单体人参皂甙Rb1对成年大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的：用缺血－再灌注损伤诱导成年Wistar大鼠心肌细胞凋亡,观察单体人参皂甙Rb1对心肌细胞凋亡的影响。方法：琼脂糖凝胶电泳、DNA裂解率的测定和原位末端标记法（TUNEL）。结果：缺血－再灌注组心肌DNA电泳呈明显的梯形图谱,DNA裂解率明显高于假手术组,TUNEL末端标记有典型的阳性细胞存在,假手术组电泳无条带,TUNEL标记无阳性细胞。Rb1组琼脂糖凝胶电泳中DNA条带变淡,TUNEL阳性细胞百分数下降,DNA裂解率降低。结论：缺血－再灌注损伤可诱导成年心肌细胞凋亡,Rb1可抑制此类细胞凋亡。     

心肌缺血再灌注损伤过程中细胞凋亡的实验研究

①目的探讨心肌缺血再灌注损伤过程中的细胞凋亡。②方法采取结扎左冠状动脉前降支再灌注复制大鼠心肌缺血再灌注损伤的模型,观察缺血再灌注心肌细胞超微结构的变化;TUNEL检测DNA片段的存在,探讨细胞凋亡与Bcl-2/Bax蛋白表达的关系。③结果透射电镜观察缺血再灌注心肌细胞可见心肌细胞凋亡的超微结构特征;DNA电泳缺血再灌注组出现明显的细胞凋亡特有的梯形条纹图像。TUNEL结果表明,缺血再灌注组可见胞核呈深棕色反应的阳性凋亡心肌细胞。Bcl-2/Bax蛋白表达检测结果表明:缺血再灌注组显著增高。④结论大鼠急性缺血再灌注的整个病理生理过程存在着细胞凋亡现象,而心肌细胞凋亡可能被Bcl-2/Bax蛋白所调控。     

缺血预适应与后适应对家兔局部短期缺血再灌注心肌细胞凋亡影响的研究

目的：探讨缺血预适应与缺血后适应对兔局部缺血再灌注,心肌细胞凋亡的影响。方法：用30只新西兰大白兔建立心肌缺血再灌注动物模型,采用DNA电泳和TUNEL分析检测缺血再灌注心肌组织的细胞凋亡情况,免疫组化方法检测心肌组织中Bcl-2和Bax蛋白的表达。结果：缺血再灌注组缺血区心肌DNA电泳出现200bp,400bp2条条带呈梯形,其余各组未见梯形;TUNEL检测显示缺血再灌注组心肌细胞凋亡指数较其他实验组显著增加（P〈0．05）;缺血再灌注组Bcl-2基因蛋白表达量低于其他各组（P〈0．05）;缺血再灌注组Bax基因蛋白表达量高于其他各组（P〈0．05）。结论：缺血后适应可产生内源性心脏保护作用。缺血预适应、缺血后适应显著减轻了兔缺血再灌注诱导的心肌细胞凋亡程度与上调Bcl-2蛋白表达、下调Bax蛋白表达有关。     

人参皂苷Rb1对肠缺血再灌注致肾损伤的保护作用

目的:研究人参皂苷Rb1对肠缺血再灌注(IIR)致肾损伤的保护机制。方法:成年雄性C57BL/6J小鼠随机分为5组:(1)假手术组(sham组);(2)模型组(IIR组);(3)生理盐水组(NS组);(4)低剂量组(Rb1-30组);(5)高剂量组(Rb1-60组)。于再灌注2h时取各组肾脏组织观察肾脏病理学形态并行评分;同时检测肾脏组织SOD和MDA含量;肾脏TUNEL细胞凋亡检测;以及免疫组化和Western Blot分析Caspase-3含量。结果:IIR组中肾脏病理学评分较sham组明显升高(P<0.01);肾脏组织中MDA含量增加,SOD活性降低(P<0.01)。Rb1-30组和Rb1-60组中肾脏病理学评分较IIR组明显降低(P<0.01);肾脏组织中MDA含量降低,SOD活性升高(P<0.01)。IIR组中TUNEL阳性细胞率和Caspase-3蛋白含量较sham组升高(P<0.01);Rb1-30组和Rb1-60组中TUNEL阳性细胞率和Caspase-3蛋白含量较IIR组降低(P<0.01)。结论:肠缺血再灌注可引发肾脏损伤;人参皂苷Rb1通过减轻肾脏细胞凋亡对其损伤起到保护作用。     

血府逐瘀汤对缺血再灌注损伤大鼠心肌细胞的保护作用研究

目的：观察血府逐瘀汤对缺血再灌注损伤大鼠心肌细胞损伤的保护作用.方法：利用培养的乳鼠心肌细胞造成缺血再灌注损伤模型，观察心肌细胞中超氧化物歧化酶（SOD）的水平来间接推断细胞内活性氧的生成量；观察培养液中乳酸脱氢酶（LDH）的量以判断细胞损伤情况，并进行DNA琼脂糖凝胶电泳及末端脱氧核苷酸介导的脱氧尿苷三磷酸缺口末端标记法（TUNEL）以判断细胞死亡类型及程度。运用以上指标来判断血府逐瘀汤对心肌细胞缺血再灌注损伤的保护作用。结果：血府逐瘀汤可显著升高缺血再灌注时SOD水平，显著降低LDH水平，DNA电泳图谱表明：血府逐瘀汤可使DNA拖尾基本消失，TUNEL结果亦表明血府逐瘀汤可显著减少缺血再灌注所致的心肌细胞凋亡。结论：血府逐瘀汤有保护缺血再灌注时心肌细胞免于死亡之功效。     

转染bcl-2基因对心肌细胞低氧/复氧损伤中细胞凋亡的影响

目的:研究转染抗凋亡基因bcl-2对心肌细胞凋亡的影响. 方法:采用SD大鼠乳鼠进行心肌细胞培养,建立模拟心肌缺血/再灌注模型;提取含有人bcl-2基因的逆转录病毒真核表达载体pDOR-SB质粒,用脂质体介导的基因转染法将pDOR-SB质粒转染心肌细胞. 实验分3组:正常对照组、模拟缺血/再灌注组和基因转染组;计算台盼蓝摄取率,测定肌酸磷酸肌酶活性,透射电镜及琼脂糖凝胶电泳观察细胞凋亡情况. 结果:在正常对照组未发现细胞凋亡,而在缺血再灌注组细胞凋亡明显增多,台盼蓝摄取率和肌酸磷酸肌酶活性明显增加(P<0.01),转染bcl-2基因组心肌细胞凋亡明显减少. 结论:细胞凋亡参与了心肌缺血/再灌注损伤,转染bcl-2基因可减少缺血/再灌注中的心肌细胞凋亡.     

大鼠心肌缺血再灌注时心肌细胞凋亡情况及缺血预处理对其影响

目的探讨缺血再灌注及缺血预处理对大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡的影响.方法制备大鼠缺血预处理(IP)、缺血再灌注损伤(I/R)模型,采用末端脱氧核苷酸转换酶介导的生物素平移缺口末端标记技术(TUNEL)检测心肌细胞凋亡情况;同时检测心肌梗死范围.结果I/R组细胞凋亡率(43.37±4.82%)高,IP组虽然也有一定的心肌细胞凋亡率(24.53±2.95%),但较I/R组明显降低(P＜0.001).IP组心肌梗死范围较I/R组明显减小.结论心肌缺血再灌注损伤可诱发或加重心肌细胞凋亡,IP能明显减少缺血再灌注诱导的心肌细胞凋亡的发生率,能明显减少心肌梗死范围,减轻缺血再灌注损伤;IP能减少心肌梗死范围、减轻缺血再灌注损伤的机理可能与其能明显减少心肌细胞凋亡有关.     

碱性成纤维细胞生长因子对大鼠局灶性缺血再灌注损伤脑组织Caspase-3表达及细胞凋亡的影响

目的 :探讨碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)对大鼠脑缺血再灌注损伤后神经细胞凋亡和Caspase 3表达的影响。方法 :应用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型 ,大脑中动脉阻塞 1h再灌注损伤 2 4h ,用TUNEL法和免疫组化法分别检测假手术组、缺血再灌注组和bFGF治疗组的凋亡细胞数和Caspase 3阳性细胞数。结果 :假手术组偶见凋亡细胞和Caspase 3阳性细胞 ,缺血再灌注组凋亡细胞数和Caspase 3阳性细胞数分别为 2 5 .4 6± 5 .5 7和1 8.6 0± 3.77,bFGF组凋亡细胞数和Caspase 3阳性细胞数分别为 1 6 .72± 5 .6 3和 1 0 .5 4± 2 .0 4。与缺血再灌注组比较 ,bFGF组凋亡细胞数和Caspase 3阳性细胞数显著降低 (P <0 .0 5和P <0 .0 5 )。结论 :Caspase 3表达下降可能是bFGF减少大鼠脑缺血再灌注损伤后细胞凋亡的分子机制之一     

黄芩茎叶总黄酮预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用

目的 探讨黄芩茎叶总黄酮(Scutellaria baiculensis stem-leaf total flavonoid,SSTF)对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用.方法 40只SD大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组和SSTF预处理组.SSTF组大鼠于术前1周分别灌胃不同剂量的SSTF[(17.5、35、70mg/(kg·d)],另两组给等量生理盐水.采用结扎大鼠左冠状动脉前降支方法制备心肌缺血再灌注模型.缺血30min、再灌注2h后,观察大鼠心电图的变化;并用免疫组织化学法检测心肌组织中Bax和Bcl-2蛋白表达情况.结果 SSTF抑制了缺血再灌注损伤大鼠心电图T波升高,降低了心律失常发生率.缺血再灌注组Bcl-2蛋白表达阳性细胞率明显比假手术组低(P＜0.05),Bax蛋白表达阳性细胞率明显较假手术组高,而SSTF预处理组Bcl-2蛋白表达阳性细胞率明显高于缺血再灌注组(P＜0.05), Bax蛋白表达阳性细胞率明显较缺血再灌注组为低(P＜0.05).结论 SSTF预处理对缺血再灌注的心肌细胞具有保护作用,其机制可能与上调Bcl-2和下调Bax蛋白表达进而抑制心肌细胞凋亡有关.     

人参皂甙Re对急性缺血再灌注心肌细胞凋亡及fas基因表达的影响

目的　研究人参皂甙Re对急性缺血再灌注心肌细胞凋亡及fas基因表达的影响 ,探讨人参皂甙Re抑制缺血再灌注心肌细胞凋亡的分子机制。方法　结扎Wistar大鼠左冠状动脉前降支 (LAD) ,建立大鼠急性缺血再灌注动物模型。 30只大鼠分 3组 (每组 10只 ) :人参皂甙Re组 ,缺血再灌注组和假手术组。用透射电镜和TUNEL法检测心肌细胞凋亡 ,并用光学显微镜进行凋亡细胞计数 ,免疫组化法检测Fas蛋白表达 ,利用图像分析系统检测阳性结果的平均吸光度 (A)值进行定量分析。结果　心肌细胞的凋亡数在缺血再灌注组、假手术组和人参皂甙Re治疗组每视野分别为 134 4 5± 4 5 6 1、 0 18± 0 0 9和 90 6 6± 19 2 2 ,各组间的心肌细胞凋亡数有显著差异 (P <0 0 5 )。缺血再灌注组、假手术组和人参皂甙Re治疗组的Fas蛋白的平均A值分别为 :0 13± 0 0 3、 0 0 6± 0 0 1和 0 0 7± 0 0 1,人参皂甙Re治疗组与缺血再灌注组相比差异有显著性意义 (P <0 0 5 )。结论　人参皂甙Re能显著抗急性缺血再灌注损伤诱导的心肌细胞凋亡 ,抑制急性缺血再灌注诱导心肌细胞内Fas蛋白表达可能是作用机制之一。     

灯盏花素对大鼠缺血-再灌注心肌细胞凋亡和bcl-2表达的影响

目的 :探讨灯盏花素 (breviscapine,BRE)对大鼠缺血 -再灌注 (ischemia/reperfusion ,I/R)心肌细胞凋亡和凋亡抑制基因bcl 2表达的影响。方法 :采用TUNEL法、免疫组化和原位杂交方法 ,观察I/R心肌细胞死亡和凋亡抑制基因的bcl 2表达。结果 :(1)灯盏花素组凋亡心肌细胞核数量及阳性心肌细胞核占总心肌细胞核数的百分比均明显少于I/R组 (P <0 0 5 ) ;(2 )灯盏花素组bcl 2蛋白 (mRNA)表达阳性的心肌细胞数及阳性心肌细胞占心肌细胞总数的百分比均明显高于I/R组 (P <0 0 1)。结论 :(1)灯盏花素能够显著减少大鼠I/R心肌细胞凋亡 ;(2 )灯盏花素通过上调凋亡抑制基因bcl 2的表达可能是其减少大鼠I/R心肌细胞凋亡的机制之一。     

Effect of Ginsenoside—Rb1 on Cardiomyocyte Apoptosis after Ischemia and Reperfusion in Rats

Summary The effect of ginsenoside Rb₁ on cardiomyocyte apotosis after ischemia (30 min) and reperfusion (6 h) in rats was observed. The ischemia/reperfusion heart model was established by ligating left anterior descending branch of coronary artery in Wistar rats. The apoptotic cardiomyocytes were examined under transmission electron microscopy and counted byin situ nick end labeling (TUNEL) method and light microscopy. Results showed that (1) The apoptotic cardiomyocytes were found in ischemic regions in the ischemia/reperfusion group, but not in the sham-operating group under transmission electron microscopy; (2) The number of apoptotic cells were 134.45±45.61/field in the ischemia/reperfusion group, 0/field in the sham-operating group and 51.65±13.71/field in the ginsenoside Rb₁-treated group. The differences were significant among the three groups (P<0.01). It was concluded that myocardial ischemia-reperfusion could induce cardiomyocyte apoptosis, and ginsenoside Rb₁ could significantly inhibit cardiomyocyte apoptosis induced by ischemia-reperfusion in rats, indicating that ginsenoside Rb₁ could inhibit cardiomyocyte apoptosis induced by ischemia-reperfusion, thus alleviating ischemia-reperfusion injury. GUAN Li, female, born in 1967, Doctor in Charge This project was supported by a grant from the Natural Science Foundation of Hubei Province (Serial No. 2000J050).     

大鼠心肌IP对I/R心肌细胞凋亡及bcl-xl蛋白表达的影响

目的研究缺血预适应(ischemic preconditioning,IP)对大鼠缺血再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)心肌细胞凋亡和凋亡抑制基因bcl-xl蛋白表达的影响.方法采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的带萤光的dUTR缺口末端标记(TUNEL)法和免疫组化方法.结果 IP组TUNEL法阳性心肌细胞核数量及阳性心肌细胞核占总心肌细胞核数的百分比均明显少于I/R组(P<0.05或0.01);IP组表达bcl-xl蛋白阳性的心肌细胞数及阳性心肌细胞占心肌细胞总数的百分比均明显高于I/R组(P<0.01) .结论大鼠心肌IP能够显著减少I/R心肌细胞凋亡;IP通过上调凋亡抑制基因bcl-xl基因表达可能是其减少I/R心肌细胞凋亡的机制之一.     

缺血预处理与心肌缺血/再灌注细胞凋亡及NF-κB表达的关系

目的:研究缺血预处理对心肌缺血/再灌注细胞凋亡及NF-κB表达的影响。方法:健康SD大鼠30只随机分为3组:对照组,缺血/再灌注组,缺血预处理组,每组10只。利用心肌缺血/再灌注模型,采用原位末端标记(TUNEL)法测定凋亡细胞,采用W estern-b lot法测定NF-κB的表达。结果:缺血再灌注组心肌细胞的凋亡百分数和NF-κB的表达均显著增加,与对照组相比有显著差异;而缺血预处理组与缺血/再灌注组相比,其凋亡心肌细胞百分数和NF-κB的表达均显著减少。结论:缺血预处理抑制心肌细胞的凋亡的作用机制与其抑制NF-κB的表达有关。     

局灶性脑缺血再灌注损伤神经细胞凋亡的研究

目的 探讨局灶性脑缺血再灌注损伤后神经细胞凋亡和不同时间点脑组织病理学改变及相应时间点大鼠神经功能评分的关系。方法 将成年Wistar大鼠55只，随机分为脑缺血组、假手术对照组、糖缺血再灌注组，应用线栓法制备局灶性脑缺血再灌注模型，并采用HE染色TUNEL法检测再灌注损伤后细胞凋亡情况。电镜观察脑缺血再灌注后细胞凋亡形态的改变。结果 脑缺血再灌注0～6h神经功能缺损程度最重，随再灌注时间延长逐渐改善，24h症状又有加重，提示再灌注引起继发性脑损害。神经细胞出现坏死或凋亡与缺血程度和持续时间有关。TUNEL标记缺血1h后再灌注48h之内，皮层区细胞凋亡指数（AI）随再灌注时间的延长不断增加。结论 线栓法成功制备的大鼠局灶性脑缺血再灌注模型，可用于缺血再灌注神经细胞损害及脑保护的研究。缺血性神经原死亡经历凋亡和坏死两种途径，中度、重度缺血以坏死为主，轻度缺血以凋亡为主。     

大鼠肺缺血再灌注损伤引起肺细胞的凋亡

目的:观察肺缺血再灌注损伤对肺细胞凋亡的影响.方法:雄性SD大鼠40只,体质量300～350 g,随机分为8组(缺血再灌注6组,单纯缺血组,对照组),每组5只.通过阻断肺门建立大鼠原位肺缺血再灌注模型,应用末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)介导的dUTP缺口末端标记技术(TUNEL)检测缺血再灌注损伤所引起的肺细胞凋亡的变化及其与再灌注时间的相关性;DNA电泳进行肺组织细胞DNA片段分析;电镜观察凋亡细胞的超微结构.结果:在肺缺血再灌注后早期(30 min)发生明显的肺细胞凋亡,凋亡细胞数峰值位于再灌注后2 h,再灌注后12 h凋亡细胞数与对照组无显著差别;缺血而无再灌注的肺细胞凋亡无明显变化.结论:细胞凋亡在肺缺血再灌注损伤机制中可能起着重要作用.     

缺血预处理第二保护窗对缺血再灌注心肌细胞凋亡和bcl-2的影响

目的 :探讨缺血预处理 (ischemicpreconditioning ,IP)第二保护窗对大鼠缺血再灌注 (ischemia/reperfu sion ,I/R)心肌细胞死亡和凋亡抑制基因bcl 2蛋白和mRNA表达的影响。方法 :采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的带萤光的dUTP缺口末端标记 (TUNEL)法以及免疫组织化学和原位杂交方法。结果 :(1)IP组TUNEL法阳性心肌细胞核数量及阳性心肌细胞核占总心肌细胞核数的百分比均明显少于I/R组 (P <0 0 5 ) ;(2 )IP组表达bcl 2蛋白 (mRNA)阳性的心肌细胞数及阳性心肌细胞占心肌细胞总数的百分比均明显高于I/R组 (P <0 0 1)。结论 :(1)IP第二窗能够显著减少大鼠I/R心肌细胞死亡 ;(2 )IP通过上调凋亡抑制基因bcl 2的基因表达可能是其减少大鼠I/R心肌细胞死亡的机制之一     

亚低温对大鼠局灶性脑缺血细胞凋亡的影响

目的　研究不同时程的亚低温治疗对大鼠大脑中动脉闭塞 -再灌注模型神经细胞凋亡的影响。方法　用Longa’s线栓法制作大脑中动脉闭塞 (MCAO)模型 ,缺血 3h后再灌注。缺血后即刻分别进行不同时程 (1/2h、1h、3h)的亚低温治疗 ,再灌注后 2 4h断头取脑 ,冠状切片作TUNEL染色。结果　①与假手术组的凋亡细胞阳性率相比 ,对照组增加 (P <0 .0 1) ;②与对照组的凋亡细胞阳性率相比 ,亚低温 1h、3h组降低 (分别为P <0 .0 5及P <0 .0 1)。结论　①细胞凋亡参与缺血性脑损伤的病理机制。②亚低温 1h以上有抑制细胞凋亡作用。     

放线菌酮连续灌注对大鼠脑缺血后DNA片段形成的影响

目的揭示蛋白合成抑制剂对脑缺血的不同时期脑细胞凋亡的保护作用。方法将wistar大鼠制成MCA缺血—再灌注模型,分成放线菌酮(CHX)组、假手术组和生理盐水(对照)组。放线菌酮组从缺血前15min开始连续测脑室放线菌酮灌注(1mg/kg·d-1),于缺血60min后再灌注l、3、7、14d处死动物,取脑冠状切面,用TUNEL染色,DNA电泳观察细胞凋亡现象。对照组则用复方氯化钠溶液连续灌注。结果CHX组在l、3d时间分别发现(158±16)、(86±10)个阳性细胞。Tunel阳性细胞与对照组无明显差异。第7、14dCHX组TUNEL阳性细胞显著低于对照组(P<0.05),CHX组在缺血l、3、7d发现DNA梯带,第14d未发现DNA梯带形成;对照组4次均出现DNA梯带。结论脑梗塞过程一直伴随DNA片段形成。在早期,蛋白生成抑制剂似乎不能阻止DNA片段的形成,而在晚期则能有效地阻止TUNEL阳性细胞的出现。缺血早期DNA片段形成可能不依赖蛋白质合成,而1周以后,蛋白质合成才成为DNA片段形成的前提。     

急性缺血再灌注家兔心肌组织中半胱氨酸蛋白酶-3的表达和细胞凋亡及对心室功能的影响

目的观察家兔急性缺血再灌注后心肌组织中半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)表达和细胞凋亡的变化及对心室功能的影响。方法30只家兔随机分为对照组、缺血组和再灌注组,每组10只。缺血组套扎左冠状动脉前降支30min,再灌注组套扎30min后再灌注120min,对照组游离左冠状动脉前降支不结扎。超声心动图测量左心室收缩功能,原位末端标记检测法(TUNEL)检测细胞凋亡数,反转录-聚合酶连反应(RT-PCR)检测Caspase-3 mRNA的表达,免疫组织化学法检测Caspase-3蛋白的表达。结果缺血组与对照组比较,Caspase-3蛋白表达增高(P<0.05),Caspase-3mRNA表达显著增强(P<0.01),心肌TUNEL阳性细胞数无明显升高(P>0.05),左心室应变率明显降低(P<0.01);再灌注组与缺血组比较,Caspase-3和Caspase-3 mRNA蛋白表达均有所增强(P<0.05),心肌TUNEL阳性数明显增加(P<0.01),左心室应变率有所恢复(P<0.01);再灌注组与对照组比较,各指标均有显著性差异(P<0.01)。结论缺血再灌注激活Caspase-3,导致心肌细胞的凋亡,二者与心室功能的改变存在一定内在联系。