豚鼠内耳前庭终器的扫描电镜观察

实验观察结果表明,应用豚鼠内耳前庭终器分离取材术与扫描电镜标本制备技术相结合,可以取得豚鼠前庭终器各种超微结构的清晰的三维图象,为开展内耳前庭终器的生理和病理研究,提供了手段和形态学基础。     

豚鼠前庭终器的扫描电镜观察

采取在解剖显微镜下快速取出活体豚鼠内耳前庭终器进行固定的方法,对豚鼠椭圆囊斑、球囊斑的耳石,前庭终器的感觉纤毛及其断面的超微结构进行了观察和讨论。     

豚鼠内耳前庭终器分离取材术

我们在借鉴豚鼠耳蜗取材经验的基础上,经过反复摸索,初步得到一套内耳前庭终器的系统取材与制片的方法。现介绍如下:     

解剖、生理和组胚学

021,27胚胎期豚鼠前庭终器细胞凋亡的检测/胡金玮…//第四军医大学学报一2002,23(16)一1514一1517 研究豚鼠胚胎正常发育期前庭终器形态变化及细胞凋亡,探讨细胞凋亡在前庭终器发育中的作用。 ·328.方法:选用胚胎40d和50d正常豚鼠,光镜观察其前庭终器发育形态变化,末端脱氧核昔酸转移酶介导的生物dUTP缺口末端标记技术(TUNEL)测定毛细胞和支持细胞凋亡,并以电镜观察凋亡细胞核变化。结果:胚胎40d,豚鼠前庭壶腹、椭圆囊斑及球囊斑已分化,前庭上皮出现一层毛细胞及多层支持细胞;胚胎50d,支持细胞层数减少,毛细胞数目增加,伴有神经纤维出…     

呼吸道合胞病毒所致豚鼠中耳内耳病变的光镜观察

将呼吸道合胞病毒注入豚鼠中耳腔内,于接种后不同时间取材进行病毒分离,血清学检查及光镜观察。中耳粘膜病毒培养阳性率一周内为50％。血清特异性抗体IgG滴度呈逐渐增高的趋势。光镜观察中耳粘膜以变性坏死性炎症为主。伴有以淋巴细胞为主的炎性细胞浸润,三周后基本恢复。耳蜗毛细胞部分变性,少数坏死。前庭终器感觉毛细胞亦出现变性。结果表明:呼吸道合胞病毒能致豚鼠急性中耳炎症,并使内耳感觉毛细胞变性。     

胚胎期豚鼠前庭终器细胞凋亡的检测

目的 研究豚鼠胚胎正常期前庭终器形态变化及细胞凋亡，探讨细胞凋亡在前庭终器发育中的作用。方法 选用胚胎40和50d正常豚鼠，光镜观察基前庭终器发育形态变化，末端脱氧核苷酸转移酶介导的生物dUTP缺口末端标记技术（TUNEL）测定毛细胞和支持细胞凋亡，并以电镜观察凋亡细胞胞核变化。结果 胚胎40d，豚鼠前庭壶腹、椭圆囊斑及球囊斑已分化，前庭上皮出现一层毛细胞及多层支持细胞；胚胎50d，支持细胞层数减少，毛细胞数目增加，伴有神经纤维出现。TUNEL检测提示大量毛细胞和支持细胞发生凋亡。电镜下前庭上皮细胞发生分化，凋亡的毛细胞和支持细胞胞核染色质浓缩边集。凋亡细胞与新生细胞相邻。结论 细胞凋亡是豚鼠内耳前庭终发育的必然现象，凋亡的发生对保证内耳正常结构和功能密切相关。     

内耳干细胞分离培养及鉴定的实验研究

目的：明确内耳干细胞的取材、培养方法及鉴定方法,观察内耳干细胞的形态.方法：取前庭椭圆囊处上皮;大鼠内耳内螺旋沟;内耳的Corti器位置;利用无血清培养和单细胞克隆技术,进行细胞培养,在相差显微镜下观察细胞形态及生长状况,并用Nestin、Brdu免疫荧光方法,鉴定内耳干细胞.同时进行细胞计数.结果：从新生大鼠内耳分离的组织,经原代和传代培养后,可获得大量未分化,悬浮生长的Nestin阳性细胞团,并具有增殖的能力,免疫荧光实验可表达Brdu阳性.其中内耳的Corti器位置取材组Nestin阳性细胞团的直径和其他两组存在统计学差异.而打散后的细胞团中Brdu阳性细胞数量较多,是内耳干细胞的最佳取材位置.结论：从新生大鼠前庭椭圆囊处上皮、大鼠内耳内螺旋沟、内耳的Corti器位置可分离出内耳干细胞,其中内耳的Corti器是内耳干细胞的最佳取材位置.     

实验动物运动病对前庭功能及前庭器结构的影响——前庭电生理研究及超微结构观察

<正>运动病的发病机理较为复杂,影响发病的因素颇多,个体敏感性及耐受力亦有差异。本实验制作豚鼠运动病实验模型,检测其前庭功能并观察前庭终器超微结构的变化,探讨运动病对前庭器结构的改变与功能变化的关系。     

碱性成纤维细胞生长因子及成纤维细胞生长因子受体在豚鼠前庭中的定位和表达

目的 :观察碱性成纤维细胞生长因子 ( b FGF)及成纤维细胞生长因子受体 ( FGFR)在豚鼠前庭终器的定位和表达。方法 :免疫组织化学。结果 :b FGF位于支持细胞和毛细胞的胞浆及胞核 ,FGFR位于支持细胞表面。b FGF及 FGFR在成年豚鼠表达较弱 ,新生豚鼠及庆大霉素内耳损伤豚鼠表达较强。结论 :提示 b FGF在豚鼠前庭终器发育、结构功能维持及损害后修复中起重要作用     

中耳局部应用氟嗪酸及庆大霉素对豚鼠Corti′s器及前庭终器的影响

本研究采用鼓室植管法，于正常豚鼠中耳局部连续应用氟嗪酸及庆大霉素溶液后，观察并比较了两种药液对内耳Ｃｏｒｔｉ′ｓ器及前庭终器的组织学影响。结果表明，氟嗪酸对内耳的感觉细胞无明显的影响，而庆大霉素则有严重的耳蜗毒性及前庭毒性。     

中耳局部应用氟嗪酸及庆大霉素对豚鼠Corti‘s器及前庭终器的…

本研究采用鼓室植管法，于正常豚鼠中耳局部连续应用氟嗪酸及庆大霉素溶液后，观察并比较了两种药液对内耳Ｃｏｒｔｉ’ｓ器及前庭终器的组织学影响，结果表明，氟嗪酸对内耳的感觉细胞无明显的影响，而庆大霉素则有严重的耳蜗毒性及前庭毒性。     

慢性庆大霉素损伤后豚鼠前庭感觉上皮蛋白激酶C表达和活性

目的 研究庆大霉素慢性损伤后豚鼠前庭终器蛋白激酶C（PKC）活性的变化及其βⅠ,βⅡ,γ亚型的表达,探讨PKC与前庭损伤修复的关系。方法 采用免疫细胞化学法观察椭圆囊斑、球囊斑和壶腹嵴PKCβⅠ,Ⅱ,γ亚型的表达;应用γ－^32P示踪检测前庭终器PKC活性的变化。结果 PKCβⅠ,Ⅱ,γ亚型在前庭感觉上皮细胞均呈阳性表达,上皮下结缔组织呈阴性表达,βⅡ,γ亚型较βⅠ亚型表达稍弱,不同亚型抗原分布不安全相同,与对照组相比,PKCβⅠ,γ在停止注射庆大霉素后1d其表达明显减弱,随后其表达逐渐增加,至1wk其表达已高于对照组,3wk仍未恢复,PKCβⅡ表达各组变化不明显。豚鼠前庭终器PKC活性检测结果与PKCβⅠ,γ表达变化规律基本相似。结论 庆大霉素慢性中毒后逐鼠前庭感觉上皮PKCβⅠ,γ亚型表达及PKC活性均发生变化,且不同亚型抗原分布不安全相同,提示PKC在前庭感觉上皮损伤修复过程中发挥重要作用,不同亚型可能具有不同的作用。     

碱性成纤维细胞生长因子及成纤维细胞生长因子受体在豚鼠前 …

目的：观察碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）及成纤维细胞生长因子受体（ＦＧＦＲ）在豚鼠前庭终器的定位和表达。方法：免疫组织化学。结果：ｂＦＧＦ位于支持细胞和毛细胞的胞浆及胞核，ＦＧＦＲ位于支持细胞表面。ｂＦＧＦ及ＦＧＦＲ在成年豚鼠表达较弱，新生豚鼠及庆大霉素内耳损伤豚鼠表达较强。结论：提示ｂＦＧＦ在豚鼠前庭终器发育、结构功能维持及损害及修复中起重要作用。     

顺铂前庭毒性的透射电镜观察

使用透射电镜观察顺钱对豚鼠前庭终器的毒性作用。结果表明最敏感的壶腹嵴，其次是椭圆囊斑及球囊斑，受损细胞表现的退行性变。在总量相同时，突击用药所致的损害重于分次给药，提示选择用药方式可减少前庭毒性。     

豚鼠前庭感受器扫描电镜样品的制备

前庭感受器的扫描电镜观察是前庭生理学、药理学和前庭病理学等研究的重要方法之一。我们根据前人的基础,结合自己的实践体会,对豚鼠前庭感受器扫描电镜样品制备技术和前庭感受器的形态特征进行了探讨。现报道如下。一、方法1.取材与固定:豚鼠以4%戍巴比妥钠(40mg/kg体重)或0.4%硫喷妥钠(30mg/kg体重)腹腔内注射麻醉。迅速断头取颞骨,打开听泡,在蜗顶处钻一小孔,挑开圆窗下缘骨壁,再使镫骨脱位或取出,致圆窗和前庭窗开放。自蜗顶开孔处灌注2.5%戍二醛磷酸缓     

新生SD大鼠G418耳蜗Corti器离体损伤模型的建立

目的:建立毒性蛋白G418损坏新生大鼠耳蜗毛细胞的离体培养试验模型。方法:应用耳蜗基底膜分离取材技术,耳蜗器官离体培养技术和毛细胞免疫组化染色技术定量观察了G418对新生SD小鼠耳蜗毛细胞的损害。结果:G418对耳蜗毛细胞的有明显的损害,200μg/ml的终浓度,内外毛细胞均有不同程度损害,以外毛细胞为著。结论:G418可用于建立耳蜗Corti器离体损伤模型。     

人胎儿前庭器超微结构的观察

对人胎儿前庭器超微结构的研究,国内外报道甚少。本文对18至36周人胎儿颞骨10具进行了扫描电镜和透射电镜的观察,并对应用Surface preparation法制做人胎儿前庭器标本的方法进行了探讨。本文观察所见:豚鼠平衡斑的生理状态与人胎儿很近似,体面积比人胎儿平衡斑小,感觉毛长,细胞排列更整齐。28周以后的胎儿因前庭周围骨质变硬,制做标本时可以分别取出两囊斑和壶腹嵴。     

听神经瘤的现代诊断与治疗

1　发病机制的认识听神经瘤大部分并非起源于听神经而是起源于前庭神经 ,实为前庭神经鞘瘤。前庭神经从脑干出脑到前庭终器大约 2 cm长 ,分为前庭上下两支 ,听神经瘤起于两者的机会相当。前庭神经颅内段 (无髓鞘 ,轴索外由胶质细胞包围 )与颅外段 (有髓鞘 ,Schwann细胞形成 )的交界部分 (Obersteiner- Redlich段 )临近 Scarpa神经节处是听神经瘤的主要发生部位。此部位有丰富而排列紊乱的类似于 Schwann细胞的细胞 ,这些细胞交错于前庭神经节细胞之间 ,目前认为听神经瘤起源于这种细胞。临床上听神经瘤有发生于双侧具遗传倾向及单侧散发性…     

猴失神经手指神经植入后感觉终器的溃变与再生

目的：观察猴失神经手指感觉神经植入后感觉终器溃变与再生情况。方法：用猴手失神经模型,神经植入后在第１,３,５,８,１２ｍｏ分别取材进行电镜观察。结果：游离神经末梢其再生过程是;神经植入３ｏｍ真皮层出现新生的神经轴突,５ｍｏ时有髓和无髓纤维的数量明显增加,髓鞘增厚结构更加清晰８ｍｏ～１２ｍｏ再生轴突;成这正常水平,Ｍｅｒｋｅｌ细胞（１）感觉神经的植入能骺细胞溃变的发生。９２）感觉神经的植入ｅｒｋｅｌ     

豚鼠内耳冰冻切片技术

内耳深埋于颞骨岩部,其内部和周围空隙间充满淋巴液。因此,进行内耳切片首先要克服坚硬的迷路骨性障碍和选用合适的包埋剂替代淋巴液来支持膜迷路,以免切片时破坏内耳的结构。我们在常规冰冻切片技术的基础上,应用豚鼠全内耳膜迷路分离取材术,从颞骨中将膜迷路取出,或将整个颞骨浸入盐酸溶液中脱钙的方法,来克服骨性障碍;采用低温下可以凝固的明胶溶液作为膜迷路的支持包埋剂,进行内耳冰冻切片。经4年多实践,我们认为此法具有比火棉胶制片法切片较薄、制片周期短、可以任意选择内耳终器切片角度、内耳结构保持完好等