阿伐他汀诱导人胆管癌QBC939细胞凋亡的研究

目的 观察阿伐他汀(ATV)对人胆管癌QBC939细胞增殖及凋亡的影响.方法 应用细胞培养技术培养QBC939细胞,经不同浓度的阿伐他汀处理后,以MTT法检测QBC939细胞的存活率,通过光镜、倒置显微镜及琼脂糖凝胶电泳检测胆管癌细胞凋亡的形态学特征、生化学特征.结果 在阿伐他汀的作用下,QBC939细胞的生长、增殖变的相对缓慢,凋亡的细胞出现膜小泡、凋亡小体等特征性改变;DNA电泳呈现典型的梯状条带.结论 阿伐他汀可抑制胆管癌细胞的生长、增殖,并可诱导细胞发生凋亡,且其作用呈剂量效应关系.     

原花青素对人胆管癌细胞QBC939抑制的体内外研究

目的研究原花青素(PC)体内外对人胆囊癌细胞的抑制作用。方法常规培养细胞,24 h后随机分为阳性对照组、空白对照组和PC组。MTT法检测PC对人胆囊癌细胞增殖的抑制作用;流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期;建立QBC939细胞裸鼠异种移植瘤模型。将荷瘤裸鼠随机分为5组:阴性对照组、5-Fu阳性对照组及PC 3个剂量组,每日腹腔注射给药,每隔3 d测肿瘤大小;12 d后,处死裸鼠,剥瘤称重并计算抑瘤率。结果 PC 3个剂量组显著抑制QBC939细胞增殖,且呈时间和剂量依赖性;将细胞周期阻滞在S期,并诱导QBC939细胞凋亡;PC可抑制QBC939细胞裸鼠异种移植瘤的生长。结论 PC体内外均可抑制SHG-44细胞生长,并诱导肿瘤细胞凋亡。     

维拉帕米联合阿霉素抑制胆管癌细胞的实验研究

目的：研究维拉帕米联合阿霉素抑制胆管癌细胞的作用并探讨维拉帕米增强胆管癌细胞对阿霉素敏感性的机制。方法：以体外培养的人胆管癌细胞QBC939为实验模型,分别或联合不同浓度的维拉帕米与阿霉素作用于QBC939,光学显微镜下观察药物作用后QBC939的形态学变化,采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法、流式细胞术（FCM）进行检测。结果：在阿霉素、阿霉素联合维拉帕米作用48 h后,光镜下观察,胆管癌细胞变圆,体积缩小,细胞内颗粒、空泡增多,有较多细胞从瓶壁脱落,随着药物浓度增大、时间延长,该变化越来越明显;阿霉素对QBC939有增殖抑制作用,呈剂量依赖性;小剂量的维拉帕米（〈10μg/mL）对QBC939无细胞毒性作用;维拉帕米联合阿霉素作用48 h后使QBC939阻滞于S期,其凋亡率明显升高。结论：维拉帕米联合阿霉素明显抑制QBC939的生长,与细胞内药物浓度的提高而诱导细胞凋亡、干扰细胞生长周期有关。     

青蒿素对K562细胞的增殖抑制作用及其作用机制

目的:探讨青蒿素对急性白血病K562细胞的增殖抑制作用及其作用机制.方法:以不同浓度的青蒿素作用于体外培养的K562细胞,MTT法检测细胞生长抑制率,应用流式细胞仪及Hoechst 33258荧光染色法观察细胞凋亡,TRAP-PCR-ELISA法检测细胞凋亡前后的端粒酶活性.结果:青蒿素可显著降低K562细胞端粒酶活性,抑制细胞生长,诱导细胞发生凋亡,并呈现出明显的量-效与时-效关系.结论:青蒿素能抑制K562细胞的生长并诱导细胞发生调亡,降低细胞端粒酶活性可能是其重要作用机制之一.     

姜黄素对人胆囊癌细胞株QBC939增殖和凋亡的影响

目的探讨姜黄素对人胆囊癌细胞株QBC939增殖及凋亡的影响,为胆囊癌的临床治疗提供新的思路。方法姜黄素与QBC939共同孵育后,采用MTT方法测定QBC939的增殖情况并计算抑制率,用流式细胞仪评估凋亡率,同时以蛋白免疫印迹(Western blot)方法检测姜黄素对凋亡相关蛋白Caspase 3表达水平的影响。数据比较采用t检验,P<0.05为差异有统计学意义。结果姜黄素处理组细胞生长明显受抑并存在显著凋亡,Western blot结果显示Cas-pase 3表达量远大于对照组。结论姜黄素可显著抑制胆囊癌细胞株QBC939的增殖,这种变化可能与其诱导的Cas-pase 3的高表达及促进凋亡有关。     

miR125a对胆管癌细胞株QBC939增殖、凋亡影响及可能机制

目的探讨miR125a对胆管癌细胞株QBC939细胞增殖及凋亡的影响及可能机制。方法实时荧光定量PCR检测52例经手术和病理证实的肝外胆管癌,31例癌旁组织及10例正常胆管组织标本miR125a的表达,免疫组化检测MMP-9蛋白表达。miR125a转染胆管癌细胞株QBC939,MTT法检测细胞增殖,流式细胞分析法检测细胞周期,Caspase-3试剂盒检测凋亡,Western blot检测MMP-9蛋白表达。结果胆管癌组织miR125a表达明显下调,低于正常胆管组织(P<0.05),MMP-9明显高于正常胆管组织(P<0.05)。与对照质粒组比较,转染miR125a胆管癌细胞QBC939增殖受到抑制,流式细胞分析法表明转染miR125a的胆管癌细胞QBC939导致G1阻滞,Caspase-3试剂盒检测显示凋亡增加,Western blot分析表明转染miR125a的胆管癌细胞QBC939中MMP-9的表达出现明显的下调。结论miR125a在肝外胆管癌中低表达,它们可能与胆管癌的发生有关。胆管癌细胞株QBC939 miR125a表达上调,能够抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡和G1阻滞,miR125a的作用可能与MMP-9的表达相关。     

双氢青蒿素诱导肺癌细胞凋亡的实验研究

双氢青蒿素是半合成的青蒿素衍生物,近年来研究表明青蒿素类药物具有明显抑制肿瘤生长的作用。目的:探讨双氢青蒿素对肺癌细胞生长抑制作用及其机制。方法:以体外培养的SPC-A-1细胞株为研究对象,采用MTT法测定二氢青蒿素对SPC-A-1细胞的增殖影响,采用TUNNEL染色、DNAladder及流式细胞术检测双氢青蒿素诱导SPC-A-1细胞凋亡。结果:DHA对SPC-A-1细胞的抑制增值作用呈浓度依赖性和时间依赖性特点,双氢青蒿素抑制SPC-A-1细胞增殖作用主要由于其诱导肺癌细胞凋亡所致。     

RhoC基因转染对胆管癌QBC939细胞生物学行为的影响

目的将人RhoC正义、反义基因真核表达载体转染胆管癌QBC939细胞株,研究RhoC基因对胆管癌QBC939细胞株增殖和侵袭能力的影响。方法以脂质体将包含正义、反义RhoC cDNA真核表达载体,分别转染人胆管癌QBC939细胞。应用克隆形成试验检测细胞增殖活性的变化,流式细胞仪检测转染前后细胞周期的变化,Boyden小室侵袭实验检测侵袭及运动能力的变化。结果正义RhoC基因能促进胆管癌QBC939细胞增殖,流式细胞仪分析结果显示,转染后细胞出现G1期细胞减少;侵袭实验显示,转染后细胞侵袭能力较转染前有显著加强。反义RhoC基因能抑制胆管癌QBC939细胞增殖,流式细胞仪分析结果显示,转染后细胞出现G1期细胞增加;侵袭实验显示,转染后细胞侵袭能力较转染前有显著减弱。结论RhoC基因能够促进胆管癌QBC939细胞株的体外增殖和侵袭能力,反义RhoC基因可抑制胆管癌QBC939细胞的增殖和侵袭能力。     

大黄素对人胆管癌多药耐药细胞QBC_（939）/ADM的耐药逆转作用

目的探讨大黄素（Emodin,EM）对人胆管癌多药耐药细胞QBC939/ADM的耐药逆转作用。方法细胞生长周期、凋亡率采用流式细胞术（FCM）,多药耐药P糖蛋白（P-gP）以免疫组织化学（SP）法检测。结果阿霉素（ADM）、紫杉醇分别与EM联合作用于人胆管癌多药耐药细胞QBC939/ADM的凋亡率比单独作用有显著提高。细胞周期分布显示：ADM、紫杉醇分别与EM联合作用于人胆管癌多药耐药细胞QBC939/ADM,使QBC939/ADM阻滞于G2/M期的细胞数明显增加。EM和紫杉醇联合作用后,人胆管癌多药耐药细胞QBC939/ADM中多药耐药P糖蛋白（P-gP）的表达由72.00%降低到46.00%（P〈0.01）。结论EM对QBC939/ADM细胞的多药耐药性有逆转作用。其作用机理可能与人胆管癌细胞P-gP的表达有关,通过与化疗药物竞争性结合P-gP的结合位点发挥疗效。     

黄芩苷通过调控c-Myc介导的细胞周期抑制胆管癌细胞增殖

目的　探究黄芩苷（BC）对人胆管癌（CCA）细胞QBC939和RBE增殖的影响及其潜在机制。方法　取对数生长期QBC939和RBE细胞，不同浓度的BC处理细胞24 h后，采用CCK-8法分别检测BC对CCA细胞增殖及敲低原癌基因蛋白质（c-Myc）后对BC引起细胞增殖活性改变的影响；高倍显微镜观察BC对细胞生长状态的影响；流式细胞术检测BC对CCA细胞周期的影响；蛋白免疫印迹（Western blot）实验分别检测BC及小干扰RNA（siRNA）敲低CCA细胞中c-Myc后对周期相关蛋白周期素依赖激酶抑制剂（p27）、细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）及c-Myc表达的影响。结果　与0 μmol/L组相比，BC明显抑制QBC939和RBE细胞的增殖活性（P＜0.01），且高倍显微镜下观察到细胞生长减缓；BC可将QBC939细胞周期阻滞于S期（P＜0.05）；随着BC浓度的增加，p27的蛋白水平明显上调，而Cyclin D1则显著降低（P＜0.01）；BC可下调c-Myc的蛋白表达，且敲低c-Myc后p27和Cyclin D1蛋白表达的变化趋势与BC处理时一致（P＜0.05）；单独敲低c-Myc后可明显抑制QBC939和RBE细胞的存活率（P＜0.01），并能进一步增强BC的抑制作用。结论　BC通过抑制c-Myc信号通路阻滞细胞周期，进而抑制CCA细胞的增殖。     

冬凌草甲素对MCF-7细胞的生长抑制作用及诱导凋亡作用的实验研究

目的探讨冬凌草甲素对人乳腺癌细胞MCF-7细胞的生长抑制作用及诱导凋亡作用。方法以不同浓度的冬凌草甲素作用于体外培养的MCF-7细胞,MTT法检测细胞生长抑制率,应用Hoechst 33258荧光染色法以及流式细胞仪观察细胞凋亡情况。结果冬凌草甲素可显著抑制MCF-7细胞的生长及诱导细胞发生凋亡,并呈现出一定的剂量-效应与时间-效应关系。Hoechst 33258荧光染色观察到典型的核浓缩、核碎裂等细胞凋亡的形态学变化。结论冬凌草甲素能显著抑制MCF-7细胞的生长,诱导细胞发生凋亡是其重要作用方式。     

青蒿素对肝癌HepG2细胞增殖、凋亡及β-catenin蛋白表达的影响

目的探索青蒿素对肝癌细胞的抑制作用及其作用机制。方法不同浓度的青蒿素与人肝癌细胞HepG2培养24、48、72 h,采用cell viability法检测细胞增殖活性,细胞克隆实验检测抑制情况,细胞流式实验检测凋亡,Western blot和免疫荧光实验检测HepG2细胞内β-catenin蛋白含量的变化。结果青蒿素以时间和剂量依赖的方式抑制HepG2细胞的增殖。与空白对照相比较,青蒿素对人肝癌HepG2细胞的增殖有明显抑制作用(P<0.05),且青蒿素能诱导肝癌HepG2细胞凋亡。青蒿素通过增加HepG2细胞质内的β-蛋白含量,进而抑制上皮细胞向间充质细胞的转变。结论青蒿素能够抑制肝癌细胞HepG2的增殖,并具有抑制肝癌细胞转移的潜力,其可能是通过抑制β-catenin从细胞质向细胞核的转运,进而抑制细胞上皮间充质转换。     

苦参碱对上消化系肿瘤临床药理作用的研究进展

苦参碱能防治大鼠胃癌前病变以及乙基硝基亚硝基胍诱发大鼠原发性胃癌,也能防治人胃癌MKN-45细胞、SGC-7901细胞、BG823细胞、人胰腺癌BxPC-3细胞移植瘤在裸鼠或大鼠体内生长。经体外实验发现,苦参碱能浓度相关地抑制人胃癌SGC-7901细胞、MGC803细胞、BGC823细胞、MKN-45细胞、NCI-N87细胞、AGS细胞、人胰腺癌BxPC-3细胞、CFPAC-1细胞、人胆管癌QBC939细胞、人胆囊癌GSC-SD细胞、人食管癌Eca109细胞、Escl细胞的增殖并诱导其凋亡。经体内外实验结果发现,苦参碱能增强化疗药抗人胃癌SGC-7901细胞作用。综述苦参碱对消化系肿瘤临床药理作用的研究文献,并对其研究进展做了分析。     

TSA对胆道癌细胞系生长的影响

目的:研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂在体外和体内对胆囊癌细胞系和肝外胆管癌细胞系生长的影响,并探讨其临床应用价值。方法:用组蛋白去乙酰化酶抑制剂-曲古抑菌素A(trichostatin A,TSA)作用于胆囊癌细胞系(Mz-ChA-1)和肝外胆管癌细胞系(QBC939、KMBC、OZ),用MTT法检测TSA对这些细胞系生长的影响。将Mz-ChA-1接种裸鼠皮下建立胆囊癌裸鼠种植模型,观察TSA处理前后体内种植瘤生长的变化。结果:TSA可以抑制Mz-ChA-1和QBC939、KMBC、OZ的增殖,以上作用与药物浓度在一定范围内呈正相关。成功建立胆囊癌裸鼠体内种植模型,TSA处理后裸鼠体内种植瘤生长受抑制。结论:TSA在体外能抑制胆囊癌细胞系和肝外胆管癌细胞系的增殖;TSA在体内能抑制胆囊癌细胞系的增殖。     

广西眼镜蛇毒蛋白Natrin在体外诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡作用的研究

目的观察广西眼镜蛇毒蛋白Natrin在体外对人肝癌SMMC-7721细胞的增殖抑制作用及凋亡诱导作用。方法以不同浓度的Natrin作用于SMMC-7721细胞24 h后,用MTT法检测细胞的生长抑制率;AO/EB双染色法、透射电子显微镜法观察细胞凋亡、流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期。结果 Natrin对人肝癌SMMC-7721细胞有体外抑制作用,随着药物浓度的增大抑制率也随之增大,24 h半数抑制浓度IC50为138.69 mg·L-1;给药后,荧光显微镜下与透射电子显微镜下细胞呈现典型的凋亡形态改变;流式细胞仪检测到随着药物浓度的增大凋亡百分数也随之增大;Natrin能诱导SMMC-7721细胞发生S期和G2/M期阻滞。结论Natrin在体外能抑制人肝癌SMMC-7721细胞增殖并诱导其凋亡。     

熊果酸对HL60细胞作用机制的初步研究

目的探讨熊果酸在体外对急性早幼粒白血病HL60细胞增殖抑制和诱导凋亡作用。方法采用体外细胞培养技术,荧光显微镜观察细胞结构变化、MTT法观察细胞生长抑制作用、流式细胞仪检测细胞凋亡及周期变化。结果 MTT法证实熊果酸对HL60细胞具有增殖抑制和杀伤效应,并呈浓度和时间依赖性。显微镜下可见HL60细胞出现典型凋亡细胞形态学改变。流式细胞仪检测细胞周期阻滞于G0/G1期。结论熊果酸在体外可抑制急性早幼粒白血病HL60细胞增殖,诱导细胞凋亡。     

紫杉醇对膀胱癌EJ细胞株增殖抑制及诱导凋亡的作用

目的:探讨紫杉醇体外抑制膀胱癌E J细胞株及诱导凋亡的作用。方法:体外培养膀胱癌E J细胞株,以不同浓度紫杉醇处理12~72h后,通过M TT法测定细胞生长抑制作用,采用电镜观察和DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡。结果:紫杉醇能抑制E J细胞的生长,并在一定剂量和时间范围内呈现出明显的时间、浓度依赖关系。电镜下凋亡细胞体积缩小,染色质浓缩致密,并沿核膜分布形成花瓣形。电泳见出现典型的凋亡DNA梯形带。结论:紫杉醇能抑制膀胱癌E J细胞株的生长,诱导凋亡可能为其抗肿瘤作用机制之一。     

掌叶半夏总蛋白诱导人卵巢癌SKOV3细胞凋亡的实验研究

目的研究掌叶半夏蛋白对人卵巢癌细胞SKOV3体外增殖凋亡活性的影响,以确定掌叶半夏蛋白能否抑制卵巢癌的生长及其可能的作用机制。方法应用CCK-8法检测掌叶半夏蛋白对SKOV3细胞体外生长的影响;利用流式细胞仪,采用Anexinn-V法检测掌叶半夏蛋白诱导SKOV3细胞凋亡的作用。结果SKOV3细胞经掌叶半夏蛋白作用后,细胞生长受到明显的抑制,Anexinn-V法检测到细胞凋亡,凋亡率随着作用浓度的增加及作用时间的延长而升高。结论掌叶半夏蛋白对卵巢癌细胞SKOV3有抑制增殖和促凋亡作用,其诱导凋亡机制有待进一步研究。     

二氢青蒿素对人乳腺癌MCF-7细胞的体外抑制作用

目的研究二氢青蒿素(青蒿素生物合成中的可能前体)对肿瘤细胞增殖的影响和机制.方法采用体外培养的人乳腺癌MCF-7细胞株,利用SRB法测定青蒿素和青蒿琥酯对MCF-7细胞增殖的影响,用流式细胞检定法(FCM)测定细胞周期的变化,用亚G1期含量测定法和DAPI荧光染色法观察细胞凋亡.结果二氢青蒿素能显著抑制MCF-7细胞的增殖,IC50为0.26μmol*L-1;二氢青蒿素作用后细胞周期发生明显变化,细胞被阻滞在G0+G1期,S期细胞显著减少.二氢青蒿素作用细胞24h后可轻微诱导MCF-7细胞凋亡.结论二氢青蒿素能强烈抑制MCF-7细胞增殖,将细胞阻滞于G0+G1期.     

基因转移FasL诱导人脑胶质瘤细胞凋亡的体外实验研究

目的：探讨体外基因转移Fas配体（Fas-Ligand,FasL)对恶性人脑胶质瘤细胞凋亡的影响，方法：用携带人FasL cDNA的缺陷型重组腺病毒载体（Ad-FL)，在体外转导5株人脑胶质瘤细胞，并使其表达，通过流式细胞仪，RT－PCR，TUNEL法及荧光显微镜分别进行Fas/FasL表达检测和相关凋亡检测，分析，结果：RT－PCR和流式细胞仪检测5株胶质瘤细胞表达均表达Fas，不表达FasL,而Ad-FL转导的5株胶质瘤细胞均能表达FasL,Fas表达水平与抗Fas抗体诱导胶质瘤细胞凋亡敏感性无相关性，Ad-FL能显著诱导5株胶质细胞瘤在体外凋亡或抑制其生长，结论：重组腺病毒FasL在体外诱导人脑胶质瘤凋亡效果显著。