顺序特异引物聚合酶链反应技术行HLA-Ⅰ类抗原基因分型与临床应用

目的 采用顺序特异引物聚合酶链反应技术（PCR-SSP)建立汉族人群HLA-Ⅰ类A、B位点DNA分型方法。材料与方法 设计合成81个特异性引物和1对阳性对照引物．组成20个PCR反应用于A位点分型、41个PCR反应用于B位点分型，建立一步法PCR-SSP方法．应用于62份标准DNA和345例肾移植供受者的HLA-Ⅰ类DNA分型。结果 所有样本PCR-SSP基因分型均获得成功．无假阳性和假阴性出现．40份样本的重复率100％，总耗时5小时。分型结果经双盲验证完全符合。可准确分辨出A位点等位基因19个、B位点等位基因41个；实际检出汉族人群A抗原特异性13个、B抗原特异性32个。结论 PCR-SSP技术行HLA-Ⅰ类A、B位点DNA分型．分辨度高、特异性强、重复性好、相对简捷快速，分型结果较血清学方法更加精确可靠、适合于临床应用。     

非修饰性寡核苷酸芯片用于HLA-DQA分型的初步研究

利用非修饰寡核苷酸基因芯片技术,根据HLAⅡ类抗原DQA位点不同基因亚型的特异性序列设计探针,制成分型芯片;待测样本经PCR反应标记上荧光之后,与探针在芯片上进行杂交,根据杂交产生的荧光信号值,确定样品DQA位点基因亚型。将这一方法应用于125例临床样本和10例标准品的HLA-DQA分型,该方法分型的结果与准确结果相比,准确率达到93.3%。实验结果表明:非修饰性寡核苷酸芯片用于HLA-DQA分型技术可行。     

人类白细胞Ⅱ类抗原与颅内囊性动脉瘤发病关系的研究

目的探讨汉族人群中人类白细胞抗原(HLA)Ⅱ类抗原基因与颅内动脉瘤发病率的关系.方法利用PCR、琼脂糖胶电泳检测PCR产物等方法,比较49例颅内动脉瘤组与58例对照组中HLA-Ⅱ类抗原基因的DR及DQ位点的等位基因频率.结果汉族颅内动脉瘤患者的HLA-Ⅱ类抗原基因的DR及DQ等位基因频率与正常对照组无显著性差异(P＞0.05).结论汉族人的HLA-Ⅱ类抗原与颅内动脉瘤的发生可能无相关关系.     

人类白细胞抗原-Ⅰ类抗原的DNA分型与临床应用

目的采用顺序特异引物聚合酶链反应技术（ＰＣＲＳＳＰ）建立汉族人群白细胞抗原Ⅰ（ＨＬＡⅠ）类抗原Ａ、Ｂ位点ＤＮＡ分型方法。方法设计合成８１个特异性引物和１对阳性对照引物，组成２０个ＰＣＲ反应用于Ａ位点分型、４１个ＰＣＲ反应用于Ｂ位点分型，建立一步法ＰＣＲＳＳＰ方法，应用于６２份标准ＤＮＡ和３４５例肾移植供受者的ＨＬＡⅠ类ＤＮＡ分型。结果所有样本ＰＣＲＳＳＰ基因分型均获得成功，无假阳性和假阴性出现，４０份样本的重复率１００％，总耗时５小时。分型结果经双盲验证完全符合。可准确分辨出Ａ位点等位基因１９个、Ｂ位点等位基因４１个；实际检出汉族人群Ａ抗原特异性１３个、Ｂ抗原特异性３２个。结论ＰＣＲＳＳＰ技术行ＨＬＡⅠ类Ａ、Ｂ位点ＤＮＡ分型，分辨率高、特异性强、重复性好、相对简捷快速，分型结果较血清学方法更加精确可靠，适合于临床应用     

HLA-DRB1基因芯片与PCR-SSP分型的比较

目的：比较基因芯片和PCR-SSP用于汉族南方人群HLA-DRB1基因分型的结果，评价分型芯片的准确性。方法：77份待分型样本，分别用等位基因特异的PCR-SSP和基因分型芯片对DRB1分型。芯片分型通过组间特异引物扩增基因组DNA，扩增用荧光标记。扩增标记后的产物与分型芯片的探针杂交，通过杂交产生的荧光信号确定样品的HLA-DRB1基因亚型，比较两种方法分型所获得的结果，不吻合的样本全部经第三方验证或测序。结果：77份样本，两种方法分型全部成功。分型结果的吻合率为93％。不吻合样本6份，其中SSP定型纯合子4份，芯片分型全部为杂合子。经第三方验证，证实芯片对纯合子和杂合子的分型全部正确。另外2份不吻合的样本经测序，证实SSP分型错误1份，芯片分型错误1份。芯片的重复率为96％。结论：基因芯片是一种理想的分型方法，具有特异性高、重复性好、操作简便、所需样本量少、一次可作多份样本的优点。     

基因芯片在中国南方汉族人白细胞抗原-DRB分型中的应用

目的 建立一种用于HLA-DRB分型的基因芯片。并通过与PCR-SSP比较。评价芯片的性能。方法 根据中国汉族南方人常见的HLA-DRB位点基因及其多态性的独特序列。在第二外显子区域设计特异性的寡核苷酸分型探针。将其点在玻片上,制成芯片。基因组DNA通过组间特异引物扩增。扩增中同时用荧光素Ｃy5标记,扩增标记后的产物与结合在芯片上的探针进行杂交,通过荧光扫描仪对杂交产生的荧光信号值进行分析。确定样品的HLA-DRB基因亚型,将这一方法应用于110份样本的HLA-DRB基因分型并与PCR-SS究型的结果进行比较。结果 110份淋巴细胞样本,除1份PCR无产物致芯片不能分型外,其余样本芯片分型全部成功。不吻合样本10份;其中SSP定型纯合子6份,芯片分型全部为杂合子,SSP定型为杂合子1份,芯片结果为纯合。经第三方用PCR-SO验证,证实芯片分型正确。另外3份不吻合的样本经测序,证实SSP分型错误2分。芯片分型错误1份。芯片的重复率为95%。结论 基因芯片是一种理想的分型方法,具有特异性高,重复性好。操作简便,所需样本量少。结果判读容易,一次可作多份样本的优点。     

广东汉族人群HLA-DRB1基因多态性分布

目的 调查HLA-DRB1基因位点遗传多态性在广东汉族人群中的分布.方法 应用聚合酶链反应-序列特异性引物方法和反向聚合酶链反应-序列特异性寡核苷酸探针杂交的方法对1058名广东汉族人进行低分辨率HLA-DRB1基因分型.结果 共检出HLA-DRB1位点的15种等位基因,其中以HLA-DRB1* 12频率最高(14.60％),其次为HLA-DRB1* 09、*15和HLA-DRB1*04,基因频率分别为14.13％、13.33％和10.16％.等位基因分布结果符合Hardy-Weinberg平衡.该人群与北方汉族、日本、白人和黑人分别进行x2检验差异有统计学意义(P＜0.05).结论 广东汉族人群HLA-DRB1基因分布有自身特点.     

血小板特异性抗体及HLA抗体引起血小板输注无效的研究

目的分析血小板输注无效(PTR)患者血小板同种抗体,并对其HPA及HLA-Ⅰ类抗原进行基因分型,探讨血小板输注无效与血小板同种抗原/HLA-Ⅰ类抗原相关性。方法应用ELISA方法对17例血小板输注无效患者血清中的血小板抗体进行检测;运用PCR-SSP方法,采用HPA分型试剂盒检测血小板同种抗原7个抗原系统HPA-1、2、3、4、5、6、15,以及HLA分型试剂盒对HLA-A/B抗原进行基因分型。结果6名患者单独表达HLA抗体,4名患者表达血小板特异性糖蛋白抗体,3例HLA抗体和血小板特异性糖蛋白抗体共同表达,其中以GPⅡb/Ⅲa为主。对17例患者HPA系统和HLA-Ⅰ类抗原基因分型,发现HPA-3系统中a的基因频率高达0.676,b为0.324;HLA-A*02、HLA-A*24、HLA-A*11和HLA-B*60、HLA-B*13、HLA-B*46多见。结论HLA抗体和血小板特异性糖蛋白抗体表达引起血小板输注无效,了解PTR与HPA/HLA-Ⅰ类抗原的相关性对指导临床血小板配合性输注具有重要意义。     

遵义地区汉族HLA-A、B等位基因多态性的研究

目的从基因水平调查遵义地区汉族人群HLA-A、B等位基因频率，并了解其多态性分布状况。方法应用聚合酶链反应-序列特异性引物（PCR-SSP）方法对遵义汉族200名健康个体进行等位基因分型。结果遵义地区汉族HLA-A、B等位基因频率分布，在低分辨水平，共检出12个A＊基因，25个B＊基因，与我国北方、南方汉族比较，更接近南方汉族人群。南方汉族中分布频率极低的B＊07，在遵义汉族分布频率较高（GF值为2．0％）。结论遵义汉族人群HLA-A、B基因具有较为丰富的多态性，其分布符合南方汉族的特点，又具有高频B＊07地区性遗传特征。     

内蒙古鄂温克族人群HLA-DRB1基因多态性与族源分析

目的：对内蒙古鄂温克族人群人类白细胞抗原（human leukocyte antigen,HLA）Ⅱ类基因DRB1位点进行基因型检测.方法：采用DNA序列测定的分型技术（sequencing based typing,SBT）,对94名鄂温克族个体进行分析.结果：DRB1等位基因中,共检出25种等位基因,内蒙古鄂温克族以DRB^1＊090102 （16.0%）的频率最高,其次为DRB1^＊030101 （13.3%）、 DRB1^＊040101（10.1%）、DRB1^＊070101 （7.4%）、DRB1^＊120101/1206（7.4%）;系统树上鄂温克族与同样是北方人群的北方汉族、沈阳汉族和蒙古族聚在一起.结论：鄂温克族人群中HLA-DRB1分布特征有其独特性,鄂温克族基因频率和系统树显示鄂温克族属于中国北方人群.     

人类白细胞抗原—I类抗原的DNA分型与临床应用

目的 采用顺序特异引物聚合酶链反应技术（ＰＣＲ－ＳＳＰ）建立汉族人群白细胞抗原－Ｉ（ＨＬＡ－Ｉ）类抗原Ａ、Ｂ位点ＤＮＡ分型方法。方法 设计合成８１个特异性引物和１对阳性对照引物,组成２０个ＰＣＲ反应用于Ａ位点分型、４１个ＰＣＲ反应用于Ｂ位点分型。结果 所有样本ＰＣＲ－ＳＳＰ基因分型均获得成功,无假阳性和假阴性出现,４０份样本的重复率１００％,总耗时５小时。分型结果经双盲验证完全符合。可准确分辨出Ａ     

湖南地区汉族系统性红斑狼疮患者HLA—DM多态性研究

目的：探讨湖南地区系统性红斑狼疮患者的遗传易感性基因,方法：运用PCR－SSO方法分析SLE患者和正常人群中HLADM基因的多态性。结果：正常人群和SLE人群组中,DMA＊0101及DMB＊0101频率占主要地主。DMA＊0104和DMB＊0104为罕见基因,两组之间无显著性差异。结论：湖南地区SLE患者中未发现HLADM易感基因。     

聚合酶链反应-反向杂交流式分析技术在骨髓库HLA基因分型中的应用

目的了解河南省汉族人群HLA—A、B、DRBl基因多态性。评价流式反向SSO技术在骨髓库大量样本检测中的应用效果。方法用Luminex开发的反向SSO方法对2200名造血干细胞捐献进行HLA-A、B、DRB1基因分型,观察基因的分布情况,计算基因频率,并与不同地区不同种族人群进行比较。结果HLA-A位点检出18个基因型别,基因频率较高的有A2、A11、A24、A33。HLA-B位点检出41个基因型别,基因频率较高的有B13、B51、B46、B40、B35、B15。HLA-DRB1位点检出13个基因型别,基因频率较高的有DRB107、DRB104、DRB109、DRB112、DRB105。结论我省汉族人群HLA基因呈高度的多态性,分布及基因频率与国外有非常显的差异,与我国南方地区汉族有显差异,与北方人群相近。LuminexSS0方法用于大量样本的HLA检测较PCR-SSP简便、节省人力、分辨率大大提高。     

PCR-SSP法HLA-A、B基因分型与血清学分型的比较

目的 比较聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)进行HLA-Ⅰ类A、B抗原位点分型的准确性，并探讨血清学分型错误发生的原因。方法 用PCR-SSP以及单克隆抗体血清学分型技术对HLA-A、B分型并比较。结果 34例样本PCR-SSP基因分型无假阳性和假阴性出现。PCR-SSP法与血清学比较，血清学检出错误或漏检率分别为HLA-A位点23.5％，B位点26．5％。血清学发生错误或易混淆的抗原有：A2和A68、A32和A33，B5、B60和61。结论 PCR-SSP法进行HLA-A、B抗原等位基因分型具有分辨率高、特异性强、重复性好、实验过程简捷快速、分型结果较血清学更加准确可靠的优点。     

辽宁地区汉族人群HLA-DRB1位点的测序分型研究

[目的 ]调查辽宁地区人群人类白细胞抗原 (humanleukocyteantigen ,HLA)DRB1位点等位基因多态性 ,获得完整准确的遗传学数据。 [方法 ]应用聚合酶链反应 -直接测序方法 (PCR -SBT)对 1 0 8名健康个体进行HLA -DRB1基因型检测。 [结果 ]检出DRB1等位基因亚型 33个 ,其中等位基因DRB1 0 70 1 1 , 1 5 0 1 1 , 0 90 1 2 , 1 1 0 1 1 , 1 2 0 2 1的频率较高。 [结论 ]提供了辽宁汉族人群HLA -DRB1位点等位基因频率 ,证实了PCR -SBT分型方法快速准确的优点     

湖南汉族群体HLA-DQA1位点等位基因多态性分析

目的 :分析湖南汉族群体HLA DQA1位点等位基因多态性。方法 :应用PCR/SSP和银染PCR/SSCP技术对 60名无血缘关系湖南汉族健康个体作HLA DQA1基因分型。结果 :检出 1 0种HLA DQA1等位基因 ,基因频率范围为 0 .0 1 67～ 0 .2 2 54 ;HLA DQA1 0 30 2 , 0 50 1 , 0 1 0 2为常见等位基因 ,HLA DQA1 0 1 0 1 , 0 2 0 1 , 0 4 0 1为少见等位基因。检出 2 6种基因型 ,基因型观察值和理论值分布符合Hardy Weinberg平衡 (P >0 .0 5)。 5例样本的PCR/SSP分型只能确定一个等位基因 ,另一等位基因经PCR/SSCP确认。结论 :提供了湖南汉族群体HLA DQA1位点等位基因频率正常值     

湖南汉族群体HLA—DQA1位点等位基因多态性分析

目的：分析湖南汉族群体ＨＬＡ－ＤＱＡ位点等位基因多态性。方法;应用ＰＣＲ／ＳＳＰ和银染ＰＣＲ／ＳＳＣＰ技术对６０名无血缘关系湖南汉族健康个体作ＨＬＡ－ＤＱＡ１基因分型。结果：检出１０种ＨＬＡ－ＤＱＡ１等位基因。基因频率范围为０．０１６７～０．２２５４,ＨＬＡ－ＤＱＡ１＊０３０２,＊０５０１,＊０１０２常见等位基因,ＨＬＡ－ＤＱＡ１＊０１０１,＊０２０１,＊０４０１为少见等位基因。检出２６种基因型,     

CTLA-4基因微卫星多态性与广西地区壮、汉族Graves病的相关性研究

目的:研究CTLA-4基因微卫星多态性与广西地区壮、汉族Graves 病(GD)的相关性.方法:112例广西地区壮、汉族GD患者和94例正常对照组,应用聚合酶链反应技术,检测CTLA-4外显子4的3'非翻译区包含(AT)n[CTLA-4(AT)n]重复序列的特异性等位基因.结果:①广西地区壮族人细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4(CTLA-4)微卫星多态性有19种等位基因,汉族人有18种等位基因;②壮、汉族GD组与正常对照组比较,106 bp等位基因频率显著增高(P＜0.05),汉族正常对照组104 bp等位基因频率较GD组高(P＝0.01);③壮族正常对照组未发现104 bp等位基因高于GD组.结论:CTLA-4基因与广西壮、汉族GD患者明显相关,CTLA-4(AT)n 106 bp可能是广西壮、汉族GD的易感等位基因,104 bp可能是广西汉族GD的保护基因.     

用顺序特异引物聚合酶链反应技术行HLA-A抗原DNA分型

作者采用顺序特异引物聚合酶链反应技术（ＰＣＲ－ＳＳＰ）,建立了汉族人群ＨＬＡ－Ａ位点ＤＮＡ分型方法。研究采用ＰＣＲ－ＳＳＰ对３４５例肾移植供受者样本ＤＮＡ行ＨＬＡ－Ａ位点基因分型均获得成功。共检出Ａ位点等位基因总数６３５个,其中纯合子５５例,杂合子２９０例;可准确分辨ＨＬＡ－Ａ位点等位基因２０个,无假阳性和假阴性出现,重复率１００％,总耗时５小时。分型结果经标准ＤＮＡ验证和美国加州大学配型中心双盲验证完全符合。与标准血清学方法比较显示,６９份血清学空白位点中１６份存在第二个位点,１３份血清学分型错误,血清学总误差率９．０％。由此表明,用该研究建立的ＰＣＲ－ＳＳＰ方法行ＨＬＡ－Ａ位点ＤＮＡ分型,具有高分辨度、高特异性和简捷快速的特点,分型结果较血清学方法更加精确可靠,适合于临床应用。