肝癌组织中EGFL9基因的表达及其对Huh-7肝癌细胞系增殖、侵袭和迁移的影响

目的:研究表皮生长因子样结构域9（epiderma growth factor-like domain 9,EGFL9）基因在肝癌组织及细胞系中的表达水平及其对Huh-7肝癌细胞系增殖、侵袭和迁移的影响。方法:采用实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR,RT-qPCR）方法检测EGFL9基因在20例肝癌及对应的癌旁肝组织标本中的表达水平。下载癌症基因组图谱（The Cancer Genome Atlas,TCGA）数据库内肝癌基因表达数据,对EGFL9在肝癌中的表达进行分析。RT-qPCR检测EGFL9基因在Huh-7、SMMC-7721及HepG2三种常见的肝癌细胞系和HL-7702正常肝脏细胞系中的表达水平。采用慢病毒介导的siRNA及基因转导技术分别构建EGFL9基因敲减及过表达的Huh-7肝癌细胞,以噻唑蓝（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）法、Transwell侵袭实验和迁移实验观察EGFL9基因敲减及过表达对Huh-7肝癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响。结果:RT-qPCR结果显示,EGFL9基因在20例肝癌组织中的表达量高于对应的癌旁组织。TCGA数据库分析结果也显示,EGFL9在肝癌组织中的平均表达量明显高于癌旁组织。EGFL9在3株肝癌细胞系中的表达水平均高于正常肝脏细胞系。EGFL9基因敲减的Huh-7肝癌细胞的增殖速度明显慢于对照Huh-7肝癌细胞,其侵袭、迁移能力也明显被抑制;EGFL9基因过表达的Huh-7肝癌细胞实验结果则与之相反。结论:EGFL9在肝癌组织和细胞中的表达水平明显上调,且可促进肝癌细胞的增殖、侵袭及迁移能力,提示EGFL9可能是一个潜在的肝癌治疗靶点。     

胃癌组织MACC1表达及其临床意义分析

目的:研究结肠癌转移相关基因1(MACC1)在胃癌组织中的表达及其临床意义。方法:采用RT-qPCR检测胃癌组织株和67例胃癌组织及癌旁正常组织中MACC1mRNA的表达,免疫组化技术检测67例胃癌组织及癌旁正常组织中MACC1蛋白的表达,并分析其与临床病理资料的关系。结果:BGC823、SGC7901和MGC803 3种胃癌细胞株中MACC1mRNA的相对表达量分别为3.458 4±0.047 9、4.768 5±0.100 6和4.257 5±0.029 5,差异有统计学意义,F=295.131,P<0.05。癌组织MACC1mRNA表达量(5.560 0±2.853 1)较癌旁正常组织(2.190 1±1.675 9)显著增高,t=6.907,P=0.000。肿瘤组织中MACC1蛋白的阳性率为64.18%(43/67),显著高于癌旁正常组织5.97%(4/67),χ2=49.844,P<0.05,且MACC1蛋白的异常高表达与分化程度(χ2=14.492,P=0.000)、腹膜转移(χ2=4.251,P=0.039)、淋巴转移(χ2=11.978,P=0.001)、临床分期(χ2=11.024,P=0.001)密切相关,而与年龄(χ2=0.129,P=0.720)、性别(χ2=0.407,P=0.523)、肿瘤大小(χ2=0.017,P=0.897)、部位(χ2=3.021,P=0.082)及远处转移(χ2=0.000,P=1.000)无关。结论:MACC1可以作为预测腹膜转移、淋巴转移,评价胃癌进展的有效指标,可为胃癌患者的临床诊疗提供依据。     

肝癌组织EMP1表达生物学意义

目的探讨上皮膜蛋白(epithelial membrane protein-1,EMP1)在肝癌组织中的表达水平及过表达对肝癌细胞生物表型的影响。方法采用免疫组织化学方法、蛋白质印迹法检测唐山市人民医院2008-01-01-2012-12-30 65例肝癌组织及35例癌旁肝脏组织中的表达情况(距其癌组织边缘≥2cm,镜下未见癌浸润)。采用慢病毒转染建立EMP1过量表达的肝癌HepG2细胞株。荧光定量PCR及蛋白质印迹法检测EMP1转染后肝癌HepG2细胞株中EMP1表达含量的变化。MTT法、流式细胞术及Transwell检测EMP1过量表达对肝癌细胞增殖、细胞凋亡及细胞侵袭转移的影响。结果免疫组织化学结果表明,EMP1蛋白在肝癌组织中的表达阳性率为32.3%(21/65),明显低于癌旁肝脏组织的85.7%(30/35),χ2=26.118,P<0.001。蛋白质印迹法检测结果表明,EMP1蛋白在肝癌组织的表达相对量(0.257±0.022)较癌旁肝脏组织(0.863±0.086)明显降低,两者比较差异有统计学意义,t=11.824,P<0.001。EMP1蛋白表达水平与肝癌有无淋巴结转移、临床分期、组织分级以及血行转移有关(P<0.05),而与肝癌患者年龄、性别、病理类型及T分期无关,P值均>0.05。EMP1高表达的肝癌细胞其增殖能力明显减弱,细胞凋亡及侵袭转移能力明显降低,Caspase-9蛋白表达上调,而血管内皮生长因子-C(vascular endothelial growth factor C,VEGFC)与基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)蛋白的表达量明显下调,P<0.05。结论肝癌组织中EMP1蛋白表达减低,可能通过调控Caspase-9及VEGFC蛋白表达影响肝癌细胞增殖、凋亡与转移的生物学过程。     

表皮生长因子样结构域7蛋白在154例结直肠癌中的表达及其临床意义分析

摘 要：［目的］ 探讨表皮生长因子样结构域7（epidermal growth factor-like domain 7，EGFL7）蛋白在结直肠癌（colorectal cancer，CRC）中表达及其临床意义。［方法］ 选取154例施行CRC根治术切除患者作为病例组，同时选取47名行肠镜检查的健康体检者作为健康者组，分别收集CRC组织和正常结直肠黏膜组织标本。采用免疫组织化学SP法检测CRC组织及正常结直肠黏膜组织中EGFL7蛋白的表达，分析EGFL7蛋白表达与患者临床病理特征及术后预后的关系。［结果］ CRC组织中EGFL7蛋白阳性表达率为68.2%，显著高于正常结直肠黏膜组织的31.9%（χ2=19.687，P<0.001）。EGFL7蛋白表达在不同浸润深度（χ2=6.057，P=0.014）、淋巴结转移（χ2=5.229，P=0.022）、远处转移（χ2=4.857，P=0.028）和TNM分期（χ2=8.195，P=0.004）CRC患者中的差异均有统计学意义。EGFL7蛋白阳性表达者生存率显著低于阴性表达者（χ2=7.022，P=0.008），且EGFL7阳性表达是影响CRC患者术后预后的独立危险因素（HR=3.443，95%CI：1.924~6.160，P<0.001）。［结论］ EGFL7蛋白在CRC发生和侵袭、转移的不良事件，如淋巴结转移、远处转移中呈阳性表达，且EGFL7蛋白阳性表达是CRC患者术后预后的独立危险因素，提示EGFL7有望成为一个新的CRC诊断和预后标志物。     

肝细胞癌组织SPAILC表达及其临床意义

背景与目的: 最近的研究发现半胱氨酸的酸性蛋白(SPARC)与肿瘤的发生、进展以及肿瘤的侵袭和转移关系密切,SPARC在黑色索瘤、胶质瘤、脑膜瘤、膀胱癌、肺癌和前列腺癌等多数肿瘤中均有高表达,而且与某些肿瘤的临床分期和预后相关.本研究观察SPARC在人肝细胞癌(hepatocellar carcinoma,HCC)组织中的表达情况.方法:选择62例有完整随访资料的HCC及相应癌旁组织标本、30例正常肝组织标本,用RT-PCR方法检测OSPARC mRNA的表达:应用免疫组化染色法检测SPARC在HCC、癌旁组织和正常肝组织的表达.结果: SPARC mRNA在HCC组织呈高表达(14.0±3.6),癌旁组织次之(6.8±1.8),正常肝组织低表达(2.7±0.9),3组间差异均有显著性(P=0.000).SPARC免疫组化显示62例HCC组织中54例SPARC表达阳性,正常肝组织中仅4例SPARC表达阳性,两者间差异有显著性(P=0.000);SPARC的免疫组化评分在肝癌组为21.5±4.8;癌旁组为11.3±3.6;正常肝组织为5.7±1.8,3组间差异亦有显著性(P=0.000).SPARC的表达水平随着Enmondson病理分级明显增加;在Ⅰ级和Ⅱ级之间差异有显著性(P=0.029);Ⅱ级和Ⅲ/Ⅳ级间具有显著性 (P=0.008).SPARC表达在出现淋巴结转移的HCC中占26/27(96.3%),显著高于无淋巴结转移者23/35(65.7%).结论: SPARC表达与肝癌的分化程度,淋巴结转移能力相关,通过检测SPARC表达将对肝癌临床评估有一定意义.     

肝癌组织长链非编码RNA RP13-143G15.3表达临床意义分析

目的 近几年,大量的长链非编码RNA被发现,通过参与表观遗传、转录和翻译等实现对基因表达的调控,促进肿瘤细胞的发生发展和转移.探究长链非编码RNA RP13-143G15.3在肝癌及癌旁组织中的表达水平,分析其差异表达与临床指标之间的相关性,为肝癌的诊疗提供新的标志物.方法 对5例肝癌及癌旁组织进行长链非编码RNA(lncRNAs)表达谱筛查,选择具有表达差异的RP13-143G15.3扩大样本进行验证.收集2016-03-01-2016-06-30广西医科大学肿瘤医院肝胆外科进行肝癌切除术的56例患者肝癌及癌旁组织,采用实时荧光定量PCR技术检测RP13-143G15.3的相对表达水平,并分析其差异表达与患者临床特征、血清学指标及免疫组化指标的相关性.结果 5例肝癌组织中RP13-143G15.3表达高于癌旁组织,P=0.005.在大样本56例肝癌组织中相对表达量为0.026 5±0.006,癌旁组织中相对表达量为0.040 7±0.025,肝癌组织中RP13-143G15.3表达明显低于相应癌旁组织(Z=-3.842,P<0.001),与芯片筛查结果不一致.RP13-143G15.3的差异表达与患者乙肝携带史(χ2=4.667,P=0.031)、门脉高压(χ2=5.250,P=0.022)、甲胎蛋白水平(χ2=4.791,P=0.029)、乳酸脱氢酶(Z=-2.237,P=0.025)、谷氨酸脱氢酶(Z=-2.101,P=0.036)、纤维蛋白原(t=-2.103,P=0.040)、CA72-4(Z=-2.147,P=0.032)、免疫学指标CD34(χ2=9.516,P=0.023)及肿瘤增殖抗原(χ2=8.000,P=0.005)有关.结论 RP13-143G15.3在肝癌组织中表达下调,其可能起到抑癌作用,有望成为肝癌新的肿瘤标志物及分子靶点,为后续功能研究及机制研究提供理论基础.     

hsa-miR-19a-3p下调靶基因SEMA4C抑制胃癌细胞增殖、侵袭能力

目的:探讨SEMA4C在胃癌中的表达以及hsa-miR-19a-3p下调SEMA4C对胃癌细胞增殖、侵袭能力的影响.方法:收集23例胃癌组织和对应癌旁组织标本,采用免疫组化染色、Real-time PCR方法检测SEMA4C的表达,并分析其与临床资料的相关性;检索Targetscan、Miranda等数据库预测调控SEMA4C基因的microRNA,并利用Real-time PCR、双荧光素酶报告系统检测加以证实;通过脂质体转染使人胃癌细胞系BGC823内过表达hsa-miR-19a-3p,Real-time PCR、Western blot检测SEMA4C的表达,通过细胞集落形成实验和Transwell小室研究BGC823细胞的增殖、侵袭能力的变化.结果:胃癌组织中SEMA4C阳性率87.0%,高于癌旁组织(x2=20.30,P<0.000 1),胃癌组织中SEMA4C mRNA的表达高于癌旁组织(t=13.47,P<0.000 1).SEMA4C的表达与胃癌TNM分期(P=0.036 4)、分化程度(P=0.042 7)、淋巴结转移度(P=0.012 8)有关.生物信息学分析hsa-miR-19a-3p、hsa-miR-214-5p、hsa-miR-138-5p可能调控SEMA4C表达,胃癌组织中hsa-miR-19a-3p的表达低于癌旁组织(t=8.233,P<0.000 1),hsa-miR-214-5p(t=0.846 3,P=0.097 6)、hsa-miR-138-5p(t=1.345,P=0.185 7)表达与癌旁组织无明显差异,hsa-miR-19a-3p转染后荧光素酶表达下降至0.46±0.12(F=5.685,P=0.003 2).hsa-miR-19a-3p转染后,SEMA4C mRNA(F=34.39,P<0.000 1)、SEMA4C蛋白(F=67.49,P<0.000 1)表达减少,BGC823细胞克隆数目减少(F=20.77,P<0.000 1),Transwell下室细胞数较少(F=16.37,P=0.000 4).结论:SEMA4C在胃癌中过表达并与肿瘤的发生发展有关,hsa-miR-19a-3p通过下调靶基因SEMA4C抑制胃癌细胞增殖、侵袭能力来发挥其抗肿瘤效应.     

非小细胞肺癌中E-钙黏素的表达及意义

目的探讨E-钙黏素(E-cad)在非小细胞肺癌(non-small-celllungcancer,NSCLC)中的表达及意义。方法应用免疫组织化学SP方法检测20例正常肺组织、69例癌旁肺组织、69例NSCLC组织中E-cad的表达。结果肺癌组织中E-cad的表达率为30.4%(21/69),显著低于癌旁组织的76.8%(53/69),χ2=29.6,P=0.000;低于肺良性病变组织的80.0%(16/20),χ2=15.5,P=0.000;而癌旁组织与肺良性病变组织间差异无统计学意义,χ2=0.89,P=0.765。E-cad在Ⅲ、Ⅳ期肺癌中表达率低于Ⅰ、Ⅱ期,χ2=4.234,P=0.040。结论E-cad可反映NSCLC的生物学特性,是预测其侵袭转移潜能有价值的指标。     

鞘氨醇激酶1在乳腺癌中的表达及其临床意义

目的探讨鞘氨醇激酶1(Sphk1)在乳腺癌中的表达情况及其与临床病理特征及E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达的关系。方法收集2003年9月至2006年5月重庆市肿瘤研究所乳腺外科手术切除的乳腺组织标本171例,包括乳腺纤维腺瘤20例和浸润性导管癌151例。通过免疫组织化学方法检测所有乳腺组织标本中Sphk1的表达,并分析其与乳腺癌临床病理特征及E-cadherin表达的关系。计数资料采用χ2检验,等级资料采用秩和检验。结果 Sphk1在114例乳腺癌组织中表达阳性,总阳性率为75.50%(114/151),而在乳腺纤维腺瘤组织中均表达阴性(0/20),两组差异有统计学意义(χ2=45.298,P=0.000)。Sphk1表达与乳腺癌淋巴结转移状态(Z=-6.122,P=0.000)、ER(χ2=4.478,P=0.034)及HER-2表达(χ2=7.313,P=0.013)有关,而与患者年龄(χ2=2.791,P=0.095)、月经状况(χ2=0.010,P=0.919)、肿瘤直径(Z=-0.249,P=0.804)、PR表达(χ2=0.740,P=0.390)无关。在全部浸润性导管癌患者中,E-cadherin与Sphk1表达不同的患者其淋巴结转移状态差异有统计学意义(χ2=17.187,P=0.001)。E-cadherin(-)且Sphk1(+)的患者淋巴结阳性率为85.71%(18/21),Ecadherin(+)且Sphk1(-)的淋巴结阳性率为30.77%(8/26),两者差异具有统计学意义(χ2=14.189,P<0.008)。结论 Sphk1可能在乳腺癌的发生和转移过程中发挥作用,有望作为评估乳腺癌生物学行为的指标。     

胃癌组织MYH-9蛋白表达及MYH-9 siRNA下调SGC-7901细胞MYH-9表达对细胞侵袭转移的影响

目的 非肌性肌球蛋白重链9基因(non-muscular myosin heavy chain 9,MYH-9)在多种恶性肿瘤中高表达,且预后差.检测胃癌组织MYH-9的表达及利用RNA干扰(RNA interference,RNM)技术特异性,抑制胃癌SGC--7901细胞中MYH-9的表达对细胞侵袭和转移的影响,探讨在胃癌治疗中将MYH-9作为基因治疗靶点的价值.方法 选取2009-06-01-2010-01-01南昌大学第一附属医院126例胃癌及癌旁组织.利用RNAi技术将MYH-9 siRNA转染到胃癌SGC-7901细胞中,蛋白质印迹法检测MYH-9蛋白的表达,RT-PCR法检测MYH-9 mRNA的表达;运用细胞迁移和侵袭实验检测MYH-9 siRNA下调胃癌SGC-7901细胞中MYH-9的表达对细胞侵袭转移的影响.结果 MYH-9在胃癌组织中的表达显著高于癌旁组织,x2=77.83,P＜0.001.胃癌MYH-9蛋白表达与肿瘤Lauren分型(x2=5.296,P=0.020)、肿瘤分化程度(x2=14.39,P=0.002)、肿瘤浸润深度(x2=5.296,P=0.026)、肿瘤淋巴结转移数(x2=11.15,P=0.003)、脉管癌栓(x2=5.255,P=0.022)、肿瘤远处转移状态(x2=6.683,P=0.009)和TNM分期(x2=10.73,P=0.002)密切相关.MYH-9蛋白表达(HR=2.825,95％CI=1.104～3.706,P=0.041)、胃癌远处转移状态(HR=1.749,95％CI=0.983～3.503,P=0.035)和胃癌淋巴结转移数(HR=3.235,95％CI=1.579～5.358,P＜0.001)可作为预测患者不良预后的独立指标.与空白对照组及阴性对照组比较,特异性siRNA可以高效抑制SGC-7901细胞MYH-9基因的表达,在mRNA水平其表达抑制率分别为87.5％(t=48.22,P＜0.001)和86.9％(t=57.30,P＜0.001);在蛋白质水平其表达抑制率分别为52.9％(t=11.01,P＜0.001)和60.1％(t=15.53,P＜0.001).在侵袭实验中,实验组细胞数为(49.5±13.8)个,显著低于阴性对照组(112±4.34)个(t=15.53,P＜0.001)和空白对照组(116±5.57)个(t=28.12,P＜0.001).在迁移实验中,实验组细胞数为(81.5±7.26)个,显著低于阴性对照组(185±7.33)个(t=47.29,P＜0.001)和空白对照组(189±3.46)个,t=46.40,P＜0.001.结论 MYH-9高表达患者预后较差,MYH-9可能成为胃癌基因治疗的新靶点.     

下调MLLT3/AF9基因对肝癌SMMC-7721细胞增殖与侵袭能力的影响

目的 本文旨在研究组蛋白甲基转移酶MLLT3/AF9在人肝癌组织中的表达,观察体外下调MLLT3/AF9的表达对肝癌SMMC-7721细胞增殖与侵袭能力的影响。方法 应用Real-time PCR技术检测100例肝癌组织、癌旁组织和肝癌细胞系SMMC-7721、HepG2、Hu7、BEL-7402中MLLT3/AF9基因的表达水平;应用RNA干扰下调MLLT3/AF9的表达,采用CCK-8、Transwell实验和划痕实验检测MLLT3/AF9下调组和对照组SMMC-7721细胞的增殖及侵袭能力。结果 Real-time PCR检测结果显示肝癌组织中的MLLT3/AF9基因的表达量显著高于癌旁组织; Real-time PCR和Western blot检测到LVMLLT3-RNAi组中MLLT3/AF9 mRNA和蛋白的表达水平都降低,CCK-8、Transwell和划痕实验结果显示LV-MLLT3-RNAi组细胞的增殖和侵袭能力降低。结论 MLLT3/AF9在肝癌组织中表达水平明显升高,体外下调MLLT3/AF9的表达可以有效抑制肝癌SMMC-7721细胞的增殖与侵袭。     

T细胞因子4基因表达与肝癌侵袭转移的关系

目的　研究人T细胞因子 4基因 (hTcf- 4)在原发性肝癌及肝癌细胞株中表达情况 ,以探讨hTcf- 4基因与肝癌发生发展的关系。方法　用逆转录 -聚合酶链反应 (RT -PCR) ,检测了 32例原发性肝癌组织、癌旁组织及 5株肝癌细胞株中hTcf- 4基因表达。结果　hTcf- 4mRNA在癌旁组织中的表达率为 71 9% ,而在癌组织中的表达率达 90 6 %。且癌组织中的表达水平明显高于癌旁组织 (P <0 0 0 1)。同时在肿瘤包膜不完整及有转移的癌组织中该基因表达明显增高。不同细胞株中均有hTcf- 4基因表达。肝癌细胞株中表达水平高于正常肝细胞株 (P <0 0 0 1) ,而高转移肝癌细胞株MHCC97中表达水平又高于低转移肝癌细胞株 (P <0 0 5 )。结论　hTcf- 4基因表达增高与肝癌发生发展及侵袭转移有关 ,提示hTcf- 4可能成为协助肝癌诊断、判断预后及疗效评价的指标。     

趋化因子CXC受体3在肝细胞癌中的表达及意义

背景与目的:最近研究揭示趋化因子及其受体网络在肿瘤侵袭转移中起重要作用。本研究旨在探讨趋化因子CXC受体3(CXCR3)在肝细胞癌(hepatocellularcarcinoma,HCC)中的表达,及其与HCC临床病理特征的关系。方法:选取7株人HCC细胞系、18例正常肝组织、64例HCC患者的癌组织和癌旁肝组织作为研究对象。采用RT-PCR和实时定量PCR方法,研究这些组织中CXCR3mRNA的表达情况。采用免疫组织化学方法,研究CXCR3蛋白的表达情况和HCC复发转移的关系。结果:在高转移细胞系MHCC97-H中,CXCR3与!2微球蛋白的mRNA拷贝均数之比为33.0×10-4,在低转移细胞系MHCC97-L中,该数值为8.7×10-4,在无转移能力的5株细胞系则未检出CXCR3的mRNA表达。在MHCC97-H和MHCC97-L中均见CXCR3蛋白强阳性染色,而在无转移能力的细胞系中只有HepG2见到微弱染色,其余4株均未见染色。CXCR3蛋白在HCC组织中的强阳性染色,与HCC的侵袭性正相关(P=0.003)。HCC组织中CXCR3蛋白强阳性的患者和CXCR3阴性或弱阳性的患者的1、2年无瘤生存率分别为66.7%、31.3%和75.0%、59.5%,差异有显著性(P=0.044)。结论:CXCR3的表达与HCC的侵袭和转移相关。     

HTPAP gene on chromosome 8p is a candidate metastasis suppressor for human hepatocellular carcinoma

Our previous studies suggested that chromosome 8p deletion is associated with metastasis of hepatocellular carcinoma (HCC), in which some novel metastasis suppressor genes might be harbored. The present study aimed to identify the metastatic suppressor gene(s). A cDNA chip was constructed with the expressed sequence tags (ESTs) from chromosome 8p and used to compare the difference of expression profiling between the MHCC97-H and MHCC97-L cell lines with different metastatic potentials and similar genetic backgrounds. In all, 10 ESTs were significantly downregulated in MHCC97-H cell line with higher metastatic potential. One full-length gene, HTPAP (phosphatidic acid phosphatase type 2 domain containing 1B), was identified at chromosome 8p12. Sequencing and bioinformatic analyses revealed that HTPAP has 826 bp and encodes a putative protein of 175 amino acids with a transmembrane segment at the NH2 terminus, two protein kinase C phosphorylation site and one tyrosine kinase phosphorylation site. Its expression level in metastatic tumor tissues was much lower than that of primary HCC tissues. Both in vitro and in vivo assays suggested that HTPAP could suppress the invasion and metastasis of HCC. These suggested that HTPAP is a novel metastatic suppressor gene for HCC. The mechanism of the effect of HTPAP on HCC metastasis is not clear yet and deserves further investigation.     

MicroRNA-182 downregulates metastasis suppressor 1 and contributes to metastasis of hepatocellular carcinoma

ABSTRACT: BACKGROUND: miR-182 is one of the most significantly up-regulated miRNAs in hepatocellular carcinoma (HCC). Metastasis suppressor 1 (MTSS1), one target gene of miR-182, plays an important role in the metastasis of cancers. However, it remains unclear that the exact function and mechanism of miR-182 and MTSS1 in HCC. METHODS: miR-182 expression was tested in 86 cases of paired HCC and normal tissues by real-time PCR and the relationships between miR-182 expression and clinicopathological parameters were analyzed. The expression of MTSS1 was evaluated by immunohistochemistry and western blot in the above tissues and its correlation with miR-182 expression was analyzed. Moreover, western blot and invasion assay were performed after transfection of pre-miR-182 or anti-miR-182 in HCC cell lines. In addition, luciferase assay and rescue experiment were performed in HCC cell lines. RESULTS: Compared with normal tissue, miR-182 was up-expression and MTSS1 was down-expression in HCC tissues. Moreover, the over-expression of miR-182 was correlated with intrahepatic metastasis (p=0.034) and poor prognosis (p=0.039) of HCC patients. There was a negative correlation between miR-182 and MTSS1 expression both in HCC tissues (r =-0.688, p<0.01) and HCC cell lines (r =-0.931, p=0.021). Furthermore, the up-regulation of miR-182 resulted in the down-expression of MTSS1 and increased invasive potential of HUH-1, and reverse results were also confirmed when the expression of miR-182 was inhibited. In addition, the results of luciferase assay demonstrated the targeted regulation of miR-182 on MTSS1. CONCLUSIONS: miR-182 could promote metastasis of HCC through the down-regulation of its target gene MTSS1. miR-182 and MTSS1 were potential prognostic markers and/or therapeutic targets in HCC.     

NTS/IL-8通路对肝细胞肝癌侵袭迁移和EMT的影响

  目的  探讨神经降压素（neurotensin,NTS）对肝细胞肝癌（hepatocellular carcinoma,HCC）细胞合成和分泌白细胞介素8（interleukin-8,IL-8）的影响及NTS/IL-8通路活化对HCC侵袭、迁移和上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）的作用。  方法  通过慢病毒基因转染构建神经降压素受体1（neurotensin receptor1,NTR1）高表达的HCC细胞系Hep3BNTR1hi,利用小干扰RNA构建NTR1低表达HCC细胞系HepG2NTR1-。通过实时荧光定量PCR（RT-qPCR）和酶联免疫吸附（ELISA）实验检测外源性NTS刺激前后HCC细胞IL-8分泌量的变化;利用划痕修复实验和Transwell实验观察阻断IL-8受体后HCC细胞侵袭迁移能力的变化;采用Western blot比较阻断IL-8受体后HCC细胞EMT相关蛋白的表达变化。  结果  外源性NTS刺激和高表达NTR1可促进Hep3B和HepG2细胞合成和分泌IL-8（P均 < 0.01）,阻断或降低NTR1表达后IL-8的表达显著降低（P < 0.05,P < 0.01）。外源性NTS刺激和高表达NTR1可提高HCC细胞的侵袭和迁移能力（P均 < 0.05）,阻断IL-8受体,即阻断NTS/IL-8信号下传,HCC细胞的划痕修复率和侵袭细胞数均降低（P均 < 0.001）,同时伴有E-cadherin表达增加,N-cadherin、β-catenin表达降低。  结论  外源性NTS刺激和高表达NTR1可以刺激HCC细胞合成和分泌IL-8,阻断NTS/IL-8信号下传会降低肝癌细胞EMT和侵袭迁移能力。      

细胞分裂周期7蛋白在肝癌组织的表达及其对肝癌细胞增殖和侵袭的影响

目的 检测细胞分裂周期7(CDC7)蛋白在人肝癌组织的表达,探讨CDC7过表达对肝癌细胞增殖和侵袭的影响。方法 实时定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测CDC7 mRNA在肝癌组织和癌旁组织的表达,检测CDC7 mRNA在肝癌细胞系和正常肝脏细胞中的表达。Western blot检测CDC7蛋白在肝癌组织和癌旁组织中的表达,检测CDC7蛋白在肝癌细胞系和正常肝脏细胞中的表达水平。利用慢病毒载体构建稳定过表达CDC7的肝癌HCCLM3和SMMC 7721细胞株。细胞克隆实验和CCK-8法检测CDC7过表达对肝癌细胞增殖的影响。Transwell实验和划痕实验检测CDC7过表达对肝癌细胞侵袭迁移的影响。结果 与癌旁组织相比,CDC7 mRNA和蛋白在肝癌组织中表达水平显著升高(P＜0.001);与正常肝细胞相比,肝癌细胞系的CDC7 mRNA和蛋白表达水平显著增高(P＜0.001);CCK-8法、细胞克隆实验说明CDC7过表达会明显增强肝癌细胞的增殖能力;划痕实验、Transwell实验说明CDC7过表达会明显提高肝癌细胞的侵袭能力。结论 CDC7蛋白在人肝癌组织高表达,其过表达促进肝癌细胞的增殖和侵袭能力。