山东半岛地区汉族人群HLA-A、B、DRB1高分辨等位基因及单体型多态性的研究

目的研究山东半岛地区汉族人群HLA-A、B、DRB1等位基因多态性的分布特征。方法应用聚合酶链反应-直接测序分型(polymerase chain reaction sequence-based typing,PCR-SBT)法和序列特异性寡核苷酸探针杂交技术(Polymerase chain reaction and sequence-specific olignucleotide probe hybridizations,PCR-SSOP)高分辨试剂,对山东半岛地区865名无血缘关系的汉族健康人群HLA-A、B、DRB1进行基因分型。结果检出HLA-A、B、DRB1等位基因分别有33、73、43种,经统计分析这3个基因座分布均符合Hardy-Weinberg平衡定律(P>0.05),A*3001-B*1302-DRB1*0701(7.61%)和A*3303-B*4403-DRB1*1302(1.674%)单体型是山东半岛地区汉族人群最常见单体型。结论山东半岛地区汉族人群HLA-A、B、DRB1基因座单体型分布具有高度的遗传多态性且有其自身分布特点。本研究获得的的HLA-A、B、DRB1基因座单体型分布数据及相关遗传参数资料,为HLA在人类学、免疫遗传学、法医学和其它的组织器官移植方面的应用和科学研究提供和积累了基础资料。     

造血干细胞移植供受者HLA基因配型结果分析

目的 分析HLA基因配型结果 与患者成活率的关系.方法 采用准确、简便的DNA提取方法 和PCR-SSP基因分型方法 .结果 对179例临床标本进行基因水平的研究发现,HLA PCR-SSP基因分型方法 具有良好的稳定性、可靠性和特异性.配型后的15例造血干细胞移植病人,全部移植成活,现无病存活12人.结论 HLA基因分型方法 准确、特异、重复性好.经HLA基因配型后患者造血干细胞移植成活率高.     

甘肃酒泉地区人群HLA-A、B、DRB1等位基因多态性研究

目的研究中国造血干细胞捐献者资料库甘肃分库汉族捐献者HLA-A、B、DRB1等位基因频率分布特征。方法采用反向特异性寡核苷酸探针杂交法(PCR-SSO)基因分型技术,对甘肃酒泉地区215份健康无血缘关系的汉族人群的人类白细胞抗原(HLA-A、-B、-DRB1)等位基因进行基因分型。结果在受检人群中共检出54种HLA特异性基因,A*02(32.47%)、A*11(20.62%)、A*24(14.95%)、B*15(15.72%)、B*40(13.4%)、DRB1*09(16.49%)、DRB1*12(15.46%)、DRB1*04(11.86%)和DRB1*15(10.57%)为本地区汉族人群的优势基因,其中A位点检出以往国内报道较少的A*74等位基因。结论甘肃酒泉汉族人群HLA-A、B、DRB1等位基因的分布特征接近北方汉族人群,与中国汉族人总体分布特征相似。未发现群体特有的基因,但具有其自身分布特征。这为不同地区、不同人群有可能在中国造血干细胞库甘肃地区汉族捐献者中寻找到HLA相合的供者提供了依据。     

741对非亲缘关系供、受者HLA高分辨基因分型结果分析

目的 研究造血干细胞捐献者资料库供、受者HLA-A、HLA-B、HLA-Cw、HLA-DRB1、HLA-DQB1位点等位基因高分辨全相合及不相合的概率.方法 采用基因测序分型(sequence based typing,SBT),序列特异性寡核苷酸探针(sequence-specific oligo nucleotide probes,SSOP),聚合酶链反应序列特异性引物(sequence-specific primers,SSP)对741对HLA-A、HLA-B、HLA-DRB1低分辨全相合的无关供、受者进行HLA-A、HLA-B、HLA-Cw、HLA-DRB1、HLA-DQB1基因高分辨检测.结果 HLA-A、HLA-B、HLA-Cw、HLA-DRB1、HLA-DQB1基因位点高分辨分型供、受者全相合的概率为0.1916(142/741);1个等位基因不相合的概率为0.1930(143/741),不相合的位点频率次序为:HLA-A＞-Cw＞-DQB1＞-B＞-DRB1;2个等位基因不相合的概率为0.2362(175/741).其中仅在一个位点(loci)上的概率为0.0175(13/741),位于两个位点上的概率为0.2186(162/741),以A+Cw组合位点不相合的概率最高,其次以B+Cw和DRB1+DQB1组合位点次之.结论 对判断无关供、受者HLA-A、HLA-B、HLA-DRB1低分辨全相合,而HLA-A、HLA-B、HLA-DRB1、HLA-Cw、HLA-DQBI高分辨基因分型全相合或部分相合的概率有重要参考价值,并且不仅能提高非亲缘造血干细胞移植的成功率,还有助于提高造血干细胞捐献者资料库数据的使用率.     

山东滨州地区汉族造血干细胞捐献志愿者 HLA- A、- B、- DRB1高分辨等位基因及其单体型多态性分析

目的:探讨山东滨州地区汉族造血干细胞(HSC)捐献志愿者中人类白细胞抗原( HLA)- A、- B、- DRB1高分辨等位基因及其单体型的多态性分布特征。 方法:选择2010年1月至2018年12月,于滨州市中心血站行 HLA- A、- ...     

中国汉族群体中异基因造血干细胞移植前人类白细胞抗原的高分辨分型

目的：通过对异基因造血干细胞移植无关供受者对的人类白细胞抗原A．B．DRB1基因的序列分析，探讨中国汉族群体中异基因造血干细胞移植前人类白细胞抗原高分辨分型的必要性。方法：实验于2000—08／2004—03在深圳市血液中心完成。供者和受者114对的血样分别来源中华骨髓库和各移植医院，供者和受者均签署知情同意书。采用聚合酶链式反应-测序分型技术对114对中国汉族无关供受者间的人类白细胞抗原-A，B，DRB1等位基因进行序列分析，观察中国汉族无关供受者对间等位基因水平的配合率、各等位基因家族的配对分布和错配分布规律。某些位点的模棱两可结果，则通过相应位点的高分辨聚合酶链式反应-序列特异性引物分型试剂进行分离并确认最后结果。结果：①高分辨与低分辨分型结果比较：114对无关供受者对中，110对人类白细胞抗原-A，B，DRB1的聚合酶链式反应-测序分型结果与低分辨（等位基因星号后两位数）DNA分型结果相吻合，4对聚合酶链式反应．测序分型结果与低分辨结果不相符。②供受者间人类白细胞抗原-A，B，DRB1高分辨配对分类结果：39％的中国汉族供受者对完全配合，但61％的供受者间存在至少一个等位基因的错配。③供受者间人类白细胞抗原-A，B，DRB1等位基因家族配对分布结果：3个座位的错配率分别为A（23％），B（10％），DRB1（17％）；A和DRB1座位的错配比较集中，A座位仅见于A＊02，A＊11和A＊24家族，DRB1座位见于DRB1＊04，DRB1＊08，DRB1＊12，DRB1＊14和DRB1＊15家族；而B座位的错配则比较分散，比较高的是B＊35，B＊48，B＊61和B＊62。④供受者间人类白细胞抗原-A，B，DRB1错配等位基因组合结果：3个座位的错配等位基因组合呈现较高的多样性，比较常见的几种组合为A＊0201／0207，A＊1101／1102．A＊0201／0206，A＊0203／0207，B＊4002／4006，DRB1＊1201／1202和DRB1＊1501／1502。结论：中国汉族异基因造血干细胞移植无关供受者对的人类白细胞抗原等位基因配合率低且其分布具有一定规律和特殊性，在移植前有必要对无关供受者对进行人类白细胞抗原高分辨分型。     

HLA半相合造血干细胞移植的研究进展

异基因造血干细胞移植是治疗恶性血液病最有效的手段之一，但人类白细胞抗原(HLA)屏障限制了其广泛应用。随着免疫学、分子生物学、细胞生物学理论和技术的不断发展，HLA半相合造血干细胞移植日益受到关注。本文就其研究进展作一综述。     

造血干细胞移植配型中HLA分型方法的研究进展

移植物抗宿主病(GVHD)是造成异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)和器官移植失败的关键因素之一，而移植前选择供受体HLA合适的配型则是减弱和减轻移植排斥反应的重要措施。随着无关供受体移植数量的逐年增加以及HLA新等位基因的不断发现(已发现1900多个等位基因)．势必要求建立一种快速、特异、高分辨、低成本、大规模及智能化的新型HLA分型技术平台，因此，HLA分型技术为适应这一现状而取得了飞速发展。我们对近年出现的几种HLA分型策略作一概述。     

造血干细胞移植供受者HLA基因配型结果分析

目的分析HIA基因配型结果与患者成活率的关系。方法采用准确、简便的DNA提取方法和PCR—SSP基因分型方法。结果对179例临床标本进行基因水平的研究发现，HLAPCR—SSP基因分型方法具有良好的稳定性、可靠性和特异性。配型后的15例造血干细胞移植病人．全部移植成活．现无病存活12人。结论HIJA基因分型方法准确、特异、重复性好。经HLA基因配型后患者造血于细胞移植成活率高。     

基于PCR-SSP技术的HLA-A、B、CW、DRB1位点直接高分辨分型方法的应用

在骨髓移植过程中,HLA配型准确与否直接影响骨髓移植的结果[1]。随着分子生物学技术的发展,借助PCR技术已建立了多种基因分型方法。其中PCR-SSP法是近年来发展起来的应用最广、最简便的方法[2]。目前国内进行HLA-A、B、CW、DRB1位点高分辨分型都是先检测出受检样品的HLA-A、B、CW、DRB1位点低分辨分型结果,再针对每一个等位基因,进行高分辨分型检测,实验耗时长,费用高。笔者应用PCR-SSP技术,在384孔板上一步即可获得HLA-A、B、CW、DRB1位点高分辨的结果,整个试验只需2~3h即可完成,效率高且成本低。1材料与方法1.1检测对…     

HLA 高分辨分型在非亲缘双份脐血移植中的应用价值简

本研究探讨人类白细胞抗原（HLA）高分辨在脐血移植中的应用价值及对移植预后的影响.对34名患有恶性血液病患者行非亲缘双份脐血移植,采用DNA序列测序方法（SBT）、序列特异性寡核苷酸探针（SSOP）和高分辨序列特异性引物（SSP）分型方法,对供、患者双方行低分辨HLA-A,B,DRB1及高分辨HLA-A,B,Cw,DRB1,DQB1配型,对比分析其在优势脐血植入、造血重建时间、急性移植物抗宿主病（aGVHD）及移植后感染之间的差异.结果表明,总有核细胞（TNC）中位数为6.0×10 7/Kg,当TNC≥5×107/kg时,可缩短中性粒细胞植入时间（P＜0.05）,HLA高分辨（6-10）/10组在脐血优势植入、血小板植入时间、aGVHD发生方面优于（4-5）/10组（P＜0.05）.高分辨HLA-Ⅰ＋Ⅱ类位点错配、HLA-DRB1、DQB1位点不合,能延长血小扳植入时间（P＜0.05）.低分辨HLA （5-6）/6组与4/6组相比,在优势脐血植入无显著性差异（P＞0.05）,但在血小板植入时间及aGVHD的发生方面HLA-5/6优于4/6组（P＜0.05）.供受体性别、血型等对造血重建、优势脐血重建、GVHD的发生均未见统计学差异及与血小板及中性粒细胞植入时间均无相关性.结论：对非亲缘脐血移植受体和移植物进行HLA高分辨配型有利于遴选最佳脐血,在促进造血重建及降低移植后并发症方面具有重要的临床应用价值.     

异基因外周血造血干细胞移植治疗恶性血液病

为观察异基因外周血造血干细胞移植 (allo PBSCT)治疗急慢性白血病的疗效 ,从 1997年 3月至 2 0 0 3年 1月共进行了 2 1例急慢性白血病的Allo PBSCT。 2 1例的供者中 19例为HLA Ⅰ /Ⅱ抗原完全相合的同胞 ,1例慢性粒细胞白血病急粒变患者的供者为HLA半相合母亲 ,1例女性急性淋巴细胞白血病患者的供者为 1个B位点不合的胞妹。 2 1名供者均用rhG CSF动员 ,第 5天起用CS 3 0 0 0plus分离外周血单个核细胞 1-3次 ,预处理方案采用常用的TBI与联合化疗方案。所有病人均采用环胞菌素A和短程MTX进行移植物抗宿主病的预防。结果表明 ,移植后粒细胞恢复至≥ 0 .5× 10 9/L平均为 12天 ,血小板恢复至≥ 2 0× 10 9/L为 15天。 17例患者中发生急性GVHD 8例 (47% ) ,其中 1例为子母间移植 ;慢性GVHD 12例 (70 % ) ;4例存活的女性患者 ,包括 1例 1个B位点不合的ALL患者 ,均无急、慢性GVHD发生。 10 0天移植相关死亡 3例 (14 % ) ,复发 2例 (9.5% ) ,均为移植时未缓解患者。至报告时无病存活 11例 (52 .4% ) ,存活时间平均 40 (15-70 )个月。结论 :Allo PBSCT后造血恢复较快、白血病复发率相对较低 ,急性和重度GVHD的发生并无明显增加 ,但慢性GVHD发生率明显增高 ,并成为影响患者生存的主要并发症     

非清髓性异基因外周血造血干细胞移植治疗血液病6例报告

近年来 ,伴随移植学和免疫学研究的进展 ,国外一些学者新开展了非清髓性异基因外周血造血干细胞移植 (NMA Allo PBSCT)治疗血液病初步取得了较好的疗效[1-4 ] 。国内除我院有个例报告外尚无系列研究报告[5] 。我们用新设计的NMA Allo PBSCT治疗 6例血液病病人 ,效果如下。材料与方法病例6例病人均系 1998年 10月 - 1999年 10月在我科住院的病人 ,其中男 3例 ,女 3例 ,中位年龄 3 2 ( 16- 42 )岁。急性白血病 (AL)第一次完全缓解期 (CR1) 3例 ,其中急性髓性白血病 (AML) 2例 ,急性淋巴细胞白血病 (ALL) 1例。另 3例为 :慢性粒细…     

非亲缘供者外周血造血干细胞移植治疗恶性血液病

为了探讨非亲缘供者外周血造血干细胞移植(UD-HSCT)治疗恶性血液病的可行治疗方案和疗效,应用高分辨HLA配型(HLA-A、-B、-DR)完全相合或1个位点不合的非亲缘供者外周血造血干细胞移植治疗恶性血液病10例,预处理方案采用马利兰、环磷酰胺、阿糖胞苷、甲基环己亚硝脲和抗胸腺细胞球蛋白,以霉酚酸酯、环孢素A加短疗程的甲氨喋呤、舒莱预防移植物抗宿主病(GVHD)。结果显示,中性粒细胞回升>0.5×109/L的中位时间为13天,血小板回升>20×109/L的中位时间为17.5天;28天STR-PCR检测显示,10例均为完全供者型;急性GVHD3例(Ⅰ度1例自行缓解,Ⅲ度1例治愈,Ⅵ度1例死亡)。结论:在非亲缘供者外周血造血干细胞移植治疗恶性血液病过程中采用上述预处理方案和GVHD预防措施是可行而且有效的。     

重组人白介素-11对外周血造血干细胞移植后血小板恢复的影响

本研究观察重组人白介素-11（rhIL-11）对恶性血液病患者在异基因外周血造血干细胞移植后血小板恢复的影响及其不良反应。20例接受同胞全相合异基因外周血造血干细胞移植术后的恶性血液病患者,随机分为“rhIL-11治疗组”和对照组。rhIL-11治疗组患者在移植术后6天（＋6天）起应用rhIL-11 0．75mg／d,连续14天;对照组患者仅接受对症支持治疗,其间观察血小板计数由最低值恢复至〉20×10^9／L和〉50×10^9／L的时间并于移植后30天观察骨髓巨核细胞的数量。结果表明：rhIL-11治疗组患者血小板计数由最低值恢复至〉20×10^9／L的时间平均为移植术后22．8天,对照组平均为移植术后27．3天,后者较治疗组延长4．5天（p〈0．01）。治疗组患者血小板计数由最低值恢复至〉50×10^9／L的时间平均为移植后24．5天,对照纽平均为移植后35．3天,后者较治疗组延长9．6天（p〈0．01）。移植术后30天时,对照组患者的骨髓巨核细胞总数及产板型数量分别为7．8个和4．2个,rhIL-11治疗组分别为15．6个和9．2个,均较对照组显著增加（p〈0．01）。结论：造血干细胞移植后应用rhIL-11有加速血小板恢复的作用。     

造血干细胞移植后患者间充质干细胞增殖功能的研究

为了研究造血干细胞移植（hematopoietic stem cell transplantation,HSCT）后造血植活患者中骨髓源的间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSCs）的增殖能力,本研究选择造血干细胞移植后临床植活的34例患者作为研究对象,抽取34例患者及30例正常健康供者骨髓,进行微环境成纤维细胞集落形成单位（colony-formingunit-fibroblast,CFU-F）集落培养,同时对MSC进行培养传代,记录MSC的融合时间及传代总数;利用流式细胞术（flowcytometry,FCM）检测患者MSC表面抗原的表达;将此34例患者培养结果与30例正常对照结果进行比较统计。另外对其中骨髓加外周血加第二供者脐血移植的10例患者与骨髓加外周血移植的19例患者的MSC体外扩增指标进行比较统计。结果表明：34例患者中有31例（91.1%）患者的MSC原代培养能达到贴壁融合,有1例（2.9%）达到部分融合,2例（5.9）未达融合;与正常对照相比,患者的MSCs融合时间明显延长,传代总数明显减少,CFU-F数明显降低,即其MSC的体外扩增能力明显受损。骨髓加外周血加第二供者脐血移植的10例患者与骨髓加外周血移植的19例患者相比,MSC达到融合的时间短,体外传代总数多,CFU-F计数高。结论：移植后患者的MSC呈明显受损状态,加用第二供者脐血细胞能部分改善患者MSC体外增殖功能。     

HLA配型、PRA检测在心脏移植中的应用研究

目的：探讨人类白细胞抗原（human leukocyte antigen，HLA）配型、群体反应性抗体（panel reactive antibody，PRA）与心脏移植术后急性排斥反应及近期生存的关系。方法：将心脏移植受者根据不同的HLA配型标准，按错配数分组；根据PRA检测阳性或阴性分组。统计各组术后3、6、12个月内急性排斥反应发生率并行生存分析。结果：HLA配型不同错配数组间急性排斥反应发生率及生存曲线无显著差异；PRA阳性和阴性组间急性排斥反应发生率及生存曲线也无显著差异。结论：就我国目前国情而言，心脏移植术前不进行常规HLA配型也是可行的，PRA阳性者通过适当的干预治疗也可获得安全的移植。     

外周血干细胞移植患者的护理

外周血干细胞移植既能达到造血干细胞移植的疗效，又避免了骨髓移植的缺点，具有良好的临床应用前景，作介绍了6例外周血干细胞移植术（pbsct）（4例异基因pbsct,2例自体pbsct）的主要过程及护理，包括：外周血干细胞的采集前运员、采集时机、采集方法和采集剂量阈；干细胞回输时对溶血，呼吸道、消化道症状，体温以及低钙血症的观察与护理，移植后对急性移植物抗宿主病，肝静脉闭塞病，间质性肺炎以及应用环孢素A的观察与护理。     

非血缘异基因造血干细胞移植治疗高危难治急性髓系白血病的疗效分析

本研究探讨非血缘异基因造血干细胞移植（URD-HSCT）治疗高危急性髓系白血病（AML）的疗效。22例接受URD-HSCT的高危难治性AML患者纳入研究,采用改良马利兰＋环磷酰胺（20例）或全身放疗＋环磷酰胺（2例）的清髓性预处理方案行URD-HSCT,术后采用环孢素A（CsA）＋甲氨蝶呤（MTX）＋骁悉（MMF）＋ATG预防急性移植物抗宿主病（aGVHD）。结果表明：22例患者中21例（95.5%）获得植入,中性粒细胞和血小板植活的中位时间分别是12（10-19）d和14（5-22）d;中位随访时间18（3-135.5）月,2年的总体生存率（OS）和无白血病生存率（LFS）分别为（53.9±12.2）%和（49.1±10.7）%;移植后8例患者发生aGVHD,累积发生率为（39.1±10.6）%,其中6例为I-II度aGVHD,2例为III-IV度aGVHD;在19例可评估的患者中,慢性GVHD（cGVHD）6例（4例为局限型,2例广泛型）,累积发生率为（28.8±9.6）%;复发7例,2年的累积复发率为（35.8±11）%;死亡原因分析显示,9例死亡中1例死于败血症,1例死于肺部感染,6例死于复发,另外1例复发予化疗联合供体淋巴细胞输注（DLI）治疗缓解后发生IV度aGVHD而死亡;预后因素分析显示,复发是影响生存的主要因素（P〈0.001）,而性别、年龄、移植方式、aGVHD、感染等对生存无明显影响,cGVHD患者生存率高于未发生者（83.3%vs 37%,P=0.152）。结论：单中心样本研究结果显示,URD-HSCT是治疗无合适血缘供体高危AML患者的有效手段,cGVHD患者预后较好,复发是影响患者生存的主要因素,移植后通过过继免疫治疗如DLI可以预防复发并改善预后以获得长期生存。     

异基因外周血造血干细胞移植治疗75例血液病

为了探讨异基因外周血造血干细胞移植（allo—PBSCT）治疗血液病的疗效及其并发症，对以allo—PBSCT治疗的75例患者进行了回顾性分析。75例患者中慢性髓系白血病（CML）35例、急性髓系白血病30例、重型再生障碍性贫血5例、急性淋巴细胞白血病3例、多发性骨髓瘤1例及阵发睡眠性血红蛋白尿1例。75例中男42例，女33例，年龄13—72岁，清髓性移植66例，非清髓造血干细胞移植9例。HLA全相合和5／6相合61例（其中6例为非亲缘性移植），单倍体相合移植14例。预处理方案中清髓性移植采用：①Cy／TBI，②Bu／Cy；而HLA单倍体相合移植均采用Cy／TBI＋阿糖胞苷；非清髓性移植采用福达拉滨＋TBI／或（CTX＋ATG）。GVHD预防：全部患者输入的干细胞均未进行去除T淋巴细胞及其他处理。HLA全相合移植均采用CsA＋短程MTX方案，HLA单倍体相合移植用CsA＋短程MTX＋ATG＋抗CD25＋霉酚酸酯。移植后复发给予供者淋巴细胞输注（DLI）和／或化疗，CML患者同时加用格列卫治疗。性别不同的供受者应用荧光原位杂交（FISH）技术检测X和Y染色体，性别相同的供受者应用PCR方法检测短片段串联重复（STR）。植入后定期采用PCR及（或）FISH监测微小残留病灶。结果表明：74例患者allo—PBSCT后获得造血重建，并最后转为完全供者嵌合体。造血重建中位时间为15（5—25）天。75例患者中至今46例（61．3％）存活，中位生存期23（2—61）个月。29例患者死亡，其中9例死于疾病复发，7例发生Ⅲ度以上急性GVHD死亡，7例（2例间质性肺炎）因严重感染而死亡，单倍体相合移植患者9例存活者均为完全供者嵌合，平均无病生存时间为30（6—53）个月，5例死亡，平均生存时间为7（2—17）个月，1例CML急变患者移植后100天复发，经DLI治疗达完全缓解，存活至今已53个月。发生巨细胞病毒（CMV）感染16