白念珠菌ERG11基因突变与氟康唑耐药性的关系

探讨白念珠菌氟康唑作用的靶酶编码基因 (ERG11)突变与耐药性的关系。分离抽提分别对氟康唑敏感和耐药的白念珠菌基因组 DNA,根据 ERG11编码序列设计一对上下游引物 ,对靶酶活性中心血色素结合区和疏水端螺旋区的基因表达序列进行 PCR扩增 ,经 DNA测序比较敏感和耐药菌株的碱基差异。结果 :6株氟康唑耐药白念珠菌此段序列有 5个位点发生突变 ,其中 5株第 1344 bp位点 G→A的突变致所编码的第 44 8个氨基酸由甘氨酸 (G)变为谷氨酸 (E)。结论 :ERG11基因突变致所编码的氨基酸改变与氟康唑耐药有关。     

临床白念珠菌耐药性与ERG3基因突变及表达的关系

目的明确白念珠菌ERG3基因突变及高表达对抗真菌药物耐药的调控作用。方法用微量稀释法测得36株临床分离白念珠菌的最小抑菌浓度（MIC）;提取基因组DNA,PCR基因扩增,将扩增后的产物纯化测序,并与genbank中已知的标准序列（AF069572）进行BLAST比对分析;采用实时定量PCR（RT—PCR）方法,对白念珠菌ERG3基因表达的mRNA进行相对定量分析。结果36株白念珠菌ERG3基因序列共发现6个突变位点,其中19株发生同义突变,突变位点为T51C、T432C、T381C、C438T、T1044C;2株发生错义突变,突变位点为C1052T,并产生耐药;白念珠菌对氟康唑耐药组ERG3高表达的发生率高于敏感组（P〈0．05）。结论ERG3基因突变及高表达增加了抗真菌药物的耐药性。同时有多种调节机制共同参与白念珠菌耐药性的形成。     

念珠菌ERG11基因耐药机制研究进展

近年来,随着医疗技术与经济的发展,侵袭性真菌感染尤其是念珠菌感染病例持续增高。由于唑类药物的广泛应用,临床念珠菌耐药菌株不断出现,使得对耐药机制的深入研究迫在眉睫。在念珠菌对唑类药物的耐药机制中,麦角甾醇合成通路上ERG11基因的突变和高表达被视为念珠菌最重要的耐药机制之一,而ERG11基因突变和高表达可能是多种机制共同作用的结果。     

生殖道感染白色假丝酵母菌药敏性研究及耐药基因ERG11突变情况分析

目的 分析白色假丝酵母菌临床分离株对氟康唑的耐药性以及耐氟康唑白色假丝酵母菌ERG11基因突变的情况.方法 收集2016年1月-2017年1月临床生殖道假丝酵母菌感染患者生殖道分泌物标本,培养并进行菌种鉴定,微量稀释法进行体外药敏性实验对氟康唑靶酶基因ERG11进行PCR扩增、测序,与已知序列进行对比分析.结果 815例样本中发现假丝酵母菌感染213例,感染率26.1％,其中白色假丝酵母菌感染139例占65.3％.通过药敏性实验从中分离耐药菌10株,通过ERG11基因分析共16个同义突变与9个错义突变.结论 白假丝酵母菌是女性生殖道假丝酵母菌感染的主要致病菌,对ERG11基因测序发现了4株单位点及6株多位点的有义突变.     

氟康唑和他克莫司联用对光滑念珠菌耐药基因表达量的影响

摘 要 目的： 评价氟康唑和他克莫司联用对光滑念珠菌耐药基因表达量的影响。方法: 采用实时定量PCR定性筛查联用药物对各耐药基因氟康唑耐药基因ERG11,CDR1,PDH1和SNQ2表达水平的影响,并用RT-qPCR定量检测各耐药基因在不同药物处理下的表达量。结果: 与对照组相比,氟康唑和他克莫司联用使ERG11和SNQ2基因的表达量分别减少了90%和66%, CDR1基因的表达量则增加了311.6%（P<0.05或P<0.01）,对PDH1基因的表达无显著影响（P>0.05）。结论: 他克莫司和氟康唑联合用药可能是克服光滑念珠菌对氟康唑耐药性的方法。     

宁波地区结核分枝杆菌基因突变位点确证及与异烟肼、利福平耐药关系研究

【摘要】： 目的 阐明宁波地区初治肺结核患者结核分枝杆菌rpoB、katG、inhA基因突变特征,深入分析基因突变与异烟肼（INH）、利福平(RFP)耐药关系,为临床抗结核治疗提供科学依据。方法 采用1%比例法对889例结核分枝杆菌临床分离株进行药敏检测,对其中的耐药菌株提取DNA,PCR扩增,对耐药菌株katG、inhA、rpoB基因测序,分析三种基因特征及基因突变与单耐药、耐多药关联性。结果 889例结核分枝杆菌临床分离株中,发现39例耐药结核分枝杆菌,其中单耐药24例,单耐药率2.70%,15例耐多药,耐多药率1.69%。39例耐药菌株中,有14例耐多药菌株发生rpoB、katG基因错义突变,突变率93.33%,3例发生inhA基因错义突变,突变率20.00%,rpoB基因450位点（ser450leu）突变率53.33%,katG基因315位点（ser315thr）突变率86.67%,463位点（arg463leu）突变率93.33%。3例单耐利福平菌株rpoB基因在463位点（arg463leu）全部发生错义突变。21例单耐异烟肼菌株中有19例发生katG基因错义突变,突变率90.47%,315位点（ser315thr）突变率63.16%,463位点（arg463leu）突变率78.95%;9例发生inhA基因错义突变,突变率42.86%,145位点（val145gly）突变率77.77%;5例发生rpoB基因错义突变,突变率23.81%,位点较分散。另外,39例耐药菌株中,有10例发生rpoB、katG、inhA多基因联合突变,突变率25.64%。结论 rpoB、katG、inhA基因突变与初治肺结核患者耐药密切相关,上述三种基因在450（ser450leu）、315（ser315thr）、463（arg463leu）、145（val145gly）等位点突变是本地区结核分枝杆菌对异烟肼、利福平耐药的重要机制之一。     

白念珠菌氟康唑耐药的分子生物学进展

随着白念珠菌临床感染的不断增加，以及以氟康畦为主的畦类抗真菌药物的广泛应用，畦类耐药现象亦随之增多，并成为困扰临床念珠菌感染治疗的难题之一。出现耐药可能的原因包括：①编码药物靶酶羊毛甾醇14α去甲基酶的ERG11基因的过度表达和点突变导致真菌细胞膜上的麦角固醇的生物合成发生异常；②药物外流泵相关的基因有ATP结合盒转运子基因—CDR1、CDR2和主要易化子超家族基因的过度表达导致药物在真菌细胞内有效浓度的减少，氟康畦耐药的发生可能同时出现不同的机制。     

白念珠菌耐药株角鲨烯环氧化酶基因的开放读框突变探讨

目的 从特比萘芬作用的靶酶即角鲨烯环氧化酶编码的基因人手，探讨白念珠菌对特比萘芬耐药的可能机制。方法 对3株特比萘芬耐药的白念珠菌菌株，用聚合酶链反应（PCR），扩增其角鲨烯环氧化酶基因的开放读框（ORF），并进行测序。将测序结果与Genbank中序列登录号U69674、D88252白念珠菌进行比较，有无碱基突变，翻译成氨基酸后再进行比较。结果 对所选3株耐药菌株成功地进行了序列测定，序列分析表明，3株菌中，共有5处碱基突变，但无氨基酸发生置换。结论 未发现由基因突变引起的氨基酸置换导致的白念珠菌对特比萘芬耐药。     

ABL激酶区突变的检测与伊马替尼耐药

目的研究慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)患者ABL酪氨酸激酶区突变及伊马替尼耐药。方法用巢式RT-PCR对35例CML患者骨髓液BCR-ABL mRNA内ABL激酶区序列进行逆转录、扩增,测序和同源性比较分析ABL激酶区突变,并分析其伊马替尼耐药。结果 35例患者检出突变16例,阳性率45.71%。CML慢性期、加速期、急变期患者突变率分别为47.83%(11/23)、50%(1/2)和40%(4/10),其差异无显著性(P=0.858);16例突变患者中,共检出26种点突变,包括Y253H、T315I、F317L、M351T、L387F、A380D、H396R、G398R、D455G、E459K和1例185 bp碱基缺失突变等。其中A269V、D274G、S286G、V299M、C305Y、R307W、G312R、I314V、L324Q、K356E、D381G、K403E、K419E、L471P、A474T和S485P突变暂未见文献报道,可能为新的突变。在这些新发现的突变中,D274G、S286G、C305Y和K356E等突变可能与伊马替尼(imatinib,IM)治疗抗性有关。结论约半数患者存在ABL激酶区突变,突变位点广泛,性质多样,既存在单一位点突变,也可多位点同时存在,突变的发生与年龄、性别无关,部分突变与伊马替尼耐药有关。ABL基因激酶区突变检测有助于酪氨酸激酶抑制剂疗效的评估、治疗方案的调整。     

艾滋病患者口咽念珠菌病的菌种分布及药物敏感性

目的 了解艾滋病患者口咽念珠菌(假丝酵母)病的菌种分布及对常用抗真菌药的敏感性,为其防治提供参考.方法 收集艾滋病合并口咽念珠菌患者口咽拭子标本,进行真菌分离和鉴定,并采用Rosco Neo-Sensitab纸片扩散法检测菌株对两性霉素B、氟胞嘧啶、氟康唑及伊曲康唑的敏感性.结果 从50例患者共分离出65株念珠菌,其中最常见的是白念珠菌(77%),其次是热带念珠菌(8%)、光滑念珠菌(6%)、克柔念珠菌(3%)、近平滑念珠菌(3%)及季也蒙念珠菌(3%).所有菌株对两性霉素B均敏感,未发现自念珠菌对氟康唑耐药;非白念珠菌对氟康唑的耐药率为40%,非白念珠菌对氟康唑和伊曲康唑存在交叉耐药.结论 白念珠菌是引起艾滋病患者口咽念珠菌病的主要致病菌,且对氟康唑敏感;非白念珠菌在临床的检出率高,且对三唑类药物的耐药率高.     

2007～2009年酵母样真菌的分离培养及其耐药性分析

目的:探讨引起我院儿童感染酵母样真菌的类型及耐药性,指导临床合理用药.方法:对1 553份住院和门诊儿童的各种标本分离出的203株酵母样真菌,采用科玛嘉念珠显色培养基培养,用API-20CAUX酵母样真菌鉴定试条进行鉴定,用ATB-FUN-GUS进行药敏试验.结果:酵母样真菌203株中白色假丝酵母菌160株(78.81%),近平滑假丝酵母菌15株(7.39%),新型隐球菌7株(3.45%),光滑假丝酵母菌13株(6.40%),热带假丝酵母菌5株(2.46%),克柔假丝酵母菌1株(0.49%),葡萄牙假丝酵母菌2株(0.99%).以呼吸内科、血液科、监护室所占比例较大.203株白色假丝酵母菌对5氟胞嘧啶(5-FC)、两性霉素B(AMB)、氟康唑(FCA)、伊曲康唑(ITR)的敏感率分别为100%、100%、94.38%、80%.结论:致儿童真菌感染的念珠菌仍以白色假丝酵母菌为主,临床用药应依据药敏结果合理用药.     

念珠菌性包皮龟头炎分离菌种鉴定及药敏测定

目的 了解2009年至2011年念珠菌包皮龟头炎念珠菌种类及其对抗真菌药物的敏感性,以便指导临床用药.方法 用沾有无菌生理盐水的无菌拭子反复转动擦拭包皮和龟头的炎症部位,所得拭子立即接种于沙保罗氏琼脂培养基,待培养基上长出酵母菌菌落后,挑取该菌落于科玛嘉念珠菌显色培养基培养.对分离的念珠菌用ROSCO纸片扩散法进行药物敏感性试验.结果 2009年至2011年共分离出507株念珠菌,其中白色念珠菌439株(86.59％),光滑念珠菌33株(6.51％),热带念珠菌28( 5.52％),克柔氏念珠菌3株(0.59％),其他念珠菌4株(0.79％);白色念珠菌对两性霉素B、克霉唑、5-氟尿嘧啶、氟康唑、伊曲康唑的敏感率分别为100％、87.1％、88.9％、86.7％、69.9％,耐药率分别为0％、1.3％、3.8％、6.4％、6.7％.结论 白色念珠菌是念珠菌性包皮龟头炎的主要分离菌株,其次是光滑念珠菌;白色念珠菌体外药敏显示,其对两性霉素B、克霉唑、5-氟尿嘧啶、氟康唑有很高的敏感性,对伊曲康唑敏感性较低,同时也显示其对氟康唑、伊曲康唑有相对较高的耐药率.     

Resistance mechanisms in fluconazole-resistant Candida albicans isolates from vaginal candidiasis

Candida albicans is the most frequently identified yeast species causing mycotic vaginitis. A significant number of vaginal yeast isolates are resistant to azole antifungal agents in vitro. Here we investigated the molecular mechanisms of resistance in 22 randomly selected fluconazole-resistant vaginal C. albicans isolates. Twelve isolates in this collection were found to be cross-resistant to itraconazole and 15 to voriconazole. Most of them also displayed decreased susceptibility to terbinafine. Northern blot analyses revealed overexpression of the MDR1 gene in all isolates, which in some isolates was accompanied by elevated levels of CDR1/CDR2 and ERG11 expression. Sequence analysis of the polymerase chain reaction-amplified ERG11 gene of selected azole-resistant isolates identified D116E and V488I amino acid alterations in Erg11p that are known to be conserved in fluconazole-resistant strains. The results demonstrate that decreased susceptibilities of vaginal yeast isolates to clinically used azole derivatives are the result of a combination of several molecular mechanisms involving drug efflux and alterations in the structure or cellular amount of 14-alpha-lanosterol demethylase.     

Antifungal resistance in Candida spp. isolated in Italy between 2002 and 2005 from children and adults

The activity of amphotericin B, fluconazole, flucytosine, itraconazole and voriconazole was tested in vitro against 618 clinical Candida spp. isolates, using the broth microdilution or the disk diffusion method (voriconazole). Amphotericin B and voriconazole were the most potent antifungal agents assayed (100% of susceptible strains). Resistance to fluconazole and itraconazole was detected in three (0.7%) and 11 (2.7%) isolates of Candida albicans and in four (3.7%) isolates of Candida glabrata. Flucytosine intermediate, resistant strains, or both, were observed in C. albicans (0.3% and 0.7%), C. glabrata (2.8% intermediate) and C. tropicalis (15.2% and 15.2%). C. krusei was the least susceptible species to azoles. No statistically significant differences in the rates of resistant isolates depending on site of infection and age of the patient were observed, with the exception of C. albicans and itraconazole (higher percentage of resistance in children). At present, acquired antifungal resistance represents an uncommon finding in most Candida spp. circulating in Northern Italy.     

临床4种常见念珠菌及其药物敏感性分析

目的：常见念珠菌种类的临床分析及其对4种抗真菌药物的耐药性。方法：统计近年来临床标本分离的念珠菌并对其进行5-氟胞嘧啶（5-Fc）、两性霉素-B（AMB）、氟康唑（FCA）、伊曲康唑（ITR）的药敏分析。结果：所有分离菌株中白色念珠菌占比最高,为60.1%,其次为光滑念珠菌（20.5%）,热带念珠菌（10.9%）,克柔念珠菌（4.5%）。体外药敏试验显示AMB和5-Fc对临床常见念珠菌具有比较高的敏感性。结论：白色念珠菌仍是目前第一位感染菌,但非白色念珠菌也不容忽视。不同念珠菌的耐药性存在种间差异。     

某院假丝酵母菌感染的临床特点及药物敏感性分析

目的了解医院假丝酵母菌感染特点及药物敏感情况,为临床抗真菌治疗提供依据。方法收集医院2011年1月至2012年12月临床送检标本中分离的假丝酵母菌,采用法国梅里埃公司生产的ATB微生物鉴定仪、ID32C真菌鉴定板、ATBFUNGUS3药敏板进行真菌鉴定和药物敏感性试验。结果在标本分离的351株假丝酵母菌中,以白色假丝酵母菌为主（74．93％）,其次是光滑假丝酵母菌（14．53％）。检出的真菌标本以痰所占比例最高（61．54％）．尿液次之（22．79％）。分离的假丝酵母菌对各类抗真菌药物的敏感性以两性霉素B、5-氟胞嘧啶敏感性最高,对氟康唑、伏立康唑、伊曲康唑有不同程度的耐药。结论医院真菌感染以白色假丝酵母菌为主,在临床医疗中应重视真菌的培养鉴定和药物敏感性试验,以指导合理选用抗菌药物,延缓耐药菌的产生。     

血液真菌感染的菌群分布及耐药性分析

目的分析本院近3年来血液真菌的分离率、菌种分布和耐药特性。方法收集自2004年8月～2007年7月3年间住院患者的血液标本,经BacT／ALERT3D血培养仪培养,沙保罗培养基分离培养真菌,柯玛嘉显色培养基和VITEK-60YBC卡进行菌种鉴定,Rosco纸片扩散法测定药敏。结果8707份血液标本中共分离出93株真菌,分离率为1．07％,其中白念珠菌41株,占44．09％,热带念珠菌16株,占17．20％,光滑念珠菌13株,占13．98％,对氟康唑的耐药率分别为：2．4％、6．3％和23．1％,对两性霉素B和制霉菌素均敏感。结论我院血液真菌感染的病原菌以白念珠菌为主,热带念珠菌和光滑念珠菌次之,白念珠菌和热带念珠菌对唑类药物敏感性较高,光滑念珠菌对唑类药物的耐药率较高,两性霉素B和制霉菌素的抗菌活性最强。     

Advances in the study of Candida albicans gene mutation on azole drug resistance

Gene mutation of Candida albicans is one of the main causes for azole drug resistance. Different types of variation play different roles in promoting the process of drug resistance. ERG series of gene mutations primarily affect the ergosterol synthesis pathway. When the regulatory factors TAC1 for CDR1 gene and Mrr1 for MDR1 gene generate mutations, the expression level of drug efflux pump protein in Candida albicans may be changed. In addition, gene copy number variation is also gaining attention. Therefore, the research of mutation resistance-associated genes has a positive meaning to explore the mechanism of drug resistance in Candida albicans.     

Upregulation of the ERG11 gene in Candida krusei by azoles

BACKGROUND AND THE PURPOSE OF THE STUDY: Candida species are the agents of local and systemic opportunistic infections and have become a major cause of morbidity and mortality in the last few decades. Azole resistance in Candida krusei (C. krusei) species appears to be the result of gene alterations in relation to the ergosterol biosynthesis pathway, as well as efflux pumps. The main objective of this study was to examine the RNA expression of ERG11 in C. krusei which had been identified to be resistance to azoles. METHODS: The ERG11 mRNA expression was investigated in four Iranian clinical isolates of C. krusei, which were resistant to fluconazole and itraconazole by a semiquantitative RT-PCR. Results: The mRNA expression levels were observed in all four isolates by this technique. Furthermore, it was found that ERG11 expression levels vary among four representative isolates of C. krusei. Although DNA sequencing revealed no significant genetic alteration in the ERG11 gene, one heterozygous polymorphism was observed in two isolates, but not in others. This polymorphism was found in the third base of codon 313 for Thr (ACT>ACC). MAJOR CONCLUSION: Even though such a polymorphism creates a new Ear1 restriction site, no significant effect was found on the resistance of C. krusei to azoles. Results of this investigation are consistent with previous studies and may provide further evidence for the genetic heterogeneity and complexity of the ergosterol biosynthetic pathway or efflux pumps.