瑞舒伐他汀对心肌肥厚大鼠TLR4信号通路的影响

目的研究瑞舒伐他汀(rosuvastatin,RSV)对压力负荷诱导心肌肥厚大鼠心肌中toll样受体4(TLR4)及其下游核转录因子NF-κB p65、IκBα、炎症因子TNF-α表达的影响。方法采用腹主动脉缩窄大鼠模型,♂Wistar大鼠随机分为假手术组(S)、模型组(M)、RSV给药组(R,10 mg·kg~(-1)·d~(-1))每组10只。行心脏超声学检查,采用RT-PCR、Western blot、免疫组化、ELISA等方法检测心肌组织中心肌肥大基因ANP及TLR4、NF-κB p65、IκBα、TNF-α的表达。将TLR4蛋白水平分别与ANP、NF-κB p65、TNF-α水平进行相关性分析。结果 M组与S组相比,心脏体积和心肌细胞横截面直径、ANP mRNA水平均明显增加(P<0.01),伴TLR4mRNA和蛋白、NF-κB p65及TNF-α的水平明显增加及IκBα蛋白水平减少(P<0.05)。RSV抑制心肌肥厚,下调心肌组织中TLR4mRNA和蛋白、NF-κB p65及TNF-α的表达及上调IκBα蛋白水平(P<0.05)。在M组和R组,TLR4蛋白水平分别与ANP、NF-κB p65、TNF-α水平呈正相关。结论 RSV抑制心脏压力负荷诱导的心肌肥厚的作用可能与其抑制TLR4信号系统有关。     

钙调神经磷酸酶在L-精氨酸抗心肌肥厚中的作用

目的研究L-精氨酸抗右心室心肌肥厚作用及其与钙调神经磷酸酶(calcineurin,CaN)信号通路的关系。方法利用野百合碱(monocrotaline,MCT)诱导大鼠右心室心肌肥厚模型和前列腺素F2α(prostaglandin F2α,PGF2α)诱导心肌细胞肥大模型,分别以右心室肥厚指数(right ventricle hypertro-phy index,RVHI,即右心室/左心室+室间隔)、心肌细胞直径、蛋白含量和心房利钠肽(atrial natriuretic peptide,ANP)mRNA表达为心肌肥厚指标。用RT-PCR法检测mRNA的表达;Western blot法检测蛋白表达;荧光法检测细胞内钙[Ca2+]i的变化情况。结果L-精氨酸200mg.kg-1.d-1预防和治疗给药均明显抑制MCT诱导的大鼠心肌肥厚,降低MCT所致心肌CaN mRNA和蛋白及其下游因子NFAT3及GATA4蛋白表达的增加。L-精氨酸1mmol.L-1也明显抑制PGF2α100nmol.L-1诱导的大鼠心肌细胞肥大和[Ca2+]i升高,阻遏其诱导的CaN mRNA及CaN-,NFAT3-,GATA4-蛋白表达升高。在体和离体实验中一氧化氮合成酶抑制剂NG-硝基-L-精氨酸-甲酯均可完全阻断L-精氨酸的作用。结论L-精氨酸可能通过降低[Ca2+]i,从而抑制CaN信号转导通路而产生抗右心室心肌肥厚作用。     

Toll样受体4/NF-κB信号通路参与黄芪多糖对肿瘤坏死因子α诱导的乳大鼠心肌细胞肥大的抑制作用

目的探讨黄芪多糖(APS)对肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的乳大鼠心肌细胞肥大的保护作用及机制。方法 原代培养乳大鼠心肌细胞分别加入APS 25,50和100 mg.L-1作用30 min后再加入TNF-α50μg.L-1作用48 h。考马斯亮蓝法测定心肌细胞蛋白含量;消化分离法及计算机图像分析系统检测细胞体积;RT-PCR检测心肌心钠素(ANP)和Toll样受体4(TLR4)的mRNA表达;Western印迹法检测心肌细胞p65和IκBα的蛋白表达;ELISA法检测细胞外液白细胞介素1β(IL-1β)的含量。结果 与正常对照组相比,TNF-α组心肌细胞蛋白含量增加了52.8%,细胞体积增大了66.7%,ANP和TLR4 mRNA分别增加了60.3%和68.7%,p65蛋白表达增加了50.5%,IκBα蛋白表达减少了43.1%,IL-1β表达增加了59.0%,差异均有统计学意义(P<0.01)。与TNF-α模型组相比,APS 50,100 mg.L-1和IκBα阻断BAY11-7082 5μmo.l L-1组蛋白含量、细胞体积、ANP mRNA、TLR4 mRNA、IL-1β和p65蛋白表达显著降低(P<0.05),IκBα蛋白表达明显增高(P<0.05);APS 25 mg.L-1组蛋白含量、细胞体积和ANP mRNA表达显著性降低(P<0.05)。结论 APS对TNF-α诱导的乳大鼠心肌细胞肥大有保护作用,其机制可能与抑制TLR4/NF-κB信号通路有关。     

心肌肌钙蛋白ⅠR146W突变对CaN-NFAT3信号通路的影响

目的探讨心肌肌钙蛋白ⅠArg146Trp(cTnI R146W)基因突变在钙调神经磷酸酶(CaN)-活化T细胞核因子(NFAT)3信号通路中的作用。方法将大鼠胚胎心肌细胞分为转染含cTnI R146W突变的腺病毒(A)组、转染野生型cTnI基因的腺病毒(B)组、腺病毒空载体对照(C)组和空白对照(D)组,Western blot法分别检测胞浆CaN、胞核NFAT3蛋白表达。结果各组心肌细胞中均有CaN蛋白表达,但组间差异无统计学意义(P>0.05);A组NFAT3蛋白表达显著高于B、C、D组(P<0.05)。结论 CaN-NFAT3信号通路参与cTnⅠ R146W突变导致心肌肥大的过程。     

人参多糖对腹主动脉缩窄大鼠心肌肥厚及心肌能量代谢的影响

目的观察人参多糖对大鼠腹主动脉缩窄(AAC)所致心肌肥厚的抑制作用及对心肌能量代谢的影响。方法腹主动脉缩窄法制备大鼠心肌肥厚模型。50只SD大鼠随机分为Sham组、AAC组、人参多糖200,100,50 mg.kg 1组。术后1周开始腹腔注射给药,共给药11周。检测大鼠全心质量指数(HMI)、左心质量指数(LVMI);HE染色观察大鼠左室心肌形态学改变;RT-PCR法检测心肌组织心钠素(atrial natriuretic peptide,ANP)mRNA的表达;紫外分光光度法检测心肌组织中乳酸(LAC)和游离脂肪酸(FFA)含量;激光共聚焦显微镜定量检测线粒体膜电位(mitochondrial membranepotential,MMP)。结果与Sham组相比,AAC组的HMI和LVMI显著增加(P<0.01),左心室ANP mRNA的表达明显上调(P<0.01);FFA和LAC含量显著升高(P<0.01),MMP显著下降(P<0.01)。与AAC组相比,人参多糖组大鼠心脏HMI和LVMI下降(P<0.01或P<0.05);明显下调ANP mRNA的表达(P<0.01或P<0.05);FFA与LAC含量显著降低(P<0.01或P<0.05);心肌细胞MMP显著升高(P<0.01或P<0.05)。结论人参多糖能有有效抑制AAC大鼠心肌肥厚并改善其能量代谢紊乱,提高线粒体的活力。     

钙调神经磷酸酶在高血压心肌肥厚中的表达

目的：探讨钙调神经磷酸酶（calcineurin,CaN）在高血压心肌肥厚中的作用,并测定其在高血压心肌肥厚大鼠中的表达。方法：SD雄性大鼠,随机分为3组,手术组、假手术组及对照组。手术组采用不完全结扎腹主动脉方法建立高血压心肌肥厚模型。5周后提取大鼠左室心肌蛋白并定量,western-blot法测定Calcineurin蛋白表达水平。结果：术后5周,手术组、假手术组、对照组大鼠体重相似,手术组心肌细胞平均直径比假手术组及对照组显著增高（P〈0.01）,术后5周CaN蛋白表达手术组是对照组的1.62倍。结论：心肌肥厚大鼠CaN的蛋白表达明显增高,CaN参与了心肌肥厚的发病过程。     

Effects of cTnI R146W mutation on CaN-NFAT3 signaling pathway

目的 探讨心肌肌钙蛋白I Arg146Trp(cTnI R146W)基因突变在钙调神经磷酸酶(CaN)-活化T细胞核因子(NFAT)3信号通路中的作用.方法 将大鼠胚胎心肌细胞分为转染含cTnI R146W突变的腺病毒(A)组、转染野生型cTnI基因的腺病毒(B)组、腺病毒空载体对照(C)组和空白对照(D)组,Western blot法分别检测胞浆CaN、胞核NFAT3蛋白表达.结果 各组心肌细胞中均有CaN蛋白表达,但组间差异无统计学意义(P＞0.05);A组NFAT3蛋白表达显著高于B、C、D组(P＜0.05).结论 CaN-NFAT3信号通路参与cTnI R146W突变导致心肌肥大的过程.     

四氢姜黄素对压力负荷引起的小鼠心肌肥厚的保护作用

目的 探究四氢姜黄素（THC）能否减轻压力负荷引起的成年小鼠病理性心肌肥厚。方法 24只C57BL/6小鼠随机分为4组：假手术（Sham）组、THC组、主动脉弓缩窄（TAC）组及TAC+THC组,每组6只。通过TAC术建立小鼠心肌肥厚模型,Sham组和THC组不结扎主动脉弓。TAC术后每日通过饮水摄入THC（120 mg/kg）。TAC术后4周检测小鼠心脏功能,分离心脏和肺脏计算心脏/体质量比和肺脏/体质量比,HE 染色计算心肌细胞平均横截面积,Masson 染色观察心脏组织胶原沉积程度,Western blotting 检测 α-肌球蛋白重链（α-MHC）、β-肌球蛋白重链（β- MHC）蛋白表达,实时定量PCR（real-time PCR）检测心房钠尿肽（ANP）mRNA表达情况。结果 TAC术后4周,小鼠发生病理性心肌肥厚,表现为心脏/体质量比、肺脏/体质量比、心肌细胞平均横截面积、心脏组织胶原沉积、β-MHC和ANP表达较Sham组小鼠明显增高,而左室射血分数（LVEF）、左室短轴缩短率（LVFS）和α-MHC表达较Sham组小鼠明显降低。与TAC组相比,THC处理可以明显缓解TAC引起的病理性心肌肥厚,改善心脏功能,提高α-MHC表达,降低心脏/体质量比、肺脏/体质量比、心肌细胞平均横截面积、心脏组织胶原沉积、β-MHC和ANP表达（均P＜ 0.05）。结论 THC能够有效减轻压力负荷引起的病理性心肌肥厚。     

他克莫司对缺血缺氧损伤脑星形胶质细胞凋亡的影响

目的 研究他克莫司(FK506)对缺血缺氧损伤星形胶质细胞(Ast)凋亡的影响及其可能作用机制.方法 将Ast分为缺血缺氧(A组)、缺血缺氧+0.01μM FK506(B1组)、缺血缺氧+0.1 μM FK506(B2组)、缺血缺氧+1μM FK506(B3组)及正常对照(C组)五组.细胞计数试剂盒8(CCK-8)和Hoechst 33342分别检测Ast活力和凋亡;Western blot检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)、B细胞淋巴瘤-白血病2(Bcl-2)、Bcl相关X蛋白(Bax)蛋白表达.结果 与C组相比,A组Ast存活率下降(P<0.01),凋亡率及Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白表达均增加(P<0.01);而与A组相比,B3组Ast存活率提高(P<0.05),凋亡率及Caspase-3、Bax蛋白表达下降(P<0.01),Bcl-2蛋白表达增加(P<0.01).结论 FK506通过增加Bcl-2表达和降低Bax、Caspase-3表达水平,从而抑制缺血缺氧损伤Ast凋亡.     

帕瑞昔布对大鼠心梗后心室重构的改善作用及对PI3K/Akt信号通路的影响

目的探讨不同剂量的帕瑞昔布对大鼠心梗后心室重构的改善作用及对PI3K/Akt信号通路的影响。方法 40只♂SD大鼠随机分为5组(n=8):假手术组(S组)、心室重构模型组(R组)、帕瑞昔布低剂量组(P1组)、中剂量组(P2组)、高剂量组(P3组)。R组、P1组、P2组、P3组大鼠采用开胸结扎心脏左冠状动脉前降支的方法制备急性心肌梗死模型。建模24 h后连续2周每天分别给予P1组、P2组、P3组大鼠腹腔注射4、8、12 mg·kg~(-1)的帕瑞昔布,余2组给予等量的生理盐水。于建模处置4周时右侧颈动脉插管的方法测定大鼠血流动力学变化;处死大鼠,取心脏测定左室肥厚指数;HE染色、Masson染色观察梗死周边区心肌组织病理变化及间质胶原纤维增生情况;TUNEL染色光镜下观察心肌细胞凋亡情况;RT-PCR法检测心肌梗死周边区ANP mRNA、BNP mRNA含量的变化;Western blot法测定心肌PI3K、Akt、p-Akt及caspase-3的蛋白表达。结果与S组比较,心室重构模型组血流动力学各项指标明显变化,左室肥厚指数、ANP mRNA、BNP mRNA及caspase-3的蛋白表达明显升高,PI3K、p-Akt的蛋白表达明显降低(P<0.05)。与R组比较,中、高剂量帕瑞昔布可改善大鼠血流动力学,降低左室肥厚指数(P<0.05)。低、中、高剂量帕瑞昔布组均可降低ANP mRNA、BNP mRNA及caspase-3的蛋白表达,提高PI3K、p-Akt的蛋白表达(P<0.05)。结论中、高剂量帕瑞昔布能延缓心肌梗死大鼠的左心室重构过程,改善心脏功能,这种保护作用可能与PI3K/Akt信号通路的激活有关。     

FK506 ameliorates renal injury in early experimental diabetic rats induced by streptozotocin

Calcineurin (CaN) plays an important role in glomerular hypertrophy and extracellular matrix accumulation in early diabetic nephropathy. Cyclosporine (CSA), a CaN inhibitor, has been shown to reduce renal injury in streptozotocin-induced diabetic rats. We examined whether FK506, which immunosuppressive action was 10–100 times of CSA, inhibits progression of diabetic nephropathy in experimental diabetic rats. Diabetes was induced with streptozotocin in rats, and FK506 (0.5 or 1.0 mg/kg) was orally administered once a day for 4 weeks. Increased relative kidney weight was significantly reduced by FK506 treatment with 1.0 mg/kg (p < 0.05), and elevated 24 hour urinary albumin excretion rate was markedly attenuated by FK506 treatment with 0.5 and 1.0 mg/kg (p < 0.05, 0.01). Elevated glomerular volume was significantly attenuated by FK506 treatment with 0.5 and 1.0 mg/kg (p < 0.05), and increased indices for tubulointerstitial injury were only ameliorated by FK506 treatment with 1.0 mg/kg (p < 0.01). Western blot analysis noted that the expression of CaN protein was increased 2.4 fold in the kidney from diabetic rats, and FK506 treatment with 0.5 and 1.0 mg/kg could reduce increased expression of CaN protein by 38.0% and 73.2%. The expression of 1α (IV) collagen, p65, p-p65, OPN, α-SMA and TGF-β1 protein in kidney was significantly increased in diabetic rats and reduced by FK506 treatment (p < 0.05, 0.01). Our results show that FK506 could ameliorate renal injury in early experimental diabetic rats, which mechanism may be at least partly correlated with suppression on increased CaN in renal tissue in diabetic rats.     

黄芪多糖对腹主动脉缩窄致大鼠心肌肥厚能量代谢紊乱的抑制作用

目的探讨黄芪多糖(APS)对腹主动脉缩窄(AAC)致大鼠心肌肥厚的抑制作用及其机制。方法大鼠采用结扎腹主动脉的方法制备AAC模型,1周后ig给予大鼠APS 200,400和800 mg.kg-1,每天1次,共11周。计算心脏质量指数(HMI)和左心室质量指数(LVMI);测定左心室收缩压(LVSP)、左心室舒张末压(LVEDP)和左心室内压最大升降速率(±dp/dtmax),HE染色观察大鼠左室心肌形态学改变;测定左心室乳酸(LAC)、游离脂肪酸(FFA)含量;采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定心肌心钠素mRNA(ANPmRNA)表达;测定心肌细胞线粒体膜电位(MMP)。结果与假手术组相比,AAC模型组的大鼠,MMP明显降低,其他指标均显著增高。与模型组相比,APS 800 mg.kg-1组HMI,LVMI,LVSP,LVEDP和±dp/dtmax均显著降低(P<0.05);APS 400和800 mg.kg-1组ANP mRNA表达明显下降,MMP明显升高(P<0.05);APS200,400和800 mg.kg-1组LAC水平明显降低(<0.05)。结论 APS能够有效抑制AAC大鼠心肌肥厚并改善其能量代谢紊乱,提高线粒体的活力。     

非诺贝特对慢性心力衰竭大鼠心室重构的影响

目的研究非诺贝特对慢性心力衰竭大鼠心室重构的影响。方法 68只8周龄健康♂Wistar大鼠随机分为假手术组(Sh组,18只)和模型组(M组,50只),模型制备采用腹主动脉缩窄术,8周后将成功存活的38只模型组大鼠随机分为非诺贝特组(F组,18只)和对照组(C组,20只),分别给予非诺贝特150 mg.kg-1或生理盐水灌胃,每天1次,共10周。结果①干预前后,与Sh组比较,C组及F组LVEF、FS%、±dp/dtmax均降低(P<0.05),LVEDd、LVEDs、LVSP、LVEDP均升高(P<0.05);C组与F组间差异无统计学意义(P>0.05)。②干预后,C组、F组心肌LVW/BW、CVF指标较Sh组增高(P<0.05);F组LVW/BW较C组增高、CVF指标较C组明显降低(P<0.05)。③干预后,与Sh组比较,C组和F组心肌ET-1 mRNA明显增高(P<0.05);与C组比较,F组明显降低(P<0.05)。④干预后,与Sh组比较,F组和C组心肌eNOS蛋白水平明显降低(P<0.05);与C组比较,F组明显升高(P<0.05)。结论非诺贝特下调慢性心力衰竭大鼠心肌ET-1基因表达,上调eNOS的表达,抑制心肌间质纤维化,改善心室重构;但对心脏功能无影响。     

FK506 does not affect cardiac contractility and adrenergic response in vitro

FK506 (tacrolimus) is a new immunosuppressant being used in cardiac allograft transplantation. While cyclosporine A has been shown to exert an acute negative inotropic effect on isolated heart muscle preparations, little is known of the inotropic influence of FK506. The Ca²⁺ release channel of human skeletal muscle and cardiac muscle is associated with FK506 binding proteins (FKBP), FKBP12 and FKBP12.6, respectively. FKBPs can be dissociated by treatment with FK506. As a consequence of FK506 exposure, isolated skeletal muscle and cardiac muscle ryanodine receptors show altered gating characteristics. Therefore, we analyzed the direct inotropic effect of FK506 exposure to isolated, intact heart muscle preparations from the human and rabbits. Experiments were performed on isolated, electrically stimulated right atrial auricular muscle strips obtained from human myocardium during elective open heart surgery and on intact right ventricular trabeculae from rabbit hearts. The human preparations were exposed to concentrations of 8×10⁻⁹, 8×10⁻⁸ and 8×10⁻⁶ M FK506 followed by a cumulative dose–response curve with isoprenaline as a non-selective β-adrenoceptor agonist. Our data suggest that FK506 does not exert any positive or negative inotropic effect in either human or rabbit myocardium.     

Inhibitory effect of ginsenoside Rb1 on calcineurin signal pathway in cardiomyocyte hypertrophy induced by prostaglandin F2α

Aim： To examine the antihypertrophic effect of ginsenoside Rb1 （Rb1） induced by prostaglandin F2α （PGF2α） in vitro and to investigate the possible mechanisms involved in the calcineurin （CAN） signal transduction pathway. Methods： The cardiomyocyte hypertrophy induced by PGF2α and the antihypertrophic effect of Rb1 were evaluated in primary culture by measuring the cell diameter, protein content, and atrial natriuretic peptide （ANP） mRNA expression. ANP and CaN mRNA expressions, CaN and its downstream effectors NFAT3 and GATA4 protein expressions, and the intracellular free Ca^2＋ concentration （[Ca^2＋]i） were assayed by RT-PCR, Western blot, and fluorescent determination using Fura 2/AM, respectively. Results： PGF2α （100 nmol/L） significantly increased the cardiomyocyte diameter, protein content and [Ca^2＋]i, and promoted ANP, CaN mRNA, and CaN/NFAT3/GATA4 protein expressions, which were inhibited by either Rb1 in a concentration-dependent manner （50, 100, and 200 μg/mL） or L-arginine （1 mmol/L）. N^G-nitro-L-arginine-methyl ester, a nitric oxide synthase inhibitor, could abolish the effects of L-arginine, but failed to change the effects of Rb1 in the experiments above. Conclusion： The present data implicate that Rb1 attenuates cardiac hypertrophy, the underlying mechanism may be involved in the inhibition of the Ca^2＋-CaN signal transduction pathway.