鬼臼毒素衍生物YB-1EPN对人口腔鳞状上皮癌细胞系增殖的抑制作用研究

目的:研究鬼臼毒素衍生物YB-1EPN对人口腔鳞状上皮癌细胞系(KB)增殖的抑制作用。方法:以KB细胞为研究对象,采用MTT法检测细胞毒作用;荧光染色法观察细胞形态学变化;RT-PCR法检测半胱天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-3mRNA的表达;激光共聚焦显微镜观察药物对细胞微管结构的影响。结果:4μmol·L-1YB-1EPN能够直接抑制和杀伤KB细胞;荧光显微镜观察到4μmol·L-1YB-1EPN干预24h后KB细胞出现凋亡小体;RT-PCR法检测到在1、2、4μmol·L-1YB-1EPN干预下KB细胞促凋亡基因Caspase-3表达上调;激光共聚焦显微镜观察到在2、4μmol·L-1YB-1EPN干预24h后KB细胞微管结构被破坏。结论:YB-1EPN能够直接抑制和杀伤KB细胞株,作用机制可能与促凋亡基因的表达上调和抑制微管蛋白聚合有关。     

槲皮素对人肺腺癌NCI-H1395细胞凋亡的影响

目的:研究槲皮素对人肺腺癌NCI-H1395细胞凋亡的影响。方法:采用CCK-8法检测0~200μmol/L槲皮素作用12、24、48 h对NCI-H1395细胞增殖的影响;应用Hochest33258染色法和流式细胞仪检测0、20、50、100μmol/L槲皮素作用24 h对NCI-H1395细胞凋亡的影响;检测100μmol/L槲皮素对经半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶8(Caspase-8)、Caspase-9、Caspase-3抑制剂处理后NCI-H1395细胞凋亡的影响。结果:槲皮素可抑制NCI-H1395细胞的增殖,且与浓度和时间呈正相关。20、50、100μmol/L槲皮素可诱导NCI-H1395细胞凋亡,凋亡率分别为(18.6±4.1)%、(39.1±4.5)%、(58.2±3.5)%。抑制Caspase-8、Caspase-3激活可明显降低槲皮素对细胞的抑制作用(P<0.05)。结论:槲皮素可抑制NCI-H1395细胞增殖,诱导其凋亡,其作用可能与凋亡外源通路Caspase-8和Caspase-3的激活有关。     

菊苣酸诱导人白血病细胞HL-60凋亡作用及机制研究

目的观察菊苣酸诱导人急性髓系白血病细胞株HL-60凋亡的作用并初步探讨其机制。方法培养HL-60细胞,分别给予终浓度为10¹00μmol·L-1的菊苣酸48 h,检测细胞活性和凋亡、Caspase-3活性以及Bcl-2蛋白表达水平。结果终浓度为10100μmol·L-1的菊苣酸48 h,检测细胞活性和凋亡、Caspase-3活性以及Bcl-2蛋白表达水平。结果终浓度为10¹00μmol·L-1的菊苣酸能呈浓度依赖性降低HL-60细胞增殖活性和增加凋亡,增强Caspase-3活性和下调Bcl-2蛋白表达。结论菊苣酸具有抑制白血病细胞株HL-60增殖活性和诱导其凋亡作用,其机制与降低抗凋亡蛋白Bcl-2表达及增强Caspase-3活性有关。     

走马胎中皂苷成分AG4对MCF-7肿瘤细胞增殖的影响及机制研究

目的研究走马胎皂苷成分AG4对不同肿瘤细胞株增殖的影响,检测其对MCF-7细胞凋亡、细胞周期、Caspase-3和Caspase-9的活性、以及SOD活性和GSH、MDA含量的影响。方法终浓度为0.51～8.13μmol.L-1的AG4作用于肿瘤细胞株24～72 h后,采用MTT比色法检测AG4对9种肿瘤细胞株增殖的影响;筛选出对AG4敏感的细胞株,Hoechst染色观察细胞形态学变化;采用流式细胞术检测细胞凋亡和周期变化;采用相应试剂盒分别进行SOD活性和GSH、MDA含量的测定;采用Caspase-3和Caspase-9活性检测试剂盒对Caspase-3和Caspase-9活性进行检测。结果AG4作用于A549、BeL-7402、BGC-823、C6、EJ、HeLa、HepG2、MCF-7、LS180细胞24 h、48 h和72 h的IC50为3.67～11.1μmol.L-1,其中MCF-7细胞株对AG4较为敏感,24 h、48 h和72 h的IC50值分别为(3.67±0.61)、(3.76±0.66)和(4.03±0.47)μmol.L-1。高、中两剂量的AG4作用MCF-7细胞24 h后,细胞凋亡形态明显,发生早期凋亡;细胞阻滞在S期;SOD活性和GSH含量降低,MDA含量明显升高;Caspase-3和Caspase-9的活性均明显高于正常对照组。结论AG4对MCF-7细胞的增殖抑制作用最为明显。AG4干预MCF-7细胞内的氧化还原系统、阻滞周期并通过激活线粒体凋亡信号转导通路来诱导细胞凋亡。     

唐古特大黄多糖对过氧化氢诱导的肠上皮细胞凋亡的保护作用及其可能机制

目的探讨唐古特大黄多糖(Rheum tanguticumpoly-saccharide,RTP)组分1(RTP1)对过氧化氢(H2O2)诱导的肠上皮细胞IEC-6凋亡的保护作用及其可能的机制。方法以不同浓度的RTP1(10、30、100 mg.L-1)预处理体外培养的IEC-6细胞后,加入H2O2诱导IEC-6细胞凋亡,MTT法检测细胞活力,激光共聚焦显微镜荧光染色法检测细胞内活性氧的产生,DNA琼脂糖凝胶电泳、吖啶橙染色及流式细胞仪检测细胞凋亡的发生,Western blot测定Caspase-3酶活性。结果 100μmol.L-1H2O2处理细胞2 h明显降低细胞存活率并诱导细胞凋亡,凋亡率为31.3%,细胞内活性氧水平及Caspase-3的活性明显升高,不同浓度(10、30、100 mg.L-1)RTP1预处理细胞24 h,可明显提高细胞存活率,有效抑制DNAladder的发生,流式细胞仪检测凋亡率(30、100 mg.L-1)分别降低至24.4%和21.5%,Caspase-3酶活性降低,并呈现一定的剂量依赖性。结论 RTP1可明显抑制H2O2诱导的IEC-6细胞凋亡,其细胞保护作用可能与降低细胞内活性氧水平和抑制Caspase-3活性相关。     

单唾液酸四己糖神经节苷脂联合奥沙利铂对HCT116细胞增殖和周期的影响

目的研究外源性单唾液酸四己糖神经节苷脂(GM1)联合奥沙利铂对HCT116细胞增殖和细胞周期的影响。方法进行人结肠癌肿瘤细胞株HCT116细胞培养,HCT116细胞在20μmol/L奥沙利铂与不同浓度GM1(5~300μmol/L)联合干预,孵育12、24、48 h后通过CCK-8法检测药物对于HCT116细胞增殖活性的影响。倒置显微镜观察药物作用后细胞形态学变化。流式细胞术检测GM1联合奥沙利铂对于HCT116细胞细胞周期分布及凋亡的影响。结果奥沙利铂导致HCT116细胞增殖活性显著降低,该作用呈现显著时间依赖性,并且不受GM1药物作用的影响(P>0.05)。细胞形态学观察,奥沙利铂作用24 h后,HCT116细胞生长出现显著抑制,联合使用GM1对奥沙利铂引起的HCT116细胞的生长抑制亦无明显影响。流式细胞术检测,奥沙利铂作用24 h后,HCT116细胞周期G0/G1期和S期细胞减少,G2/M期细胞增多,细胞凋亡增多(P<0.05),联合使用GM1对于奥沙利铂引起的HCT116细胞细胞周期和凋亡的改变无明显影响(P>0.05)。结论GM1在体外不降低奥沙利铂对HCT116细胞增殖的抑制作用,不影响奥沙利铂引起的细胞周期和凋亡的变化。     

肝素酶抑制剂OGT2115对口腔癌KB细胞侵袭迁移的影响

目的探讨肝素酶抑制剂OGT2115对人口腔上皮癌KB细胞增殖及侵袭迁移能力的影响,以期为治疗肿瘤转移提供思路。方法 MTT法和Transwell实验分别检测不同浓度OGT2115(0.4、0.8、1.6、3.2、6.4μmol.L-1)对口腔癌KB细胞增殖以及侵袭迁移的影响;Transwell实验和划痕实验检测OGT2115(0.4μmol.L-1)联合低浓度(2μmol.L-1)阿霉素(adriamycin,ADM)后对细胞侵袭迁移的作用;ELISA法观察不同浓度OGT2115、OGT2115联合ADM对乙酰肝素酶(heparanase,Hpa)的影响。结果 MTT法结果显示,OGT2115对KB细胞的增殖具有一定的抑制作用,IC50为8.59μmol.L-1,抑制活性随着作用时间和浓度的增加而增加(P<0.05)。OGT2115可抑制KB细胞的侵袭和迁移,OGT2115(0.4μmol.L-1)与ADM(2μmol.L-1)联用后可以明显增强ADM抗KB细胞增殖和侵袭迁移能力(P<0.05)。结论肝素酶抑制剂OGT2115可以抑制KB细胞的侵袭和迁移,且可增强ADM抗KB细胞侵袭迁移的能力,其机制可能与抑制Hpa的活性有关。     

全反式维甲酸提高人结肠癌LoVo细胞对奥沙利铂敏感性

目的探讨全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,AT-RA)提高人结肠癌LoVo细胞对奥沙利铂的药物敏感性和机制。方法MTT法筛选ATRA和奥沙利铂实验浓度。流式细胞仪检测ATRA对细胞周期的影响。分别用ATRA、奥沙利铂、ATRA联合奥沙利铂作用LoVo细胞;MTT法检测药物抑制率,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡率,原子光谱吸收仪检测细胞DNA含铂(Pt)量。结果奥沙利铂抑制LoVo细胞作用呈量效依赖;其GI50(GI,inhibit net cell growth by%)为6.5mg.L-1,主要阻滞肿瘤细胞在S期。ATRA抑制LoVo细胞作用呈时效和量效依赖。1.0μmol.L-1ATRA作用12h后G1期细胞增多;48h后伴S期、G2/M期细胞减少并明显抑制肿瘤细胞增殖;作用12h至48h后联合奥沙利铂,两药联合由相加作用转变为协同作用;联合用药后S期细胞明显增多,细胞DNA含Pt量明显增加,但不提高奥沙利铂凋亡率。结论小剂量ATRA通过改变LoVo细胞周期和提高细胞DNA含Pt量,明显增加肿瘤细胞对奥沙利铂的药物敏感性。     

奥沙利铂诱导人舌鳞癌细胞株Tca8113凋亡抑制基因survivin表达的研究

目的探讨铂类抗癌药——奥沙利铂体外对诱导人舌鳞癌细胞株Tca8113凋亡抑制基因survivin表达的影响。方法应用MTT法检测奥沙利铂不同浓度(32、64、128、256μmol/L)对Tca8113细胞增殖的影响,并确定半数抑制浓度(IC50);应用免疫细胞化学法观察奥沙利铂作用于Tca8113细胞过程中凋亡抑制基因survivin表达的变化。结果一定浓度的奥沙利铂作用于Tca8113细胞24、48及72小时,可见survivin表达有不同程度增强。结论奥沙利铂体外能诱导人舌鳞癌细胞株Tca8113凋亡抑制基因survivin表达上调,可能是奥沙利铂化疗耐药性的机制之一。     

桦木酸对人肿瘤细胞的抗癌活性筛选

目的研究桦木酸(betulinic acid,BetA)对9种人肿瘤细胞的作用。方法采用噻唑兰(MTT)比色法测定KB(口腔上皮癌细胞)、OVCAR(卵巢癌细胞)、Bcap-37(乳腺癌细胞)、A2780(卵巢癌细胞)、HT-29(大肠癌细胞)、LS-1747(结肠腺癌细胞)、SMMC-7721(肝癌细胞)、PC-14(肺癌细胞)、K562(白血病细胞)对桦木酸及常用抗癌药cDDP(顺铂)、Taxol(紫杉醇)的敏感性。结果KB细胞对BetA最为敏感(IC50为11.6μmol.L-1),其次为LS-1747(IC50为12.5μmol.L-1)、SMMC-7721(IC50为25.0μmol.L-1)。结论桦木酸可以用作特异性的细胞增殖抑制剂。     

吗啡对血清饥饿致培养乳大鼠心肌细胞凋亡的影响及机制

目的利用体外原代培养的乳大鼠心肌细胞,研究吗啡对血清饥饿诱导心肌细胞凋亡的影响及其机制。方法体外原代培养乳大鼠心肌细胞,各组分别给药作用48h后,用MTT法测心肌细胞的活力;用Annexin V-FITC/PI双标记法测心肌细胞的凋亡率;用流式细胞仪分析心肌细胞周期;用Westernblot法测PKC和Caspase-3蛋白的表达。结果体外原代培养的乳大鼠心肌细胞经无血清饥饿作用48h后,心肌细胞可出现明显的凋亡现象;给予1μmol·L-1吗啡作用于心肌细胞后,心肌细胞的这种凋亡现象可明显被抑制,表现为:心肌细胞凋亡率降低、Caspase-3蛋白表达减少;但吗啡的这种抑制心肌细胞凋亡作用可被10μmol·L-1 naloxone完全阻断;并且给予10μmol·L-1GF109203X或1μmol·L-1Staurosporine与吗啡共同作用时,吗啡抑制心肌细胞凋亡的作用亦在一定程度上降低,表现为:心肌细胞凋亡率增加、Caspase-3蛋白表达增加、PKC蛋白表达减少。结论吗啡可激活心肌细胞膜上的阿片受体,通过PKC途径对血清饥饿诱导的心肌细胞凋亡具有抑制作用。     

缺血预适应对HK-2细胞缺氧/复氧损伤的保护作用及相关基因表达的调节

目的探讨缺血预适应对HK-2(人类肾小管上皮细胞)细胞缺氧/复氧损伤的保护作用及机制。方法用300μmol.L-1CoCl2预处理HK-2细胞2h,然后更换正常的培养基培养24h后用无血清的培养基培养,建立预适应的细胞模型。MTT法测定细胞增殖,流式细胞技术测定细胞的凋亡,RT-PCR技术检测诱导型一氧化氮合酶(inducible ni-tric oxide synthase,iNOS)和凋亡相关基因的表达情况。结果 300μmol.L-1CoCl2预处理可以明显增加HK-2细胞在无血清刺激下的增殖能力,减少凋亡(P<0.05或0.01)。预适应可以上调iNOS和凋亡抑制基因Bcl-2的表达,下调凋亡促进基因Caspase-9的表达,而这些调节作用可被iNOS的抑制剂氨基胍(AG)抑制(P<0.05)。结论 300μmol.L-1CoCl2预处理HK-2细胞2h可以模拟预适应的保护作用;iNOS和凋亡相关基因在预适应中起到重要的作用。     

全合成Jaspine B诱导人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡及DNA损伤

目的研究全合成Jaspine B对人乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖抑制及凋亡诱导作用,并探讨其对细胞DNA的损伤。方法酸性磷酸酶法(APA)检测细胞增殖,荧光显微镜、透射电镜(TEM)观察细胞形态结构,DNA琼脂糖凝胶电泳检测DNA片段化,流式细胞技术检测凋亡率及线粒体膜电位(ΔΨm),Western blot检测凋亡相关蛋白表达,单细胞凝胶电泳(SCGE)检测DNA损伤。结果Jaspine B抑制细胞增殖,24、48、72h IC50分别为2.61、1.07、0.77μmol·L-1,其作用在一定范围内呈浓度和时间依赖性;细胞发生凋亡形态改变,生化特征上出现DNA梯状改变;1.50μmol·L-1及3.00μmol·L-1Jaspine B作用24h,早期凋亡细胞率分别为7.60%及15.48%,相应浓度作用48h,早期凋亡细胞率分别增至21.48%及23.60%;Jaspine B可引起ΔΨm明显下降、Cyt C水平增加,促使Caspase-3酶原剪切活化;Jaspine B作用24h,细胞出现明显DNA损伤。结论全合成Jaspine B对人乳腺癌MDA-MB-231细胞抑制增殖、诱导凋亡并诱发DNA损伤,凋亡经由依赖胱天蛋白酶的内在途径发生。     

新藤黄酸诱导人鼻咽癌细胞CNE-1凋亡以及对p-p38和p-ERK1/2蛋白的影响

目的探讨新藤黄酸对人鼻咽癌细胞CNE-1凋亡的作用以及对磷酸化p38、p-ERK1/2蛋白的影响。方法倒置显微镜观察新藤黄酸不同时间和不同浓度处理CNE-1细胞形态变化;采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度新藤黄酸(0.25、0.5、1.0、2.0、4.0和8.0μmol.L-1)处理24 h、48 h和72 h对人鼻咽癌细胞CNE-1增殖的抑制作用;新藤黄酸作用CNE-1细胞24 h后的IC50为2.34μmol.L-1,再结合倒置显微镜观察的结果故选用2.0μmol.L-1作为药物作用浓度。Annexin V-FITC/PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡率,并应用透射电子显微镜检测细胞凋亡形态改变及线粒体损伤;Western blot检测p-p38、p38、ERK1/2和p-ERK1/2蛋白和线粒体凋亡相关蛋白Cytochrome C和Caspase-3蛋白的表达。结果新藤黄酸对人鼻咽癌细胞CNE-1生长和增殖有抑制作用,并随着新藤黄酸浓度的增加或作用时间的延长细胞活力明显下降。通过电镜可见2.0μmol.L-1新藤黄酸作用CNE-1细胞后细胞体积皱缩变圆,细胞核发生典型核染色质固缩等细胞凋亡形态学的变化;与control组相比包括对线粒体的损伤。Western blot表明p-p38蛋白表达有所上调,特别是在短时间(120 min)内,p-ERK1/2蛋白表达呈现时间依赖性下降;而p38和ERK1/2表达则基本不变。Cytochrome C和Caspase-3蛋白表达也呈现时间依赖性增加。结论新藤黄酸能诱导人鼻咽癌细胞CNE-1凋亡,增强Cytochrome C和Caspase-3蛋白表达,同时对p-p38和p-ERK1/2蛋白也有影响。     

苦参碱诱导卵巢癌SKOV_3细胞凋亡的机制研究

目的探讨苦参碱(matrine,Mat)诱导SKOV3细胞凋亡及可能的作用机制。方法四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测不同浓度Mat(0.4、0.8、1.2、1.6、2.0g·L-1)处理24、48、72h对SKOV3细胞增殖作用;流式细胞仪检测细胞的凋亡率,RT-PCR检测Survivin mRNA表达,Western blot检测Sur-vivin和Caspase-3蛋白的表达。结果一定浓度范围的Mat对SKOV3细胞的增殖均有抑制作用,且呈量效和时效关系,24、48、72h的IC50分别为3.38、1.57、1.13g·L-1;0.8、1.6g·L-1Mat作用48h后SKOV3细胞凋亡率分别为(11.44±0.56)%、(17.68±0.98)%,与空白对照组(4.85±0.31)%比较差异具有显著性(P<0.05)。RT-PCR及Western blot分析表明药物处理后SKOV3细胞的Survivin mRNA和蛋白表达均明显下调,而Caspase-3蛋白表达增加(P<0.05)。结论 Mat能抑制卵巢癌SKOV3细胞的增殖,促进其凋亡,其作用机制可能与下调Survivin表达和提高Caspase-3活性有关。     

蛋白酶体抑制剂MG132诱导HepG2细胞凋亡及其机制研究

目的观察蛋白酶体抑制剂MG132对人肝癌细胞HepG2的致凋亡作用,并从泛素蛋白酶体途径(UPP)相关基因E1、E2和E3及天冬氨酸特异的半胱氨酸蛋白酶3(Caspase3)表达初步探讨MG132的致细胞凋亡机制。方法采用多个浓度(2、5、10μmol·L-1)的蛋白酶体抑制剂MG132处理HepG2细胞;流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡率,DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡;逆转录聚合酶链反应(RTPCR)检测UPP相关基因E1、E2、E3和凋亡相关基因Caspase3的转录水平;免疫细胞化学检测Caspase3蛋白表达。结果对照组HepG2细胞凋亡率低于5%,在2、5和10μmol·L-1MG132作用下,细胞凋亡率分别为42.9%、66.1%、72.8%,MG132诱导HepG2细胞凋亡具有量效关系;RTPCR检测发现细胞内UPP相关基因E1、E2、E3mRNA表达下降,而凋亡相关基因Caspase3mRNA表达上调;免疫组化检测Caspase3蛋白表达水平升高。结论蛋白酶体抑制剂MG132能够诱导HepG2细胞凋亡,其机制可能与MG132抑制UPP活性,使细胞内Caspase3蛋白降解减少,同时上调Caspase3基因转录,促进细胞凋亡。     

绿原酸对过氧化氢诱导内皮细胞凋亡的保护作用

目的探讨绿原酸对体外过氧化氢诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的影响及机制。方法体外培养的人脐静脉内皮细胞株传代后进行实验,分为(A)正常对照组、(B)绿原酸组(30μmol.L-1)、(C)H2O2损伤组、(D)绿原酸+H2O2组。检测细胞线粒体膜电位;Hoechst33258荧光染色检测细胞凋亡;RT-PCR检测不同组内皮细胞Caspase-3和Bcl-2基因的表达。结果与正常对照组比较,过氧化氢(400μmol.L-1)能明显的造成内皮细胞的凋亡(P<0.05),绿原酸(30μmol.L-1)可降低过氧化氢引起的内皮细胞凋亡,表现为细胞凋亡率减少(P<0.05),线粒体膜电位增加,Bcl-2的表达增强,Caspase-3的表达减弱。结论绿原酸可抑制过氧化氢引起的内皮细胞凋亡,其作用机制可能与保护线粒体膜电位,促进凋亡抑制基因Bcl-2的表达及抑制Caspase-3的表达有关。     

抑制MEK对内质网应激诱导乳腺癌细胞凋亡的增敏作用

目的探讨抑制MEK/ERK信号通路对人乳腺癌细胞内质网(endoplasmic reticulum,ER)应激途径细胞凋亡的影响,以期为乳腺癌化疗提供新的靶点。方法不同浓度(0、1.5、3、6、9、12μmol.L-1)衣霉素(tunicamycin,TM)处理乳腺癌细胞SK-BR-3,48h后溴化丙啶(propidium iodide,PI)染色检测细胞凋亡率;TM(3μmol.L-1)处理SK-BR-3细胞不同时间(0、6、12、24、36h),Western blot检测葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein78,GRP78)、ERK1/2、pERK1/2的表达;MEK抑制剂U0126(20μmol.L-1)预处理1h后再给予TM(3μmol.L-1)同上处理,检测上述指标,比较U0126作用前后上述指标的变化。结果SK-BR-3细胞对TM诱导的细胞凋亡率<20%,且TM上调GRP78的表达;TM没有诱导ERK1/2的进一步激活;U0126明显增加TM诱导的细胞凋亡率(78%),同时下调GRP78的表达和阻断TM对GRP78的上调作用。结论MEK/ERK信号通路的抑制增强人乳腺癌细胞SK-BR-3对ER应激途径细胞凋亡的敏感性,抑制非折叠蛋白反应(unfolded protein response,UPR)的诱导。     

2,3-吲哚醌对肿瘤凋亡抑制因子survivin的影响及作用机制

目的研究2,3-吲哚醌(2,3-dioxoindoline,isatin,ISA)在体外对人神经母瘤细胞(SH-SY5Y)分泌肿瘤凋亡抑制因子survivin的影响,并探讨其作用机制。方法体外培养人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y细胞,将SH-SY5Y细胞随机分为对照组和ISA不同浓度(100、200、400μmol.L-1)处理组,采用荧光染色、DNA Ladder分析细胞凋亡,RT-PCR及Westernblot等方法检测不同浓度ISA作用后survivin及p53在mRNA和蛋白水平的变化,流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测Caspase-3蛋白水平的变化。结果ISA(100、200、400μmol.L-1)作用SH-SY5Y细胞48h后,在荧光显微镜下观察到400μmol.L-1ISA组细胞出现典型的凋亡形态学改变:核染色质聚集、核碎裂、胞质浓缩;琼脂糖凝胶电泳显示400μmol.L-1ISA处理组细胞出现明显的梯形条带;RT-PCR及Western blot显示:随着ISA药物浓度的增加,survivin mRNA及蛋白表达逐渐减少(P<0.05),野生型p53mRNA及蛋白表达水平逐渐增加,各用药组与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05),并呈现浓度依赖关系;FCM结果显示随着ISA药物浓度的增加,活化Caspase-3的表达率分别为18.38%、26.93%、35.66%,明显高于对照组(11.23%,P<0.05)。结论ISA能明显诱导SH-SY5Y细胞凋亡,可能机制是抑制凋亡抑制蛋白(IAP)家族中的生存蛋白(survivin)表达继而增加活化Caspase-3水平来实现的,而这一过程可能与ISA上调野生型p53的表达有关。     

姜黄素诱导人肺癌细胞凋亡的作用机制初步研究

目的　探讨姜黄素对人肺腺癌细胞 (SPC A1 )抗癌作用机制。方法　采用细胞培养、荧光显微镜、原位末端标记、放射免疫、原位杂交等技术 ,探讨姜黄素抗癌作用及其机制。结果　①姜黄素作用于癌细胞后 ,光镜下可见有细胞脱壁 ,悬浮培养液中 ;荧光镜下可见细胞核破碎 ,裂解成大小不等的凋亡小体 ,原位末端标记法进一步证实 2 0 μmol·L- 1 姜黄素作用 2 4h凋亡率达 42 67%。②姜黄素作用于癌细胞后 ,使细胞内cAMP浓度升高。③ 2 0 μmol·L- 1 姜黄素作用于癌细胞 2 4h后 ,使人肺癌细胞半胱氨酸蛋白酶 8(Caspase 8)mRNA表达明显增高。结论　姜黄素可诱导人肺癌细胞凋亡 ,其作用机制可能与细胞内cAMP浓度升高、Caspase 8表达增高有关