白花蛇舌草诱导人胶质瘤细胞凋亡的作用及机制

目的 探讨白花蛇舌草诱导胶质瘤U87细胞株凋亡的作用及机制.方法 采用不同浓度的白花蛇舌草含药培养基(0、100、200 ml/L)处理U87细胞48 h,流式细胞仪检测对照组与实验组细胞的凋亡率及线粒体膜电位差异,Western blot法检测两组细胞中抗凋亡基因[B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)]和促凋亡基因(bax)的表达水平改变.结果 经100、200 ml/L白花蛇舌草处理的U87细胞凋亡率明显增加,分别为(17.31±1.36)％、(41.23±0.72)％,明显高于对照组的(8.11±1.71)％(P＜0.01),呈显著的剂量依赖性;经JC-1染色法处理后,呈绿色荧光的U87细胞比率随含药培养基浓度升高而增多,分别为(11.90±0.20)％、(34.17±2.79)％,明显高于对照组的(5.53±1.20)％(P＜0.05),提示其线粒体膜电位受药物影响而逐步递减;白花蛇舌草能显著上调促凋亡蛋白bax基因的表达并降低bcl-2/bax比率.结论 白花蛇舌草通过线粒体依赖性途径诱导人胶质瘤U87细胞的凋亡.     

BMS-345541通过抑制IκB激酶/核因子-κB信号通路诱导人脑胶质瘤细胞凋亡

目的 观察IκB激酶(IKK)高度选择性抑制剂BMS-345541对胶质瘤细胞凋亡的影响及其机制.方法 不同浓度BMS-345541作用于人脑胶质瘤细胞株U87MG后,采用Annexin V-FITC/PI双标记法检测细胞凋亡,荧光素酶核因子-κB(NF-κB)报告基因法检测NF-κB活性,免疫印迹法检测bcl-2、Caspase-3和NF-κB胞核定位.结果 终质量浓度1、10、20 μmol/L BMS-345541作用U87MG细胞24 h后,细胞凋亡率分别为(18.2±2.2)%、(49.3±3.6)%、(73.3±8.9)%,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01).BMS-345541处理U87MG细胞后,bcl-2蛋白表达减少、Caspase-3被激活;NF-κB转录启动子的活性下降(66.2±5.1)%(P＜0.01),NF-κB p65亚单位核移位被抑制.结论 BMS-345541可通过抑制IKK/NF-κB信号通路诱导人胶质瘤细胞凋亡.     

3-甲基腺嘌呤促进吡柔比星诱导膀胱癌BIU-87细胞凋亡及机制

目的 探讨3-甲基腺嘌呤(3-MA)自噬抑制剂联合吡柔比星(THP)对膀胱癌BIU-87细胞杀伤作用及机制.方法 膀胱癌BIU-87细胞分为对照组、3-MA(10 mmol/L)组、THP(5 mg/L)组、3-MA(10 mmol/L)+ THP(5 mg/L)组.噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测各组细胞中自噬蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3)-Ⅱ、Beclin-1以及凋亡蛋白半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3和Caspase-9的表达.结果 药物作用24h后,各组细胞增殖率分别为(86.64±3.09)％、(63.70±5.62)％、(58.43±3.89)％、(37.55±4.17)％,其中3-MA+THP组细胞增殖下降最明显(P ＜0.05);3-MA与THP联合应用后,自噬蛋白LC3-Ⅱ、Beclin-1的表达明显减弱,而凋亡蛋白Caspase-3和Caspase-9的表达在各组中最强(P＜0.05).结论 3-MA抑制膀胱癌BIU-87细胞对化疗药物保护性自噬反应,增加膀胱癌细胞对THP细胞毒杀伤作用的敏感性.     

柠檬酸钠对胃癌细胞增殖和凋亡的影响及其机制

目的 探讨柠檬酸盐对胃癌细胞的影响及其机制.方法 将胃癌细胞株BGC-823和SGC-7901各分成对照组、5mmol/L组、10 mmol/L组,分别用0、5、10 mmol/L柠檬酸钠处理.24、48h后,荧光显微镜下观察细胞增殖变化、进行活细胞计数、计算细胞增殖抑制率；应用4’,6-二.脒基-2-苯基吲哚(DAPI)细胞核染色和流式细胞仪检测细胞凋亡；24h后蛋白免疫印迹法(Western blot)检测凋亡相关蛋白表达.结果 5、10 mmol/L组活细胞计数均低于对照组,细胞增殖抑制率均高于对照组(P＜0.05)；DAPI染色显示凋亡细胞核变化特点.流式细胞仪凋亡检测显示,BGC-823/SGC-7901对照组、5、10 mmol/L组,24h后凋亡率分别为(10.68±1.20)％/(11.86±0.20)％,(46.36±0.60)％/(50.72±1.90)％,(58.41±3.50)％/(59.92±2.60)％；48 h后分别为(8.20±1.60)％/(4.99±0.90)％,(76.34±2.70)％/(82.92±2.80)％,(87.18±3.10)％/(95.65±1.30)％.5、10 mmol/L组与对照组比较细胞凋亡率增高(P＜0.05),并有浓度和时间依赖性.Western blot法显示两株细胞中多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)、活化Caspase-9(cleaved Caspase-9)、活化Caspase-3(cleaved Caspase-3)表达增高,髓细胞白血病基因-1(Mcl-1)表达降低,在SGC-7901中突变型p53( Mtp53)表达降低.结论 柠檬酸钠能有效抑制胃癌细胞增殖,并经线粒体通路诱导凋亡,其作用随浓度和作用时间增加而增强.其机制可能与Mcl-1表达降低有关.     

胶质瘤中Hedgehog/Gli1信号通路活性变化与血管内皮生长因子表达的关系

目的 探讨胶质瘤中Hedgehog/Gli1信号通路的活化与肿瘤微血管新生之间的关系.方法 54例手术切除的胶质瘤肿瘤标本,免疫组织化学检测胶质瘤组织中Gli与肿瘤微血管密度(MVD)表达的关系;运用Western blot法及定量聚合酶链反应(PCR)检测U87、SHG44、U251及A172胶质瘤细胞中Gli1与血管内皮生长因子(VEGF)在蛋白及mRNA水平的表达;U87、SHG44中通过环巴胺(Cyclopamine)处理胶质瘤细胞束抑制Hedgehog/Gli1信号通路,观察这一信号通路活性下降后对胶质瘤中VEGF表达的影响.结果 随着Hedgehog/Gli1信号通路中Gli1表达数量的增加,MVD也相应地升高;在胶质瘤细胞株U87、SHG44、U251及A172中,U87及SHG44中Hedgehog/Gli1信号通路的活化程度较高,同时VEGF基因及蛋白的表达水平较高;通过Cyclopamine抑制这一信号通路可明显下调胶质瘤细胞中VEGF的表达,其中5μmol/L Cyclopamine组VEGF的表达分别下降至(33.3±3.3)％(U87细胞),(27.1±3.0)％(SHG44细胞);10 μmol/L组VEGF的表达分别下降至(14.7±29)％( U87),(16.3±2.4)％(SHG44).结论 部分胶质瘤中存在Hedgehog/Gli1信号通路活化,而且这一信号通路活化程度与胶质瘤的血管新生密切相关.     

AG1478对U87细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响

目的 观察表皮生长因子受体抑制剂Tyrphostin AG1478对人脑胶质瘤U87细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡的影响.方法 噻唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度Tyrphostin AG1478作用于体外培养的人脑胶质瘤U87细胞24 h后的细胞生存率,流式细胞仪检测不同浓度Tyrphostin AG1478作用于体外培养的人脑胶质瘤U87细胞24 h后细胞周期分布和细胞凋亡.结果 5、10、15、20 μmol/L的Tyrphostin AG1478作用人脑胶质瘤U87细胞24 h后细胞生存率分别为(7 8.93±11.95)%、(46.42±4.12)%、(42.13±7.54)%和(37.48±4.69)%;0、10、20 μmol/L的Tyrphostin AG1478作用人脑胶质瘤U87细胞24 h后细胞凋亡率分别为(10.19±3.15)%、(32.02±1.60)%和(54.35±2.80)%;0、10、20 μmol/L的Tyrphostin AG1478作用人脑胶质瘤U87细胞24 h后细胞主要分布在G0～G1期,分别为(51.20±1.21)%、(78.61±1.57)%和(82.73±0.77)%,实验组与对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 Tyrphostin AG1478抑制体外人脑胶质瘤细胞增殖,阻滞细胞周期在G0～G1期,诱导细胞凋亡,均呈浓度依赖性.

Abstract：

Objective To investigate the effects of Tyrphostin AG1478 on glioma U87 cells proliferation, cells cycle and apoptosis. Methods U87 cells were cultured for 24 h in the medium which contained AG1478 with different concentrations (0, 5, 10, 15, 20 μmol/L). The methyl thiazolyl tetrazolium(MTT) assay was used to detect the survival rate, and the cells cycle and apoptosis of the cells were examined by using flow cytometry. Results The cells proliferation was obviously inhibited by AG1478 in a dose-dependent manner. The survival rate of the cells in 5, 10, 15, 20 μmol/L AG1478 groups was (78.93 ±11.95)%, (46.42 ±4. 12)%, (42. 13 ±7.54)% and (37.48 ±4.69)% respectively, which was all significantly higher than that in 0 μ mol/L AG1478 group (P ＜0. 05 ). The apoptotic rate in 10, 25μmol/L AG1478 groups was (32.02 ± 1.60)% and (54. 35 ± 2. 80)% respectively, significantly higher than that in 0 μmol/L AG1478 group ( P ＜ 0. 05 ). The cells cycle was obviously inhibited by AG1478 in a dose-dependent manner. The percentage of cells treated with 10 and 20 μmol/L AG1478 in Go-G1 phase was ( 78. 61 ± 1.57 ) % and ( 82. 73 ± 0. 77 ) % respectively, significantly higher than that in 0 μmol/L AG1478 group (P ＜ 0. 05 ). Conclusion The growth inhibition of glioma U87 cells caused by AG1478 may be associated with apoptotsis induction and the G0-G1 arrest. AG1478 was expected to become a new anti-tumor drug in human glioma.     

藤梨根对人脑胶质瘤U251细胞的影响及其机制

目的 探讨藤梨根对人脑胶质瘤U251细胞的作用及其机制.方法 常规培养人脑胶质瘤细胞株U251,分别加入不同浓度(50、100、200 mg/L)藤梨根作用48 h后细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测U251的细胞活性;取50 mg/L藤梨根作用48 h后的细胞,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测信号转导和转录活化因子3(STAT3) mRNA的表达,Western blot检测STAT3蛋白的表达.结果 藤梨根作用48 h后U251细胞凋亡率明显增加,不同浓度的凋亡率分别为50 mg/L:(26.51士1.30)％、100 mg/L:(55.92 ±2.40)％、200mg/L:(63.69±2.70)％;50 mg/L藤梨根处理后的U251细胞中STAT3 mRNA和蛋白表达水平均下调,检测其中相关蛋白表达结果显示,藤梨根处理组中磷酸化STAT3(p-STAT3)和B淋巴细胞瘤/白血病-2(bcl-2)的表达下调,而bcl-2相关X蛋白(bax)的表达上调.结论 藤梨根可以抑制脑胶质瘤细胞的增殖,其机制可能与藤梨根调控STAT3信号通路有关.     

扭曲肉芝甲酯对人结肠癌LoVo细胞生长的抑制作用及其机制

目的 探讨扭曲肉芝甲酷抗结肠癌LoVo细胞增殖活性及其机制.方法 将LoVo细胞随机分为对照组和处理组(10、30、50μmol/L 3个亚组).对扭曲肉芝甲酯处理后LoVo细胞凋亡率、细胞周期、凋亡蛋白表达的改变进行定量分析.结果 经10、30、50 μmol/L扭曲肉芝甲酯处理24h后,LoVo细胞凋亡率分别为(2.32±0.93)％、(11.03±0.14)％和(16.29±1.98)％,对照组凋亡率为(2.09±0.97)％,而50 μmol/L扭曲肉芝甲酯处理0、6、12、24h后凋亡率分别为(2.67±0.97)％、(5.08±1.03)％、(5.04±0.83)％和(13.50±1.16)％(P＜0.05).荧光显微镜下细胞呈现典型的凋亡性改变;扭曲肉芝甲酯在0、10、50及100 μmol/L时将LoVo细胞抑制在G2/M期(9.53±3.97)％、(10.26±1.89)％、(11.36±2.56)％、(15.39±1.56)％ (P ＜0.05),该期的比例逐渐增高;Western blot法结果显示扭曲肉芝甲酯处理后结肠癌LoVo细胞的半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶( Caspase)-8、Caspase-3表达升高.结论 扭曲肉芝甲酯以浓度依赖性和时间依赖性的方式抑制结肠癌LoVo细胞增殖,抑制细胞周期G2/M期,通过Caspase-8/Caspase-3来诱导细胞凋亡.     

选择性环氧合酶-2抑制剂对胶质瘤生长的影响

目的　观察选择性环氧合酶 (COX) -2抑制剂塞来昔布对人脑胶质瘤细胞株U2 5 1生长、细胞周期的影响以及对其凋亡的诱导。方法　采用四甲基偶氮唑蓝 (MTT )比色法检测塞来昔布对细胞生长的抑制 ;用免疫组织化学检测细胞增殖核抗原 (PCNA)的表达 ;用流式细胞仪检测塞来昔布对其凋亡的诱导。结果　MTT检测表明细胞生长抑制率呈现一定的时间、剂量依赖性。PCNA检测发现经塞来昔布处理后PCNA指数明显下降 (P <0 .0 5 )。2 0 0 μmol/L塞来昔布处理胶质瘤细胞 8h后 ,流式细胞仪检测出现典型的凋亡亚二倍体峰 ,且峰值随处理时间的延长而增加 ,细胞凋亡率随处理时间的延长而呈现增加趋势 ,方差分析各组间差异具有统计学意义。结论　塞来昔布能有效抑制体外培养的人脑胶质瘤细胞生长 ,并呈时间浓度梯度 ;塞来昔布能诱导其发生凋亡。     

山药多糖通过miR-98-5p/TGFβR1分子轴调控肝癌细胞凋亡的机制研究

目的探究山药多糖(CYPS)通过miR-98-5p/TGFβR1分子轴调控肝癌(HCC)细胞凋亡的分子机制。方法qPCR检测miR-98-5p在不同HCC细胞系中的表达情况,使用不同浓度的CYPS处理Huh-7细胞,CCK-8检测细胞增殖活力,Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测细胞凋亡,Western blotting检测TGFβR1和细胞凋亡相关蛋白Caspase-3、Caspase-8、Bcl-2、Bax的表达,双荧光素酶报告基因系统验证miR-98-5p与TGFβR1的靶向关系。结果与人正常肝细胞HL-7702相比,miR-98-5p在HCC细胞系中表达升高(均P<0.05),且在Huh-7细胞中的表达高于其他HCC细胞(P<0.05);CYPS处理可明显抑制Huh-7细胞的增殖活力并诱导细胞凋亡(均P<0.05),且10-3 kg/L CYPS对细胞增殖活力的抑制作用比其他浓度明显。双荧光素酶报告基因实验证实,miR-98-5p靶向调控TGFβ1。与10-3 kg/L CYPS组相比,miR-98-5p mimics可下调10-3 kg/L CYPS对细胞增殖活力(P<0.05)的抑制作用和对细胞凋亡(P<0.01)的促进作用,CYPS+miR-98-5p mimics+pcDNA-TGFβR1组中细胞增殖活力与CYPS+miR-98-5p mimics组相比明显降低(P<0.05),细胞凋亡水平明显升高(P<0.01)。结论CYPS可下调miR-98-5p,促进TGFβR1的表达,抑制Huh-7细胞增殖并诱导细胞凋亡。     

LRIG3基因过表达对神经胶质瘤细胞株U251与U87增殖及增殖细胞核抗原和Ki-67表达的影响

目的 探讨过表达LRIG3基因对神经胶质瘤细胞株U251与U87增殖及增殖细胞核抗原(PCNA)和Ki-67表达的影响及其机制。方法 用携带LRIG3过表达特异性序列和只含空白载体的质粒用慢病毒法感染胶质瘤细胞株U251与U87,筛选稳定株,分别分成实验组和对照组,通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot法检测各组细胞LRIG3表达的变化,应用噻唑蓝(MTT)比色法检测病毒感染后对胶质瘤细胞株U251与U87增殖的影响,用免疫组织化学链霉亲和素生物素复合物(SABC)法分别检测各组细胞中PCNA和Ki-67的表达差异。结果 LRIG3过表达组细胞中LRIG3 mRNA水平与对照组比较分别升高67.6％( U251)和79.9％ (U87),LRIG3蛋白表达水平分别升高62.3％(U87)和91.0％( U251)。MTT法结果显示两实验组细胞增殖率均低于相应对照组。U251细胞对照组PCNA阳性率为(47.81 ±4.67)％,实验组为(27.49±3.17)％,U87细胞对照组PCNA阳性率为(55.50±4.01)％,实验组为(33.60±4.82)％,差异均有统计学意义(P＜0.05)。U251细胞对照组中Ki-67的阳性率为(48.50±6.11)％,实验组为(24.30±3.76)％,U87细胞对照组Ki-67阳性率为(55.20±4.19)％,实验组为(23.50±4.60)％,差异均有统计学意义(P＜0.0l)。结论 LRIG3基因过表达可减少胶质瘤细胞的增殖。     

缺氧诱导因子-1α反义寡核苷酸体外对胶质瘤U87细胞增殖和侵袭的影响

目的 观察缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)反义寡核苷酸体外对人胶质瘤U87细胞增殖、凋亡和侵袭的影响.方法 人工合成的HIF-1α反义短发夹经阳离子脂质体包裹后瞬时转染人胶质瘤细胞株U87,采用Western blot法检测转染后胶质瘤细胞HIF-1α蛋白表达,证实转染成功,再采用噻唑蓝(MTT)比色法和Transwell小室体外侵袭实验检测转染后对U87细胞增殖体外侵袭能力的影响,流式细胞仪检测细胞凋亡.结果 转染靶向HIF-1α的短链发夹RNA的胶质瘤细胞,HIF-1α蛋白表达较空白细胞组明显降低,MTT法检测转染组、空载体组和空细胞组24 h细胞的增殖率分别为5.46%、21.25%、22.32%,体外侵袭性实验表明转染组、空载体组和空细胞组细胞12 h侵袭ECM的细胞数分别为(22±4)、(124±3)、(122±6);流式细胞仪检测表明转染组、空载体组和空细胞组细胞凋亡率分别为(53.35±2.80)%、(12.02±1.60)%、(10.19±3.15)%,转染组与空白细胞组及空载体组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 封闭HIF-1α蛋白的表达,可以抑制人胶质瘤U87细胞增殖和侵袭能力,促进细胞凋亡.

Abstract：

Objective To investigate the effects of antisense oligodeoxynucleotides (ODNs) targeting hypoxia inducible factor-1α (HIF-1α) on the apeptosis, proliferation and invasion of U87 glioma cell line. Methods Antisense ODNs were constructed and transfected into U87 cells by Dosper liposomal reagent. The HIF-1α gene expression was detected by Western blotting, the cell proliferative index was determined by methyl thiazol tetrazolium (MTT) assay, the cells cycle and apoptosis of the cells were examined by flow cytometry and the changes of the U87 cells invasive ability were measured by Transwell chamber.Results The protein expression of HIF-1α in U87 cells was down-regulated by HIF-1α ASONDN. The cell proliferative index in transfected group, empty vector group and control group was 5.46％, 21.25％and 22. 32％ respectively. Transwell chamber assay showed that the cell number in transfected group,empty vector group and control group was (22 ±4), ( 124 ±3) and ( 122 ±6) respectively; and the apoptosis rate was (53. 35 ± 2. 80) ％, ( 12.02 ± 1.60 )％, ( 10. 19 ± 3. 15 )％ respectively, and there was significant difference between transfected group and other groups ( P ＜ 0. 05 ). Conclusion Silencing the expression of HIF-1α protein can inhibit proliferation and invasion, and promote apoptosis of human glioma U87 cells. HIF-1α is expected to become a target for cancer therapy.     

MS-275阻断STAT3信号通路诱导U251细胞凋亡

目的 探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂MS-275对脑胶质瘤细胞株U251细胞增殖的影响及促凋亡机制.方法 以不同药物浓度梯度和U251细胞分别共培养24、48、72 h后,应用CCK-8法检测肿瘤细胞增殖,瑞氏-姬姆萨染色法观察细胞形态变化,PI单染法检测细胞周期,Annexin V-FITC/PI法经流式检测细胞凋亡率,免疫印迹检测STAT3蛋白和PARP蛋白表达.结果 MS-275能显著抑制U251细胞的增殖,药物浓度40 nmol/ml,培养72 h,抑制率为(79.0±1.7)%;经药物作用后,细胞呈现凋亡形态,胞质和胞核浓缩或碎裂;G0/G1期细胞由(66.320±0.456)%降至(38.288±1.242)%(P＜0.01),G2/M期细胞由(19.940±0.580)%升高至(35.650±0.507)%,而后降至(22.343±1.224)%(P＜0.01),亚G0凋亡峰由(0.230±0.035)%增高至(18.393±1.449)%(P＜0.01);总凋亡率由(2.133±0.416)%增高至(29.000±2.307)%(P＜0.01);免疫印迹检测提示磷酸化STAT3表达水平降低,PARP被剪切.结论 MS-275对胶质瘤细胞的增殖抑制作用具有浓度和时间依赖性,它通过阻断STAT3磷酸化,诱导激活Caspase-3凋亡途径.

Abstract：

Objective To investigate the effect of MS-275 on the proliferation of brain glioma cells. Methods U251 cells were respectively cultured for 24, 48, 72 h, with different concentrations of MS-275. CCK-8 assay was used to assess the proliferation of U251 cells. The morphological changes of U251 cells were observed by Wright-Giemsa staining. The cell cycle was analyzed by PI dyeing. The apoptosis rate was assayed by flow cytometry using annexin V-FITC/PI. The protein expression of STAT3 and PARP was detected by Western blotting. Results MS-275 could significantly inhibited proliferation of U251 cells. After treatment with MS-275, apoptosis of U251 cells was seen; The ratio of G0/G1 was decreased from ( 66.320 ± 0.456 ) % to ( 38. 288 ± 1. 242 ) % ( P ＜ 0. 01 ), the percentage of G2/M cells was increased from ( 19. 940 ± 0. 580 ) % to ( 35.650 ± 0. 507 ) %, then decreased to ( 22. 343 ± 1. 224 ) %(P＜0.01), and ratio of sub-G0 was increased from (0.230 ±0.035)% to (18.393 ±1.449)% (P＜0. 01 ); Total apoptosis rate was increased from ( 2. 133 ± 0.416 ) % to ( 29. 000 ± 2. 307 ) % ( P ＜ 0. 01 );The expression level of phosphorylated STAT3 was significantly downregulated, and the cleavage of PARP was detected by Western blotting. Conclusion MS-275 inhibites proliferation of brain glioma cells in a time- and dose-dependent manner, which is achieved by inducing apoptosis.     

陷阱受体3反义寡核苷酸对胶质瘤U251细胞凋亡的影响

目的 观察陷阱受体3(DcR3)反义核苷酸(ASODN)在胶质瘤细胞凋亡中的作用.方法 构建并挑选DcR3反义核苷酸,转染U251细胞,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot方法 观察DcR3 mRNA和蛋白有无降低,流式细胞仪观察细胞凋亡的变化.结果 经1.2 μmol/L AS20DN处理的U251细胞可有效地降低DcR3 mRNA和蛋白表达,DcR3/β-actin比值分别为(12.4±3.1)%和(13.5±4.2)%,错义链组、脂质体组、对照组mRNA和蛋白分别为(68.8±4.5)%、(74.5±5.0)%、(71.3±6.4)%和(78.2±6.8)%、(79.8±4.5)%、(76.4±5.6)%,差异有统计学意义(P＜0.05),同时,传染DcR3反义核苷酸的U251细胞凋亡率为(42.9±13.1)%,明显高于错义链组(15.8±4.8)%、脂质体组(15.7±3.7)%和对照组(14.6±4.0)%,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 DcR3反义核苷酸可使U251细胞凋亡增多.     

Smac蛋白对C6胶质瘤细胞的影响

目的 观察Smac蛋白对c6胶质瘤细胞的影响.方法 以不同浓度(1.5×10-6～1.5×10-2)g/L作用于C6胶质瘤细胞24～72 h,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率和细胞周期的影响.结果 (1)Smac能以剂量和时间依赖方式抑制C6胶质瘤细胞的增殖,在终质量浓度为1.5×10-2g/L,72 h时抑制率达(57.13±1.41)%,24 h半数抑制浓度(IC50)为:1.34×10-2g/L,其差异具有统计学意义(P<0.01);(2)经流式细胞仪分析,Same蛋白能诱导C6胶质瘤细胞发生凋亡,此作用呈剂量和时间依赖性;(3)Smac蛋白可将c6胶质瘤细胞阻滞在G0/G1期.结论 Smac蛋白能够显著抑制C6胶质瘤细胞生长,诱导其凋亡,其机制可能与C6胶质瘤细胞周期阻滞在G0/G1期有关.     

Caspase-9 transduction overrides the resistance mechanism against p53-mediated apoptosis in U-87MG glioma cells.

OBJECTIVE: Conflicting reports have been published with regard to the relationship between the efficacy of p53 gene therapy and the p53 status of gliomas. In this study, we evaluated whether U-87MG glioma cells harboring wild-type p53 and U251 and U-373MG glioma cells harboring mutated p53 demonstrate different sensitivities to p53-induced apoptosis. In addition, we tested whether transduction of Bax or caspase-9, which are downstream components of p53-induced apoptosis, can override the resistance mechanism of U-87MG cells to apoptosis. METHODS: We transduced U-87MG, U251, and U-373MG glioma cells with p53, Bax, or caspase-9 genes via adenovirus (Adv) vectors, to induce the same level of respective proteins, and evaluated the degree of apoptosis. RESULTS: U-87MG cells were highly resistant to Adv for p53 (Adv-p53)-mediated apoptosis, whereas U251 and U-373 cells underwent extensive apoptosis after Adv-p53 infection. In U-87MG cells, the elevation of Bax and Fas was not as marked as that observed in U251 and U-373MG cells after Adv-p53 infection. Endogenous expression of Bcl-XL and Bcl-2 in U-87MG cells was greater than that in U251 and U-373MG cells. U-87MG cells were more resistant to Bax-mediated apoptosis than were U251 or U-373MG cells. In contrast, U-87MG cells were more sensitive to caspase-9-mediated apoptosis than were U251 or U-373MG cells, suggesting that transduction of caspase-9 may override the resistance mechanism of U-87MG to p53-mediated apoptosis. CONCLUSION: These results demonstrate that proapoptotic function induced by p53 transduction in U-87MG cells was repressed at several steps and that induction of caspase-9 may circumvent this resistance mechanism.     

红细胞生成素对马兜铃酸诱导肾小管上皮细胞凋亡的保护机制研究

目的探讨红细胞生成素（EPO）抑制马兜铃酸（AA）所诱导的肾小管上皮细胞（LLC—PK1）凋亡的作用机制。方法以不同浓度AA（5、10、20mg／L）刺激LLC—PK1细胞株，同时培养体系中加入不同浓度的EPO（5、10、20U／m1），另设对照组。各组细胞培养24h后，TUNEL法原位检测细胞凋亡情况；流式细胞仪检测凋亡细胞的比例；Western印迹检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白激酶（caspase）3、bcl—xL的蛋白表达。结果（1）与对照组（6．09±1．84）％相比，AA5mg／L组TUNEL阳性细胞比例增加【（9．79±2．58）％】；AA10、20mg／L阳性细胞比例显著增加[（37．67±8．23）％、（62．95±8．29）％】，与对照组差异有统计学意义（P〈0．05）。AA10mg／L组细胞经EPO10、20U／ml干预后，阳性细胞比例显著下降f（22．41±3．47）％、（14．63±2．66）％，P〈0．051；AA20mg／L组细胞经不同浓度EPO干预后，阳性细胞比例无显著变化。（2）与对照组相比，AA5mg／L组细胞caspase-3的活性表达有少量增加；AA10mg／L组细胞caspase-3显著增加；而AA20mg／L组caspase-3表达降低。与AA10mg／L组相比，EPO10U／ml和EPO20U/ml干预后，细胞caspase-3的表达显著降低。（3）与对照组相比，AA5mg／L组细胞bcl—xL的表达明显增加；AA10mg／L组细胞bcl-xL表达减少；AA20mg／L组细胞bcl—xL表达显著减少。与AA10mg／L组相比，EPO5U/ml干预后，细胞bcl-xL有所增加；EPO10U／ml和EPO20U／ml干预后，细胞bcl—xL的表达显著增加。结论EPO可能通过促进抗凋亡蛋白bcl-xL的表达、抑制凋亡蛋白酶caspase-3的过高表达，从而抑制了AA诱导的肾小管上皮细胞的凋亡。