酸二十二碳六稀酸（DHA）后大鼠心室肌细胞AP的变化。结果成功记录到大鼠心室肌细胞外膜、中膜和内膜AP。外膜、中膜和内膜心室肌细胞动作电位时程（APD）逐渐延长（P〈0．05），其中外膜APD25、APD50和APD50分别为（3．6±1．2）ms、（10．3±2．1）ms和（46．3±4．8）ms；中膜分别为（6．4±1.8）ms、（14．7±2．4）ms和（69．4±8．3）ms；内膜分别为（13．8±2．1）ms、（45．3±10．2）ms和（152．1±33．4）ms；②DHA浓度在0～30μmol·L^-1时，随着DHA浓度增加，APD延长不明显（P〉0．05）；当DHA浓度大于30μmol·L^-1时，APD逐渐延长，且呈浓度依赖性（P〈0．05）。结论大鼠外膜、中膜和内膜心室肌细胞AP形态存在分层差别，ω-3多不饱和脂肪酸DHA对AP的影响可能是其抗心律失常作用机制之一。     

ω-3多不饱和脂肪酸对树突状细胞生物物理学特性及迁移能力的影响

目的 从生物物理学与免疫学交叉角度,分析二十碳五烯酸(eicosapentaenoic acid, EPA)、二十二碳六烯酸(docosahexaenoic acid, DHA)对鼠源树突状细胞(dendritic cells, DCs)生物物理学特性、细胞骨架及迁移能力的影响,探讨ω-3多不饱和脂肪酸(ω-3 polyunsaturated fatty acids,ω-3 PUFAs)对DCs免疫功能的影响及其潜在作用机制。方法 分离C57BL/6J小鼠骨髓来源单核细胞,经20 ng/mL重组鼠集落刺激因子(recombinant mouse granulocyte macrophage colony stimulating factor, rmGM-CSF)和10 ng/mL重组鼠白介素-4(recombinant mouse interleukin-4, rmIL-4)诱导分化为未成熟树突状细胞(immature dendritic cells, imDCs),第6天加入100 ng/mL脂多糖诱导为成熟树突状细胞(mature dendritic cells, mDCs),进一...     

n-3多不饱和脂肪酸在抗肿瘤方面的研究进展

多不饱和脂肪酸（polyunsaturated fatty acids,PUFAs）是指结构中含有两个或两个以上双键的长链脂肪酸,根据碳链羧基端起最后一个双键相对于甲基碳（n碳）原子的位置,将其分为n-3族、n-6族、n-7族和n-9族PUFAs,其中n-3和n-6族在机体各项生理功能调节中发挥重要作用。n-3PUFAs主要包括α-亚麻酸（n-3,ALA）、二十碳五烯酸（n-3,EPA）和二十二碳六烯酸（n-3,DHA）,其中ALA主要来源于芸苔属植物油和豆油,EPA和DHA在多脂的深海冷水鱼类（如鲑鱼、鲭鱼、蹲鱼、金枪鱼）和海藻中含量丰富。     

ω-3多不饱和脂肪酸对急性肺损伤炎症反应及免疫功能影响的机制研究进展

烧(创)伤、吸入性损伤、严重感染以及休克等疾病过程中,机体内多种炎性介质的释放,引发炎性细胞向肺组织迁移,激活呈级联放大的炎症反应,常常可造成以肺毛细血管内皮细胞和肺泡上皮细胞损伤为主的急性肺损伤(ALI),严重者短时间内可迅速发展为急性呼吸窘迫综合征(ARDS),病死率极高。ω-3多不饱和脂肪酸(ω-3PUFA)作为药理性免疫营养素的重要组成部分,目前已经超越了以往单纯提供能量、恢复正氮平衡的范畴,发挥着调控机体炎症反应、免疫功能的全面作用,并逐渐演变为现代危重性肺损伤治疗的重要组成部分。因此,本文就ω-3PUFA对ALI炎症反应及免疫功能影响的机制作一综述,旨在为临床治疗ALI提供理论依据。     

他汀类药物调脂及非调脂作用的临床新进展

目的 介绍他汀类调脂及非调脂作用的临床新进展.方法参阅相关文献,经综合、分析和归纳.结果 他汀类药物具有降低胆固醇、低密度脂蛋白的作用和预防心血管疾病,保护肾脏细胞,抗肿瘤细胞的增殖作用,抗癌中的增敏及减少不良反应,抗骨质疏松,预防痴呆,免疫抑制等非调脂作用.结论他汀类药物在临床上具有广阔的应用前景.     

Caspases在ω-3脂肪酸联合跨膜型TNFα诱导HL-60细胞凋亡中的作用

目的探讨ω-脂肪酸联合跨膜型TNFα诱导HL-60细胞凋亡与半胱氨酸蛋白酶(Caspases)之间的关系。方法已证实转染带有脂肪酸受体反应元件的跨膜型TNFα表达载体(pPPRE-tmTNFa)后,HL-60细胞可在ω-脂肪酸诱导下高效表达跨膜型TNFα。运用MTr比色法、DNA梯形带检测、RT-PCR和免疫印迹技术分析ω-脂肪酸对转染细胞增殖能力和凋亡的影响,以及细胞Caspase-1、3、8和9基因的表达变化,检测Caspase-8活性以及Caspases特异性抑制剂对肿瘤细胞凋亡效应的拮抗作用。结果HL-60细胞经ω-脂肪酸处理后,细胞增殖能力减弱,可检测到DNA梯形带形成,Caspase-1、3、8和9基因表达增加,Caspase-8活性增高,上述变化在转染细胞中更为显著,Caspases抑制剂可以部分拮抗ω-脂肪酸联合跨膜型TNFα对HL-60诱导凋亡和抑制增殖的作用。结论ω-脂肪酸可以联合跨膜型TNFα更有效的诱导细胞凋亡,抑制肿瘤细胞增殖,而上调Caspases的表达和／或活性可能在此过程中发挥重要作用。     

14-3-3zeta在T1期非小细胞肺癌中的表达及其临床病理意义

目的探讨14-3-3ζ在T1期非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及其临床病理意义。方法采用免疫组化、免疫印迹及RT-PCR技术检测110例T1期NSCLC及癌旁正常肺组织中14-3-3ζ蛋白的表达。结果 T1期NSCLC中14-3-3ζ蛋白及mRNA表达水平均较正常肺组织明显增强,14-3-3ζ的表达与患者的年龄、性别及病理学分型不相关。但随着肺癌分化程度的降低,14-3-3ζ的表达逐渐增强。在淋巴结转移阳性的癌组织中,14-3-3ζ表达高于淋巴结转移阴性的癌组织。生存曲线分析结果显示14-3-3ζ表达阴性患者的5年生存率及平均生存时间均高于表达阳性者。结论 14-3-3ζ与肺癌的分化程度、淋巴结转移及患者预后密切相关,提示14-3-3ζ有可能作为判断T1期NSCLC发展与预后的生物学指标之一。     

CDC25 B与14-3-3相互作用的研究

有研究表明在肿瘤发生发展的过程中,癌细胞的有丝分裂失控是肿瘤发生的主要原因。因此,对细胞分裂调控机制的研究成为目前研究的热点。其中细胞分裂周期25 B （ cell division cycle 25 B, CDC25B）和14-3-3是与细胞分裂有着密切关系的调控子。目前研究已经发现PKA／CDC25B／MPF （ CDC2-cyclinB1）和PKA／CDC25B／14-3-3／MPF是调控细胞有丝分裂的两条重要信号转导途径。蛋白激酶A （ pro-tein kinase A, PKA）是一种环磷酸腺苷（ cyclic adenosine monophosphate, cAMP）依赖性蛋白激酶,可以通过磷酸化下游的靶蛋白,抑制靶蛋白正常发挥作用,从而发挥调节作用。实验研究发现, PKA可以通过磷酸化CDC25B某些位点的丝氨酸残基,使CDC25B处于磷酸化状态,不能使成熟促进因子（ maturation pro-moting factor, MPF）的催化亚基细胞分裂周期2蛋白（cell division cycle 2, CDC2）第15位酪氨酸脱磷酸,因而不能激活MPF,使细胞分裂发生阻滞,不能发生G2／M的转化。14-3-3可以通过CDC25B／14-3-3／MPF途径调节有丝分裂,14-3-3通过结合已经发生磷酸化的CDC25 B的氨基酸（丝氨酸或者苏氨酸）残基,阻止CDC25B进入细胞核,从而引起细胞分裂的阻滞畅这样也就提示可以将14-3-3作为靶位点进行靶向治疗,治疗肿瘤疾病。     

14-3-3zeta与p-Bad在T1期非小细胞肺癌中的表达及意义

目的 观察14-3-3zeta 和p-Bad在T₁ 期非小细胞肺癌 (NSCLC) 中的表达,探讨两者在非小细胞肺癌发展中的作用及相互关系。方法 取110例非小细胞肺癌及癌旁正常肺组织存档蜡块和50例新鲜NSCLC及癌旁正常肺组织标本,采用免疫组织化学和免疫印迹法（Western blotting）
检测14-3-3zeta 和p-Bad 蛋白的表达。结果 与正常肺组织相比,14-3-3zeta 在NSCLC 中的表达显著增强,与肺癌的分化程度和淋巴结转移有关,而与患者的年龄、性别及病理学分型无关。p-Bad在正常肺组织中轻微表达,而在NSCLC 中表达显著增强。且其表达与患者的年龄、性别及
病理学分型无关,但与癌组织分化程度、淋巴结转移相关。结论 14-3-3zeta蛋白与p-Bad与T₁期NSCLC发展、侵袭和转移密切相关。     

结肠癌干细胞样细胞的体外培养、鉴定及n-3多不饱和脂肪酸对结肠癌干细胞样细胞的抗增殖作用

 目的:采取无血清培养法培养出SW620细胞球,并对细胞球细胞进行干细胞鉴定;在细胞水平研究n-3多不饱和脂肪酸（n-3 PUFAs）对结肠癌干细胞样细胞的作用。 方法: 正常培养人结肠癌细胞株SW620并使其逐步适应无血清培养条件,经无血清培养1周后收集SW620细胞球。用免疫荧光法检测胚胎干细胞标志物SSEA-1和TRA-1-81;采用real-time PCR的方法检测干细胞相关基因Sox-2和Oct-4的表达情况;对比SW620贴壁细胞和干细胞样细胞（CSCLC）在软琼脂上的克隆形成能力;采用裸鼠移植瘤模型比较2种细胞的成瘤能力;用MTS法对比2种细胞在递增浓度的5-氟尿嘧啶（5-FU）或mitomycin C处理下的生长抑制情况;用MTS法、Annexin V/PI染色和台盼蓝染色分别观察递增浓度二十二碳六烯酸（DHA）和二十碳五烯酸（EPA）作用于SW620 CSCLC后细胞生长抑制情况、凋亡情况和死亡情况;MTS法检测5-FU或mitomycin C联合n-3 PUFAs对结肠癌CSCLC增殖的影响。 结果: 无血清培养法成功从SW620中培养出细胞球。细胞球细胞高表达SSEA-1和TRA-1-81并一过性表达Sox-2和Oct-4基因;对5-FU及mitomycin C相对抵抗;在软琼脂上克隆形成率及在裸鼠皮下的成瘤率均显著高于贴壁细胞,表明这些细胞具有干细胞特性,即为来自于SW620的CSCLC。DHA和（或）EPA作用于SW620 CSCLC能抑制细胞生长、诱导细胞凋亡,并能增强5-FU及mitomycin C对其抑制作用。 结论: 无血清培养法能够从SW620细胞中培养出具有干细胞特性的细胞,它们具有高克隆形成能力及高致瘤性,对化疗药物相对抗拒;DHA和EPA能够诱导SW620来源CSCLC发生凋亡并增强化疗药物的抗肿瘤活性。     

GLS 3’-非编码区-荧光素酶报告质粒的构建及其活性鉴定

目的构建颗粒溶素基因3’-非编码区(3’-untranslated region,3’-UTR)-荧光素酶报告质粒,检测颗粒溶素和微小RNA(miRNA)调控位点的关联性。方法将人工合成的GLS基因3’-UTR区序列,克隆至荧光素酶报告质粒pGL3-control;通过Targetscan5.1等软件预测可能与GLS基因3’-UTR作用的miRNA;将荧光素酶报告质粒和miRNA真核表达质粒共转染293T细胞,为防止脱靶效应,同时转染anti-mir-inhibitor和anti-mir-control,用双荧光素酶检测试剂盒测定荧光素酶活性。结果用Targetscan5.1软件、PicTar软件和miRBase数据库预测交叉结果显示,miRNA(mir)-218、mir-514、mir-185、mir-611均与GLS基因3’-UTR存在互补结合位点;构建的miRNA真核表达质粒和荧光素酶报告质粒经酶切及测序鉴定正确;2种质粒共转染293T细胞后,miRNA-218可使荧光素酶报告质粒表达的荧光素酶活性降低75%左右(P<0.01);转染anti-mir-inhibitor后,荧光素酶的表达恢复到正常水平。结论成功构建了GLS基因3’-UTR荧光素酶报告质粒,通过检测荧光素酶活性,筛选出和GLS表达相关的miRNA片段即miRNA-218,为探讨miRNA调控GLS表达机制打下实验基础。     

3-羟基丁酸与3-羟基己酸共聚酯的血管内生物相容性

背景：可降解聚合材料3-羟基丁酸与3-羟基己酸共聚酯(3-hydroxybutyrate-co- 3-hydroxyhexanoate, PHBHHx)具有良好的机械性能和生物可降解性。 目的：在体研究PHBHHx的血管内生物相容性。 方法：采用脱细胞羊肺动脉为支架,以PHBHHx涂层,构建复合补片,植入新西兰兔腹主动脉内,以脱细胞未涂层羊肺动脉片作为对照。分别于植入后第1,4,12周取出移植补片进行组织学、免疫荧光染色、扫描电镜和钙含量测定。 结果与结论：复合补片管腔面光滑无血栓,内膜增生适度,再细胞化完全;免疫荧光染色可见新生内膜组织中类内皮细胞呈CD31阳性反应,单层连续排列,间质细胞呈平滑肌肌动蛋白阳性反应;复合补片的钙含量明显低于未涂层羊肺动脉片。说明PHBHHx的血管内生物相容性满意,是心血管组织工程较为理想的腔内涂层材料。     

人类14-3-3ζ和GCH1蛋白相互作用的初步研究

目的 寻找人类14-3-3ζ蛋白的相互作用蛋白,为进一步揭示14-3-3ζ的作用机理提供线索.方法 以14-3-3ζ为"诱饵",利用酵母双杂交系统筛选人脑cDNA文库得到"猎物"蛋白,通过GST pulldown技术和哺乳动物细胞内免疫共沉淀技术验证14-3-3ζ和"猎物"蛋白的特异性结合.结果 首次利用酵母双杂交cDNA文库筛选技术发现了14-3-3ζ能够与GTP环化水解酶Ⅰ(GTP cyclohydrolase 1,GCH1)相互作用,并通过了体内和体外的蛋白质结合实验证实了这两个蛋白质之间的特异性相互作用.结论 发现并验证了14-3-3ζ与GCH1之间的蛋白质相互作用,为进一步深入研究这两种蛋白质的功能及所引起的相关疾病的发病机理提供了新的线索.     

1,25-二羟维生素D_3对胰岛β细胞免疫保护作用

目的研究1,25-二羟维生素D3对胰岛β细胞的免疫保护作用,为胰岛β细胞的免疫保护治疗提供实验依据。方法培养胰岛β细胞株NIT细胞及正常对照外周血单个核细胞,分别与以下4组作用：①（IL-1β＋IFN-γ）组,②（IL-1β＋IFN-γ＋D3）组,③D3组,④对照组（DMEM）。采用酶联免疫吸附分析（ELISA）检测培养上清液中IL-4、IFN-γ水平,用硝酸还原酶法检测上清液NO水平,用化学发光法检测上清液胰岛素水平。结果①IL-1β＋IFN-γ＋D3刺激的NIT-1细胞与IL-1β＋IFN-γ刺激组相比,分泌IL-4水平增高（P〈0.01）、IFN-γ减少（P〈0.01）,IL-4/IFN-γ增高（P〈0.01）;②IL-1β＋IFN-γ＋D3刺激的NIT-1细胞与IL-1β＋IFN-γ刺激组相比,分泌NO水平减少（P〈0.01）;③IL-1β＋IFN-γ＋D3刺激的NIT-1细胞与IL-1β＋IFN-γ刺激组相比,胰岛素分泌增加（P〈0.05）。结论 1,25-二羟维生素D3可减轻IL-1β＋IFN-γ对NIT细胞的损伤作用,保护NIT细胞的胰岛素分泌功能。     

T1期非小细胞肺癌中14-3-3ζ与上皮型钙黏素的表达及临床意义

目的 观察14-3-3ζ和上皮型钙黏素(E-cadherin)在T1 期非小细胞肺癌 (NSCLC) 中的表达,探讨两者与NSCLC发展、侵袭和转移的关系. 方法 采用免疫组织化学和免疫印迹法(Western blotting)检测110例NSCLC及正常肺组织中14-3-3ζ和E-cadherin 蛋白的表达.结果 与正常肺组织相比,14-3-3ζ 在NSCLC 中的表达显著增强,且表达与肺癌的分化程度和淋巴结转移显著相关,并与患者的性别、年龄和病理学分型无关.与正常肺组织相比,E-cadherin 在NSCLC中的表达减弱,且其表达也与肺癌的分化程度和淋巴结转移明显相关,而与性别、年龄和肺癌病理学分型无关. 结论 14-3-3ζ 高表达可能促进了NSCLC的发展与转移,14-3-3ζ和E-cadherin 与T1期NSCLC发展、侵袭和转移密切相关.     

肿瘤化学预防剂吲哚-3-甲醇作用的靶点

从蔬菜水果中发现的抗肿瘤生物活性成分一直是研究的热点。本文对十字花科蔬菜活性成分吲哚-3-甲醇（indole-3-carbinol,I3C）的抗肿瘤活性进行综述,重点综述了吲哚-3-甲醇影响致癌物代谢、抗肿瘤细胞增殖、诱导细胞凋亡、诱导细胞周期阻滞、调节转录因子和基因表达等靶点的研究现状和进展。     

14-3-3 ζ与β连接素在人T1期非小细胞肺癌中的表达及意义

目的 观察14-3-3 ζ 和β连接素(β-catenin)在人T1期非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达,探讨两者与非小细胞肺癌发展、侵袭和转移的关系. 方法 采用免疫组织化学、免疫荧光双标、激光扫描共焦显微技术和Western blotting,检测 NSCLC 及正常肺组织中14-3-3ζ 和β-catenin 蛋白的表达. 结果 与正常肺组织相比,14-3-3ζ 在NSCLC 中的表达显著增强,且表达与肺癌的分化程度和淋巴结转移有关,而与病理学分型无关.β-catenin 在NSCLC中的表达与正常肺组织相比减弱,且其表达与肺癌的分化程度呈正相关,与淋巴结转移呈负相关,而与肺癌病理学分型无关. 结论 14-3-3ζ 和β-catenin与T1期NSCLC发展、侵袭和转移密切相关.14-3-3ζ 高表达可能促进了NSCLC的发展与转移,因此14-3-3ζ可以作为非小细胞肺癌又一个有效的治疗靶点.     

14-3-3γ对烧伤及LPS诱导所致大鼠心肌损伤的保护作用

目的: 研究14-3-3γ在烧伤及脂多糖(LPS)引起的心肌损伤中的保护作用。方法: 体内实验建立大鼠烧伤及LPS损伤模型,检测3、6、12、24 h各时点心功能及心肌细胞14-3-3γ蛋白表达水平的改变;体外实验采用新生大鼠心肌细胞,构建pFLAG-14-3-3γ质粒,于LPS损伤前24 h转染至心肌细胞,实验结束后检测培养液中乳酸脱氢酶(LDH) 活性,MTT法测定细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡,线粒体肿胀实验检测线粒体通透性转换孔(mPTP)开放。结果: 烧伤及LPS损伤模型大鼠心电图ST段均有明显改变,心肌细胞14-3-3γ蛋白表达水平均显著升高。转染了pFLAG-14-3-3γ质粒的心肌细胞能明显对抗随后的LPS损伤,与未转染组比较,14-3-3γ能明显提高细胞存活率,降低LDH活性,减少细胞凋亡,抑制mPTP的开放。结论: 14-3-3γ可能通过抑制mPTP的开放对烧伤及LPS所致的心肌损伤起保护作用。