灌胃对老龄大鼠海马内APP裂解酶基因表达的影响

与阿尔茨海默病（AD）相关的酶主要是指淀粉样蛋白前体（β-amyloid precursor protein,APP）裂解酶,目前所知道的包括α-分泌酶（主要为a disintegrin and metalloproteinase（ADAM）10和ADAM17）、β-分泌酶（β-secretase,主要为BACE1）和γ-分泌酶（主要为presenilin1,PS1）.本研究对灌胃大鼠海马内所有的四个指标均进行了基因表达的检测。现将结果报告如下。     

裂蹄木层孔菌菌丝体培养物中的β-分泌酶抑制剂hispidin[英]／Park I-H…∥Planta Med

阿尔茨海默病(AD)的主要特征是淀粉样蛋白沉积(淀粉样斑块)，淀粉斑块主要成分是β-淀粉肽(Ap)。Aβ的形成与β-分泌酶有直接关系，而α-分泌酶则可防止Aβ的形成。因此，抑制β-分泌酶和诱导α-分泌酶可能是减少脑中Aβ形成的标靶。作者测试了256种植物和真菌提取物，从裂蹄木层孔菌Phellinus linteus Teng菌丝体培养液中分离、鉴定了一种小分子β-分泌酶(BACEl)抑制剂hispidin，     

裂蹄木层孔菌菌丝体培养物中的β-分泌酶抑制剂hispidin

阿尔茨海默病(AD)的主要特征是淀粉样蛋白沉积(淀粉样斑块),淀粉斑块主要成分是β-淀粉肽(Aβ)Aβ的形成与β-分泌酶有直接关系,而α-分泌酶则可防止Aβ的形成。因此,抑制β-分泌酶和诱导α-分泌酶可能是减少脑中Aβ形成的标靶。作者测试了256种植物和真菌提取物,从裂蹄木层孔菌Phelli-nus linteus Teng菌丝体培养液中分离、鉴定     

血小板淀粉样前体蛋白加工过程：1种阿尔茨海默病的生物标记物

脑内淀粉样前体蛋白（APP）通过下述两种途径进行加工：由β-分泌酶和γ-分泌酶介导的淀粉样通道产生Aβ（β-淀粉样蛋白4kDa）肽或由β-淀粉样蛋白区域的α-分泌酶介导产生非淀粉样产物。在31例阿尔茨海默病（AD）患者和10例年龄相匹配的健康对照受试者中，研究22kDa片段的血小板水平，上述片段包括Aβ（β-淀粉状蛋白4kDa）肽、β-分泌酶（BACE1）、α-分泌酶（ADAMl0）和120—130kDa到110kDa肽的APP异构体比。研究发现，与正常对照者相比，AD患者的Aβ4水平升高、BACE1活性增加、ADAM10活性和APP比降低。上述研究结果提示，与脑内APP的加工相同，血小板APP也是通过淀粉样和非淀粉样通道进行加工的，并且AD患者血小板APP的加工过程与对照者相比有所改变，这也许可以作为临床试验中诊断AD、病程和监测药物疗效的生物标记物。     

聪明方对老年痴呆模型大鼠行为学能力及α-β-分泌酶的影响

目的观察聪明方对老年痴呆模型大鼠行为学能力及α-β-分泌酶的影响。方法以腹腔注射D-半乳糖+双侧海马CA1区一次性注射聚集态Aβ1-40复合造模方法制作老年痴呆大鼠模型,通过Morris水迷宫实验系统测试模型动物的行为学能力,提取并测定大鼠海马α-β-分泌酶,采用SPSS13.0软件进行统计学处理。结果聪明方能缩短老年痴呆模型大鼠在Morris水迷宫测试中的逃避潜伏期,延长原平台区停留时间和增加经过平台的次数(P0.05),且聪明方低、中、高剂量组α-分泌酶的MOD均明显升高,β-分泌酶的MOD均明显降低,且与低剂量组比较,中、高剂量组α-分泌酶的MOD明显升高,β-分泌酶的MOD均明显降低(P0.05,或P0.01)。结论聪明方能有效改善老年痴呆模型大鼠行为学能力,并能有效上调α-分泌酶,抑制β-分泌酶。     

脑慢性低灌注老龄大鼠海马α-分泌酶ADAM17 mRNA表达及其酶活性的变化

目的 探讨α-分泌酶在脑缺血后认知障碍发生机制中的作用。方法 将48只老龄Wistar大鼠随机分为低灌注组和假手术组,每组细分为术后1、2、4及16周4个亚组。永久性阻断大鼠双侧颈总动脉构建脑慢性低灌注模型;用Y迷宫测试大鼠学习记忆能力;用荧光定量PCR法检测大鼠海马α-分泌酶ADAM17 mRNA表达;用直接荧光法检测海马α-分泌酶活性。结果 低灌注组术后2、4及16周Y迷宫测试成绩均显著下降。术后2、4和16周低灌注组α-分泌酶ADAM17mRNA表达（与参照物比值分别为0．78±0．03、0．78±0．02和0．54±0．03）显著低于假手术组（分别为1．12±0．05、0．99±0．04和1．01±0．04）,差异有统计学意义（均P〈0．01）;而低灌注组α-分泌酶活性则于术后1、2、4和16周（荧光值分别为33880±1086、37496±817、32295±864和30069±1111）持续性显著降低,与假手术组（分别为39497±838、39802±1052、40137±776和39894±1076）相比,差异有统计学意义（均P〈0．01）。结论脑慢性低灌注下调海马组织d．分泌酶ADAM17mRNA表达并抑制α-分泌酶活性,推测可能因此增加了α-分泌酶作用底物APP的量,间接激活APP代谢的β-分泌酶途径,最终增加脑内Aβ的生成量,进而损害大鼠学习记忆能力。     

解整合素-金属蛋白酶17在肺泡上皮细胞间质转化中的作用研究

目的：探讨解整合素-金属蛋白酶17(a disintegrin and metalloproteinase-17,ADAM 17)过表达和抑制在转化生长因子-β1(transforming growth factor-beta 1,TGF-β1)介导的A549细胞上皮向间质转化(epithelial-to-mesenchymal transition, EMT)过程中的作用,以进一步揭示肺纤维化的机制。方法将A549细胞分为空白对照组、TGF-β1组、PMA(ADAM 17激活剂)组和TNF484(ADAM 17抑制剂)组。各组细胞培养36 h后,应用倒置相差显微镜观察各组细胞形态,Real-time PCR和Western blotting分别检测ADAM 17、上皮及间质细胞标记物在mRNA和蛋白水平上的表达情况。结果镜下观察发现未诱导的A549细胞呈鹅卵石形态,排列比较紧密;经TGF-β1诱导后,细胞形态伸长,出现伪足,排列较松散,细胞与细胞之间的紧密连接消失。Real-time PCR和Western blotting检测结果均显示ADAM 17在PMA组高表达,而在TNF484组低表达,差异有统计学意义;上皮细胞标记物E-cadherin在空白对照组和TNF484组高表达,间质细胞标记物Vimentin在TGF-β1组和PMA组高表达,差异同样有统计学意义。结论 ADAM 17的过表达有助于TGF-β1介导的A549细胞EMT进程,提示ADAM 17可作为肺纤维化的标记物之一。     

八氢贯叶金丝桃素乙酸酯对淀粉样前体蛋白水解途径的影响及机制

目的探讨合成的稳定化合物八氢贯叶金丝桃素乙酸酯[(8H)-Ac-HF]对皮层原代神经元细胞中淀粉样前体蛋白(APP)水解途径的影响及其作用机制。方法建立SD大鼠皮层原代神经元细胞体外培养体系,用MTT法检测(8H)-Ac-HF对原代神经元细胞的生长活力影响;用ELISA方法检测(8H)-Ac-HF对原代神经元细胞培养上清液中可溶性淀粉酶前体蛋白α(sAPPα)分泌及α-分泌酶活性的影响;用Western blot检测(8H)-Ac-HF对解聚金属蛋白酶10(adisintegrin and metalloprotease,ADAM10)蛋白表达的影响;并通过蛋白激酶C(PKC)抑制剂calphostinC(Cal.C)观察其可能作用的信号途径。结果 0～50μmol/L(8H)-Ac-HF处理皮层神经元30 h对细胞生长活性无显著影响;20、50μmol/L(8H)-Ac-HF可增加神经元细胞sAPPα的胞外分泌(P<0.01),增加α-分泌酶活性,上调ADAM10蛋白的表达;其对sAPPα、ADAM10和α-分泌酶的上调作用可受PKC抑制剂Cal.C抑制。结论 (8H)-Ac-HF可通过PKC信号途径,增加ADAM10表达及α-分泌酶活性,促进APP经非淀粉样途径水解。     

大鼠缺血性脑损伤致星形神经胶质细胞内β-淀粉样蛋白聚集与β-分泌酶增加相关

目的研究大鼠缺血损伤后脑内星形胶质细胞中β-淀粉样蛋白（Ala）的形成是否与β-分泌酶的增加相关。方法采用大脑中动脉栓塞30min制备SD大鼠短暂性脑缺血模型。用免疫组化和荧光双标结合共聚焦扫描的方法来检测Aβ和β-分泌酶在脑内的表达及细胞分布。结果大鼠脑缺血损伤后同侧纹状体内Aβ和β-分泌酶免疫阳性细胞较对侧显著增加（P〈0．05）,且Aβ和β-分泌酶主要分布在缺血侧星形胶质细胞中。此外,缺血侧纹状体内存在大量Aβ与β-分泌酶共定位细胞。结论脑缺血诱导星形胶质细胞中Aβ的形成伴随着β-分泌酶的表达增加,提示中风引起星形胶质细胞中Aβ的表达与β-分泌酶的活性增加有关。     

知母皂苷元对HEK293sw细胞APP和BACE1的影响

目的 探讨知母活性成分知母皂苷元(ZMS)对HEK293sw细胞淀粉样前体蛋白(APP)和β-位点APP切割酶1(BACE1)的影响.方法 常规培养HEK293sw细胞,加入不同浓度ZMS预处理24 h后,换为无血清培养,继续处理48 h后观察ZMS的作用.Western blotting和RT-PCR技术测定APP和主要β-分泌酶BACE1的表达;荧光分析法测定BACE1活力.结果有效终浓度1 μmol/L和10 μmol/L的ZMS对BACE1的mRNA和蛋白表达均有显著降低作用,但对APP的mRNA和蛋白表达无明显影响.荧光分析结果显示,10 μmol/L ZMS能显著降低BACE1活力.结论 ZMS显著降低HEK293sw细胞主要β-分泌酶BACE1的表达及活力,而对APP的表达无明显影响.     

静脉和吸入麻醉后认知功能障碍与BACE1基因多态性的关系

目的 比较和分析静脉麻醉和吸入麻醉后出现的认知功能障碍与β分泌酶基因多态性的关系. 方法 1000例受试者被随机分配在静脉麻醉组和吸入麻醉组,分别接受全凭静脉麻醉和吸入麻醉.用简易精神量表分析患者术后认知功能,评分小于25分被诊断为认知功能障碍.从受试者全血中提取DNA,用PCR方法扩增β-分泌酶1、β-分泌酶2（BACE1、BACE2）基因,记录两种基因BACE1和BACE2限制性酶切片段的个数. 结果 在静脉麻醉组中,评分的降低与β分泌酶基因单核苷酸多态性没有相关性,而在吸入麻醉组中评分的降低与β分泌酶基因1单核苷酸多态性的相关性有统计学意义.结论 携带β分泌酶1基因单核苷酸多态性的患者应慎用吸入麻醉.     

知母皂苷元对HEK293sw细胞APP和BACE1的影响

目的 探讨知母活性成分知母皂苷元(ZMS)对HEK293sw细胞淀粉样前体蛋白(APP)和β-位点APP切割酶1(BACE1)的影响.方法 常规培养HEK293sw细胞,加入不同浓度ZMS预处理24 h后,换为无血清培养,继续处理48 h后观察ZMS的作用.Western blotting和RT-PCR技术测定APP和主要β-分泌酶BACE1的表达;荧光分析法测定BACE1活力.结果有效终浓度1 μmol/L和10 μmol/L的ZMS对BACE1的mRNA和蛋白表达均有显著降低作用,但对APP的mRNA和蛋白表达无明显影响.荧光分析结果显示,10 μmol/L ZMS能显著降低BACE1活力.结论 ZMS显著降低HEK293sw细胞主要β-分泌酶BACE1的表达及活力,而对APP的表达无明显影响.     

巨噬细胞极化在幽门螺杆菌感染中的应用

胃黏膜幽门螺杆菌(H.pylori,Hp)感染可引起较强的炎性反应,增加胃酸的分泌,是萎缩性胃炎、胃溃疡以及胃腺癌发病的重要危险因素.Hp通过影响H,K-三磷酸腺苷酶控制胃酸的分泌.其主要的调控机制有:①存在四型分泌系统(T4SS),主要依赖于Hp cag致病性基因进行编码;②Hp表达的T4SS、CagL、CagE、CagM,以及CagA、细菌分解后转糖苷酶Slt诱发炎性反应而激活核因子κB(NF-κB)促进了H,K-ATPase的转录表达;③Hp感染使基质蛋白ADAM 17与整合素α5β1分离,促使肝素结合的上皮生长因子(HB-EGF)分泌增加而激活NF-κB的转录活性,促进炎性反应和导致免疫损伤[1].     

miR-126通过ADAM9调控自发性高血压大鼠的心肌纤维化

目的：探讨微小RNA(miR)-126/整合素和金属蛋白酶9(ADAM9)在自发性高血压大鼠(SHR)心肌纤维化中的作用。方法：实验分为正常组、SHR组、SHR+AAV9组和SHR+miR-126-AAV9组。超声心动图检查心功能，荧光显微镜观察绿色荧光蛋白（GFP）表达情况，Masson和HE染色观察心肌组织形态并统计胶原沉积评分（CVF）,qRT-PCR检测miR-126、ADAM9 mRNA表达，Werstern Blot检测α-平滑肌肌动蛋白（SMA）、ADAM9、转化生长因子（TGF）-β1蛋白表达，双萤光素酶实验验证miR-126与ADAM9的靶向关系。结果：miR-126在SHR组大鼠心肌中低表达，ADAM9高表达。与SHR+AAV9组比较，SHR+miR-126-AAV9组心肌炎症和纤维化损伤减轻，左心室缩短分数（LVFS）、左心室射血分数（LVEF）显著增高，左心室收缩末期内径（LVESD）、左心室舒张末期内径（LVEDD）、CVF、ADAM9、TGF-β、α-SAM蛋白水平显著降低。miR-126可靶向调节ADAM9表达。结论：miR-126可能通过调节成纤维细胞活...     

非融合表达β-半乳糖苷酶的重组乳酸乳球菌的构建和性能研究

目的 构建能非融合表达高活性β-半乳糖苷酶的重组乳酸乳球菌,并对其酶活性和分泌性能进行研究.方法 提取能在大肠杆菌中非融合表达德氏乳杆菌保加利亚亚种β-半乳糖苷酶的重组质粒pMG36e-lacZ 1.1480和pMG36e-lacZ wch9901,电转化乳酸乳球菌乳酸亚种MGl363.测定重组菌在不同培养时间和乳糖浓度下的β-半乳糖苷酶活性,及在不同培养条件下的酶分泌率.结果 携带pMG36e-lacZ wch9901的重组乳酸乳球菌(MG1363/pMG36e-lacZ wch9901)具最高酶活性,其β-半乳糖苷酶活性达(16.95±0.09)U/mg pro,为基因初始菌的2.75倍;重组乳酸乳球菌培养24 h产酶达高峰;培养基含乳糖时,重组菌酶活测定结果表现为降低;重组乳酸乳球菌表达的β-半乳糖苷酶可分泌到培养基中,当培养基不含红霉素,而含20 g/L乳糖时,分泌率最高,达(27.09±0.05)%.结论 获得了能非融合表达和分泌高活性β-半乳糖苷酶的重组乳酸乳球菌,可在此基础上进一步研制β-半乳糖苷酶活菌释放体.     

疼痛对垂体前叶超微结构的影响

应用免疫荧光抗体法或免疫酶组化法(酶一抗酶复合体,简称PAP法)发现某些哺乳类动物(牛、羊、猪和鼠)及人垂体前叶的促肾上腺皮质激素(ACTH)细胞,可分泌ACTH、β-内啡肽、β-MSH(β-促黑色素激素)及β-LPH(β-向脂素等激素);并且证明这些激素定位在该细胞的同一分泌颗粒内(Moon-1973,Pellefier 1977)。在应激状态下,这些激素同时被泌出,并排出量增多(Guillemn 1977)。在暴冷或手术时,血清中的皮质酮、生长激素(GH)及催乳素(PRL)的浓度的增高。现认为这是由于强烈刺激引起机体的急性应激反应,促使垂体同时分泌ACTH、β-内啡肽、β-LPH、β-MSH、GH及PRL等激素     

家族性阿尔茨海默病患者的PEN-2基因突变

遗传学证据显示,脑内β淀粉样物质(Aβ)积聚在阿尔茨海默病(AD)的发病机制中起重要作用。除早老素1和早老素2外,另外3个新发现的蛋白(A ph1、PEN-2和nicastrin)也与γ-分泌酶的活性有关,后者为产生Aβ的酶复合体。编码以上蛋白基因的改变可能导致A D的发生。检测散发和家族性A     

钙调神经磷酸酶在阿尔茨海默病中作用机制的研究进展

阿尔茨海默病(Alzheimer's diease,AD)是以进行性认知功能下降和记忆力减退为主要特征的神经系统退行性疾病.AD的主要病理特征是神经原纤维缠结(neuro-fibrillary tangles,NFTs)和细胞外淀粉样老年斑(senile plaques,SP)的形成.NFTs是由于过度磷酸化的微管相关蛋白Tau于神经元内高度螺旋化而成.SP是由淀粉样前蛋白(amyloid precursor protein,APP)在β-分泌酶(β-secretase)和γ-分泌酶(γ-secretase)水解作用下形成β-淀粉样肽(β-amyloid peptid,Aβ)在细胞外沉积而成.除少数家族性AD外,大部分散发性AD的发病机制尚未明确.近年来关于AD发病机制研究很多,有β-淀粉样蛋白瀑布假说、tau蛋白假说、钙离子失衡假说等.已经有研究证实钙调神经磷酸酶(calcineurin,CaN)与Tau蛋白的磷酸化[1]、突触的可塑性[2]及神经元细胞的凋亡[3]等有关,但CaN在AD中的具体机制还不甚明了.本文就CaN在AD中的作用机制进行综述.     

胞二磷胆碱对阿尔茨海默病大鼠顶叶皮质Aβ及其相关蛋白表达的影响

目的:研究胞二磷胆碱对AD大鼠大脑皮质Aβ及其相关蛋白表达的影响.方法:选用30只SD雄性大鼠随机分成对照组、模型组、治疗组3组;模型组及治疗组腹腔注射D-半乳糖,同时喂饲AlCl3水溶液;对照组每日腹腔注射生理盐水40mL/kg;治疗组于造模结束后1 d开始腹腔注射胞二磷胆碱,连续给药4周;刚果红染色,铃木镀银染色判定神经元变性;用免疫组织化学方法、Western Blot结合图像分析对比观察胞二磷胆碱对Aβ、β-分泌酶及γ-分泌酶表达的影响.结果:与对照组比较模型组大鼠顶叶皮质Aβ、β-分泌酶及γ-分泌酶表达均明显增加,治疗组大鼠与模型组相比顶叶皮质内Aβ、β-分泌酶及γ-分泌酶表达无减少.结论:胞二磷胆碱不能通过作用于β-分泌酶及γ-分泌酶抑制Aβ的表达.     

糖基化终末产物促SH-SY5Y细胞β-淀粉样蛋白生成及相关机制

目的通过研究糖基化终末产物(AGEs-BSA)对培养的人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y细胞)β-淀粉样蛋白(Aβ)的生成,以及淀粉样前体蛋白(APP)及相关酶—β-分泌酶(BACE1)、γ-分泌酶(PS1)的表达的影响,在体外水平探讨AGEs-BSA在阿尔茨海默病(AD)发病中的作用及其可能的机制。方法以培养的SH-SY5Y细胞为模型,将细胞随机分为4组。用MTT实验得到的AGEs-BSA最佳干预时间及浓度干预细胞,用免疫细胞化学方法及ELISA方法观察及检测各组细胞内Aβ1-40、Aβ1-42表达,用免疫印迹法检测各组细胞内APP、BACE1、PS1变化。结果 BSA组与空白对照组相比APP、BACE1、PS1、Aβ的表达无明显差异(P>0.05);AGEs-BSA组与BSA组相比APP、BACE1、PS1、Aβ的表达明显增加(P<0.05);AGEs-BSA+抗RAGE中和抗体组APP、BACE1、PS1、Aβ的表达较单纯AGEs-BSA组明显减少(P<0.05),但仍高于BSA组(P<0.05)。结论 糖基化终末产物能够促使SH-SY5Y细胞中APP的表达增加,并通过上调BACE1、PS1的活性使Aβ生成增加。通过阻断其与特异性受体RAGE的结合可以部分减少APP、BACE1、PS1及Aβ的表达和生成。