荧光原位杂交技术快速鉴定石蜡包埋组织中的曲霉菌感染

目的探讨荧光原位杂交技术(FISH)在快速鉴定石蜡包埋组织中的真菌感染的应用价值。方法制备针对曲霉菌属18SrRNA序列互补的寡核苷酸探针18S-1,经绿色荧光染料6-FAM标记后,对50例怀疑或证实为真菌感染的石蜡包埋标本进行FISH检测。结果 50例石蜡包埋标本中,HE染色、PAS染色、六胺银染色和真菌荧光染色显示真菌感染阳性例数分别为44、50、50和46例,32例FISH检测呈阳性反应。对照组为阴性。结论 FISH可以特异性地检测出石蜡包埋组织中的曲霉菌,是一种快速准确检测石蜡包埋组织内真菌感染的有效方法。     

CFW荧光染色法检测疑似真菌感染的临床应用评价

目的探讨荧光染色剂Calcofluor White(CFW)在真菌感染诊断中的临床应用价值,并与传统KOH湿片镜检法及真菌培养法进行比较,寻找更有效的真菌检测方法。方法选取临床155例疑似真菌感染的患者,采用KOH湿片镜检法、CFW荧光染色法和真菌培养法进行检测。结果 CFW荧光染色法阳性率(85.8%)最高,KOH湿片镜检法阳性率(76.1%)次之,二者差异有统计学意义(χ2=14.45,P0.05),真菌培养法阳性率(71.0%)最低。结论 CFW荧光染色法可显著提高真菌检测的阳性率,是一种有效的真菌检测方法。     

活检组织中真菌Calcofluor White荧光染色法的改良

目的:探索对Calcofluor White荧光染色法的改良,为活检诊断真菌感染提供一种快速、经济、对比更清晰的染色方法。方法:采用Calcofluor White M2R和苏木素、伊红染液,组合成3种染色步骤,对32例病例进行染色,筛选出适用于活检组织,并且在光镜与荧光镜下能同时观察的改良染色法步骤。结果:光镜下,组织呈现HE染色固有的形态。切换至荧光显微镜下,真菌则被显示为亮蓝色,组织背景呈黄绿色,结果清晰、醒目,对比强烈。结论:改良Calcofluor White荧光染色法能使同一张切片在光镜和荧光显微镜下同时观察,相互对照和定位,是提高真菌检出的好方法,值得在真菌的病理活检工作中广泛使用。     

实时荧光PCR和六胺银染色对肺孢子菌肺炎诊断价值的分析评价

目的比较实时荧光PCR和六胺银染色对肺孢子菌肺炎(PCP)的诊断价值。方法收集2014年1～12月北京协和医院疑似PCP患者非重复送检标本共2 525例,其中2 492例标本用六胺银染色法对肺孢子菌孢囊进行检测,33例标本用实时荧光PCR法对PCP-DNA进行检测,429份标本同时用六胺银染色法和实时荧光PCR法进行检测,以临床诊断为标准,分析两种方法的阳性率、敏感度、特异度、阳性预测值和阴性预测值。结果六胺银染色法的阳性率为1.2%(30/2 492),其中痰、气管插管支气管吸取物和肺泡灌洗液的阳性率分别为0.70%(13/1 845),4.00%(10/250)和2.72%(7/257)。实时荧光PCR法的阳性率为34.20%(158/462),痰和肺泡灌洗液的阳性率分别为30.61%(105/343)和44.54%(53/119)。六胺银染色法和实时荧光PCR法的敏感度13.97%vs 72.07%(χ~2=68.625,P0.01),特异度100%vs94.24%(χ~2=4.296,P0.05),阳性预测值100%vs 92.14%(χ~2=6.380,P0.01),阴性预测值55.36%vs 78.26%(χ~2=11.873,P0.01),差异均具有统计学意义。结论实时荧光PCR敏感度高,相对干扰因素少,临床诊断价值高,但标本送检率明显低于六胺银染色,建议临床提高其送检率,提高PCP的早期诊断。     

改良PASM染色法在肾穿刺活检组织中的应用

<正>肾穿刺活检组织诊断中,PASM(六胺银染色法)染色是重要的检查方法,能清晰地显示基底膜增厚"叮突"、"双轨"等病理变化,通过浸银染色,还可以观察肾小球毛细血管或球囊壁基底膜在炎性损伤(如断裂、增生、折叠等)中的形态学改变。为提高染色质量,我们对传统的方法进行了改良,在实际应用中取得了较好的效果,现将具体方法介绍如下。     

肺组织胞浆菌病CT表现及骨髓病理特征

目的 观察肺组织胞浆菌病(HP)影像学及临床病理学表现.方法 分析14例经病理确诊肺HP并接受抗真菌治疗患者的临床、胸部CT和病理学资料.14例均接受经支气管肺活组织检查(TBLB)、骨髓穿刺苏木精-伊红(HE)染色、过碘酸希夫(PAS)染色、六胺银(GMS)染色及免疫组织化学检测,其中11例接受支气管肺泡灌洗(BAL...     

微波技术在肾小球基底膜六胺银染色中的应用

<正>肾穿刺活检病理诊断是目前认为确诊肾脏疾病的唯一方法,特殊染色能直观地观察到肾小球、肾小管、肾间质及血管的病理变化。六胺银染色是观察肾小球基底膜的重要方法之一,我们通过微波技术对肾小球基底膜进行六胺银染色改进,获得了比传统染色方法更好的效果,现报告如下。     

肺泡灌洗液中肺部真菌的鉴定及诊断价值评估

目的探讨病理学特殊染色对支气管肺泡灌洗液中肺部真菌的检测与鉴定的能力,并进行真菌分类。方法收集广州医科大学附属第一医院2018年住院及门诊支气管肺泡灌洗液患者312例。采用病理学特殊染色的方法对312例肺泡灌洗液进行病原学检测及鉴定,同时对照血清学半乳甘露聚糖抗原和真菌1-3-β-D-葡聚糖定量检测结果及组织病理活检结果。结果病理学特殊染色检测肺泡灌洗液可以鉴定多种真菌、革兰氏阳性菌、抗酸菌及病毒等病原体,与真菌G实验及GM实验相比,其检测真菌的效率更高(P<0.001),并且可以鉴定病原体种类,尤其是真菌种类;对于不易进行组织病理活检的患者,尤其是接受移植患者或者重症肺炎的患者,肺泡灌洗液检测真菌的阳性率更高,并与已有肺活检结果较一致。结论肺泡灌洗液真菌检测可以作为检测肺部病原菌的方法,进行真菌检测及鉴定。     

结核分枝杆菌DNA实时定量PCR技术在临床病理诊断中的应用

目的探讨实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR,FQ-PCR)检测结核分枝杆菌(Mycobaeterium tuberculosis,MTB)在临床组织病理学诊断中的应用价值。方法收集我院2013年5月-2015年2月临床确诊的144例结核病(tuberculosis,TB)患者,对其石蜡包埋组织标本行组织病理学检查,并同时采用组织切片抗酸染色及FQ-PCR技术检测MTB-DNA,并对这三种方法的阳性检出率进行比较。结果在144例临床诊断TB患者的石蜡包埋组织中,FQ-PCR法检测MTB阳性68例,阳性率为47.22%,抗酸染色法检测阳性22例,阳性率为15.28%,组织病理学法检测阳性74例,阳性率为51.39%,三者阳性率比较差异有统计学意义(P0.01)。FQ-PCR法对肺活检标本、肺叶切除标本和胸膜活检标本MTB的阳性检出率均高于组织病理学法和抗酸染色法;对淋巴结活检标本和其他组织标本的阳性检出率高于抗酸染色法,但低于组织病理学法。结论 FQ-PCR技术简便、快捷,敏感性明显好于传统抗酸染色法,可作为TB分子病理诊断的重要检测方法,为组织病理学诊断提供可靠的依据,具有较高的临床应用价值。     

小标本切片HE染色褪色后再进行4种特殊染色方法的探讨

正在日常工作中偶尔会遇到一些细菌、真菌及抗酸菌感染的小标本病例,诊断时需联合六胺银、PAS、革兰和抗酸这4种特殊染色辅助~([1])。小标本的HE染色切片往往要求一个蜡块连续切片6张捞在一张玻片上,在无会诊白片、无蜡块或病变范围极小又不能重新切片的情况下,采用HE染色褪色后行特殊染色对临床诊断具有实用价值。     

Evaluating the accuracy and diagnostic value of CFW and a new fluorescent reagents,fluorescent brightener 85, for the diagnosis of vulvovaginal candidiasis

BackgroundVulvovaginal candidiasis (VVC) is a common vaginitis in females. The commonly used diagnostic method, 10% potassium hydroxide (KOH) smear microscopy, makes it not very easy to recognize fungi.MethodsVaginal secretions were collected from clinically suspected VVC patients and divided into four groups and examined using KOH, CFW (Calcofluor White), FB 85(fluorescent brightener 85), and culture. The data were statistically analyzed.ResultsIn total, 110 patients with suspected VVC were recruited. The positive rates of KOH, CFW, FB 85, and the culture method were 68.2%, 64.5%, 61.8%, and 77%, respectively. According to the McNemar test, there was no statistically significant difference between the KOH, CFW, and the FB 85 methods (p > 0.05). However, CFW had a shorter diagnosis time than the KOH method and had a statistically significant difference (p < 0.001). Moreover, CFW has the highest sensitivity, specificity, and accuracy. In morphological recognition, it was easier to recognize fungal structures with CFW and FB 85 than with the KOH.ConclusionsThe fluorescent method is a good method for the diagnosis of VVC. And the fungi can be found more quickly. Similar to CFW, FB 85 is also a potential good fluorescent reagent for the diagnosis of VVC and has potential value for application in clinical fungal infection diseases.     

消化道真菌定植与感染的临床研究

目的 调查不同疾病住院患者消化道真菌定植与感染发生率,为真菌感染控制提供实验依据。方法收集我院不同疾病住院患者的粪便标本2144份,做革兰氏染色镜检,同时接种真菌分离培养平板并经API20CAUX进行真菌鉴定。结果经涂片镜检检出真菌624例,阳性率为29．10％．其中13例查见真菌孢子及菌丝,根据患者临床资料提示其中10例为消化道真菌感染所致腹泻．与临床的符合率为76．92％,余下611例为仅见真菌孢子,未见菌丝。真菌培养阳性700例,阳性率为32．65％,其中有112例分离到2种或以上真菌,占真菌分离培养阳性总数的16．00％。分离真菌主要为白色念珠菌516例（73．71％）,其次为光滑念珠菌48例（6．86％）。真菌分离率较高的疾病有恶性肿瘤（18．14％）、慢性呼吸系统疾病（17．00％）、慢性心脑血管疾病（14．57％）。随着年龄的增高,真菌培养的阳性率有增高趋势。结论涂片镜检与真菌培养联合检测有助于提高消化道真菌感染检出率。     

三种阴道分泌物念珠菌检测方法的比较及临床应用

目的：阴道分泌物念珠菌三种检测方法（盐水湿片法、五联检测法、真菌培养法）的比较及临床应用.方法：对477例疑似阴道念珠菌感染标本同时做盐水湿片、五联检测和真菌培养检测.结果：盐水湿片检测,五联检测及真菌培养检测分别显示阳性率为22.5％,34.1％,45.2％.五联检测与盐水湿片法阳性率差异有统计学意义（P＜0.05）,五联检测与真菌培养阳性率差异有统计学意义（P＜0.05）.结论：盐水湿片法快速方便,但阳性率较低,五联检测结果稳定快速,但易受干扰因素影响.实验室应结合二种方法,提高患者阳性率检测.真菌培养能鉴定念珠菌菌株及报告药敏试验,适用于念珠菌反复发作的患者.     

支气管扩张并发真菌性肺部感染相关因素分析

目的探讨支气管扩张症并发肺部真菌感染可能的相关因素,为临床诊治提供参考。方法收集柳钢医院2008年1月至2013年5月收治的支气管扩张症患者资料,将其分为真菌感染组32例和非真菌感染组32例,对比分析两组患者的临床资料。结果严重的基础疾病、长住院时间、长时间应用抗菌药物、血清白蛋白水平等是支气管扩张合并真菌感染的主要诱因,两组间比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论严重的基础疾病,长住院时间,长时间应用抗菌药物和血清白蛋白水平等是支气管扩张并发肺部真菌感染相关因素。     

荧光染色在鼻窦真菌快速诊断中的应用评价

目的评价荧光染色在快速诊断真菌性鼻-鼻窦炎中的应用效果。方法对96例2017年7月至2018年4月首都医科大学附属北京同仁医院临床诊断为真菌性鼻-鼻窦炎的患者术中留取少量真菌团块组织,拉片制成薄层涂片,滴适量荧光染料,加盖玻片,室温放置5 min,在荧光显微镜下从低倍至高倍观察真菌结构。常规进行乳酸酚棉蓝染色及1.79 mol/L KOH湿片处理,以真菌培养结果作为金标准。真菌培养阴性、镜检阳性的样本提取核酸通过ITS序列扩增,进行真菌成分的分子检测。结果荧光染色、乳酸酚棉蓝染色、1.79 mol/L KOH湿片标本一次镜检阳性率分别为95.83%(92/96),93.75%(90/96)及91.67%(88/96),差异无统计学意义;涂片阴性标本再次涂片染色镜检,除1.79 mol/L KOH漏检2例外,荧光及乳酸酚棉蓝染色均可捕捉到真菌结构。培养阳性的65例标本,荧光着色理想,可见清晰的真菌结构,尤其对曲霉菌属与暗色真菌属菌丝区分良好,直接荧光染色拟诊与培养结果一致。有3例经乳酸酚棉蓝染色及1.79 mol/L KOH湿片观察到特征性顶囊结构及分生孢子判断为烟曲霉及链格孢属,结果与培养一致,而荧光染色此类结构着色不清。31例镜检阳性、培养阴性的样本分子检测结果显示,黄曲霉9例、烟曲霉3例、杂色曲霉1例、产黄青霉1例、链格孢霉属2例、尖端赛多孢1例、近平滑假丝酵母菌1例,13例样本为阴性结果。结论荧光染色法可用于鼻窦真菌的快速拟诊,但在观察真菌特征性产孢及产色素结构上,与常规方法相比并无显著优势。     

血浆(1,3)-β-D葡聚糖检测对深部真菌感染诊断的临床评价

目的探讨血浆中(1,3)-β-D葡聚糖检测(G试验)对深部真菌感染诊断的临床应用价值。方法通过查阅住院患者病历的回顾性调查分析,对昆明市延安医院2011年3月至2012年2月长期使用广谱抗菌药物、免疫抑制剂或糖皮质激素等,且临床出现感染症状的120例怀疑真菌感染的住院患者所做血浆(1,3)-β-D葡聚糖的检测结果,结合临床最终诊断结果进行评价,并分析不同的阳性预测值时G试验的灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值。结果 120例住院患者中按临床诊断标准诊断为深部真菌感染37例,临床资料不明确的8例(剔除),实际有效病例112例。血浆(1,3)-β-D葡聚糖检测试验分别以10、20、50pg/mL为临界值时,其敏感度分别为73.0%(27/37)、67.6%(25/37)、56.8%(21/37);特异度分别为66.7%(50/75)、76.0%(57/75)、86.7%(65/75);阳性预测值分别为51.9%(27/52)、58.1%(25/43)、67.7%(21/31);阴性预测值分别为83.3%(50/60)、82.6%(57/69)、80.2%(65/81)。结论血浆(1,3)-β-D葡聚糖用于深部真菌感染的诊断具有简便、快速、阳性率高的优点,可用于深部真菌感染的早期诊断以弥补传统方法的不足,但影响因素也较多,实际应用中需密切结合临床情况和动态监测以排除假阳性。     

结核性支气管扩张合并真菌感染患者血浆（1—3）-β-D葡聚糖检测分析

目的：探讨结核性支气管扩张合并肺部真菌感染患者进行血浆（1—3）-β-D葡聚糖检测和真菌培养鉴定结果比较其一致性,及其与慢支肺气肿、肺部感染和肺结核等肺部疾病合并真菌感染患者血浆（1—3）-β-D-葡聚糖检测结果进行差异性比较。方法：结核性支气管扩张合并肺部真菌感染患者20例（Ⅰ组）、其他肺部疾病合并真菌感染患者共20例（Ⅱ组）,其中包括慢支肺气肿14例、肺部感染5例和肺结核1例,健康对照组20例,应用MB-80微生物动态快速检测系统及真菌（1-3）-β-D葡聚糖检测试剂盒检测三组血浆（1—3）-β-D葡聚糖含量,比较其与真菌培养方法的差异。结果：Ⅰ组、Ⅱ组及对照组血浆（1—3）-β-D葡聚糖含量分别为166．91±74．64pg／ml、164．04±80．53pg／ml和6．05±1．91pg／ml。Ⅰ组与Ⅱ组比较无显著差异（P〉0．05）;Ⅰ组与对照组比较有显著性差异（P〈0．01）。40例肺部疾病合并真菌感染患者血浆（1～3）-β-D葡聚糖阳性,同时行痰液真菌培养法阳性37例（占92．5％）．结论：血浆（1—3）-β-D葡聚糖检测较培养法简便、快速、阳性率高,可用于结核性支气管扩张等肺疾病合并深部真菌感染的早期快速诊断。     

慢性阻塞性肺疾病继发肺部真菌感染56例临床分析

目的 探讨慢性阻塞性肺疾病（COPD）患者继发肺部真菌感染的临床特点及危险因素.方法 回顾性分析296例COPD患者的临床资料,其中56例继发肺部真菌感染为感染组,未发生真菌感染240例为非感染组.分析比较两组患者使用抗生素种类、抗生素应用疗程,以及应用激素情况;低蛋白血症、侵入性操作、死亡例数情况.通过痰涂片培养结果确定真菌种类.结果 感染组病死率16.1％（9/56）明显高于非感染组6.2％ （15/240）,差异有统计学意义（x2=6.436,P＜0.05）;感染组使用抗生素种类（2.6±0.8）种、应用抗生素疗程（15.4±2.6）d、应用激素比例[41.1％ （23/56）]、低蛋白血症比例[57.1％ （32/56）]、侵入性操作比例[35.7％ （20/56）]均大于非感染组[（1.6±0.6）种、（9.6±2.2）d、8.3％ （20/240）、12.1％（29/240）、5.4％ （13/240）],差异有统计学意义（P均＜0.05）;非感染组治疗总有效率90.4％ （217/240）高于感染组78.6％ （44/56）,差异有统计学意义（x2=4.248,P＜0.05）.感染组真菌感染种类主要以白色念珠菌为主.结论 长期使用高档抗生素、应用激素、低蛋白血症及侵入性操作是引起COPD继发真菌感染的主要因素.在抗真菌治疗中,主要针对病原菌治疗,根据痰培养结果选择抗真菌药物.     

超高倍显微仪检查粪便涂片诊断肠道真菌感染的临床意义

目的研究超高倍显微仪粪便涂片检查在诊断肠道真菌感染的临床意义。方法取新鲜粪便涂片、染色,用超高倍显微仪检测细菌总数及真菌,对检出真菌的标本重新采集标本做真菌培养,将两种方法的结果进行比较并做统计学处理。结果 283例标本中超高倍镜显微仪检出真菌93例(32.8%);真菌培养93例标本,其中83例有真菌生长,符合率为91.4%,两种方法检测结果差异无统计学意义。检出的真菌类型以白色念珠菌占首位为52例(61.2%),其次是热带念珠菌14例(16.5%),季也蒙念珠菌12例(14.1%),曲霉菌7例(8.2%)。结论真菌感染是引起肠道慢性腹泻的主要原因,而引起真菌感染的主要原因是抗生素的不合理使用。超高倍显微仪检查粪便涂片对快速、准确诊断肠道真菌感染、正确治疗慢性腹泻、避免滥用抗生素有重要的临床意义。     

泌尿系统真菌感染的分布及其耐药性分析

目的：了解临床泌尿系统真菌分布及其药敏情况,指导临床合理使用抗菌药物。方法对2012年1月至2013年6月期间临床送检的泌尿系统标本进行真菌鉴定,并检测其对5种抗菌药物的敏感性,结果采用 WHONET 软件进行统计学分析。结果（1）共分离出真菌239株,其中白色念珠菌居首位,其余依次为光滑念珠菌和热带念珠菌;（2）239株真菌对氟康唑（FCA）、伊曲康唑（ITR）、伏立康唑（VRC）、5-氟胞嘧啶（5-FC）及两性霉素（AMB）的敏感率分别为63．2％、61．9％、92．5％、93．7％及93．7％;（3）白色念珠菌对5种抗菌药物的敏感性较好,均达到95．0％以上;（4）光滑念珠菌对 FCA 和 ITR 的敏感性最低,仅为9．7％。结论泌尿系统真菌感染以白色念珠菌为主,由于各种念珠菌对5种抗真菌药物的敏感性不同,因此加强泌尿系统真菌鉴定及药敏检测,能够为临床合理使用抗菌药物提供重要参考依据。