白念珠菌对人急性单核细胞白血病细胞系产生肿瘤坏死因子α、活化信号分子p38MAPK 的影响

目的：探讨白念珠菌对人急性单核细胞白血病细胞系（THP-1细胞系）分泌肿瘤坏死因子α（TNF-α）和细胞内信号分子 p38丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）激活的影响。方法实时荧光定量 PCR 分析105、106 CFU/ml 灭活白念珠菌及阳性刺激物脂多糖刺激 THP-1细胞1、3、6 h 后 TNF-α mRNA 表达水平变化。40μg/L 地塞米松预先与 THP-1细胞共培养30 min 后,再用106 CFU/ml 白念珠菌、脂多糖刺激6 h 后检测TNF-α mRNA 表达水平。酶联免疫吸附法检测白念珠菌刺激 THP-1细胞24 h 后 TNF-α分泌量。免疫印迹法分析白念珠菌体外作用 THP-1细胞30 min、1 h 后 p38MAPK 和磷酸化 p38MAPK 的水平。结果105 CFU/ml 白念珠菌、106 CFU/ml 白念珠菌、脂多糖刺激 THP-1细胞组以及空白对照组 TNF-α mRNA 表达水平差异有统计学意义（F =110.98,P <0.001）;白念珠菌刺激1、3、6 h 之间差异也有统计学意义（F =701.680,P <0.001）,随培养时间延长,THP-1细胞 TNF-α mRNA 水平增高,呈时间依赖效应。106 CFU/ml 白念珠菌刺激 THP-1细胞后24 h,TNF-α蛋白水平（6385.70±533.99 ng/L）较空白对照组（147.10±0.53 ng/L）明显升高,差异有统计学意义（P <0.01）。106 CFU/ml 白念珠菌作用于 THP-1细胞30、60 min 后磷酸化 p38MAPK 蛋白水平也明显升高。40μg/L地塞米松预先与 THP-1细胞共培养30 min 后,再以106 CFU/ml 白念珠菌刺激6 h 后 TNF-α mRNA 表达水平（3.77±0.62）较未用地塞米松组（208.50±10.50）明显降低,地塞米松可阻断白念珠菌上调 TNF-α mRNA 水平。结论人 THP-1细胞体外与白念珠菌作用后激活信号分子 p38MAPK 并分泌 TNF-α,参与抗念珠菌感染固有免疫反应。     

烟曲霉对人THP-1细胞IL-6分泌和信号分子IκBɑ活化的影响

目的: 明确烟曲霉对THP-1细胞中IL-6水平和细胞内信号分子NF-κB抑制蛋白(IκBɑ)激活的影响。 方法：体外培养THP-1细胞,分为106 CFU/mL和107CFU/mL烟曲霉组,β-Glucan (100g/L)阳性对照组,空白对照组, RT-PCR和ELISA检测各组IL-6 mRNA和蛋白表达水平。免疫印迹法检测IκBɑ和磷酸化IκBɑ水平。结果: 106 CFU/mLIL-6 mRNA水平低于107 CFU/mL烟曲霉组,选择107 CFU/mL烟曲霉组作为实验浓度。107 CFU/mL烟曲霉组IL-6 mRNA和蛋白浓度分别为209.38 ± 25.35和(879.86±32.35) ng/L高于空白对照组的1.19 ±0.36和(10.67±0.17)ng/L,差异均有统计学意义(均P<0.05)。烟曲霉作用于THP-1细胞后磷酸化IκBɑ蛋白水平显著升高。NF-κB信号通路抑制剂BAY 11-7082可显著降低烟曲霉组IL-6 mRNA的 表达。 结论 烟曲霉可能通过激活THP-1细胞中的IκBɑ刺激IL-6分泌。     

烟曲霉对人THP-1细胞中IL-6分泌和信号分子IκBα活化的影响

目的:明确烟曲霉对THP-1细胞中IL-6水平和细胞内信号分子NF-κB抑制蛋白(IκBα)激活的影响。方法:体外培养THP-1细胞,分为10~6CFU/mL和10~7CFU/mL烟曲霉组,β-Glucan(100g/L)阳性对照组和空白对照组,RT-PCR和ELISA检测各组IL-6 mRNA和蛋白表达水平,免疫印迹法检测IκBα和磷酸化IκBα水平。结果:10~6 CFU/mL IL-6 mRNA水平低于10~7CFU/mL烟曲霉组,选择10~7CFU/mL烟曲霉组作为实验浓度。10~7CFU/mL烟曲霉组IL-6 mRNA和蛋白浓度分别为(209.38±25.35)ng/L和(879.86±32.35)ng/L高于空白对照组的(1.19±0.36)和(10.67±0.17)ng/L,差异均有统计学意义(均P0.05)。烟曲霉作用于THP-1细胞后磷酸化IκBα蛋白水平显著升高。NF-κB信号通路抑制剂BAY 11-7082可显著降低烟曲霉组IL-6 mRNA的表达。结论:烟曲霉可能通过激活THP-1细胞中的IκBα刺激IL-6分泌。     

烟曲霉对人急性单核细胞白血病细胞系产生肿瘤坏死因子α、活化信号分子p38丝裂原活化蛋白激酶的影响

目的 探讨烟曲霉对人急性单核细胞白血病细胞系THP-1细胞分泌肿瘤坏死因子α（TNF-α）和细胞内信号分子p38丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）激活的影响。方法 106、107 CFU/ml烟曲霉悬液（106和107 CFU/ml烟曲霉组）、100 mg/L阳性刺激物β-葡聚糖（β-葡聚糖组）及培养基（空白对照组）分别与2 × 105/ml THP-1细胞共孵育1、3、6 h,实时荧光定量PCR分析各组THP-1细胞TNF-α mRNA表达水平。107 CFU/ml烟曲霉悬液（烟曲霉组）、β-葡聚糖（β-葡聚糖组）及培养基分别作用THP-1细胞24 h,酶联免疫吸附法检测各组培养上清液中TNF-α含量。Western印迹法检测107 CFU/ml烟曲霉体外作用THP-1细胞后15、30、60 min p38MAPK和磷酸化p38MAPK水平。采用20 μmol/L SB203580预先与THP-1细胞共培养2 h后,再用107 CFU/ml烟曲霉、β-葡聚糖或培养基作用6 h,检测各组THP-1细胞TNF-α mRNA表达水平变化。结果 106、107 CFU/ml烟曲霉组、100 mg/L β-葡聚糖组及空白对照组TNF-α mRNA表达水平差异有统计学意义（F = 110.983,P < 0.001）,且随培养时间延长,THP-1细胞TNF-α mRNA水平增高（F = 701.680,P < 0.001）。107 CFU/ml烟曲霉刺激THP-1细胞24 h后,TNF-α蛋白水平（6 236.30 ± 437.12 ng/L）较空白对照组（132.10 ± 0.61 ng/L）明显升高（P < 0.01）。107 CFU/ml烟曲霉作用THP-1细胞30 min后磷酸化p38MAPK蛋白水平明显升高,60 min时开始减弱。SB203580阻断的烟曲霉组TNF-α mRNA表达水平（3.83 ± 0.62）较未阻断的烟曲霉组（187.23 ± 21.62）明显降低。结论 人THP-1细胞体外与烟曲霉作用后激活信号分子p38MAPK并分泌TNF-α,表明单核细胞可能参与抗烟曲霉感染固有免疫反应。     

中波紫外线对角质形成细胞NF-κB p65及其抑制因子IκBα表达的影响北大核心CSCD

目的 探讨不同剂量中波紫外线（UVB）照射对体外培养的人皮肤角质形成细胞NF-κB p65及其抑制因子IκBα表达的调控效应.方法 4.5、10及50 mJ/cm2UVB照射人角质形成细胞系及人原代角质形成细胞,设置未经照射的对照组,在照射后4h使用Western印迹法测定细胞总蛋白中IκBα及NF-κB p65的表达水平.并对人原代角质形成细胞进行50 mJ/cm2UVB照射,照射后继续培养2、4、8、12h,分别测定4个时间点IκBα及NF-κB p65的表达水平.蛋白条带密度分析使用Quantity One（R）4.6.8软件,分别计算IKKβ、IκBα、NF-κB p65以及磷酸化IKKα/β、IκBα、NF-κB p65和β肌动蛋白条带吸光度和面积的乘积,再分别计算IKKβ、IκBα和NF-κB p65与β肌动蛋白的比值,取3次实验结果.结果 4.5和10 mJ/cm2 UVB照射后4h,相对于对照组细胞,人角质形成细胞系及人原代角质形成细胞总蛋白中IKKβ、IκBα、NF-κB p65表达水平均无明显变化（P＞ 0.05）;50 mJ/cm2 UVB照射后4h,细胞系及原代角质形成细胞中IKKβ表达水平均无明显变化（P＞0.05）;原代角质形成细胞IκBα表达水平（0.173±0.055）较对照组细胞（0.462±0.142）显著降低（t=5.64,P＜ 0.05）,NF-κB p65表达水平（0.076±0.030）也较对照组细胞（0.120±0.034）降低（t=5.40,P＜0.05）;角质形成细胞IκBα表达水平（0.160±0.046）较对照组细胞（0.398±0.136）轻度下调（t=4.37,P＜0.05）,NF-κB p65的表达水平无明显变化（P＞0.05）.50 mJ/cm2 UVB照射原代角质形成细胞后2h,IκBα表达水平（0.140±0.034）相对于对照组细胞（0.208±0.031）开始下调（t=17.55,P＜ 0.05）,并随照射后时间延长下调效应更为显著;NF-κB p65的表达水平在2h和4h时较对照细胞无明显变化（P＞0.05）,8h时（1.162±0.345）较对照细胞（1.235±0.349）表达水平下调（t=36.67,P＜0.05）,12 h时（1.061±0.246）较对照细胞（1.390±0.226）仍下调（t=8.71,P＜0.05）,随着时间的推进下调效应无明显改变;磷酸化IKKα/β（ser176/180）、IKKβ、磷酸化IκBα（ser32）、磷酸化NF-κB p65（ser536）表达量均无明显改变（P＞0.05）.结论 高剂量（50 mJ/cm2）UVB照射可显著抑制人原代角质形成细胞IκBα表达,同时轻度抑制NF-κB p65蛋白的表达,提示可能存在UVB照射人原代角质形成细胞引起NF-κB p65活化的另一种通路.     

申克孢子丝菌酵母相对人急性单核细胞白血病细胞NF-κB信号通路及TNF-α的影响

目的:明确申克孢子丝菌酵母相对人急性单核细胞白血病细胞(THP-1)NF-κB信号通路激活和肿瘤坏死因子α(TNF-α)分泌的影响。方法:实时荧光定量PCR分析申克孢子丝菌酵母相刺激THP-1细胞TNF-αmRNA的表达,酶联免疫吸附法检测TNF-α分泌量,免疫印迹法分析申克孢子丝菌酵母相体外作用于THP-1细胞后IκBα和磷酸化IκBα的水平,免疫荧光法观察NF-κB-p65核转位。同时设置地塞米松(NF-κB抑制剂)抑制组,并检测100 n M地塞米松预处理THP-1细胞后TNF-αmRNA水平的变化。结果:申克孢子丝菌酵母相刺激THP-1细胞后6 hTNF-αmRNA水平显著高于空白对照组(P0.001)。申克孢子丝菌酵母相刺激THP-1细胞后24 h,TNF-α蛋白水平为(4610.419±121.501)pg/mL,显著高于空白对照组(186.964±98.073)pg/m L,差异具有统计学意义(P0.001)。申克孢子丝菌酵母相作用THP-1细胞后30~60 min,磷酸化IκBα蛋白水平显著升高,为时间依赖性。申克孢子丝菌酵母相组细胞核内NF-κB-p65较空白对照组荧光强度增强。100 nM地塞米松预处理各组THP-1细胞后,TNF-αmRNA水平较前明显降低。结论:人THP-1细胞体外与申克孢子丝菌酵母相作用后激活NF-κB信号通路并上调TNF-α分泌。     

两性霉素B对人THP-1细胞产生肿瘤坏死因子α、白细胞介素8及p38MAPK活化的影响

目的 探讨两性霉素B对人急性单核细胞白血病细胞系THP-1细胞系分泌肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素8(IL-8)以及p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)活化的影响.方法 将THP-1细胞分为空白对照组、两性霉素B组(分别加入2、4、8mg/L两性霉素B处理);阳性对照组(用100 μg/L β葡聚糖或者100 mg/L脂多糖处理).实时荧光定量PCR分析不同刺激物和THP-1细胞作用一定时间后TNF-α、IL-8 mRNA表达水平.酶联免疫吸附试验检测8 mg/L两性霉素B刺激THP-1细胞24 h后上清液中TNF-α分泌量.Western印迹检测8 mg/L两性霉素B作用THP-1细胞后p38MAPK和磷酸化p38MAPK的水平.结果 2、4、8 mg/L两性霉素B刺激6h,TNF-α mRNA水平分别为7.55±1.17、19.47±2.91、57.22±0.65,与空白对照组比较,差异均有统计学意义(P＜ 0.01、0.001、0.001).IL-8mRNA水平分别为2.98±0.04、5.22±1.35、11.82±1.66,与空白对照组比较,差异均有统计学意义(P＜ 0.01、0.001、0.001).8 mg/L两性霉素B刺激THP-1细胞1、3、6h后TNF-αmRNA水平分别为8.61±0.30、10.75±0.08、56.98±2.43,与空白对照组比较,差异均有统计学意义(P＜ 0.05、0.01、0.001).IL-8 mRNA水平分别为2.63±0.28、5.35±0.98、11.73±1.18,与空白对照组比较,差异均有统计学意义(P＜ 0.05、0.01、0.001).8mg/L两性霉素B刺激THP-1细胞24 h上清液中TNF-α蛋白水平为(4039.06±223.87) ng/L,与空白对照组比较差异有统计学意义(P＜ 0.001).结论 两性霉素B体外可促进人THP-1细胞p38MAPK蛋白磷酸化及TNF-α和IL-8分泌,具有免疫调节作用.     

申克孢子丝菌酵母相对人THP-1巨噬细胞样细胞p38MAPK激活及白细胞介素6表达的影响

目的 探讨申克孢子丝菌酵母相对人急性单核细胞白血病细胞(THP-1)巨噬细胞样细胞p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)活化及白细胞介素6(IL-6)表达的影响.方法 实时荧光定量反转录PCR分析申克孢子丝菌酵母相刺激THP-1巨噬细胞样细胞3、6h后IL-6 mRNA表达水平变化,酶联免疫吸附法检测刺激24 h后IL-6分泌量;Western印迹法分析2×106 CFU/ml申克孢子丝菌酵母相体外作用于THP-1巨噬细胞样细胞30 min和60 min后p38MAPK磷酸化水平的变化,同时检测100 nmol/L地塞米松(p38MAPK抑制剂)预处理THP-1巨噬细胞样细胞30 min后p38MAPK磷酸化水平及IL-6 mRNA表达水平的变化.采用SPSS19.0统计软件,进行多因素方差分析、单因素方差分析,组间多重比较采用LSD检验.结果 刺激THP-1巨噬细胞样细胞3h后,酵母相组、凝胶多糖组、空白对照组IL-6 mRNA表达水平分别为56.81±7.36、26.69±1.22、0.97±0.05,刺激6h后分别为378.03±16.67、276.24±39.13、1.02±0.04,组间差异有统计学意义(F=5 552.22,P＜0.001).申克孢子丝菌酵母相刺激6h后IL-6 mRNA表达高于刺激3h后(q=16.74,P＜0.001),申克孢子丝菌酵母相与THP-1巨噬细胞样细胞共孵育24 h后,酵母相组、凝胶多糖组及空白组细胞上清液中IL-6浓度分别为(59.96±18.16)、(91.01±17.27)、(5.50±2.30) pg/L,组间差异有统计学意义(F=26.62,P＜0.01);酵母相组高于空白对照组(P＜ 0.01).地塞米松处理后,酵母相组IL-6 mRNA表达水平(4.46±1.03)低于未用地塞米松处理组(493.52±113.87,P＜0.001).申克孢子丝菌酵母相作用THP-1巨噬细胞样细胞30、60 min后,磷酸化p38MAPK蛋白相对表达量均高于空白对照组(P＜0.01).地塞米松预处理THP-1巨噬细胞样细胞后,磷酸化p38MAPK水平低于未用地塞米松处理组,差异有统计学意义(q=10.81,P＜ 0.01).结论 人THP-1巨噬细胞样细胞体外与申克孢子丝菌酵母相作用后,通过激活p38MAPK信号通路促进IL-6表达.     

姜黄素对人单核细胞株THP-1细胞NF—κB、TNF-α和IL-1βmRNA表达的影响

目的：评价姜黄素对人单核细胞株THP-1中炎症相关因子NF—κB、TNF-α和IL-1βmRNA表达的影响。方法：采用佛波酯（TPA）构建鼠耳肿胀急性炎症反应模型,采用不同浓度的姜黄素处理THP-1细胞,1μg／mL脂多糖（LPS）刺激细胞4h,提取细胞总RNA。用RT—PCR方法检测NF-κB、TNF-α和IL-1βmRNA的表达。结果：局部外用0．8和1．6μmol的姜黄素及腹腔注射50mg／kg和100mg／kg姜黄素,对鼠耳肿胀急性炎症反应均有明显抑制作用。浓度为50μg／mL和25μg/mL。的姜黄素可以明显抑制THP-1细胞中LPS诱导的NF—κB、TNF—α和IL-1βmRNA的表达。结论：姜黄素对炎症因子有抑制作用。     

NFKBIZ基因表达在银屑病发病中的作用机制分析

目的 旨在分析B细胞K轻肽基因增强子核因子抑制因子（NFKBIZ）基因表达在银屑病发病中的作用机制。方法 采用白细胞介素-17A/F(IL-17A/F)异源二聚体或肿瘤坏死因子-α(TNF-α)刺激培养的人角质细胞进行实验,并转染含有睫状肌核转录因子κB抑制物ζ基因表达的小干扰RNA(IκBζsiRNA)的细胞沉默IκBζ。收集细胞或上清液,进行定量聚合酶链反应（qPCR）、酶联免疫吸附测定（ELISA）以及蛋白质印迹（WB）检测特定的银屑病相关基因和蛋白质（NFKBIZ/IκBζ,CCL20,DEFB4/hBD2,S100A7,IL-8和CHI3L1）,并通过将人角质细胞与p38有丝分裂原活化蛋白激酶（MAPK）抑制剂（SB202190）,ERK1/2抑制剂（PD98059）,JNK1/2抑制剂（SP600125）或核转录因子-κB(NF-κB)抑制剂（SC-514）预孵育,以此评估所涉及的信号通路。结果 单独的IL-17A/F或联合TNF-α都能显著诱导刺激1.5 h、3 h、6 h和24 h的人角质细胞NFKBIZ mRNA表达,当IL-17A/F异源二聚体的浓度分别为10、10...     

实验性小鼠系统性念球菌病TNFα水平的测定

本文通过测定小鼠脾细胞在感染不同时间产生TNFα水平来探讨宿主在急性系统性念珠菌病中的保护机制。以致死量（106个细胞／ml）白念珠菌从尾静脉感染小鼠，用放射免疫法检测感染后3天和6天，小鼠脾细胞与刀豆蛋白A（ConA，10μg／ml）孵育上清液中TNFα含量，同时用平皿稀释法测定感染小鼠肾脏菌落形成单位（CFU），并计算感染小鼠平均存活时间（MST）。结果表明，感染后3天和6天，TNFα含量分别为306±73pg／ml和218±60pg／ml，均明显高于对照组（P＜0．01）；CFU分别为（4．41±1．16）×103／ml和（28．4±8．70）×103／ml；MST为9．17天。结果提示TNFα可能参与了抗白念珠菌感染的早期免疫反应，对机体起保护作用。     

C型凝集素1受体参与人中性粒细胞体外杀伤白念珠菌活性的实验研究

【摘要】 目的 探讨人中性粒细胞能否通过C型凝集素1受体（dectin-1）识别白念珠菌细胞壁不溶性β葡聚糖来介导体外杀伤白念珠菌的活性。 方法 100 mg/L β葡聚糖体外作用于中性粒细胞1、6、24 h后,实时荧光定量逆转录PCR分析dectin-1和Toll样受体2 mRNA表达水平。100 mg/L β葡聚糖体外分别刺激中性粒细胞15 min、2 h、6 h,或先用dectin-1抑制剂昆布多糖100 mg/L和50 mg/L预处理30 min后,再予100 mg/L β葡聚糖刺激2 h,微量培养板荧光分析法检测中性粒细胞H2O2释放水平。昆布多糖预处理的中性粒细胞与白念珠菌体外共培养后,检测菌落形成单位（CFU）。结果 β葡聚糖作用中性粒细胞1、6、24 h后,dectin-1 mRNA水平分别为2.8195 ± 0.1669、5.4859 ± 0.7244、3.6041 ± 0.5372,均明显高于空白对照组（均P < 0.01）。β葡聚糖刺激中性粒细胞15 min后H2O2水平为（64.55 ± 15.67） μmol/L,2 h时为（290.34 ± 30.56） μmol/L,6 h时为（208.54 ± 26.88） μmol/L,与空白对照组（22.05 ± 3.99） μmol/L比较,差异均有统计学意义（均P < 0.01）;100 mg/L和50 mg/L昆布多糖预处理组分别为（80.45 ± 22.41） μmol/L和（130.42 ± 44.55） μmol/L,与β葡聚糖刺激组相比,分别降低了73%和45%,差异均有统计学意义（P < 0.01）。昆布多糖能明显抑制中性粒细胞体外杀伤白念珠菌的活性（均P < 0.01）。 结论 Dectin-1参与人中性粒细胞分泌H2O2以及对白念珠菌杀灭活性,为过继性粒细胞转输治疗系统性念珠菌感染提供初步依据。 【关键词】 念珠菌,白色; 中性白细胞; β葡聚糖类; 外源凝集素类,C型; 过氧化氢     

姜黄素对THP-1细胞Toll样受体4信号传导通路中相关因子mRNA水平的影响

目的 研究姜黄素对人单核细胞株THP-1 Toll样受体4(TLR4)信号传导通路中相关因子mRNA水平的影响.方法 用不同浓度姜黄素(50、25、12.5 mg/L)预处理THP-1细胞12 h,0.043 mg/L地塞米松处理组作为阳性对照,继而用1 mg/L脂多糖(LPS)刺激诱导细胞4 h,以不做处理的THP-1作为阴性对照,仅用1 mg/L LPS刺激的THP-1作为LPS刺激组.提取细胞总RNA,用RT-PCR方法检测TLR4信号传导通路中TNF受体相关因子(TRAF)6、IL-1受体相关激酶(IRAK1)、核因子κB(NF-κB)mRNA的表达情况.结果 未经处理的THP-1细胞经LPS刺激4 h,可以显著提高TRAF6、IRAK1、NFκB mRNA的表达,与阴性对照组比较,t值分别为38.69、39.13、23.99(P<0.01). 50、25 mg/L姜黄素可以明显抑制THP-1细胞经LPS诱导后TRAF6、IRAK1、NF-κB mRNA的表达(P值均<0.01),抑制率均在50%以上.结论 一定浓度的姜黄素可以抑制LPS诱导后THP-1细胞TRAF6、IRAK1、NF-κB mRNA的表达,表明姜黄素对TLR4信号传导通路中相关因子mRNA水平有调节作用.     

白念珠菌诱导小鼠骨髓来源巨噬细胞焦亡的初步研究

【摘要】 目的 探讨白念珠菌对小鼠骨髓来源巨噬细胞（BMDM）焦亡的影响。方法 通过活细胞工作站实时观察白念珠菌［感染复数（MOI） = 50,下同］体外诱导BMDM后是否发生焦亡;将BMDM分为对照组、白念珠菌组,分别用磷酸盐缓冲液和白念珠菌酵母诱导BMDM 6 h,实时荧光定量PCR检测NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3 （NLRP3）、白细胞介素1β （IL-1β）、IL-18 mRNA表达水平,Western印迹法检测NLRP3、胱天蛋白酶1（Caspase-1）、Gasdermin D（GSDMD）的表达及剪切水平。用白念珠菌诱导BMDM不同时间（0、10、15、20及25 h）后,酶联免疫吸附试验检测IL-1β、IL-18分泌水平。白念珠菌体外诱导野生型（WT）BMDM及 GSDMD 敲除（KO）BMDM 15 min,采用流式细胞仪比较WT、GSDMD KO BMDM对白念珠菌的吞噬率;诱导6 h后,采用流式细胞仪及乳酸脱氢酶（LDH）释放法分别检测WT、GSDMD KO BMDM的死亡率。分别设置空白对照组、对照组、样品最大酶活性对照孔组、IL-1β组、白念珠菌组、IL-1β + 白念珠菌组,用IL-1β和/或白念珠菌酵母诱导BMDM后用LDH释放法分析WT及GSDMD KO BMDM死亡率。采用非配对t检验、Kruskal-Wallis 检验、方差分析等统计学方法进行统计分析。结果 白念珠菌体外诱导BMDM后细胞可出现气球样变及出泡现象,证实焦亡发生;与对照组相比,白念珠菌组诱导BMDM 6 h后NLRP3、IL-1β的mRNA表达水平明显升高（t = 13.02、17.51,P = 或＜0.001）,而IL-18 mRNA表达水平无明显变化（P = 0.486）,且白念珠菌诱导可引起炎症小体NLRP3表达增多及Caspase-1、GSDMD剪切。白念珠菌诱导BMDM不同时间（0、10、15、20及25 h）后IL-1β的分泌水平随时间逐渐升高（H = 12.90,P = 0.012）,而IL-18的分泌水平无明显变化（F = 0.48,P = 0.753）,且GSDMD KO组BMDM的IL-1β分泌水平低于WT BMDM组（F = 24.22,P = 0.008）。白念珠菌体外诱导15 min后,GSDMD KO BMDM［（50.3 ± 1.10）%］对白念珠菌的吞噬率低于WT BMDM［（58.53 ± 1.19）%,t = 5.09,P = 0.007］;白念珠菌体外诱导6 h后,流式细胞仪检测显示GSDMD KO组BMDM的死亡率（38.40% ± 0.50%）高于WT组BMDM（34.37% ± 0.52%）,t = 4.72,P = 0.009;LDH检测同样显示GSDMD KO BMDM的死亡率（22.52% ± 0.18%）高于WT BMDM（12.48% ± 0.15%）,t = 42.36,P＜0.001;IL-1β预处理后予白念珠菌体外诱导的WT BMDM及GSDMD KO BMDM 的细胞死亡率均较单纯白念珠菌诱导组降低（均P＜0.001）。结论 白念珠菌可诱导BMDM发生焦亡,焦亡的发生可促进IL-1β释放,并通过提高巨噬细胞的免疫活性,降低巨噬细胞死亡率。     

复发性念珠菌颈部淋巴结炎1例易感基因筛查及免疫学研究

【摘要】 目的 探究1例复发性念珠菌性颈部淋巴结炎患者的遗传学病因及抗真菌免疫功能。方法 采用二代测序技术筛查患者及父母真菌病易感基因,提取患者及6例健康对照者外周血单个核细胞（PBMC）以及中性粒细胞,与白念珠菌进行体外共培养,采用Western印迹检测患者PBMC中胱天蛋白募集域蛋白9（CARD9）表达水平,酶联免疫吸附试验检测肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素（IL）-6、IL-17A、IL-1β和粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）的分泌水平,菌落计数法检测中性粒细胞处理后白念珠菌存活率。两组间均数比较采用t检验。结果 患者CARD9基因存在2号外显子c.68C>A（p.S23X）和6号外显子c.820dupG（p.D274Gfs*61）复合杂合突变,两突变分别来自其父母。Western印迹显示,健康对照组PBMC中CARD9蛋白相对表达水平为0.41 ± 0.07,而患者表达缺如。热灭活白念珠菌孢子刺激后,患者PBMC的TNF-α、IL-6、IL-17A、IL-1β和GM-CSF分泌水平均低于健康对照组（P < 0.001）。体外培养30、120 min时,与患者中性粒细胞共培养的白念珠菌存活率（78.00%、74.00%）均高于健康对照（70.91% ± 1.75%、34.55% ± 5.35%）,差异有统计学意义（t值分别为3.743、6.988,P <0.05）。结论 1例复发性念珠菌颈部淋巴结炎患者CARD9基因存在复合杂合突变,导致CARD9蛋白表达缺如,该患者存在抗白念珠菌免疫功能缺陷。     

棕榈酸对HaCaT细胞增殖及产生炎症因子的影响

目的 探讨棕榈酸对HaCaT细胞增殖及产生炎症因子的影响.方法 将不同浓度棕榈酸(0、25、50、75、100、125、150、175、200 μmol/L)刺激HaCaT细胞3～ 24h,用细胞计数试剂盒CCK8检测HaCaT细胞增殖情况.选取一定浓度棕榈酸(0、75、100、125、150 μmol/L)刺激HaCaT细胞24 h后,分别用免疫组化荧光染色法在共聚焦显微镜下观察核因子(NF)-κB p65细胞核转位情况.酶联免疫吸附试验检测细胞培养上清液中白介素6(IL-6)分泌量,实时PCR法检测过氧化物酶增殖体激活受体α(PPARα)mRNA及IL-6mRNA的表达,免疫印迹法检测PPARα、总蛋白NF-κB p65及核蛋白NF-κB p65表达量.用GraphPad Prism 5.0软件进行单因素方差分析.结果 与空白对照组相比,50～175 μmol/L棕榈酸均可刺激HaCaT细胞增殖(均P＜ 0.05).75、100、125、150 μmol/L棕榈酸可剂量依赖性增强HaCaT细胞NF-κB p65向细胞核内转位,各浓度组核蛋白的相对表达量分别为0.4536±0.0173、0.5184±0.0206、0.5333±0.0231、0.6160±0.0297,与空白对照组相比,差异有统计学意义(均P＜0.01).PPARα mRNA及其蛋白产物、IL-6 mRNA及分泌量呈剂量依赖性增加,各浓度组IL-6分泌量分别为(31.5677±0.2268)、(32.3773±0.4156)、(32.9837±0.0029)、(33.6890±0.0936) ng/L,与空白对照组相比,差异有统计学意义(P＜0.05或0.01).结论 棕榈酸可促进HaCaT细胞增殖,并在一定浓度内剂量依赖性增强NF-κB核转移、IL-6及PPARα表达量,在激活和促进相关炎症因子表达中起到一定作用.     

白藜芦醇对长波紫外线照射的人成纤维细胞的保护作用北大核心CSCD

目的探讨白藜芦醇对长波紫外线（uVA）照射的人成纤维细胞的保护作用及其机制。方法0.01、0．1、0．5、1．0mmol／L白藜芦醇分别处理正常人成纤维细胞6、24、48、72h后,采用MTT法检测增殖活性。10J,cm：uvA照射细胞后立即加入0．01、0．1mmol／L白藜芦醇,继续培养6、24、48、72h,MTT法检测细胞的增殖活性,EusA法检测上清液中白介素（IL）-1α、IL-1β、IL-6蛋白水平。结果0．5、1．0mmol/L白藜芦醇对正常人成纤维细胞增殖活性有明显抑制作用,72h时抑制作用最为显著,其细胞存活率分别为31．99％±8．29％和21．15％±5．76％。单独uvA照射后6h,细胞存活率为78．01％±12．74％,直至照射后72h细胞存活率（80．64％±36．12％）仍低于空白对照组（99．95％±12．23％）;照射后6h,培养上清液中IL-1α、IL-1β、IL-6蛋白水平分别升高至（58．39±0．67）ng／L、（1294．37±92．51）pg/L、（197．81±6．37）ng/L,直至照射后72h,IL-1B、IL-6蛋白分泌量仍处于高水平（1236．76±56．49）pg/L、（215．65±3．78）n∥L。成纤维细胞经uVA照射加白藜芦醇后,与单独uvA照射组比较,0．01mmol／L白藜芦醇组在各观察点均使细胞存活率升高,作用72h时细胞存活率升高至91．93％±12．90％,并持续抑制细胞分泌的IL-1α蛋白至48h（43．89±3．60ng,L）、IL-1β蛋白至72h（1110．12±51．91pg/L）、IL-6蛋白至72h（201．94±4．71ng／L）;而0．1mmol／L白藜芦醇组在各观察点对细胞存活率均无明显影响,仅持续抑制IL-6蛋白水平至24h（182．90±6．67ng／L）。结论0．01mml/L白藜芦醇对uVA照射损伤的成纤维细胞有保护作用,其机制可能与白藜芦醇抑制uVA诱导的细胞因子IL-1α、IL-1β、IL-6分泌有关。     

姜黄素对人单核细胞株THP-1细胞NF-κB、TNF-α和IL-1β mRNA表达的影响

目的: 评价姜黄素对人单核细胞株THP-1中炎症相关因子NF-κB、TNF-α和IL-1β mRNA表达的影响.方法: 采用佛波酯(TPA)构建鼠耳肿胀急性炎症反应模型,采用不同浓度的姜黄素处理THP-1细胞,1 μg/mL脂多糖(LPS)刺激细胞4 h,提取细胞总RNA.用RT-PCR方法检测NF-κB、TNF-α和IL-1β mRNA的表达.结果: 局部外用0.8和1.6 μmol的姜黄素及腹腔注射50 mg/kg和100 mg/kg姜黄素,对鼠耳肿胀急性炎症反应均有明显抑制作用.浓度为50 μg/mL和25 μg/mL的姜黄素可以明显抑制THP-1细胞中LPS诱导的NF-κB、TNF-α和IL-1β mRNA的表达.结论: 姜黄素对炎症因子有抑制作用.     

不同来源痤疮丙酸杆菌培养上清对THP-1细胞产生TNF-α、IL-12的影响

目的：探讨不同来源痤疮丙酸杆菌培养上清对单核巨噬细胞株THP-1细胞产生TNF—α、IL-12的影响，明确外伤后细菌性致死性肉芽肿分离菌株与标准株刺激机体产生细胞因子的差别。方法：采用ELISA法、RT—PCR的方法观察标准株与从外伤后细菌性致死性肉芽肿分离株的培养上清对THP-1细胞产生TNF—α和IL-12的影响。结果：（1）痤疮丙酸杆菌培养滤液可促进THP-1细胞产生TNF—α和IL-12，和空白对照组相比有显著性差异（P〈0．05），标准株较临床株有较强的刺激THP-1产生TNF—α的能力；（2）所有培养上清均能促进THP-1细胞产生IL-12，标准株较外伤后细菌性致死性肉芽肿分离株培养滤液的刺激THP-1细胞产生IL-12作用弱（P〈0．05）。结论：不同来源痤疮丙酸杆菌培养上清均可促进THP-1细胞产生TNF—α、IL-12，但其能力不同，说明不同来源痤疮丙酸杆菌刺激机体早期免疫应答水平不同。     

梅毒螺旋体膜蛋白Tpp47对血管内皮细胞黏附功能影响的实验研究

【摘要】 目的 探讨梅毒螺旋体膜蛋白Tpp47对血管内皮细胞的作用。 方法 利用基因工程技术重组合成的梅毒螺旋体膜蛋白Tpp47及脂多糖分别刺激人脐静脉内皮细胞（HUVEC）,ELISA检测上清中细胞间黏附分子1（ICAM-1）及E选择素的水平;荧光定量PCR检测HUVEC中ICAM-1及E选择素 mRNA的转录水平;MTT法检测HUVEC增殖水平;将重组蛋白Tpp47及脂多糖预处理的HUVEC与钙黄绿素AM标记的THP-1细胞共培养,荧光倒置显微镜下观察HUVEC与THP-1细胞的黏附情况。 结果 梅毒螺旋体膜重组蛋白Tpp47刺激HUVEC后,其分泌的黏附分子ICAM-1（1.28 ± 0.03）及E选择素（0.51 ± 0.01）水平显著提高,与空白对照组（0.90 ± 0.01与0.13 ± 0.03）比较,差异均有统计学意义（t值分别为18.28和18.19,均P ＜ 0.05）;将重组蛋白Tpp47刺激24 h后的HUVEC与THP-1细胞共培养,HUVEC与THP-1细胞的黏附率为56.1% ± 1.9%,较空白对照组（16.3% ± 2.1%）明显提高,差异有统计学意义（χ2 = 12.65,P ＜ 0.05）。MTT试验结果显示,重组蛋白Tpp47刺激HUVEC后,其增殖率（19.5% ± 1.7%）高于空白对照组（10.0% ± 3.1%）,差异有统计学意义（χ2 = 3.92,P ＜ 0.05）;较脂多糖低（41.2% ± 3.7%）,差异有统计学意义（χ2 = 10.42,P ＜ 0.05）。 结论 梅毒螺旋体膜重组蛋白Tpp47可体外上调HUVEC与THP-1的黏附能力及促进HUVEC增殖,可能在梅毒的发病中起一定作用。