大鼠脑出血后脑组织MMP-2、MMP-9 表达的实验研究

目的　探讨大鼠脑出血后不同时程脑组织中的基质金属蛋白酶 - 2 ( MMP- 2 )、基质金属蛋白酶 - 9( MMP- 9)的表达及其规律。方法　采用立体定向技术制作大鼠脑出血模型 ,在脑出血后不同时间分别断头取脑 ,免疫组化法测定脑组织 MMP- 2、MMP- 9的表达量。结果　 ( 1)与假手术对照组比较 ,脑出血后 6 h血肿周围可见到微血管内皮表达 MMP- 9( P<0 .0 1) ,48h达高峰 ,至 5～ 7d后下降 ,但仍高于假手术对照组 ( P<0 .0 1) ,2周时降至零表达 ;12～ 2 4h中性粒细胞亦表达 MMP- 9;( 2 ) MMP- 2的表达要迟于 MMP- 9,2 4h可见到少量的 MMP- 2表达 ( P>0 .0 5 ) ,5～ 7d时逐渐达高峰 ( P<0 .0 1) ,主要在巨噬细胞上表达 ,2周时仍保持较高水平 ( P<0 .0 1)。结论　脑出血后出血侧血肿边缘有 MMP- 9、MMP- 2表达 ,推测 MMP- 9在急性期参与了脑水肿的形成 ,而 MMP- 2在脑出血后期可能参与了脑组织的修复.     

AQP4、MMP-2及MMP-9 mRNA在高血压脑出血中的早期表达

目的探讨水通道蛋白4(AQP4)及基质金属蛋白酶2,基质金属蛋白酶9(MMP-2, MMP-9)在高血压性脑出血后的早期表达,为临床上防止脑组织进一步损伤提供实验依据。方法应用半定量RT-PCR方法检测高血压性脑出血患者出血后24 h内血肿周围脑组织中AQP4及MMP-2、 MMP-9的表达。结果 AOP4、MMP-2及MMP-9在高血压脑出血血肿周围组织中其相对表达量明显升高,相对表达量分别为0．517±0．028、0．502±0．054和1．003±0．013,与正常对照组0．021±0．004、 0．271±0．103和0．239±0．021相比差异均具有显著性(P<0．001)。结论 AQP4、MMP-2及MMP-9的早期上调表达在高血压性脑出血后早期脑水肿的发生、发展过程中具有重要的作用。     

MMP-2/9与脑出血后脑水肿的关系探讨

目的 探讨MMP-2／9与脑出血后脑水肿的关系。方法 采用胶原酶复制大鼠脑出血模型．通过免疫组化和原位杂交技术测定血肿周围脑组织中MMP-2／9的mRNA和蛋白表达，同时进行脑水含量和渗出脑血管外EB量的测定。结果 大鼠脑出血后血肿周围有明显的脑水肿发生和EB含量显著增加．均于24～48h达高峰。正常和假手术组可见极少量MMP-2蛋白和mRNA阳性染色细胞；而无MMP-9的表达。模型组出现大量MMP-2／9蛋白和mRNA阳性染色细胞；且MMP-9蛋白和mRNA表达在24～48h达高峰，与脑水含量和EB含量呈正相关。结论 大鼠脑血肿周围早期存在MMP-2／9的表达上调，其可能促进了出血后血管源性脑水肿的形成。     

MMP-9对大鼠脑出血后DCX表达的影响

目的 探讨脑出血后MMP-9对大鼠神经修复的影响.方法 采用立体定向技术制作 大鼠脑出血模型,用免疫组化方法测定脑出血后血肿周围及SVZ区DCX及MMP-9表达.结果 与对照组(MMP-9:116.865±5.126;DCX:121.34±2.76)相比,在第14天时脑出血组MMP9、DCX表达最强,灰度值最小(MMP-9:102.801±2.422,P＜0.05;DCX:110.58±2.29,P＜0.05),干预组较脑出血组表达弱,灰度值增大(MMP-9:109.31±2.13,P＜0.05;DCX:115.50±3.12,P＜0.05).结论 脑出血恢复期MMP-9可能是促进神经再生因子,多西环素能通过调节MMP-9的表达与活性影响神经再生.     

大鼠脑出血周边组织MMP-9、TIMP-1表达对脑水肿的影响

目的:研究大鼠脑出血周边组织基质金属蛋白酶系(MMPs)的成员明胶酶-9(MMP-9)和内源性基质金属蛋白酶抑制物(TIMP-1)表达对脑水肿的影响。方法:Wister大鼠50只随机分为对照组、出血组,各组又分为6、24、48、72、120h等5个时间点。测定脑组织含水量、脑组织示踪剂伊文思蓝(EB)含量和MMP-9、TIMP-1表达。结果:出血后脑组织含水量在72h、EB含量在48h、MMP-9和TIMP-1表达在48h达到高峰,血脑屏障(BBB)在各时间点均有破坏。结论:出血后MMP-9表达可导致BBB通透性增加,TIMP-1通过抑制MMP-9的表达减轻脑水肿。     

MMP-2、MMP-9与缺血性脑损伤研究进展

基质金属蛋白酶 (MMP)是一大类细胞外基质 (ECM)降解酶 ,目前认为其中的MMP - 2和MMP- 9与动脉粥样硬化的形成有关 ;实验研究发现它们在缺血性脑血管病脑损伤过程中发挥了重要作用 ,促使血脑屏障 (BBB)开放和脑水肿形成。本文综述MMP - 2和MMP - 9的生理功能、活性调节及与动脉粥样硬化和脑缺血损伤的关系。     

大鼠尾壳核内注射凝血酶对AQP4蛋白表达的影响

目的研究凝血酶对水孔蛋白-4(aqaporin-4,AQP4)表达的影响及引起脑出血后脑水肿形成的机制.方法在立体定向仪下向大鼠右侧尾壳核注射15 U凝血酶,在不同时间段对注射部位邻近脑组织AQP4蛋白进行免疫组化检测.结果注射凝血酶6 h后尾壳核AQP4蛋白表达开始增高,在第1 d达高峰,并维持到第3 d,以后逐渐下降到正常水平.结论凝血酶能促进脑微血管周围的AQP4蛋白表达的增加,加速水分的跨膜流动,引起星形胶质细胞水肿和血脑屏障的破坏,导致脑出血早期阶段脑水肿的发生.     

MMP-2、MMP-9在人脑胶质瘤及其浸润组织中的表达和临床意义

目的 阐述MMP-2、MMP-9与胶质瘤的浸润机制.方法 应用免疫组化方法 和原位杂交方法 检测胶质瘤和胶质瘤浸润组织中的MMP-2、MMP-9蛋白及MMP-2 mRNA、MMP-9 mRNA的表达.结果 MMP-2 mRNA和MMP-9 mRNA表达在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ级胶质瘤的阳性表达分别为5.26±1.47、9.51±0.96、14.58±1.42、20.56 4±1.56和7.90±0.50、14.46±0.75、23.54±1.32、28.07±0.81.MMP-2 mRNA和MMP-9 mRNA在Ⅰ～Ⅱ级胶质瘤浸润组织与Ⅲ～Ⅳ级胶质瘤浸润组织中的阳性表达分别为5.70±0.95、8.20±0.43和2.30±0.14、10.32±0.65.两者之间有显著差异(P<0.01).结论 胶质瘤的恶性程度与MMP-2、MMP-9表达呈正相关,随着胶质瘤的恶性程度的增高而增加.恶性程度高的胶质瘤,分泌基质金属蛋白酶能力越强,肿瘤的浸润性也越强.在胶质瘤治疗的过程中,即使肿瘤组织自身被切除,浸润组织则是胶质瘤复发的根源.     

亚低温对实验性大鼠脑出血后MMP-2/9表达的影响

目的 研究亚低温对脑出血后MMP-2/9表达及脑水肿的影响,探讨亚低温对出血性脑水肿的作用机制.方法 以立体定向技术在大鼠尾状核注射自体血制作脑出血模型;用冰块降温及白炽灯照射加温的方法调节体温;应用干湿重法测定脑水含量,并用免疫组化方法检测脑组织MMP-2/9表达.结果 脑出血模型大鼠血肿周围MMP-2/9的表达水平明显高于假手术组(均P<0.01);各个时间点亚低温组大鼠病灶侧血肿周围MMP-2/9的表达水平均明显低于常温对照组(P<0.01).同时,亚低温组脑水含量在各时间点与脑出血组比较明显下降(P<0.01).结论 亚低温能明显减轻脑出血后MMP-2/9的表达,亚低温可能通过抑制MMP-2/9的表达而减轻脑水肿.     

普罗布考对大鼠脑出血后MMP-9表达及血-脑屏障通透性的影响

目的讨论普罗布考对大鼠脑出血后基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达及血-脑屏障通透性的影响。方法采用自体动脉血注入大鼠尾壳核建立脑出血模型,将7 5只大鼠分成对照组、脑出血组、普罗布考组。各实验组分12h、1d、3d、5d、7d五个时间点,每个时间点5只大鼠。分别采用逆转录聚合酶链法(RT-PCR)、蛋白印迹法(Western blot)、伊文思兰染色法测定不同时间点的MMP-9 mRNA、MMP-9蛋白的表达和血-脑屏障通透性的变化。结果 MMP-9 mRNA、MMP-9蛋白的表达和血-脑屏障通透性在脑出血后1d开始升高,3d达到高峰,5d⁷d开始下降。给予普罗布考治疗后,在1d、3d、5d、7d时间点MMP-9蛋白和血-脑屏障通透性明显下调,与脑出血组相比差异有统计学意义(P<0.01),而MMP-9 mRNA无明显变化(P>0.01)。12h时间点MMP-9蛋白和血-脑屏障通透性在普罗布考组与脑出血组差异无统计学意义(P>0.01)。结论普罗布考可以减轻大鼠脑出血后的MMP-9蛋白的高表达,降低血-脑屏障的通透性,从而减轻脑水肿程度。     

大鼠局灶性脑缺血再灌注后MMP-9、TIMP-1的表达

目的 探讨基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)在局灶性脑缺血再灌注中的表达规律.方法 健康雄性Wistar大鼠40只按随机数字表法分为缺血再灌注组(I/R组,共25只)和假手术组(Sham组,共15只).采用线栓法成功制作可复血流的大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,缺血2 h后再灌注,于再灌注6 h、24 h、48 h、72 h和7 d时取材,进行MMP-9、TIMP-1免疫组织化学染色,通过免疫组化方法分析MMP-9、TIMP-1表达规律和在脑组织中的分布.结果 在I/R组,MMP-9再灌注6 h即有表达,24 h明显增多,48 h达高峰,72 h下降,7d时有微量的表达;TIMP-1在6h亦有表达,24h达高峰,48h时开始下降,7d时有微量表达.二者的阳性表达部位主要在血管内皮细胞,神经元、小胶质细胞亦有少量表达.Sham组未见阳性结果.结论 脑局部缺血再灌注后可诱导MMP-9、TIMP-1的大量表达,缺血后血管内皮损害是MMP-9及TIMP-1高表达的主要原因.     

川芎嗪对大鼠前脑缺血再灌注后MMP-9的影响

目的观察大鼠前脑缺血再灌注后MMP-9的变化及川芎嗪对其表达的影响。方法用夹闭双侧颈总动脉30min的方法,制备缺血再灌注大鼠模型,应用明胶酶谱法(SDS-PAGE enzymograph)测各组脑组织不同时间点MMP-9的表达。结果假手术组各个时间段大鼠前脑组织少量表达MMP-9;缺血再灌注6h组大鼠脑组织即有MMP-9的表达,缺血再灌注24h组、48h组大鼠脑组织大量表达MMP-9;缺血再灌注3d、5d组大鼠脑组织亦可见MMP-9的表达,但较缺血再灌注24h、48h组相比MMP-9表达减少;除川芎嗪6h组不具统计学意义外,其它时间段川芎嗪治疗组与缺血再灌注组相比MMP-9含量均降低。结论脑缺血再灌注后MMP-9的表达可上调;川芎嗪对大鼠前脑缺血再灌注后对MMP-9的表达有干预作用。     

大鼠脑出血后血肿周围凝血酶与脑细胞凋亡和脑水肿的关系

目的 研究大鼠脑出血后血肿周围脑组织中凝血酶的变化及其与脑细胞凋亡和脑水肿的关系.方法 105只成年雄性SD大鼠随机均分为脑出血组、生理盐水组和正常对照组.每组再随机均分为7个时相,分别为6 h、12 h、24 h、48 h、3 d、5 d、7 d;用立体定向脑内注射法制备脑出血模型;用ELISA法检测脑组织中凝血酶-抗凝血酶复合物的含量;用流式细胞仪检测脑细胞的凋亡率;用干-湿重法检测脑组织的含水量;用透射电镜观察脑组织的形态学变化.结果 制备动物模型后,脑出血组各时相血肿周围脑组织中凝血酶含量、脑细胞凋亡率、脑组织含水量均明显高于生理盐水组和正常对照组;血肿周围脑组织中凝血酶-抗凝血酶复合物的含量与脑细胞凋亡率和脑组织含水量之间均呈正相关;电镜下,在脑出血组各时相脑组织切片中均可见大量的脑细胞凋亡和毛细血管周围大片组织间隙水肿,以及神经纤维脱髓鞘改变.结论 脑出血后,血肿周围脑组织中凝血酶含量明显升高,可导致脑细胞凋亡和脑水肿,凝血酶的含量与脑细胞凋亡率和脑组织含水量呈正相关;尽早清除血肿有望改善凝血酶引起的继发性脑损伤.     

实验性脑出血后脑水肿的动态变化及其与MMP-9的关系

目的探讨脑出血后脑水肿和MMP-9表达的动态变化,并初步探讨其关系。方法健康雄性Wistar大鼠56只,将动物随机分成假手术组和脑出血组,大鼠尾壳核区注入自体非肝素抗凝动脉血建立脑出血模型,采用干湿重法测量脑组织水含量;免疫组织化学方法观察术后不同时间点MMP-9的动态变化。结果血肿形成后脑水肿产生迅速,从脑出血后3h开始增加,48~72h达高峰;脑出血后12h时,血肿周围组织中开始出现大量的深棕黄色阳性染色细胞,术后72h达高峰,以后逐渐下降,至120h时仍维持在较高水平。结论脑出血后脑水肿可能与MMP-9的活化有关。     

实验性大鼠脑动脉瘤形成过程中MMP-2、MMP-9表达的动态变化

目的探讨实验性大鼠动脉瘤形成过程中基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)的表达规律。方法制作肾性高血压大鼠脑动脉瘤模型,通过免疫组化在蛋白水平系统动态观察肾性高血压大鼠脑动脉瘤形成过程中MMP-2、MMP-9表达的变化。结果实验组在术后1 w脑动脉壁即可见MMP-2、MMP-9表达增加,随着术后时间的推移和大鼠血压的增高,其表达也迅速增加,术后1个月基本达最高峰并一直持续至4个月,其中MMP-9较正常状态的增加比MMP-2的表达增加更为显著。对照组脑动脉壁MMP-2、MMP-9也有微弱表达,且MMP-2表达较MMP-9略强。结论脑动脉壁MMP-9、MMP-2特别是MMP-9的过度表达导致的脑动脉壁胶原纤维及内弹力层破坏是脑动脉瘤形成的主要原因之一。     

阿加曲班对实验性大脑内出血后脑组织 MMP-9表达变化的研究

目的研究大鼠实验性大脑内出血(ICH)后脑组织基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinases- 9,MMP-9)的表达在阿加曲班(argatroban)注入前后的变化及意义。方法采用立体定向技术将自体不凝血注入大鼠尾状核区制备不同时间段的大脑内出血模型。另设加药组,术后30min及术后每天给予同等量的阿加曲班(3.0 mg/kg)。免疫组化染色法检测注药前后出血脑组织MMP-9的表达。结果未加药组MMP-9表达的阳性细胞数在出血后2d达到最高峰,之后又下降。加药后MMP-9表达的变化趋势消失(P>0.05),同一时相MMP-9阳性表达的细胞数与加药前无显著性差别(P>0.05)。结论进行阿加曲班治疗后MMP-9表达无显著性改变,MMP-9在出血后脑组织可能具有双重作用。