基于细胞自噬的荭草苷抗心肌缺血/再灌注损伤的机制研究

目的本研究主要探讨荭草苷抗心肌缺血/再灌注损伤的保护作用与细胞凋亡和细胞自噬的关系。方法采用Langendorff法,建立大鼠离体心脏缺血/再灌注模型,缺血30min,再灌注120 min;随机将Wistar大鼠分为正常对照组、模型组、不同剂量荭草苷组(1.0、2.0、4.0 mg·kg~(-1))、自噬抑制剂组(2.0 mg·kg~(-1)荭草苷+渥曼青霉素)以及阳性对照药白藜芦醇组;采用多道生理记录仪采集血流动力学指标,全自动生化仪检测灌流液中心肌酶活性,电镜观察大鼠心肌细胞超微结构改变及自噬体,TUNEL法检测心肌细胞凋亡,Western blot法检测心肌细胞中自噬相关蛋白LC3和Beclin1水平。结果与模型组比较,荭草苷可明显改善大鼠血流动力学指标,降低乳酸脱氢酶和肌酸激酶水平,明显改善大鼠心肌细胞超微结构变化,同时能降低心肌细胞凋亡水平,增加细胞内自噬体数量以及自噬相关蛋白LC3Ⅱ和Beclin 1表达水平。结论荭草苷对大鼠心脏缺血/再灌注损伤具有明显保护作用,其机制可能与降低心肌细胞凋亡及增强细胞自噬有关。     

白藜芦醇通过促进线粒体自噬减轻小鼠脑缺血/再灌注损伤的实验研究

目的研究白藜芦醇(resveratrol,Res)对脑缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)损伤的保护作用及其可能作用机制。方法采用线栓法建立小鼠右侧大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型。各组小鼠术前连续腹腔给药5 d,每日1次。术后24 h对梗死体积和神经功能进行评价; Western blot检测沉默信息调节因子1(silent information regulator 1,SIRT1)和线粒体自噬相关蛋白p62、LC3B、PHB2、TOM20表达情况,以及细胞色素C (cytochrome C,CytC)分布情况;流式细胞术检测线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)变化;酶标仪检测胞内ATP水平变化;透射电镜观察线粒体形态变化。结果Res预处理减少了脑梗死体积和神经功能缺损,提高了SIRT1和线粒体自噬相关蛋白表达,减少了CytC的释放,恢复了MMP,提高了ATP水平。透射电镜结果显示,Res减轻了缺血导致的线粒体损伤。自噬抑制剂3-MA抑制了线粒体自噬,同时也逆转了Res的神经、线粒体保护作用。结论Res减轻小鼠脑组织I/R损伤可能与其对线粒体自噬的调控,最终确保线粒体质量有关。     

缺血/再灌注过程中心肌细胞自噬研究进展

自噬是一种广泛存在于真核细胞中的生命现象,心肌细胞营养缺乏、缺血/再灌注损伤、心衰等均可诱发细胞自噬。缺血/再灌注过程中的心肌细胞自噬可以维持心肌细胞稳态、减少细胞缺失,但是自噬作用也可导致心肌细胞死亡。     

白藜芦醇预处理对心肌细胞缺血/再灌注损伤的保护作用

目的观察白藜芦醇预处理对心肌缺血再灌注损伤的保护作用。方法培养乳鼠心肌细胞,模拟I/R损伤,随机分为阴性对照组、缺血再灌组及白藜芦醇预处理组,采用台盼蓝穿透法及MTT比色法测定细胞活力,检测细胞培养液中LDH活性及心肌细胞Na^＋-K^＋-ATP酶、Ca^2＋-ATP酶活力。结果Res预处理可提高心肌细胞活力;稳定心肌细胞膜,抑制LDH释放;保护心肌细胞钠泵和钙泵功能,减轻再灌注损伤。结论白藜芦醇预处理对心肌缺血再灌注损伤有明显保护作用。     

白藜芦醇对肠缺血再灌注损伤的保护作用

目的探讨白藜芦醇(Resveratrol,RSV)对肠缺血再灌注损伤的作用及分子机制。方法 30只SD大鼠随机分成假手术组(Sham组)、肠缺血再灌注损伤组(IRI组)和白藜芦醇预处理组(RSV组)。检测各组沉默信息调节因子1(SIRT1)、乙酰化p53(Acetylp53)、p53、bax、bcl-2、凋亡诱导因子(AIF)和TUNEL,观察肠组织病理形态。结果与Sham组相比,IRI组肠组织病理形态改变以及Acetylp53、bax、细胞浆AIF、TUNEL表达明显增加,而SIRT1和bcl-2表达明显降低。与IRI组相比,RSV组肠组织病理形态改变及Acetylp53、bax、细胞浆AIF、TUNEL表达明显减少,而SIRT1和bcl-2表达明显增加。此外,三组之间p53表达差异无统计学意义。结论 RSV可通过抗凋亡减轻肠缺血再灌注损伤,其作用机制与SIRT1/p53信号通路相关。     

白藜芦醇预处理对心肌缺血/再灌注损伤的保护作用

目的:观察白藜芦醇预处理对心肌缺血再灌注损伤的保护作用.方法:45只雄性SD大鼠随机分为假手术组、缺血再灌组及白藜芦醇预处理组,结扎左冠状动脉制作心肌缺血再灌注模型,比较各组左室最大收缩压(LVSP)、左室等容收缩/舒张期压力上升最大速率(LVdP/dtmax),心肌一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)含量变化及心肌梗死范围.结果:白藜芦醇预处理组LVSP、LVdP/dtmax较缺血再灌组显著升高,心肌NO含量显著升高、MDA含量则显著降低,心肌梗死范围明显减小.结论:白藜芦醇预处理对心肌缺血再灌注损伤有明显保护作用,其机制与白藜芦醇抗氧化、清除自由基及增加NO合成有关.     

白藜芦醇预处理对心肌细胞缺血／再灌注损伤保护作用的机制研究

目的研究白藜芦醇(Res)预处理对心肌细胞缺血再灌注损伤的保护作用的机制。方法培养乳鼠心肌细胞,模拟I/R损伤,随机分为阴性对照组、缺血再灌组及白藜芦醇预处理组,采用激光共聚焦显微术观察Res对细胞内钙的影响;采用比色法检测心肌细胞SOD和MDA活性。结果Res预处理使得心肌细胞培养液上清中超氧化物歧化酶(SOD)活性显著升高(29.28±1.24vs22.13±1.42NU/ml,P<0.05),丙二醛(MDA)活性显著降低(8.27±1.02vs13.55±1.69μmol/L,P<0.05)。Res预处理可以显著降低细胞内钙强度,P<0.05。结论白藜芦醇通过提高心肌细胞抗氧化损伤能力及降低细胞内钙超载,而缓解由于I/R产生的氧自由基损伤和钙超载所造成的损伤,从而发挥保护作用。     

自噬在肠缺血再灌注损伤中的研究进展

肠缺血/再灌注损伤(intestinal ischemia reperfusion injury, Ⅱ/RI)是临床常见的病理过程,缺血再灌注导致肠黏膜及远隔器官损伤,诱发全身炎症反应综合征(systemic inflammatory response syndrome, SIRS)和多器官功能障碍综合征(multiple organ dysfunction syndrome, MODS)。自噬是机体应激条件下的防御调控机制,具有维持细胞质、蛋白质和细胞器稳态的功能。自噬机制复杂,由进化上保守的自噬相关基因(autophagy-related gene, ATG)编码的蛋白质复合物以及多种信号分子、通路协同调控。研究发现,自噬参与肠缺血再灌注损伤的过程,因此,揭示自噬在Ⅱ/RI中的作用机制,可为Ⅱ/RI的防治提供依据。     

褪黑素对缺血再灌注损伤的人肝细胞的自噬影响及功能研究

目的：探讨褪黑素对缺血再灌注的人正常肝细胞LO2自噬的影响以及褪黑素的功能机制。方法：采用MTT法检测细胞的活性;采用Western blot检测LO2细胞中自噬相关蛋白LC-3Ⅱ、Beclin1的表达情况。结果：MTT结果显示：褪黑素对缺血再灌注损伤的肝细胞有一定的保护作用,促进细胞的存活。 Western blot结果显示：缺血再灌注能够上调LO2细胞的自噬活性,增强细胞内的自噬,缺血再灌注6 h后LC-3Ⅱ和Beclin1的表达迅速上升,并且维持在高自噬水平状态;褪黑素能够在缺血再灌注3 h后显著下调LO2细胞的自噬活性,降低细胞内的自噬水平,细胞内LC-3Ⅱ和Beclin1在3 h后逐渐下降表达,从而有效降低过度自噬的发生;褪黑素预处理后的缺血再灌注组的自噬活性在24 h较褪黑素治疗组低,预处理对缺血再灌注细胞后期能够起到更好的保护作用。结论：褪黑素能够抑制因缺血再灌注导致的肝细胞内自噬的发生,并且可以防止细胞发生过度自噬,提示褪黑素可以对各种因缺血再灌注导致损伤的肝细胞起到保护作用,以维持细胞内环境的稳态。     

内质网应激相关细胞自噬与心肌缺血再灌注损伤的研究现状

自噬是细胞对自身长寿命蛋白、冗余蛋白或破坏的细胞器进行降解并再利用的过程。内质网应激是细胞的一种适应性机制,通过未折叠蛋白反应等细胞活动来维持内质网的稳态。这两者都具有双刃剑的作用:即适度的激活可以保护细胞;但过度激活则导致细胞死亡。内质网应激可以诱导细胞自噬,且与心肌缺血再灌注损伤关系密切。本文对内质网应激相关自噬在心肌缺血再灌注损伤中的作用机制及研究进展进行综述。     

白藜芦醇对脑缺血/再灌注氧化应激损伤保护机制的研究进展

白藜芦醇是一种广泛存在于植物中的多酚类化合物,具有广泛的生物学活性。该文主要从白藜芦醇的性质以及在脑缺血/再灌注氧化应激损伤中的保护作用及其机制作一综述。     

脑室注射纳洛酮对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的　探讨脑室直接灌注盐酸纳洛酮注射液 (纳洛酮 ) ,对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法　采用线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型 ,在再灌注后的不同时间点 ( 3、6、2 4h) ;通过脑室直接灌注、腹腔注射和脑室灌注 腹腔注射的方式使用纳洛酮 ,观察用药后大鼠神经功能和组织病理学改变 ,计算脑梗死体积比 ,脑水肿体积和脑含水量。结果　与对照组相比 ,纳洛酮组的脑梗死体积比 ,脑水肿体积和脑含水量均明显减轻 ,随着缺血时间的延长这种保护作用逐渐降低 ,脑室灌注和腹腔注射联合使用的保护效果明显优于单纯脑室灌注或腹腔注射给药。结论　脑缺血再灌注后使用纳洛酮具有明显的神经功能保护作用 ,脑室灌注和腹腔注射给药的保护作用相似 ,但在损伤后的早期 ( <6h)、超早期 ( <3h)采用脑室灌注和腹腔注射联合给药的方式效果最佳     

SIRT3-FOXO1介导自噬在H9C2心肌细胞缺血再灌注损伤中的保护作用

目的　探究沉默信息调节因子2相关酶类3（SIRT3）-叉头盒转录因子O1（FOXO1）通路介导自噬在心肌细胞缺血再灌注损伤中的作用。方法　慢病毒感染H9C2心肌细胞构建SIRT3过表达稳定株。实验分4组：正常对照（NC）组、缺血再灌注（IR）组、SIRT3过表达+缺血再灌注（S+IR）组、SIRT3过表达+IR+SIRT3抑制剂（S+IR+3-TYP）组。Western blot检测SIRT3、乙酰化FOXO1（Ac-FOXO1）、自噬标记蛋白LC3B、Beclin1及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达;流式细胞分析仪检测细胞凋亡率;全自动生化仪检测细胞培养上清液中乳酸脱氢酶（LDH）水平。结果　与NC组相比,IR组SIRT3表达降低,Ac-FOXO1表达升高,自噬标记蛋白LC3B、Beclin1表达升高,抗凋亡蛋白Bcl-2表达降低,促凋亡蛋白Bax表达升高,LDH水平和细胞凋亡率升高（P＜0.05）。与IR组相比较,S+IR组SIRT3表达升高,Ac-FOXO1表达降低,LC3B、Beclin1表达升高,Bcl-2表达升高,Bax表达降低,LDH水平和细胞凋亡率降低（P＜0.05）;加入SIRT3抑制剂3-TYP后,与S+IR组相比,SIRT3表达水平无明显变化,但Ac-FOXO1表达升高,LC3B、Beclin1表达降低,Bcl-2表达降低,Bax表达升高,LDH水平和细胞凋亡率升高（P＜0.05）。结论　SIRT3-FOXO1通路激活可提高H9C2心肌细胞自噬水平,对心肌缺血再灌注损伤有保护作用。     

积雪草苷调控SIRT1-FOXO3-PINK1-Parkin通路介导的线粒体自噬保护肾缺血再灌注损伤的机制研究

目的　探讨积雪草苷（AC）调控沉默信息调节因子1（SIRT1）-叉头盒转录因子O3（FOXO3）-PTEN诱导性激酶蛋白1（PINK1）-E3泛素连接酶（Parkin）通路介导线粒体自噬对肾缺血再灌注损伤（RIRI）的保护作用及机制。方法　采用随机数字表法将50只雄性SD大鼠分为假手术组（Sham组）、模型组（Model组）、AC组、AC+SIRT1抑制剂（EX-527）组、EX-527组,每组10只。构建RIRI模型;AC组造模前予以AC混悬液80 mg/（kg·d）连续灌胃4周;AC+EX-527组造模前3 d予以含EX-527（5 mg/kg）的1% DMSO溶液腹腔注射,术中再灌注前20 min腹腔注射1次,余处理同AC组;EX-527组仅予以等量含EX-527的1%DMSO溶液腹腔注射。造模24 h后取材,检测血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）水平,HE染色观察肾组织病理改变及评分,Western blot检测组织SIRT1、FOXO3、PINK1、Parkin通路蛋白和自噬相关蛋白Beclin1、微管相关蛋白轻链3（LC3）A/B-Ⅰ、LC3A/B-Ⅱ表达水平,并计算（LC3A/B-Ⅱ）/（LC3A/B-Ⅰ）;紫外分光光度法检测组织ATP含量;JC染色法检测线粒体膜电位变化。结果　与Sham组比较,Model组Scr、BUN水平升高,肾组织发生病理损伤,通路及自噬相关蛋白表达量出现不同程度升高,ATP含量减少,线粒体膜电位水平下降（P＜0.05）;相比Model组,AC组Scr、BUN水平明显降低,肾组织病理损伤减轻,通路及自噬相关蛋白表达水平升高,ATP含量增高,线粒体膜电位升高（P＜0.05）;与AC组比较,经EX-527干预的AC+EX-527、EX-527组Scr、BUN水平出现不同程度升高,组织病理损伤加重现象,通路及自噬相关蛋白表达量均减少,ATP含量减少,线粒体膜电位水平下降（P＜0.05）,EX-527组程度较为明显。结论　AC通过上调SIRT1-FOXO3-PINK1-Parkin信号通路蛋白表达,促进线粒体自噬来改善肾组织细胞线粒体功能,抑制细胞凋亡,对RIRI起到保护作用。     

苯妥英钠对大鼠脑缺血再灌注损伤保护作用的实验研究

目的 :探讨苯妥英钠对实验性脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法 :采用结扎大鼠双侧颈总动脉制作不完全脑缺血 4 5min再灌注 12 0min模型 ,观察苯妥英钠对脑组织ATP酶活性、脑组织线粒体琥珀酸脱氢酶 (SDH)活性以及超微结构病理变化的影响。结果 :苯妥英钠可明显增加脑组织ATP酶活性 ,增强SDH的活性 ,并可明显改善损伤病理变化。结论 :苯妥英钠对脑缺血再灌注有保护作用 ,其机制与其提高脑组织ATP酶活性、稳定细胞膜、线粒体膜、保护线粒体功能有关。     

总丹酚酸对脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的　研究总丹酚酸对脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法　采用跳台法和断头法 ,观察总丹酚酸对缺血再灌注小鼠学习记忆功能障碍的作用和耐缺氧能力的影响。采用化学法 ,观察总丹酚酸对缺血再灌注小鼠脑组织中超氧化物歧化酶的 (SOD)活性 ,丙二醛 (MDA)和谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH)的含量。结果　总丹酚酸改善缺血再灌注引起的学习记忆障碍 ,缩短被动回避反应时间 ,减少错误次数 ,延长潜伏期 ,延长断头后呼吸持续时间。总丹酚酸亦增强缺血再灌注小鼠脑组织SOD的活性 ,降低MDA含量 ,增加GSH的含量。结论　总丹酚酸对脑缺血再灌注损伤有明显的保护作用 ,其机制与总丹酚酸抗氧化作用有关     

The protective effect of prophylactic ozone administration against retinal ischemia-reperfusion injury

Introduction: Retinal ischemia-reperfusion (IR) injury is associated with many ocular diseases. Retinal IR injury leads to the death of retinal ganglion cells (RGCs), loss of retinal function and ultimately vision loss. The aim of this study was to show the protective effects of prophylactic ozone administration against retinal IR injury.

Materials and methods: A sham group (S) (n?=?7) was administered physiological saline (PS) intraperitoneally (i.p.) for 7 d. An ischemia reperfusion (IR) group (n?=?7) was subjected to retinal ischemia followed by reperfusion for 2?h. An ozone group (O) (n?=?7) was administered 1?mg/kg of ozone i.p. for 7 d. In the ozone?+?IR (O?+?IR) group (n?=?7), 1?mg/kg of ozone was administered i.p. for 7 d before the IR procedure and at 8 d, the IR injury was created (as in IR group). The rats were anesthetized after second hour of reperfusion and their intracardiac blood was drawn completely and they were sacrificed. Blood samples were sent to a laboratory for analysis of superoxide dismutase (SOD), glutathione peroxidase (GSH-Px), malondialdehyde (MDA), total oxidant score (TOS) and total antioxidant capacity (TAC). The degree of retinal injury was evaluated according to changes in retinal cells and necrotic and apoptotic cells using the TUNEL method. Data were evaluated statistically with the Kruskal-Wallis test.

Results: The number of RGCs and the inner retinal thickness were significantly decreased after ischemia, and treatment with ozone significantly inhibited retinal ischemic injury. In the IR group, the degree of retinal injury was found to be the highest. In the O?+?IR group, retinal injury was found to be decreased in comparison to the IR group. In the ozone group without retinal IR injury, the retinal injury score was the lowest. The differences in the antioxidant parameters SOD, GSH-Px and TAC were increased in the ozone group and the lowest in the IR group. The oxidant parameters MDA and TOS were found to be the highest in the IR group and decreased in the ozone group.

Discussion: IR injury is also positively correlated with the degree of early apoptosis. This study demonstrated that ozone can attenuate subsequent ischemic damage in the rat retina through triggering the increase of the antioxidant capacity.     

盐酸右美托咪定对脑缺血再灌注损伤小鼠的保护机制

目的 研究盐酸右美托咪定(Dex)对脑缺血/再灌注实验动物氧化应激水平的影响及初步机制.方法 将108只C57小鼠随机分为假手术组、模型组和实验组,每组36只.实验组于再灌注前30 min,腹腔注射盐酸右美托咪定25μg·kg-1,假手术组和模型组同时间点给予等量生理盐水.用2,3,5-三苯基氯化四氮唑法(TTC)观察...     

西红花酸对小鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的：研究西红花酸对小鼠脑缺血再灌注（CIR）损伤的保护作用。方法：采用CIR模型,观察西红花酸对CIR小鼠脑水肿、脑毛细血管通透性及脑组织中乳酸脱氢酶（LDH）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱苷肽过氧化酶（GSH-Px）活性和丙二醛（MDA）、NO含量的影响。结果：与CIR模型组比较,西红花酸（50、100mg／kg）连续5d灌胃能减少CIR小鼠脑组织含水量、伊文思蓝和MDA、NO含量,提高脑组织中LDH、SOD、GSH-PX活性,差异具有统计学意义。结论：西红花酸对小鼠CIR损伤有一定的保护作用,其作用机制可能与西红花酸抗氧化、降低NO含量有关。     

洋川芎内酯A对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用研究

目的：探讨洋川芎内酯A对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及其机制。方法：将60只雄性健康SD大鼠随机分为4组,分别为：假手术组（Sham,n=15）,模型组（CTL,n=15）,洋川芎内酯A低剂量组（ASE-L,n=15）和洋川芎内酯A高剂量组（ASE-H,n=15）,大鼠脑缺血90min后恢复血流,于大脑中动脉阻断（MCAO）后24h将大鼠处死,对各组脑组织中IL-1β、IL-6、MDA水平以及SOD活性进行测定,并对各组的缺血侧脑水肿指数、脑梗死体积以及神经功能评分进行比较。结果：与CTL组比较,给药组大鼠的脑水肿指数、脑梗死体积以及神经功能评分明显改善,高剂量组（ASE-H）明显优于低剂量组（ASE-L）,差异均具有统计学意义（P<0.05）;同时,给药组大鼠脑组织中IL-1β、IL-6、MDA水平明显降低,SOD活性明显提高,差异也具有统计学意义（P<0.05）。结论：围术期采用洋川芎内酯A预处理可明显减轻脑组织的氧化应激反应,抑制促炎因子释放,对于脑缺血再灌注引起的中枢神经系统损伤具有明显保护作用。