神经营养因子修复神经组织机制的研究：脑细胞生长肽对豚鼠耳蜗毛细胞内酸性磷酸酶的影响

背景：脑细胞生长肽(cerebrocellular growth peptide，CCGP)对庆大霉素引起的耳蜗毛细胞内酸性磷酸酶(acid phosphatase，ACP)的变化是否有影响?对受损耳蜗组织是否有促进修复的作用?目的：观察CCGP对庆大霉素引起的耳中毒豚鼠ACP的影响。设计：随机对照研究。地点和材料：实验地点：泰山医学院听觉研究室。选用健康杂色豚鼠40只，对照组10只，肌肉注射生理盐水1mL／(kg&;#183;d)；庆大霉素组15只，肌肉注射硫酸庆大霉素80mg／(kg&;#183;d)；CCGP组15只，肌肉注射硫酸庆大霉素同庆大霉素组，并肌肉注射CCGP 1mg／(kg&;#183;d)。各组用药25d。方法：用脑干听觉诱发电位(brainstem auditory evoked potential，BAEP)和组织化学方法检测动物听阈的变化和耳蜗毛细胞ACP显色变化。主要观察指标：各组动物BAEP反应阈值和ACP显色变化。结果：用药前BAEP反应阈值[dB(peSLP)]：生理盐水组32．62&;#177;2．33，庆大霉素组31．87&;#177;2．63，CCGP组32．56&;#177;2．39。用药后BAEP反应阈值均有不同程度的升高，用药后25d BAEP反应阈值：生理盐水组32.81&;#177;2．48，庆大霉素组56．73&;#177;17．21，CCGP组42．87&;#177;9．95，庆大霉素组CCGP组与生理盐水组比较，差异均有显著性意义(t=3．113，4．335，P均&;lt;0．01)，CCGP组与庆大霉素组比较，差异有显著性意义(t=2．700，P&;lt;O．05)。ACP显色变化：生理盐水组毛细胞ACP染色呈棕褐色，毛细胞排列整齐。庆大霉素组ACP变化显著，毛细胞显色失明显；CCGP组ACP显色变化较轻，两组铺片显示有明显差别。结论：CCGP能降低庆大霉素的耳毒性，减轻由于溶酶体的破坏溢出的ACP引起的毛细胞的损伤。     

加减味耳聋左慈丸对庆大霉素耳毒性的防治及其机制研究

目的:观察耳鸣、耳聋的传统中药方剂耳聋左慈丸加减味对庆大霉素耳毒性的防治作用,并探讨其作用机制。方法:选用耳郭反射正常,体质量为300～350g的健康杂色豚鼠,雌雄兼用,随机分成3组,对照组15只,肌肉注射生理盐水2mL/(kg·d),生理盐水4mL/(kg·d)灌胃;庆大霉素组15只,肌肉注射硫酸庆大霉素80mg/(kg·d),生理盐水4mL/(kg·d)灌胃;中药组15只,肌肉注射硫酸庆大霉素同庆大霉素组,中药煎剂浓缩液4mL/(kg·d)灌胃。各组连续用药均25d。用脑干听觉诱发电位的方法检测庆大霉素耳中毒豚鼠听阈的变化;用组织化学的方法检测耳蜗毛细胞酸性磷酸酶的变化。结果:用药前对照组、庆大霉素组和中药组的脑干听觉诱发电位反应阈值分别为:32.28±2.55,32.34±2.52和32.32±2.54;用药后第27天分别为:32.30±2.73,54.95±18.62和41.76±9.36。用药后27d庆大霉素组和中药组的脑干听觉诱发电位反应阈值升高,差异有显著性意义(t=3.466,P<0.01)。耳蜗毛细胞内酸性磷酸酶染色的变化:耳蜗铺片在光镜下观察:正常豚鼠耳蜗基底膜铺片毛细胞酸性磷酸酶染色呈棕褐色,显色分布均匀,毛细胞排列整齐;庆大霉素致耳聋的豚鼠耳蜗毛细胞酸性磷酸酶显色变化依动物耳聋程不同,出现染色缺失程度亦不同;庆大霉素组酸性磷酸酶染色缺失显著,中药组酸     

川芎嗪对豚鼠耳蜗毛细胞内酸性磷酸酶的影响

目的:探讨活血祛淤中药制剂成分川芎嗪对庆大霉素耳中毒豚鼠耳蜗毛细胞酸性磷酸酶的保护作用。方法:实验于2004-12/2005-01在泰山医学院听觉研究室进行。选用耳耳郭反射正常的健康杂色豚鼠30只4月龄,体质量为250～300g,雌雄不拘。随机分成3组,每组10只。对照组给予肌肉注射生理盐水2mL/(kg·d);庆大霉素组给予肌肉注射硫酸庆大霉素80mg/(kg·d);川芎嗪组给予腹腔注射川芎嗪6mg/(kg·d),同时肌肉注射硫酸庆大霉素80mg/(kg·d)。各组连续用药20d。用电位仪检测用药前及用药后脑干听觉诱发电位反应阈值(与用药前比较,其值升高可提示听觉受损);用组织化学方法检测耳蜗毛细胞内酸性磷酸酶的变化(酸性磷酸酶染色缺失越明显,提示毛细胞损害程度越重)。结果:所有动物均进入结果分析。①脑干听觉诱发电位反应阈值结果:用药前对照组、庆大霉素组、川芎嗪组脑干听觉诱发电位反应阈值差异无显著性意义([36.12±0.25,35.72±2.08,35.22±1.07)dBpeSLP,P>0.05];用药20d三组脑干听觉诱发电位反应阈值分别为(37.27±0.13,69.06±24.73,40.46±10.34)dBpeSLP,即庆大霉素组与对照组和川芎嗪组相比较脑干听觉诱发电位反应阈值明显偏高,(t=5.75,t=4.77,P<0.01),川芎嗪组与对照组比较无显著性差异(t=1.38,P>0.05)。②耳蜗毛细胞内酸性磷酸酶的染色变化结果:光镜下观察耳蜗铺片显示对照组豚鼠耳蜗毛细胞排列整齐,酸性磷酸酶染色均匀,呈棕褐色;庆大霉素致聋豚鼠耳蜗毛细胞酸性磷酸酶染色变化依动物耳聋程度不同而呈现不同的表现,出现显色变淡、消失;川芎嗪组酸性磷酸酶染色变化较轻。结论:川芎嗪能明显降低庆大霉素对听觉系统的损伤,其机制可能与川芎嗪能维持溶酶体的完整性、防止毛细胞溶酶体内的水解酶逸出造成的毛细胞自溶性损伤有关。     

脑细胞生长肽对螺旋神经节细胞损伤的预防作用

目的:探讨脑细胞生长肽是否有预防庆大霉素对豚鼠耳蜗螺旋神经节细胞的损害的作用。方法:实验在泰山医学院生理听觉研究室进行。选用45只豚鼠,随机分为3组:对照组动物肌肉注射生理盐水2mL/(kg·d);庆大霉素组动物肌肉注射硫酸庆大霉素80mg/(kg·d);脑细胞生长肽组肌肉注射庆大霉素同庆大霉素组,并肌肉注射脑细胞生长肽1mg/(kg·d)。各组均用药25d。分别用脑干听觉诱发电位(brainstemauditoryevokedpo-tential,BAEP)和组织化学方法检测动物的BAEP反应阈、波峰潜伏期及耳蜗螺旋神经节细胞的形态学变化。结果:用药后BAEP波峰潜伏期延长。用药后第27天对照组、庆大霉素组和脑细胞生长肽组BAEP反应阈值分别为:(32.57±2.26),(58.49±18.43)和(44.63±8.74)dBpeSLP;后两组高于对照组,差异均有非常显著性意义t=7.646,4.439,P均<0.01);脑细胞生长肽组(高于庆大霉素组(t=3.725,P<0.01)。用药后第27天,对照组、庆大霉素组和脑细胞生长肽组耳蜗螺旋神经节细胞数分别为:(14.45±0.95),(9.53±3.16)和(11.84±2.63)个;后两组少于对照组,差异有非常显著意义(P均<0.01);脑细胞生长肽组多于庆大霉素组(P<0.01)。结论:脑细胞生长肽有明显保护耳蜗螺旋神经节细胞对抗庆大霉素耳毒性的作用。     

丹参提取制剂对耳蜗毛细胞琥珀酸脱氢酶的影响

目的:观察具有活血化淤,扩张耳蜗血管,改善内耳微循环之功效的丹参提取制剂对豚鼠庆大霉素耳中毒引起的耳蜗毛细胞琥珀酸脱氢酶变化的影响。方法:实验于2004-09/12在泰山医学院生理听觉研究室完成。选用耳郭反射正常、体质量为250～300g的健康杂色豚鼠,雌雄不拘,排除耳郭反射的声刺激强度超过正常±2.5dB的实验豚鼠。将动物随机数分成3组:正常对照组动物15只,肌肉注射生理盐水2mL/(kg·d);庆大霉素组动物15只,肌肉注射庆大霉素80mg/(kg·d);丹参注射液组动物15只,腹腔注射丹参注射液(含生药量1.5kg/L)6mg/(kg·d),然后肌肉注射庆大霉素同庆大霉素组。各组动物连续注射药物均20d。用脑干听觉诱发电位的方法检测庆大霉素耳中毒豚鼠的听阈变化;用组织化学方法检测耳蜗毛细胞琥珀酸脱氢酶的变化。结果:在实验过程中无动物死亡,进入结果分析3组动物共45只。①用药22d后,庆大霉素组、丹参注射液组豚鼠的脑干听觉诱发电位反应阈值与正常对照组比较,差异有显著性犤(71.25±24.730),(41.05±10.930),(34.65±1.321)dB;t=8.097,3.184,P<0.01犦;丹参注射液组与庆大霉素组比较,差异有显著性(t=6.118,P>0.01)。②耳蜗铺片毛细胞内琥珀酸脱氢酶染色在光镜下观察,正常豚鼠耳蜗基底膜铺片毛细胞琥珀酸脱氢酶染色呈紫蓝色;显色分布均匀,毛细胞排列整齐;在庆大霉素组耳蜗毛细胞琥珀酸脱氢酶显色出现明显消失,耳蜗毛细胞破坏明显;丹参注射液组琥珀酸脱氢酶染色变化较轻,庆大霉素组与丹参注射液组耳蜗铺片显示有明显差异。结论:丹参注射液能降低庆大霉素对耳蜗毛细胞的损害作用,保护耳蜗线粒体呼吸酶的活性,维持毛细胞的能量代谢以供给细胞需要能量的功能活动,可能是丹参注射液降低庆大霉素耳毒性的机制之一。     

电针对豚鼠耳蜗螺旋神经节细胞的保护作用

目的:探讨电针预防庆大霉素对耳蜗螺旋神经节细胞(cochlearspiralganglioncells,SGC)损伤的作用。方法:选用耳郭反射正常,体质量为300～350g的健康杂色豚鼠,雌雄兼用,随机分成3组:对照组10只,肌肉注射生理盐水2mL/(kg·d);庆大霉素组15只,肌肉注射硫酸庆大霉素80mg/(kg·d);电针组15只,给予电针(针刺双侧“听宫、翳风、肾俞”穴)1次/d;针刺后再给予庆大霉素同对照组,各组用药均25d。用脑干听觉诱发电位(BAEP)检测动物BAEP反应阈值;用组织学方法检测耳蜗SGC的形态学变化。结果:在用药前对照组组、庆大霉素组和电针组BAEP反应阈分别为:(31.85±2.19),(32.23±2.26),(32.19±2.24)dBpeSLP;用药后27d检测分别为:(32.27±2.21),(59.58±17.74),(45.67±9.35)dBpeSLP。庆大霉素组、电针组分别与对照组组比较,差异均有显著性意义(t=6.809,4.435,P<0.01);庆大霉素与电针组比较差异亦有显著性意义(t=3.800,P<0.01)。在放大倍数为400倍光镜下平均在80μm×80μm视野内SGC存活数为:对照组(14.08±0.79)个,庆大霉素组(9.16±2.55)个,电针组(11.17±2.08)个;庆大霉素组与电针组比较差异有显著性意义(t=2.367,P<0.05)。结论:电针对庆大霉素引起的耳蜗螺旋神经节细胞损伤有明显的预防作用。     

加减味耳聋左慈丸对庆大霉素耳毒性的防治及其机制研究

目的：观察耳鸣、耳聋的传统中药方剂“耳聋左慈丸”加减味对庆大霉素耳毒性的防治作用，并探讨其作用机制。方法：选用耳郭反射正常，体质量为300～350g的健康杂色豚鼠，雌雄兼用，随机分成3组，对照组15只，肌肉注射生理盐水2mL／(k&;#183;d)，生理盐水4mL／(kg&;#183;d)灌胃；庆大霉素组15只，肌肉注射硫酸庆大霉素80mg／(kg&;#183;d)，生理盐水4mL／(k&;#183;d)灌胃；中药组15只，肌肉注射硫酸庆大霉素同庆大霉素组，中药煎剂浓缩液4mL／(kg&;#183;d)灌胃。各组连续用药均25d。用脑干听觉诱发电位的方法检测庆大霉素耳中毒豚鼠听阈的变化；用组织化学的方法检测耳蜗毛细胞酸性磷酸酶的变化。结果：用药前对照组、庆大霉素组和中药组的脑干听觉诱发电位反应阈值分别为：32．28&;#177;2．55，32．34&;#177;2．52和32．32&;#177;2．54；用药后第27天分别为：32．30&;#177;2．73，54．95&;#177;18．62和41.76&;#177;9．36。用药后27d庆大霉素组和中药组的脑干听觉诱发电位反应阈值升高，差异有显著性意义(t=3．466，P&;lt;0．01)。耳蜗毛细胞内酸性磷酸酶染色的变化：耳蜗铺片在光镜下观察：正常豚鼠耳蜗基底膜铺片毛细胞酸性磷酸酶染色呈棕褐色，显色分布均匀，毛细胞排列整齐；庆大霉素致耳聋的豚鼠耳蜗毛细胞酸性磷酸酶显色变化依动物耳聋程不同，出现染色缺失程度亦不同；庆大霉素组酸性磷酸酶染色缺失显著，中药组酸性磷酸酶染色缺失变化轻，两组耳蜗铺片显示有明显差别。结论：该中药方剂能降低庆大霉素的耳毒性；保护耳蜗毛细胞溶酶体的完整性，降低庆大霉素对溶酶体的损坏而造成的毛细胞自溶性损伤，是该方剂降低庆大霉素耳毒性的机制之一。     

川芎嗪对豚鼠耳蜗毛细胞内酸性磷酸酶的影响

目的：探讨活血祛淤中药制剂成分川芎嗪对庆大霉素耳中毒豚鼠耳蜗毛细胞酸性磷酸酶的保护作用。方法：实验于2004-12／2005-01在泰山医学院听觉研究室进行。选用耳耳郭反射正常的健康杂色豚鼠30只4月龄，体质量为250-300g．雌雄不拘。随机分成3组，每组10只。对照组给予肌肉注射生理盐水2mL／（ks&;#183;d）；庆大霉素组给予肌肉注射硫酸庆大霉素80ms／（ks&;#183;d）：川芎嗪组给予腹腔注射川芎嗪6mg／（kg&;#183;d），同时肌肉注射硫酸庆大霉素80mg／（kg&;#183;d）。各组连续用药20d。用电位仪检测用药前及用药后脑干听觉诱发电位反应阈值（与用药前比较，其值升高可提示听觉受损）；用组织化学方法检测耳蜗毛细胞内酸性磷酸酶的变化（酸性磷酸酶染色缺失越明显，提示毛细胞损害程度越重）。结果：所有动物均进人结果分析。①脑干听觉诱发电位反应阈值结果：用药前对照组、庆大霉素组、川芎嗪组脑干听觉诱发电位反应阈值差异无显著性意义[（36．12&;#177;0．25，35．72&;#177;2．08，35．22&;#177;1．07）dB peSLP，P〉0．051：用药20d三组脑干听觉诱发电位反应阈值分别为（37．27&;#177;0．13,69．06&;#177;24．73，40．46&;#177;10．34）dBpe SLP，即庆大霉素组与对照组和川芎嗪组相比较脑干听觉诱发电位反应阈值明显偏高，（t=5．75，t=4．773,P〈0．01），川芎嗪组与对照组比较无显著性差异（t=1．38,P〉0．05）。②耳蜗毛细胞内酸性磷酸酶的染色变化结果：光镜下观察耳蜗铺片显示对照组豚鼠耳蜗毛细胞排列整齐，酸性磷酸酶染色均匀，呈棕褐色；庆大霉素致聋豚鼠耳蜗毛细胞酸性磷酸酶染色变化依动物耳聋程度不同而呈现不同的表现，出现显色变淡、消失；川芎嗪组酸性磷酸酶染色变化较轻。结论：川芎嗪能明显降低庆大霉素对听觉系统的损伤，其机制可能与川芎嗪能维持溶酶体的完整性、防止毛细胞溶酶体内的水解酶逸出造成的毛细胞自溶性损伤有关。     

丹参提取制剂对耳蜗毛细胞琥珀酸脱氢酶的影响

目的：观察具有活血化淤，扩张耳蜗血管，改善内耳微循环之功效的丹参提取制剂对豚鼠庆大霉索耳中毒引起的耳蜗毛细胞琥珀酸脱氢酶变化的影响。方法：实验于2004-09／12在泰山医学院生理听觉研究室完成。选用耳郭反射正常、体质量为250—300g的健康杂色豚鼠，雌雄不拘，排除耳郭反射的声刺激强度超过正常&;#177;2．5dB的实验豚鼠。将动物随机数分成3组：正常对照组动物15只，肌肉注射生理盐水2mL／（kg&;#183;d）；庆大霉索组动物15只，肌肉注射庆大霉素80mg／（kg&;#183;d）；丹参注射液组动物15只，腹腔注射丹参注射液（含生药量1．5kg／L）6mg／（kg&;#183;d），然后肌肉注射庆大霉索同庆大霉素组。各组动物连续注射药物均20d。用脑干听觉诱发电位的方法检测庆大霉素耳中毒豚鼠的听闽变化；用组织化学方法检测耳蜗毛细胞琥珀酸脱氢酶的变化。结果：在实验过程中无动物死亡，进入结果分析3组动物其45只。①用药22d后，庆大霉素组、丹参注射液组豚鼠的脑干听觉诱发电位反应阈值与正常对照组比较，差异有显著性[（71.25&;#177;24．730），（41．05&;#177;10．930）．（34．65&;#177;1.321）dB；t=8．097．3．184，P〈0.01]；丹参注射液组与庆大霉素组比较，差异有显著性（f=6．118，P〉O．01）。②耳蜗铺片毛细胞内琥珀酸脱氢酶染色在光镜下观察，正常豚鼠耳蜗基底膜铺片毛细胞琥珀酸脱氢酶染色呈紫蓝色；显色分布均匀，毛细胞排列整齐；在庆大霉素组耳蜗毛细胞琥珀酸脱氢酶显色出现明显消失，耳蜗毛细胞破坏明显；丹参注射液组琥珀酸脱氢酶染色变化较轻，庆大霉素组与丹参注射液组耳蜗铺片显示有明显差异。结论：丹参注射液能降低庆大霉素对耳蜗毛细胞的损害作用，保护耳蜗线粒体呼吸酶的活性，维持毛细胞的能量代谢以供给细胞需要能量的功能活动，可能是丹参注射液降低庆大霉素耳毒性的机制之一。     

马来酸桂哌齐特对噪声性听力损失的保护作用

目的:探讨马来酸桂哌齐特对豚鼠噪声性听力损失的保护作用。方法:实验于2003-10/11在河北医科大学第三医院耳鼻喉科实验室进行。取22只豚鼠随机分成3组:马来酸桂哌齐特组、生理盐水组各10只,正常组2只。马来酸桂哌齐特组及生理盐水组豚鼠分别腹腔注射马来酸桂哌齐特20mg/(kg·d),生理盐水4mL/(kg·d),注射后15min行白噪声(110dB)暴露,60min/d,连续9d,正常组豚鼠用以制备观察耳蜗螺旋器毛细胞正常形态的电镜标本,无需任何处理。前两组在暴露后不同时间(1,3,5,7,9d)分别测试听脑干反应,并用扫描电镜观察耳蜗毛细胞的结构变化。结果:22只动物全部进入结果分析。①扫描电镜观察显示,正常组豚鼠耳蜗内、外毛细胞形态正常;生理盐水组耳蜗内、外毛细胞均有听毛紊乱、融合及缺失;马来酸桂哌齐特组耳蜗病变比生理盐水组轻,听毛仅有轻微倾倒、融合现象。②无论任何时段马来酸桂哌齐特组豚鼠听脑干反应阈移小于生理盐水组(P<0.01);马来酸桂哌齐特组豚鼠在噪声暴露后第7天听脑干反应阈值已接近正常[(9.18±3.47),(6.93±3.24)dB,P>0.05],而生理盐水组豚鼠在噪声暴露后第9天听脑干反应阈值与正常组相比仍有显著差异[(16.84±3.78),(7.82±3.01)dB,P<0.05]。结论:马来酸桂哌齐特能够减轻噪声对耳蜗毛细胞的损害,对噪声性听力损伤具有较明显的保护作用。     

庆大霉素中毒后豚鼠耳蜗毛细胞的再生

背景:以往一直认为损伤的毛细胞不具有修复能力。近年研究表明,哺乳动物前庭毛细胞破坏后也保持一定的修复能力。那么,哺乳类动物耳蜗毛细胞破坏后是否具有再生能力?目的:应用扫描电镜技术并结合听性脑干反应测试,观察庆大霉素中毒后不同时间豚鼠耳蜗毛细胞情况和听性脑干反应阈值变化,以观察哺乳动物耳蜗毛细胞受损后能否再生。设计:随机对照动物实验。单位:沈阳医学院生理教研室。材料:实验于2001-11/2002-05在中国医科大学听力研究室完成。选用清洁级耳郭反射灵敏的健康成年白色红目豚鼠60只,随机分为庆大霉素组、正常对照组,每组30只。方法:庆大霉素组每日腹腔注射庆大霉素100mg/kg。正常对照组每日腹腔注射与庆大霉素等量的生理盐水2.5mL/kg,各组皆连续用药10d。每日测量体质量调整药量。在用药前和停药后1,3,30d分别检测听性脑干反应阈值;停药处死后应用扫描电镜技术观察各组豚鼠耳蜗毛细胞情况。主要观察指标:①听性脑干反应阈值。②庆大霉素中毒后不同时间豚鼠耳蜗毛细胞变化。结果:实验动物60只中途无脱落,全部进入结果分析。①庆大霉素组停药后1,3,30d其听性脑干反阈值显著高于正常对照组,差异有显著性[(38.00±3.75),(2.22±3.63)dBnHL,t=30.651,P<0.001];[(39.09±4.22),(2.50±3.54)dBnHL,t=29.708,P<0.001];[(14.50±3.69),(1.50±2.42)dBnHL,t=13.175,P<0.001]。30d时听性脑干反应阈值有明显恢复,但未达到正常水平。②庆大霉素组停药后1d豚鼠耳蜗第二转外毛细胞静纤毛显示融合、扭曲、倒伏、缺失或残缺不全等病理改变,尤其是第三排外毛细胞更为严重,且内毛细胞静纤毛外侧有囊状突出物;停药后3d豚鼠耳蜗第二转外毛细胞静纤毛融合、缺失、倒伏等病理改变仍然存在,内毛细胞静纤毛仍有倒伏现象,而其外侧囊状突出物减少;停药后30d豚鼠耳蜗第二转外毛细胞静纤毛融合、缺失、倒伏等病理改变,明显弱于庆大霉素停药1d和3d,同时耳蜗第三转有新生的静纤毛出现。结论:庆大霉素耳中毒后豚鼠耳蜗毛细胞损伤后存活30d者其耳蜗毛细胞形态上有所恢复,且听性脑干反应阈值也有一定程度的恢复,说明庆大霉素耳中毒后豚鼠耳蜗毛细胞具有再生修复能力。庆大霉素损伤后的毛细胞可以再生。     

庆大霉素中毒性耳聋豚鼠耳蜗热休克蛋白70的表达及川芎嗪的保护作用

景川芎嗪具有降低庆大霉素的耳毒性作用,但川芎嗪能否通过增加耳蜗热休克蛋白70表达,从而拮抗庆大霉素的耳蜗毒性作用.目的应用免疫组化及图像分析技术并结合听性脑干反应测试,观察川芎嗪对庆大霉素耳中毒豚鼠耳蜗热休克蛋白70表达的影响.设计随机对照实验,直线相关分析.单位沈阳医学院生理教研室和中国医科大学听力研究室.材料选用清洁级耳郭反射灵敏的健康白色红目豚鼠40只,体质量200～250 g,雌雄不拘.随机分为庆大霉素组、川芎嗪+庆大霉素组、川芎嗪组、正常对照组,每组10只.方法川芎嗪+庆大霉素组每日左侧腹腔注射川芎嗪注射液140 mg/kg,同时在右侧腹腔注射硫酸庆大霉素注射液100 mg/kg.庆大霉素组每日腹腔注射硫酸庆大霉素注射液100 mg/kg.川芎嗪组每日腹腔注射川芎嗪注射液140 rmg/kg.正常对照组每日腹腔注射生理盐水2.5 mL/kg,各组皆连续用药10 d.各组动物混合饲养,每日测量体质量调整药量.在用药前和停药后分别检测各组大鼠听性脑干反应阈值,停药处死后应用SABC免疫组化和图像分析技术,观察各组豚鼠耳蜗热休克蛋白70表达情况.主要观察指标①各组大鼠听性脑干反应阈值.②各组大鼠耳蜗热休克蛋白70表达.结果①豚鼠听性脑干反应阈值川芎嗪+庆大霉素组、庆大霉素组均明显高于正常对照组[(21.09±4.50)dBnHL,(36.55±6.13)dBnHL,(2.50±2.75)dBnHL,t=15.764～22.665,P＜0.001].川芎嗪+庆大霉素组明显低于庆大霉素组(t=9.092,P＜0.001).②豚鼠耳蜗各部位热休克蛋白70表达庆大霉素组耳蜗Corti's器、血管纹和螺旋韧带、螺旋缘、螺旋神经节4个部位细胞热休克蛋白70阳性反应产物平均灰度值低于正常对照组[(88.24±4.34,96.85±1.05;121.24±0.92,128.76±1.59;96.15±1.10,98.78±0.54;117.73±1.18,120.51±0.80),(t=6.097～18.307,P＜0.001)].川芎嗪+庆大霉素组耳蜗Corti's器、血管纹和螺旋韧带、螺旋缘、螺旋神经节4个部位细胞热休克蛋白70阳性反应产物平均灰度值明显高于庆大霉素组(92.53±2.25,88.24±4.34;125.20±1.43,121.24±0.92;98.71±0.91,96.15±1.10;118.91±0.46,117.73±1 18,t=3.925～10.415,P＜0.001).③各组各部位热休克蛋白70阳性反应产物平均灰度值与听性脑干反应阈值高度相关(r=-0.8141～-0.9841,P＜0.001).结论应用川芎嗪注射液可降低听性脑干反应阈值和庆大霉素中毒耳蜗热休克蛋白70的表达,以减轻庆大霉素的耳毒性损伤,从而改善听功能.     

卡那霉素致豚鼠耳蜗细胞凋亡及 caspase- 3表达的研究

目的:探讨卡那霉素耳慢性中毒与豚鼠耳蜗细胞凋亡的关系,及耳蜗细胞凋亡是否与凋亡蛋白酶caspase-3信号转导有关。方法:取50只豚鼠随机分为5组,实验组连续14d肌肉注射硫酸卡那霉素,200mg/(kg·d),分别对健康对照组及停药1、3、7、14d组处死豚鼠,处死前检测其ABR的变化,并利用TUNEL法检测耳蜗细胞凋亡情况及免疫组化法测定caspase-3的表达。结果:豚鼠卡那霉素耳慢性中毒后,随停药时间延长,ABR阈值较对照组明显上升,同时耳蜗细胞的凋亡数增多,且愈近底回愈多,愈近顶回则愈少。caspase-3阳性表达增高,与对照组比较差异均有显著性(P<0.01)。结论:卡那霉素耳慢性损害与耳蜗细胞的凋亡有关;耳蜗细胞的凋亡过程中有Caspase-3的激活。     

丹参注射液对庆大霉素耳蜗毒性的防护

背景丹参可有效减轻卡那霉素对CBA小鼠的耳毒性效应;然而,其是否也能防护庆大霉素对豚鼠的耳蜗毒性,目前尚不明确.目的研究丹参注射液对庆大霉素耳蜗毒性的防护作用.设计完全随机对照的实验研究.地点和对象实验在中国医科大学听力研究室进行.选用清洁级健康纯白红目豚鼠40只,雌雄不限,体质量250～300 g,耳郭反射灵敏,鼓膜及外耳道正常,由中国医科大学第二医院动物中心提供.干预动物随机分成4组,即对照组、庆大霉素组、庆大霉素+丹参注射液组和丹参注射液组,每组各10只.庆大霉素组每日腹腔注射硫酸庆大霉素100 mg/kg;丹参注射液组每日腹腔注射丹参注射液6 g/kg;庆大霉素+丹参注射液组同时注射硫酸庆大霉素100 mg/kg和丹参注射液6 g/kg;对照组则每日腹腔注射等量生理盐水.4组皆连续用药10 d.用药期间每天监测体质量以调整药量.全部实验由作者和另一名硕士研究生完成.主要观察指标应用听脑干反应(auditory brainstem response,ABR)测试,观察用药前后听阈变化.应用透射及扫描电镜技术,观察豚鼠耳蜗形态学变化.结果用药10d后,庆大霉素组ABR阈值(36.00±5.48)dB SPL明显升高,与对照组(17.00±4.47)dB SPL比较差异有显著性意义(t=6.008,P＜0.01);庆大霉素+丹参注射液组ABR阈值(27.00±4.47)dB SPL较庆大霉素组(36.00±5.48)dB SPL明显降低,差异有显著性意义(t=2.846,P＜0.05).电镜观察显示庆大霉素+丹参注射液组耳蜗结构损害明显轻于庆大霉素组.结论丹参注射液能有效防护庆大霉素的耳蜗毒性.     

Effect of transgenic GDNF expression on gentamicin-induced cochlear and vestibular toxicity

Gentamicin administration often results in cochlear and/or vestibular hair cell loss and hearing and balance impairment. It has been demonstrated that adenovirus-mediated overexpression of glial cell line-derived neurotrophic factor (GDNF) can protect cochlear hair cells against ototoxic injury. In this study, we evaluated the protective effects of adenovirus-mediated overexpression of GDNF against gentamicin ototoxicity. An adenovirus vector expressing the human GDNF gene (Ad.GDNF) was administered into the scala vestibuli as a rescue agent at the same time as gentamicin, or as a protective agent, 7 days before gentamicin administration. Animals in the Rescue group displayed hearing thresholds that were significantly better than those measured in the Gentamicin or Ad.LacZ/Gentamicin groups. In the Protection group, Ad.GDNF afforded significant preservation of utricular hair cells. The data demonstrated protection of the inner ear structure, and rescue of the inner ear structure and function against ototoxic insults. These experiments suggest that inner ear gene therapy may be developed as a clinical tool for protecting the ear against environmentally induced insults.     

不同补肾法对肾阳虚豚鼠模型听力的影响

目的探讨滋补肾阴与温补肾阳两类补肾中药对肾阳虚豚鼠模型的听力的影响。方法用糖皮质激素建立豚鼠肾阳虚模型,分别应用六味地黄汤及肾气汤进行干预,以耳廓反射（PR）、听性脑干反应（ABR）及耳蜗毛细胞计数为指标进行观察对比。结果肾阳虚组耳蜗第1～2回外毛细胞部分坏死导致高频听力下降（以3kHz最明显）,滋肾组亦出现大致相似的改变,温肾组耳蜗功能与形态的改变较轻。结论应用补肾法治疗耳聋须辨明肾虚之阴阳属性。     

干细胞移植豚鼠耳蜗形态结构及听力的变化

背景：既往研究证明耳蜗微造孔注射病毒或非病毒载体行基因治疗对耳蜗结构及听功能的影响轻微.目的：观察骨髓间充质干细胞通过耳蜗微造孔术移植到正常豚鼠内耳后对耳蜗结构及听功能的影响.方法：正常豚鼠分3组,空白对照组未予任何干预;单纯耳蜗微造孔术组单纯行耳蜗微造孔术,不注射任何成分;骨髓间充质干细胞组鼓阶微造孔后注射经DAPI荧光标记的骨髓间充质干细胞.结果与结论：单纯耳蜗微造孔术组、骨髓间充质干细胞组经耳蜗微造孔术后7 d的听性脑干诱发电位阈值均较空白对照组提高,术后28 d恢复至正常水平;耳蜗石蜡切片苏木精-伊红染色显示实验动物耳蜗内结构无明显异常改变.骨髓间充质干细胞组耳蜗切片可见荧光信号多分布于耳蜗底周的外淋巴腔（鼓阶和前庭阶）,无堆积堵塞管腔情况.结果表明经鼓阶开窗行骨髓间充质干细胞移植对耳蜗形态结构和听力的影响是轻微的,干细胞移植后能在耳蜗内迁移并存活.     

川芎嗪拮抗庆大霉素耳毒性扫描电镜观察

目的研究川芎嗪注射液(四甲基吡嗪TMP)对庆大霉素(GM)耳中毒豚鼠耳蜗毛细胞的影响,探讨TMP对GM耳毒性损伤的保护作用。方法选用健康白色红目豚鼠40只,体重200～250g,随机分为4组:GM组、TMP+GM组、TMP组、生理盐水组。应用听脑干反应(ABR)测试及扫描电镜技术。结果TMP+GM组耳蜗ABR阈值明显低于GM组(P<0.01),而且毛细胞倒伏、缺失或残缺不全等现象明显少于GM组。结论TMP可拮抗GM的耳毒性,从而改善听功能。     

镍钛合金听泡植入对豚鼠耳蜗及听功能的毒性

背景：镍钛合金多作为自膨胀支架和封堵器的材料应用已很成熟,但镍钛合金作为听骨链重建材料的相关研究及临床应用至今少有报道。 目的：观察镍钛合金植入体在豚鼠听泡中的耳毒性。 方法：健康听敏纯白红目豚鼠50只,每只豚鼠其中一侧耳为镍钛合金植入组,其中25只对侧耳为钛植入组,另25只对侧耳为空白植入组。分别于植入后7,14,28,56,112 d随机处死含钛植入组和空白植入组的豚鼠各5只,对各组行近中轴位耳蜗石蜡切片苏木精-伊红染色观察耳蜗组织的形态变化,行耳蜗毛细胞核丫啶橙-碘化丙啶双重荧光染色观察毛细胞凋亡和缺失情况,行耳蜗基底膜扫描电镜观察毛细胞纤毛排列情况,透射电镜观察毛细胞细胞器形态,对各组的豚鼠植入前、不同时间点处死前均行听性脑干反应及畸变反应耳声发射检测。 结果与结论：各组植入后各时间点耳蜗组织形态无明显变化,未发现耳蜗毛细胞发生凋亡,基底膜耳蜗毛细胞纤毛排列整齐,外耳蜗毛细胞的细胞器未见明显异常。植入前及植入后7,14,28,56,112 d听性脑干反应阈值差异无显著性意义,且畸变反应耳声发射检测通过率均为100%。结果证实,镍钛合金听泡植入对豚鼠耳蜗形态及听功能无明显影响,提示镍钛合金无明显耳毒性。     

针刺翳风、耳门、中渚穴对药物中毒性听力损害豚鼠耳蜗基底膜病理组织形态的影响

背景:目前关于听力损害的治疗尚无较理想方法,针刺可能不失为一种防治药物性听力损害的有效方法。目的:观察针刺翳风、耳门、中渚(改善药物中毒性听力损害豚鼠耳蜗基底膜病理形态结构的作用效果。设计:以实验动物为观察对象,完全随机设计实验。单位:北京首都医科大学宣武医院神经内科。材料:选用耳廓反射正常的白色雄性豚鼠45只,3～4月龄,普通级,体质量250～300g。随机将豚鼠分为5组:正常组、模型组、翳风组、耳门组、中渚组,每组9只。方法:实验于2002-04/07在北京中医药大学针灸学院实验室完成。①正常组:保持正常饲养条件,模型组、翳风组、耳门组、中渚组:每日肌肉注射庆大霉素80mg/kg,连续20d。翳风组、耳门组、中渚组在给药同时两耳对相应(位进行针刺治疗。针刺前豚鼠固定,选用0.35mm×25mm不锈钢毫针,快速进针刺入皮下,直刺约10mm,平补平泻捻转行针,隔10min1次,30s/次,留针30min,治疗20d。②制取豚耳蜗基底膜,光镜(×200)下毛细胞计数,记录毛细胞缺失数,观察琥珀酸脱氢酶活性;同时采用透射电镜(×5000)观察毛细胞超微结构。组间计量资料差异比较采用t检验。主要观察指标:各组豚鼠耳蜗铺片毛细胞琥珀酸脱氢酶活性和耳蜗毛细胞超微结构比较。结果:豚鼠45只均进入结果分析。①耳蜗铺片琥珀酸脱氢酶活性比较:正常组耳蜗铺片琥珀酸脱氢酶活性强,内外毛细胞结构正常。模型组琥珀酸脱氢酶活性明显减弱,甚至消失,底回外毛细胞损害严重,与正常组比较,差异明显(P<0.01)。与正常组比较,翳风组耳蜗毛细胞琥珀酸脱氢酶活性变化较小,差异不明显(P>0.05);耳门组琥珀酸脱氢酶活性降低,毛细胞略有肿胀、缺失;中渚组琥珀酸脱氢酶活性明显下降,底回外毛细胞损害严重。耳门组、中渚组与正常组比较有明显差别(P<0.01)。②豚鼠耳蜗基底膜外毛细胞缺失数:翳风组、耳门组、正常组明显少于模型组(P<0.05～0.01),中渚组与模型组相近。③超微结构:正常组耳蜗毛细胞结构正常;模型组毛细胞结构明显病理改变;针刺组病理变化较模型组轻。翳风组外毛细胞病理变化较轻,耳门组毛细胞结构略有改变,中渚组病理变化较严重,但略轻于模型组。结论:针刺能改善和维持琥珀酸脱氢酶活性,减轻或拮抗庆大霉素的毒性作用,以针刺翳风(效果最好,针刺耳门(次之,针刺中渚(效果最差。