TGF-β1mRNA与大鼠小肠同种异体移植急性排斥反应的关系

目的:研究TGF-β1mRNA与大鼠小肠同种异体移植急性排斥反应的关系.方法:试验分2组,Ⅰ组:Wistar→SD小肠移植;Ⅱ组Wistar→SD小肠移植 CsA.术后3,5,7d观察病理学改变并用半定量RT-PCR方法检测IFN-γ、IL-2、TGF-β1mRNA.结果:病理改变:Ⅰ组术后3d出现排斥反应,7d最重,Ⅱ组术后7d部分出现轻度排斥反应.Ⅰ组IFN-γ、IL-I mRNA术后明显增高,Ⅱ组术后略升高,两者相比差异有统计学意义(P＜0.01).Ⅰ组TGF-β1mRNA术后增高,Ⅱ组TGF-β1mRNA术后增高大于Ⅰ组,两者差异有统计学意义(P＜0.01).结论:TGF-β1mRNA转录水平增高可抑制大鼠小肠移植急性排斥反应.     

转化生长因子β1与大鼠小肠同种异体移植急性排斥反应的关系

目的　研究转化生长因子 β1(TGF -β1)与大鼠小肠同种异体移植急性排斥反应的关系。方法　试验分 3组。Ⅰ组 :Wistar→SD小肠移植 ;Ⅱ组 :Wistar→SD小肠移植 +环孢素A(CsA) ;Ⅲ组 :Wistar→SD小肠移植 +重组人转化生长因子 β1(rhTGF -β1)。术后 3、5、7d观察病理学改变并用半定量RT -PCR方法检测干扰素γ(IFN -γ)、白细胞介素 2 (IL -2 )、TGF -β1mRNA。结果　病理改变 :Ⅰ组术后 3d出现排斥反应 ,7d最重 ;Ⅱ组术后 7d部分出现轻度排斥反应 ;Ⅲ组术后 5d出现轻度排斥反应 ,术后 7d中度排斥反应。Ⅰ组IFN -γ、IL -2mRNA术后明显增高 ;Ⅱ组术后略升高 ,与Ⅰ组相比差异有统计学意义 ( P <0 .0 1) ;Ⅲ组IFN -γ、IL -2mRNA术后升高 ,较Ⅰ组升高程度低 ,二者比较差异有统计学意义 (P <0 .0 5 )。Ⅰ组TGF -β1mRNA术后增高 ,Ⅱ组术后增高大于Ⅰ组 ,两者差异有统计学意义 (P <0 .0 1)。结论　TGF -β1可抑制大鼠小肠移植急性排斥反应     

肝再生增强因子对大鼠腹腔移植的肝细胞的影响

目的 探讨肝再生增强因子(ALR)对急性肝功能衰竭大鼠腹腔移植的肝细胞的影响.方法 采用D-氨基半乳糖诱导SD大鼠急性肝功能衰竭(AHF),然后将其随机分为空白对照组(仅接受生理盐水腹腔注射)、移植对照组(腹腔移植SD大鼠的肝细胞2×107个)、环孢素A组(CsA组,接受肝细胞移植后腹腔注射CsA 6 d)、ALR组(接受肝细胞移植后腹腔注射ALR 6 d)和ALR对照组(仅腹腔注射ALR 6 d).实验期为14 d,观察受者的存活情况及移植肝细胞存活情况,检测腹腔内细胞CD4、CD8及CD68的表达情况,测定血清及腹腔冲洗液中自细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子a(TNF-a)的水平.结果 空白对照组、移植对照组、CsA组、ALR组及ALR对照组的受者2周存活率分别为0、46.7%、20%、66.7%和14.3%,ALR组显著高于空白对照组(P=0.001).移植后1～2 d,ALR组血清TNF-a和IL-1β明显低于空白对照组和移植对照组(P<0.01);移植对照组腹腔冲洗液中TNF-a和IL-1β水平明显高于其它各组(P<0.05,P<0.01).至移植后14 d,各组存活大鼠的血清TNF-a和IL-1β水平接近正常水平.移植后1～2 d,ALR组移植物内CD68表达水平为(0.5±0.3)%,明显低于移植对照组和CsA组(P<0.01);ALR组腹腔内细胞CD68、CD4及CD8表达水平分别为(1.3±1.2)%、(0.1±0.3)%和(0.2±0.1)%,均明显低于移植对照组(P<0.01,P<0.01,P<0.05).移植后1～3 d,接受肝细胞移植的大鼠腹腔内可见聚集成团的肝细胞结节,ALR组存活的肝细胞数明显多于移植对照组和CsA组,且炎症细胞浸润较少,至移植后14 d,仅ALR组可见少量形态正常的肝细胞.结论 腹腔内肝细胞移植联合ALR腹腔注射能提高AHF大鼠的存活率;ALR能短期改善移植肝细胞的存活状况.     

大鼠肝细胞的分离,短期培养及异体移植治疗实验性急性肝？…

研究分离Ｓｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙ大鼠肝细胞的方法及短期培养后对细胞活性的影响。并研究新鲜分离的同种异体肝细胞移植对实验性急性肝功能衰竭的治疗作用。方法 采用胶原酶原位和循环灌注法分离肝细胞；游离肝细胞在合成ＲＰＭＩ１６４培养基内培养６天测定细胞内生化指标；用Ｄ－氨基半乳糖将６０只雄性ＳＤ大鼠制成急性肝功能衰竭模型并同均分为移植组和对照组，将新鲜离体肝细胞悬液注入移植组大鼠腹腔内，对照组则注入等     

微囊化猪肝细胞移植治疗大鼠急性肝衰竭

目的探讨微囊化猪肝细胞移植(HTx)治疗大鼠急性肝衰竭(ALF)的效果。方法采用原位胶原酶循环肝灌注法分离中国实验用小型猪肝细胞,海藻酸钠-氯化钡法微囊化。应用 D-氨基半乳糖(D-gal)1．2 g／kg体重腹腔内注射制作SD大鼠ALF模型。ALF大鼠随机分为3组。注药24 h后分别将PRMI 1640培养液2 ml腹腔注射为对照(I组)、2 ml游离猪肝细胞(2×107个／ml)腹腔内移植(Ⅱ组),以2 ml微囊化猪肝细胞腹腔内移植(2×107个／ml,Ⅲ组)。观察移植后大鼠14 d存活率、谷丙转氨酶(ALT)、总胆红素(TB)、血氨(NH3)的改变和肝脏的病理变化。结果肝细胞移植后大鼠14 d存活率:I组为20．0％(5／25),Ⅱ组为66．7％(16／24),Ⅲ组为76．0％(19／ 25),3组间差异有统计学意义(P<0．05)。移植后第1天I组ALT、TB和移植前相比差异无统计学意义,Ⅱ、Ⅲ组ALT、TB下降。第4天3组ALT、TB均继续下降,Ⅱ、Ⅲ组低于I组(P<0．05), Ⅱ、Ⅲ两组间差异无统计学意义(P>0．05)。移植后第7天,ALT进一步下降,3组间差异有统计学意义(P<0．05);TBⅢ组显著低于Ⅱ组和I组(P<0．05),Ⅱ组低于I组但差异无统计学意义 (P>0．05)。移植后第14天,肝功能均明显恢复,ALT、TBⅡ、Ⅲ组均低于I组(P<0．05),Ⅱ、Ⅲ两组间差异无统计学意义(P>0．05)。各组治疗前后NH3有所改善,但各时间段及各组之间差异无统计学意义(P>0．05)。微囊组和游离肝细胞组移植后肝脏病理损害修复较快,而阴性对照组肝脏再生修复较差。结论微囊化猪肝细胞腹腔内移植可以提高药物诱导急性肝衰竭大鼠的存活率,改善急性肝衰竭大鼠的肝功能,有利于受体受损肝脏的再生修复,但对降低血氮的效果不明显。     

重组肝细胞生长因子促进大鼠移植肝细胞的再生

目的探讨术后应用重组肝细胞生长因子(r HGF)对大鼠移植肝细胞再生的促进作用。方法采用改良“二袖套法”建立SD大鼠原位部分肝移植模型,受鼠分为实验组和对照组,术后经尾静脉分别给予r HGF和相同体积的生理盐水,2次/d。两个组分别在术后第1、2、4、7d时随机挑取5只大鼠处死,称取移植物湿重,采血检测血清丙氨酸转氨酶及白蛋白,流式细胞仪检测移植肝的增殖活性,免疫组织化学法检测移植肝Ki-67的表达情况。结果术后第1、2d,实验组移植物湿重较对照组同时间段明显增加;术后第4、7d,实验组血清丙氨酸转氨酶水平较对照组同时间段明显降低,而白蛋白水平较对照组同时间段明显增高;术后第2、4d,实验组的移植肝增殖指数和Ki-67表达较对照组高(P<0.05)。结论大鼠部分肝移植后使用r HGF能够明显促进移植肝细胞的再生。     

异种肝细胞移植治疗大鼠药物性肝衰的疗效观察

目的　观察异种肝细胞移植治疗大鼠药物性肝衰的疗效。方法　杂种豚鼠为供体 ,胶原酶消化法制备肝细胞。SD大鼠为受体 ,氨基半乳糖 (D GI)腹腔内 1次注射制作肝衰模型。 4 8h后将豚鼠肝细胞(1.5× 10 7个 )移植于大鼠脾内。同种移植及生理盐水为对照。移植后观察受体 2周存活率 ,在移植不同时间作移植物病理及组织化学检查。结果　受体 2周存活率 :异种移植组为 71% ,同种组为69 % (P >0 .0 5 ) ,生理盐水对照组为 2 5 % (P>0 .0 1)。豚鼠肝细胞移植后 12～ 2 4h其结构和功能基本保存完好。结论　与同种移植一样 ,异种肝细胞移植能逆转大鼠药物性肝衰。     

肝细胞生长因子对大鼠移植小肠粘膜结构的保护作用

目的　探讨肝细胞生长因子 (HGF)对大鼠移植小肠粘膜结构的保护作用。方法　近交系Wistar (RT1k)大鼠行异位全小肠移植后第 2天开始给予肠外营养至第 10天 ,对照组 (n =10 )行常规TPN支持 ,HGF组 (n =10 )行常规TPN支持的同时加用人胎肝细胞生长因子 15 0 μg/ (kg·d) ,观察移植肠粘膜结构的形态学参数如绒毛高度、绒毛宽度、隐窝深度、粘膜厚度及绒毛表面积的变化 ,以及移植肠上皮细胞超微结构变化及移植肠粘膜蛋白质和DNA含量的改变。结果　移植前两组肠粘膜形态学参数差异无显著性意义 ,行移植及TPN后对照组各参数较移植前明显减小 (P<0 .0 5 ) ;而HGF组各参数与移植前比较变化不明显 (P>0 .0 5 ) ,但明显高于对照组 ,分别是绒毛高度为 ( 2 98.79± 2 2 .3 1) μmvs ( 176.45± 14 .62 ) μm ,P=0 .0 0 1;绒毛宽度为 ( 10 7.46± 12 .3 4) μmvs ( 74.2 0± 16.85 ) μm ,P =0 .0 0 4;隐窝深度为 ( 10 4.5 6± 11.17) μmvs ( 74.45± 8.3 4)μm ,P =0 .0 0 0 5 ;粘膜厚度为 ( 4 0 9.5 3± 3 5 .83 ) μmvs( 2 5 9.3 8± 2 4.65 ) μm ,P =0 .0 0 3 ;绒毛表面积为 ( 0 .10 1± 0 .0 11)mm2 vs ( 0 .0 41± 0 .0 0 5 )mm2 ,P =0 .0 0 1。HGF组蛋白质含量明显高于对照组 (P =0 .0 12 )而与基准值接近     

百令胶囊对大鼠肾小管间质纤维化的防治作用

目的：观察百令胶囊对肾小管间质纤维化的防治作用及其作用机制。方法：雄性SD大鼠90只,随机分为对照组（30只）、模型组（30只）、预防组（30只）。以2%腺嘌呤淀粉混悬液150mg.kg^-1.d^-1灌胃,连续17周,制作大鼠肾小管间质纤维化模型;预防组加以1.5g.kg^-1.d^-1百令胶囊溶于生理盐水灌胃以预防肾小管间质纤维化;对照组以等体积的2%淀粉溶液和生理盐水灌胃。分别于实验第7周、12周、17周时随机处死10只大鼠,进行血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）,24h尿蛋白定量和尿NAG酶检测,光镜下观察肾组织的病理变化,计算肾小管间质纤维化指数;免疫组织化学法检测肾脏HGF、TGF-β1的表达情况。结果：（1）功能学变化：与对照组比较,各时相点模型组、预防组大鼠尿蛋白、尿NAG酶、Scr及BUN均升高（P〈0.01）,但预防组低于模型组（P〈0.01）;模型组、预防组自身对照各指标均较前一时相点升高（P〈0.01）。（2）病理学变化：7周时模型组、预防组即有肾小管间质损害;模型组、预防组自身对照肾小管间质损害均较前一时相点加重（P〈0.01）,但7周、12周时预防组肾小管间质损害均较模型组为轻（P〈0.01）,17周时两组间无统计学差异（P〉0.05）。（3）免疫组化：模型组、预防组大鼠肾脏HGF表达7周、12周时高于对照组大鼠（P〈0.01）,17周时低于对照组（P〈0.01）,且各时相点预防组均高于模型组（P〈0.01）;模型组、预防组自身对照均较前一时相点降低（P〈0.01）,17周时表达量最低。各时相点模型组、预防组大鼠肾脏TGF-β1的表达均高于对照组（P〈0.01）,且预防组均低于模型组（P〈0.01）,模型组、预防组自身对照均较前一时相点升高（P〈0.01）,17周时表达量最高。（4）HGF表达量与TGF-β1表达量呈负相关（r=-0.999,P〈0.01）。结论：百令胶囊对早期肾小管间质纤维化有一定的防治?     

缬草油对高胆固醇血症大鼠肾间质纤维化的改善作用及机制探讨

目的观察缬草油对高胆固醇血症大鼠肾间质纤维化的改善作用并探讨其可能机制。方法将64只SD大鼠随机分为正常组、高脂组、缬草油组和辛伐他汀组,每组16只。缬草油组给予缬草油25mg·kg^-1·d^-1灌胃,辛伐他汀组同时给予辛伐他汀5mg·kg^-1·d^-1灌胃。比较各组大鼠总胆固醇（TC）、甘油三酯、低密度脂蛋白（LDL）、高密度脂蛋白、24h尿蛋白量、血肌酐（SCr）、肾间质损伤指数及转化生长因子β1（TGF-β1）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）mRNA和蛋白表达。结果与高脂组相比,第16周时缬草油组肾小管间质损伤指数降低,TC、LDL、24h尿蛋白量和SCr降低,差异均有统计学意义（P〈0．01）。与正常组相比,第8周时,高脂组肾小管内TGF-β1表达增多,差异有统计学意义（P〈0．01）,而α-SMA表达未见明显升高;第16周时,TGF-β1表达更为明显,α—SMA表达明显增加,差异均有统计学意义（P〈0．01）。缬草油能显著降低各时间点TGF-β1、rSMA蛋白和mRNA表达,其改善作用较辛伐他汀更明显。结论缬草油可改善高脂血症大鼠肾间质纤维化,可能与其调节血脂,下调肾组织TGF-β1表达,抑制肾小管上皮细胞转分化有关。     

intermedin对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的影响

目的 观察intermedin( IMD)对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾间质纤维化的影响.方法 雄性Wistar大鼠40只,按随机数字表法分为假手术组(n=10,行左输尿管分离术)、模型组(UUO,n=10)、氯沙坦组(n=10)和IMD组(n=10),后3组行左输尿管结扎术.各组大鼠分别于术后第14、21天随机选取5只,腹主动脉采血并留取梗阻侧肾组织之后处死.HE、Masson染色观察肾组织病理变化;比色法测定血尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)及新鲜肾组织羟脯氨酸(Pro)含量;免疫组化方法检测肾组织中转化生长因子β1 (TGF-β1)、IMD的表达水平,并进行半定量分析.结果 与假手术组相比,不同时间点UUO组血BUN、Scr、肾组织Pro含量及TGF-β1、IMD的阳性表达均显著升高(P＜0.05);与UUO组相比,氯沙坦组血BUN、Scr、肾组织Pro含量及TGF-β1、IMD表达均降低(P＜0.05),IMD组除IMD表达增加外,其余均降低(P＜0.05).结论 IMD可减轻UUO肾间质纤维化,改善肾功能,其机制可能与拮抗纤维化炎性介质TGF-β1有关.     

Platelet-rich plasma increases transforming growth factor-beta1 expression at graft-host interface following autologous osteochondral transplantation in a rabbit model

AIM: To explore the effect of platelet-rich plasma on protein expression patterns of transforming growth factor-beta1 (TGF-β1) in cartilage following autologous osteochondral transplantation (AOT) in a rabbit knee cartilage defect model.METHODS: Twelve New Zealand white rabbits received bilateral AOT. In each rabbit, one knee was randomized to receive an autologous platelet rich plasma (PRP) injection and the contralateral knee received saline injection. Rabbits were euthanized at 3, 6 and 12 wk post-operatively. Articular cartilage sections were stained with TGF-β1 antibody. Histological regions of interest (ROI) (left, right and center of the autologous grafts interfaces) were evaluated using MetaMorph. Percentage of chondrocytes positive for TGF-β1 was then assessed.RESULTS: Percentage of chondrocytes positive for TGF-β1 was higher in PRP treated knees for selected ROIs (left; P = 0.03, center; P = 0.05) compared to control and was also higher in the PRP group at each post-operative time point (P = 6.6 × 10^-4, 3.1 × 10^-4 and 7.3 × 10^-3 for 3, 6 and 12 wk, respectively). TGF-β1 expression was higher in chondrocytes of PRP-treated knees (36% ± 29% vs 15% ± 18%) (P = 1.8 × 10^-6) overall for each post-operative time point and ROI.CONCLUSION: Articular cartilage of rabbits treated with AOT and PRP exhibit increased TGF-β1 expression compared to those treated with AOT and saline. Our findings suggest that adjunctive PRP may increase TGF-β1 expression, which may play a role in the chondrogenic effect of PRP in vivo.     

大鼠原位辅助性部分肝移植

本研究旨在建立大鼠原位辅助性部分肝移（ａｕｘｉｌｉａｒｙｐａｒｔｉａｌｏｒｔｈｏｔｏｐｉｃｌｉｖｅｒｔｒａｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ,ＡＰＯＬＴ）模型,进一步推动肝移植的实验和临床研究。在半肝血流阻断下切除受体肝脏的７５％。然后将３０％的供肝移植于原位。作者成功地施行大鼠原位辅助性部分肝移植４０次。受体５天生存率为８７．５％。移植肝５天存活率为７５％。术后第５天移植肝重量增加一倍,肝细胞增生活跃,ＤＮＡ呈二倍体,ＤＮＡ合成期肝细胞占２２．６％±２．７５％明显高于正常肝细胞的１２．２２％±１．４８％（Ｐ＜０．００１）。作者认为,大鼠ＡＰＯＬＴ是一个较理想的动物模型。     

大鼠部分肝移植的实验研究

目的 建立稳定的大鼠部分肝移植动物模型,以对移植肝的功能、移植肝的增殖活性进行研究。方法 采用雄性SD大鼠,用两袖套法行活体供肝移植,设部分肝移植组、全肝移植组及部分肝切除组。分别于术后不同时间段取血检测总胆红素、丙氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶及谷氨酰转移酶;取肝组织行组织学检查。结果 部分肝移植组和全肝移植组术后受者存活时间的差异无显著性;各组术后1周肝功能酶学指标增高,后逐步降至正常;组织学检查可见大量单核细胞浸润,特别是在门静脉周围汇管区,术后1个月细胞浸润和坏死减少,可见胆管增殖;肝切除和部分肝移植组的肝组织可见线粒体肥大以及二倍体和多倍体的肝细胞,中央小静脉、肝窦和叶间静脉轻度扩张;术后300d,各组的肝组织结构基本正常。结论 本模型是研究活体供肝部分肝移植的较好模型。     

CTLA4-Ig对肝细胞移植大鼠免疫耐受的作用及其机制

目的 探讨细胞毒性淋巴细胞相关抗原4融合蛋白(CTLA4-Ig)诱导肝细胞移植大鼠免疫耐受的作用及机制.方法 10%D-氨基半乳糖(D-gal)一次性腹腔注射建立大鼠急性药物性肝衰竭模型;采用肝脏原位灌注法分离纯化肝细胞,经脾脏移植后随机分为两组.实验组腹腔一次性注射CTLA4-Ig,对照组不予处理.两组均分别于术后第1、3、5、7天采外周血观察白细胞介素(IL)-2、肿瘤坏死因子(TNF)及肝功能变化;术后1周测两组大鼠外周血T细胞亚群,处死大鼠后取脾脏苏木素-伊红(HE)染色.结果 实验组谷丙转氨酶(ALT)、血清总胆红素(TBil)于术后第7天分别为(6.5±7.3)IU/ml、(5.1±1.6)mmol/L,低于对照组.术后治疗组IL-2含量明显下降,第7天达到(1. 3138±0.8508)ng/L,两组差异有统计学意义(P＜0.05);术后TNF含量两组之间差异无统计学差异(P＞0.05).外周血CD4+T细胞、CD4+/CD8+T细胞实验组分别为(37.3±7.2)%、(1.5±0.1)%,低于对照组(P＜0.05),CD8+T细胞两组差异无统计学意义(P＞0.05).术后第7天治疗组脾内仍可见肝细胞或肝细胞团,对照组见大量淋巴细胞浸润,但很少见肝细胞.结论 CTLA4-Ig能诱导经脾同种异体肝细胞移植大鼠免疫耐受,使急性肝衰大鼠肝功能得到改善.可能是抑制T淋巴细胞亚群,且主要是抑制CD4+T细胞,使CD4+/CD8+T细胞比值下降;抑制IL-2的分泌.

Abstract：

Objective To investigate the immunosuppressive effect of cytotoxic T Iymphocyte associated antigen 4 Ig fusion protein (CTLA4-Ig) in rat allograft hepatocyte transplantation model and the mechanisms. Methods Acute liver failure (ALF) model was established by intraperitoneal injection of 10% D-gal solution to SD rates. Collagenase perfusion was performed on SD rats to separate liver cells. SD rats with ALF were subjected to intrasplenic hepatocyte transplantation and randomly divided into two groups. The experimental group received intraperitoneal injection of CTLA4-Ig. The concentrations of interleukin (IL)-2 and tumor necrosis factor (TNF), liver function and histologicy were observed at the 1st,3rd, 5th, 7th day after operation and the T lymphocyte subsets were detected by using immunohistochemistry at the 7th day after operation. Results The levels of ALT and TBil were respectively (6. 5 ±7.3) IU/ml and (5.1 ± 1.6) mmol/L at the 7th day after operation and significantly decreased after injection of CTLA4-Ig ( P ＜ 0. 01 ). IL-2 concentration in the experimental group was ( 1.3138 ± 0. 8508 ) ng/L at the 7th day after operation and significantly decreased (P ＜0. 05). TNF had no significant difference between two groups after operation ( P ＞ 0. 05 ). T lymphocyte subsets, mainly CD4 + , in the experimental group was significantly decreased as compared with control group ( P ＜ 0. 05 ), so did the CD4 +/CD8 +. Histological changes: At the 7th day after operation, there were some hepatocytes in the spleen of the experimental group. But in the control group, the changes in the spleen were characterized by severe lymphocyte infiltration. There were no hepatocytes both groups. Conclusion CTLA4-Ig can induce rat allogeneic hepatocytes intrasplenic transplantation immune tolerance. It may improve the liver function of rats with ALF.CTLA4-Ig can decrease T lymphocyte subsets, mainly CD4 + and concentrations of IL-2.     

肾清饮对腺嘌呤致大鼠肾间质纤维化的防治作用

目的观察肾清饮对大鼠肾问质纤维化的影响,并探讨其机制。方法将56只大鼠随机分为正常对照组（C组）、模型组（M组）和药物干预组,药物干预组包括肾清饮预防组（S组）、肾清饮低剂量组（SL组）、肾清饮高剂量组（SH组）、苯那普利组（B组）、肾清饮＋苯那普利组（S＋B组）,每组8只。对M组和药物干预组大鼠采用腺嘌呤灌胃法建立肾间质纤维化动物模型。M组给予腺嘌呤灌胃,第4～6周给予蒸馏水灌胃;S组前3周同时给予腺嘌呤及肾清饮（0．4ml／d）灌胃,每毫升肾清饮含生药2．4g,第4～6周给予肾清饮（0．4ml／d）灌胃;SL组和SH组前3周给予腺嘌呤灌胃,第4～6周给予肾清饮灌胃,剂量分别为0．4ml／d和1．2ml／d;B组前3周给予腺嘌呤灌胃,第4～6周给予盐酸苯那普利灌胃,剂量为10mg·kg^-1·d^-1;S＋B组前3周给予腺嘌呤灌胃,第4～6周同时给予盐酸贝那普利（10mg·kg^-1·d^-1）及肾清饮（0．4ml／d）灌胃。比较各组大鼠血肌酐（SCr）、尿素氮（BUN）、24h尿蛋白定量、血浆内皮素1（ET-1）水平、肾组织病理学表现、问质纤维化指数评分及肾组织Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和转化生长因子β1（TGF-β1）mRNA表达。结果与C组相比,M组SCr、BUN、24h尿蛋白定量和血浆ET-1水平及肾组织Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和转化生长因子B1（TGF-β1）mRNA表达显著升高（P〈0．01）;与M组相比,各药物干预组SCr、BUN、24h尿蛋白定量和血浆ET-1水平及肾组织Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和TGF-β1 mRNA表达显著降低（P〈0．01）,肾间质纤维化程度减轻（P〈0．05）;各药物干预组之间相比,s组SCr、BUN、24h尿蛋白定量和血浆ET-1水平及肾组织Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和TGF-131mRNA表达降低最显著（P〈0．01）。结论肾清饮可延缓肾间质纤维化,减少尿蛋白,改善肾功能。     

上调肾组织intermedin表达抑制单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化

目的观察上调肾组织intermedin(IMD)表达对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾间质纤维化的影响。 方法健康雄性Wistar大鼠随机分为假手术组、UUO组、IMD＋UUO组、空质粒＋UUO组。IMD＋UUO组和空质粒＋UUO组在输尿管结扎前分别将IMD-pcDNA3.1真核表达质粒和空质粒转入肾组织,real-time RT-PCR及免疫组化法检测转染效率。各组分别于术后7 d、14 d留取梗阻侧肾组织。HE、Masson染色观察肾组织病理变化;real-time RT-PCR检测肾组织中转化生长因子-β1(TGF-β1)、纤连蛋白(Fn1)的mRNA表达;Western印迹法检测Fn1的蛋白表达;免疫组化法检测TGF-β1的蛋白表达。 结果与假手术组相比,UUO组肾脏出现明显的病理改变,肾间质纤维化程度随梗阻时间延长加重(与假手术组比较,7 d, t＝11.927,P＝0.0003;14 d, t＝8.891,P＝0.0009);IMD＋UUO组肾脏病理改变及肾间质纤维化程度较同时间点UUO组明显减轻(7 d, t＝3.892,P＝0.018;14 d, t＝4.047,P＝0.016),而空质粒＋UUO组与UUO组无显著差别(7 d, t＝0.562,P＝0.604;14 d, t＝0.035,P＝0.974)。与同时间点假手术组相比,UUO组TGF-β1、Fn1的表达明显升高(TGF-β1 mRNA水平7 d, t＝4.432,P＝0.011;14 d, t＝4.873,P＝0.006;蛋白质水平7 d, t＝5.312,P＝0.006;14 d, t＝4.482,P＝0.011;Fn1 mRNA水平7 d, t＝6.053,P＝0.004;14 d, t＝7.345,P＝0.002;蛋白质水平7 d, t＝8.791,P＝0.009;14 d t＝8.027,P＝0.001);转染IMD质粒后Fn1的表达较同时间点UUO组明显下降(mRNA水平7 d, t＝3.103,P＝0.036;14 d, t＝2.913,P＝0.044;蛋白质水平7 d, t＝2.955,P＝0.042;14 d, t＝2.991,P＝0.040);而转染空质粒后Fn1的表达无明显变化(mRNA水平7 d, t＝0.095,P＝0.929;14 d, t＝0.158,P＝0.882;蛋白质水平7 d, t＝0.159,P＝0.881;14 d, t＝0.170,P＝0.874)。转染IMD和空质粒对TGF-β1的表达均无明显影响(转染IMD质粒mRNA水平7 d, t＝0.176,P＝0.869;14 d, t＝0.126,P＝0.906;蛋白质水平7 d, t＝0.198,P＝0.853;14 d, t＝0.196,P＝0.854;转染空质粒mRNA水平7 d, t＝0.100,P＝0.925;14 d, t＝0.097,P＝0.928;蛋白质水平7 d, t＝0.042,P＝0.968; 14 d, t＝0.060,P＝0.955)。 结论上调肾组织IMD的表达能明显减轻肾间质纤维化,但其作用不是通过直接抑制TGF-β1的表达实现的。     

异种肝细胞移植排斥机理的探讨

目的：探讨异种肝细胞排斥反应的机理,为治疗异种肝细胞移植排斥反应提供理论依据。方法,用D－氨基半乳糖腹腔内注射制成肝功能衰竭大鼠模型,并在其脾内植入豚鼠肝细胞,通过免疫组化方法,用抗大鼠IgM抗体和抗大鼠IgG抗体,抗大鼠CD4和抗大鼠CD8抗体与因排斥反应在大鼠脾 内可能产生的IgM,IgG抗体和CD4,CD8淋巴细胞结合,在移植后不同时间取受鼠脾脏标本,检测其内是否有IgM,IgG抗体和CD4,CD8淋巴细胞存在。结果：移植后12hIgM抗体存在,移植后24h大鼠脾内出现IgG抗体,同时有CD4^=和CD8^＋淋巴细胞,且在移植后1周大鼠脾内均可见上述4种物质。结论：体液和细胞免疫均参与异种肝细胞移植的排斥反应。     

不同移植途径对大鼠骨髓干细胞迁移至肝脏及分化的影响

目的 探讨门静脉、尾静脉和肝动脉3种移植途径下大鼠骨髓干细胞迁移至肝脏及向肝细胞分化的情况.方法 取30只正常SD大鼠,采用2-乙酰氨基芴和四氯化碳溶液灌胃,制成急性肝损伤模型,取其骨髓,以淋巴细胞分离液分离出干细胞,再用荧光染料(PKH26)进行标记.将此30只急性肝损伤大鼠分为3组,每组10只,门静脉输注组大鼠麻醉后,取腹部正中切口,经门静脉注入自体骨髓干细胞悬液0.4 ml(4×106个,下同);尾静脉输注组大鼠经尾静脉注人自体骨髓干细胞悬液0.4 ml;肝动脉输注组大鼠麻醉后,取腹部正中切口,将胃十二指肠动脉远端结扎,用动脉夹阻断肝总动脉血流,迅速在胃十二指肠动脉结扎点前方进针,注入自体骨髓干细胞悬液0.4 ml.骨髓干细胞移植后2周,取各组肝脏组织,制成冰冻切片,再以用异硫氰基荧光素标记的抗体进行免疫组织化学染色,检测其PKH26标记阳性细胞以及自蛋白和CK18的表达情况.结果 各组大鼠肝脏切片中均可见散在的PKH26染色阳性的红色荧光,门静脉输注组、尾静脉输注组及肝动脉输注组PKH26染色阳性细胞数分别为(58.0±2.67)个、(57.8±3.04)个及(58.3±3.52)个,三组间的差异无统计学意K(P>0.05).各组肝组织切片均广泛表达白蛋白及CK18(绿色荧光),荧光显微镜下可见同时发绿色荧光和红色荧光的细胞(绿色荧光与红色荧光相叠加而成的黄色荧光).结论 经门静脉、尾静脉和肝动脉注入的骨髓干细胞均能定植于肝脏,并在损伤的肝脏中分化为肝细胞,3种途径的效果相当.