Nbn基因对小鼠小脑神经元发育的影响

目的:通过观察神经特异性Nbn基因敲除(Nbn-CNS-del)和对照(Nbn-CNS-Ctr)小鼠小脑神经元发育的形态学变化,探讨DNA损伤修复基因Nbn在小鼠小脑发育过程中的作用.方法:应用免疫组织化学技术和体视学方法对生后(P) 7、 14、 21d的Nbn-CNS-del和Nbn-CNS-Ctr小鼠小脑进行系统观察和定量分析.结果:与Nbn-CNS-ctr小鼠相比,Nbn-CNS-del小鼠生后各时间相点小脑发育迟缓,皮质各层界限不清,细胞排列紊乱,至21d未形成正常小脑皮质的3层结构;NeuN阳性表达的颗粒细胞面数密度和体密度值明显减小;D-28K阳性表达的浦肯野细胞面数密度和体密度值增加.结论:DNA损伤修复基因Nbn可能是小脑发育过程中的重要基因,影响小鼠小脑神经元的发育和成熟.     

Nbn基因敲除小鼠小脑形态发育的变化

目的:通过观察神经特异性Nbn基因敲除(Nbn-CNS-del)和对照(Nbn-CNS-Ctr)小鼠小脑发育的形态学变化,探讨DNA损伤修复基因Nbn在小鼠小脑发育过程中的作用.方法:应用光镜连续切片和体视学方法,对出生后(P)7、 14、 21d的实验组和对照组小鼠小脑进行系统地形态学观察和定量分析.结果:Nbn-CNS-del小鼠小脑发育比Nbn-CNS-Ctr明显滞后,至P21小脑截面积约减少4倍、小脑小叶截面积约减少6倍;外颗粒细胞层截面积、体密度和小脑小叶的体密度差异有统计学意义.结论:DNA损伤修复基因Nbn是小鼠小脑发育的一个关键基因,明显影响小鼠小脑的发育与成熟.     

Caspase-9在生后小鼠海马发育中的表达

目的观察小鼠海马发育过程中凋亡相关基因caspase-9的表达变化。方法取出生后1d、3d、7d、14d、21d和28d的小鼠海马,应用免疫组织化学技术、免疫印迹技术及图像分析技术检测caspase-9的表达变化。结果 P1 d海马CA区锥体细胞层和齿状回颗粒细胞层caspase-9阳性表达产物平均光密度最高,P3 d~P21 d caspase-9阳性表达产物平均光密度逐渐降低,P28表达水平最低。结论凋亡相关基因caspase-9在生后小鼠海马发育过程表达水平呈逐渐降低的趋势。     

小鼠海马发育中Bcl-2和Bax表达的体视学观察

目的探讨B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)和促凋亡基因Bax(Bax)在C57/BL6小鼠海马发育过程中的表达变化。方法取胚龄(E)18、20 d和生后(P)1、3、7、14、21、28 d以及2、3、6、15、18个月的C57/BL6小鼠海马,每组8只,应用免疫组织化学技术及体视学方法检测Bcl-2和Bax蛋白的表达。结果 E18 d~P21 d,在齿状回(DG)的颗粒层、海马阿蒙角(CA)以及CA各区(CA1~CA4)的锥体层,Bcl-2和Bax阳性细胞及其体密度均呈现出先逐渐增加再逐渐降低的趋势,除DG区Bax阳性细胞及其体密度在P14 d达到最高外,其他均在P7 d达到最高(P0.01)。P28 d后均趋于稳定(P0.05)。CA锥体层及DG颗粒层Bcl-2/Bax的体密度比值在P1d显著降低(P0.01),之后趋于稳定(P0.05)。结论小鼠海马Bcl-2和Bax的表达在胚胎发育晚期和生后发育早期较多,而在成年及老年期的表达稳定在较低水平,它们可能参与了海马的塑形过程。     

短暂性脑缺血对C57BL/6小鼠海马区神经发生的影响

目的:利用小鼠急性全脑缺血模型观察急性脑缺血对海马神经发生的影响。方法:将C57BL/6雄性小鼠(6~8周)随机分为脑缺血组和假手术组。采用双侧颈动脉结扎法建立短暂性全脑缺血模型;利用HE染色观察脑缺血后不同时间(1周,2周)海马区形态学变化;采用免疫组织荧光染色观察缺血后海马区caspase-3表达变化;利用Ed U染色观察缺血3 d、7 d、14 d和28 d后,海马区神经干细胞增殖变化;利用免疫组织荧光染色观察缺血3 d、7 d、14 d和28 d后,海马区nestin、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)及少突胶质细胞特异蛋白(OSP)等蛋白表达变化,判断脑缺血对海马区神经干细胞分化的影响。结果:脑缺血7 d后,小鼠海马CA1区神经元数目减少,caspase-3阳性细胞增加(P0.05)。海马DG区Ed U阳性细胞数量在第3 d开始增加(P0.05),第1周达到峰值(P0.05);海马CA1区Ed U阳性细胞数量在缺血后1周开始增加(P0.05),缺血2周后逐渐降低。海马DG区nestin、GFAP及OSP阳性细胞数量均在缺血3 d后开始增加(P0.05),缺血1周后达到峰值(P0.05),2周后逐渐降低。海马CA1区GFAP及OSP阳性细胞数量在缺血3 d后开始增加(P0.05),缺血1周后达到峰值(P0.05),2周后逐渐降低。结论:脑缺血激活了海马DG区神经干细胞,使干细胞增殖,并向神经元、星形胶质细胞、少突胶质细胞分化,同时逐渐向CA1区迁移。     

TRPC1缺失对小鼠脑神经细胞生存的影响

 目的: 研究瞬时受体电位通道1(TRPC1)缺失对小鼠海马神经元生存的影响。方法: 选用6月龄TRPC1基因敲除小鼠及其对照小鼠,通过神经元特异性标志物NeuN免疫染色、尼氏染色及TUNEL染色检测TRPC1敲除小鼠海马CA1、CA3及齿状回(DG)神经细胞的变化情况。通过Western blot检测TRPC1基因敲除小鼠促凋亡因子C/EBP同源蛋白(C/EBP homologous protein,CHOP)及凋亡相关蛋白cleaved caspase-3的表达水平。结果: NeuN免疫荧光和尼氏染色发现,TRPC1基因敲除小鼠海马CA1、CA3及DG区神经细胞显著减少;TUNEL染色检测发现TRPC1基因敲除小鼠以上区域神经细胞凋亡显著增加;Western blot结果显示,与对照小鼠相比,TRPC1基因敲除小鼠海马组织CHOP及cleaved caspase-3的水平均显著升高。结论: TRPC1基因缺失可导致小鼠海马神经元数量显著减少,其机制可能与TRPC1缺失促进神经细胞凋亡有关。     

Expression of apoptosis related protein in the development and aging of mice hippocampus

目的:探讨Bcl-2和Bax在C57/BL6小鼠海马发育和老化过程中的表达变化.方法:取胚龄(E) 18、20 d和生后(P)1、3、5、7、14、21、28 d以及2、3、6、15、18个月(M)的C57/BL6小鼠海马,应用免疫组织化学、免疫印迹法及图像分析技术检测Bcl-2和Bax蛋白的表达.结果:E18 d～P7d,海马CA区及齿状回Bcl-2和Bax阳性细胞逐渐密集.P14～P21 d,CA区两种阳性细胞稀疏;齿状回Bcl-2阳性细胞逐渐稀疏,Bax阳性细胞P14 d密集,P21 d稀疏.P28 d后均趋于稳定.图像分析显示,E18 d～P21 d,除DG区Bcl-2的平均光密度值无差异外,Bcl-2和Bax均表现为先增大后降低的趋势.免疫印迹法结果显示,Bcl-2和Bax表达E18 d～P7 d逐渐增多,P14～P21 d减少;P28 d后趋于稳定.Bcl-2/Bax在P1 d降低,P3 d～P5 d增高,P7 d～P21 d降低,P28 d后趋于稳定.结论:Bcl-2和Bax在小鼠海马发育早期表达较多,成年及老年期处于较低水平,表明它们可能参与了海马的塑形过程.     

烟碱型乙酰胆碱受体α7在Fmr1基因敲除小鼠中的表达及意义

目的观察烟碱型乙酰胆碱受体α7在Fmr1基因敲除小鼠前额皮层及海马的表达,探讨其在Fmr1基因敲除小鼠学习记忆中的作用。方法将4周龄FVB小鼠分为WT组和KO组,用跳台实验分别检测KO及WT小鼠学习记忆的能力,利用Western blotting和免疫组化方法检测KO及WT小鼠前额皮层及海马α7 nAChR的表达。结果跳台实验结果显示,与WT空白组比较,KO空白组第一天及第二天的潜伏期均显著缩短,错误次数明显增多,差异均具有统计学意义(P0.05);免疫组化结果显示,与WT空白组相比,KO空白组前额皮层和海马区α7 nAChR免疫阳性细胞数均显著减少(P0.05);Western Blotting结果显示,KO空白组前额皮层及海马区α7 nAChR表达量均较WT空白组减少,海马区更为显著,差异均具有统计学意义(P0.05)。结论 Fmr1基因敲除小鼠前额皮层、海马区的α7 nAChR表达量较野生型小鼠减少,提示α7 nAChR参与了Fmr1基因敲除小鼠学习记忆障碍的发病机制。     

X染色体上脆性X智力低下基因1敲除模型小鼠针刺长强穴学习记忆及海马CA1区γ-氨基丁酸A型受体α1亚基表达的影响

背景:X染色体上脆性X智力低下基因1敲除小鼠海马区γ-氨基丁酸A型受体α1亚基表达低于野生型小鼠。目的:观察针刺长强穴对X染色体上脆性X智力低下基因1敲除小鼠学习记忆及海马CA1区γ-氨基丁酸A型受体α1亚基表达的影响。方法:采用X染色体上脆性X智力低下基因1敲除纯合子小鼠雌雄各5只,一雌一雄合笼饲养。所繁殖幼鼠经基因型鉴定为X染色体上脆性X智力低下基因1敲除纯合子小鼠者,随机分为模型组、长强组、非穴组,各10只,另取野生型小鼠10只作为空白组。长强组小鼠采用平补平泻,行提插手法针刺长强穴1 min,频率160-200次/min,1次/d,连续治疗10 d;非穴组刺激小鼠右肋弓最低点上1 cm处;模型组及空白组每日只进行模拟抓取。结果与结论:与空白组相比,模型组小鼠水迷宫逃避潜伏期明显延长(P0.05);而与模型组相比,长强组小鼠水迷宫逃避潜伏期明显缩短(P0.05),海马CA1区γ-氨基丁酸A型受体α1亚基表达率增加(P0.05);而非穴组小鼠水迷宫逃避潜伏期及海马CA1区γ-氨基丁酸A型受体α1亚基表达率与模型组接近(P0.05)。且针刺X染色体上脆性X智力低下基因1敲除小鼠长强穴后其海马CA1区γ-氨基丁酸A型受体α1亚基阳性细胞率与逃避潜伏期呈负相关(r=-0.554,P=0.001)。提示针刺长强穴可改善X染色体上脆性X智力低下基因1敲除小鼠的学习记忆能力,上调γ-氨基丁酸A型受体α1亚基在海马CA1区的表达。     

Cell proliferation in hippocampal formation during the development and aging of C57/BL6 mouse

目的:探讨C57/BL6小鼠海马结构发育及衰老过程中细胞增殖的变化规律.方法:采用免疫组织化学和免疫印迹结合体视学方法对不同发育阶段C57/BL6小鼠海马结构中的细胞增殖进行系统观察和定量分析.结果:胚胎12天(E12 d)海马结构原基中见大量双皮质素抗原(DCX)阳性细胞.E18 d阳性细胞弥漫分布.生后1～14天(P1 d～P14 d)阿蒙角(CA)锥体层外周阳性细胞排列成1条致密带,P1 d最宽,至P14 d消失.P1 d～P7 d阳性细胞弥散分布于齿状回(DG)各层,P14 d主要分布于颗粒层内1/2,P21 d～18个月主要分布于亚颗粒细胞层.CA锥体层体积P1 d～P3 d呈上升趋势,P7d降低.DG颗粒层体积P1 d～P14 d增大;P21 d～18个月呈下降趋势.CA各区锥体细胞层阳性细胞Vv值P1 d CA3区下降,CA1区上升,P7d各区均降低.E18 d～P3 d,DCX蛋白表达逐渐增多;P3 d～18个月呈下降趋势.结论:小鼠海马结构细胞增殖、分化、迁移高峰,CA区位于生前,DG区生后两周仍有一高峰.     

The hairless gene of the mouse: relationship of phenotypic effects with expression profile and genotype.

Various mutations of the hairless (hr) gene of mice result in hair loss and other integument defects. To examine the role of the hr gene in mouse development, the expression profile of hr has been determined by in situ hybridisation and correlated to the nature of genetic changes and morphological abnormalities in different mutant animals. Four variant alleles have been characterised at the molecular level. hr/hr mice produce reduced, but significant, levels of hr mRNA whereas other alleles contain mutations which would be expected to preclude the synthesis of functional product, demonstrating a correlation between allelic variation at the hr locus and phenotypic severity. hr expression was shown to be widespread and temporally regulated. It was identified in novel tissues such as cartilage, developing tooth, inner ear, retina, and colon as well as in skin and brain. Analysis of mice homozygous for the rhino allele of hairless revealed that, although no morphological defects were detectable in many tissues normally expressing hr, previously undescribed abnormalities were present in several tissues including inner ear, retina, and colon. These findings indicate that the hairless gene product plays a wider role in development than previously suspected. Dev Dyn 1999;216:113-126.     

Disruption of the midkine gene (Mdk) resulted in altered expression of a calcium binding protein in the hippocampus of infant mice and their abnormal behaviour

BACKGROUND: Midkine (MK) is a growth factor implicated in the development and repair of various tissues, especially neural tissues. However, its in vivo function has not been clarified. RESULTS: Knockout mice lacking the MK gene (Mdk) showed no gross abnormalities. We closely analysed postnatal brain development in Mdk(-/-) mice using calcium binding proteins as markers to distinguish neuronal subpopulations. Intense and prolonged calretinin expression was found in the dentate gyrus granule cell layer of the hippocampus of infant Mdk(-/-) mice. In infant Mdk(+/+) mice, calretinin expression in the granule cell layer was weaker, and had disappeared by 4 weeks after birth, when calretinin expression still persisted in Mdk(-/-) mice. Furthermore, 4 weeks after birth, Mdk(-/-) mice showed a deficit in their working memory, as revealed by a Y-maze test, and had an increased anxiety, as demonstrated by the elevated plus-maze test. CONCLUSION: Midkine plays an important role in the regulation of postnatal development of the hippocampus.     

低压缺氧延迟预适应小鼠海马差异表达基因的筛选及鉴定研究

目的：探索低压缺氧延迟预适应小鼠海马差异表达基因。 方法： 将近交系Babl/c小鼠放入减压舱，模拟海拔 7 000 m高度减压2.5 h/d，连续3 d。第3次减压毕36 h后，提取海马总RNA，SMART PCR合成cDNA，经抑制消减杂交，建立消减cDNA文库。随机挑取文库单克隆，用反向Northern杂交，分别对来自于正、反向文库的452个和74个克隆进行了筛选。 结果： 用消减探针筛选时，217个基因片段的杂交信号在延迟预适应海马增加2倍以上，85个基因片段的杂交信号则降低66%以下。用未消减探针筛选时，135个基因片段的杂交信号在延迟预适应海马增加2倍以上，44个基因片段的杂交信号则降低66%以下。对部分基因片段测序显示，小鼠线粒体细胞色素C氧化酶亚单位1、线粒体NADH脱氢酶亚单位1和6、小鼠DSS1和克隆号为IMAGE:3582855的基因在延迟预适应海马表达增加。克隆号为IMAGE: 3593193的基因、与成年雄性小鼠嗅脑的一个cDNA高度相似的基因及与小鼠bladder RCB-0544 MBT-2 cDNA高度相似的基因在延迟预适应海马表达降低。 结论： 小鼠海马低压缺氧延迟预适应多种基因表达发生改变，它们可能是产生低压缺氧延迟预适应的重要机制之一。     

APP/PS1转基因小鼠海马内少突胶质细胞变化的体视学研究

目的:定量研究APP/PS1转基因小鼠海马内少突胶质细胞(OLG)的改变,探讨β-淀粉样蛋白(Aβ)对OLG的影响。方法:随机选取10月龄雄性APP/PS1转基因小鼠(AD组)和10月龄同窝生雄性野生型小鼠(WT组)各13只,运用Morris水迷宫检测各组小鼠的空间学习和记忆能力;运用体视学方法计数各组小鼠海马CA1、CA2-3和齿状回(DG)内Olig2+细胞和2',3'-环核苷酸3'-磷酸二酯酶(CNPase)阳性细胞总数;体外培养小鼠少突胶质前体细胞(MOPC),给予Aβ1-42,运用real time RT-PCR和Western Blot检测OLG相关蛋白的表达水平和含量。结果:AD小鼠逃避潜伏期显著性长于WT小鼠(P<0.05),穿台次数显著性少于WT小鼠(P<0.05);AD小鼠海马各区Olig2+细胞总数均较WT小鼠显著性增加(P<0.05),且与逃避潜伏期呈正相关,与穿台次数呈负相关,而各区CNPase+细胞总数均较WT小鼠显著性减少(P<0.05),且与逃避潜伏期呈负相关;Aβ1-42干预后MOPC的NG2及CNPase的mRNA水平显著性降低(P<0.05),Olig2含量也显著性降低(P<0.05)。结论:APP/PS1转基因小鼠海马内存在成熟OLG丢失、少突胶质细胞系异常增殖;Aβ可能引起OLG损伤和发育异常;保护海马成熟OLG以及调控OLG发育可能是防治AD的有效策略。     

海尔福防治慢性铝中毒小鼠作用机制的实验研究

目的探讨中药海尔福对慢性铝中毒小鼠防治作用机制。方法实验用30只昆明小白鼠,分模型组、海尔福治疗组、对照组,采用跳台法及避暗法检测各组小鼠学习记忆成绩,用HE染色观察小鼠脑皮层及海马神经元的变化,用免疫组织化学方法观察海尔福对各组小鼠脑皮层及海马结构区域NMDA受体亚单位NR2B蛋白表达的情况。结果模型组与对照组比较,学习记忆成绩明显下降(P<0.01);海尔福治疗组与模型组比较,学习记忆成绩明显提高(P<0.01);HE染色观察小鼠脑皮层及海马神经元在各组变化不明显。模型组与对照组比较,皮层和海马内NR2B的表达明显减少(P<0.01),海尔福治疗组小鼠脑内NR2B的表达程度明显增加(P<0.01)。结论海尔福可能通过NR2B蛋白表达的保护作用而发挥抗慢性铝中毒作用。     

海马Cajal-Retzius细胞的正常发育及在APPswe转基因小鼠中的改变

目的 观察reelin阳性Cajal-Retzius细胞（CR细胞）在正常小鼠及APPswe转基因小鼠海马发育中的变化,探讨CR细胞在阿尔茨海默病（AD）发生发展过程中所起的作用,为研究AD发病机制和临床治疗提供新的思路和方法。 方法 80只实验小鼠分为APPswe转基因模型组和对照组,每一组内分E16、P0、P7 、P15 、P30、P90、P180和P360 8个年龄段,每一年龄段小鼠各取5只。另取12月龄模型组和对照组小鼠各3只,用硫黄素S染色技术检测APPswe转基因小鼠脑内沉积的老年斑;免疫荧光技术标记正常及模型组小鼠齿状回分子层内reelin阳性CR细胞,同时采用谷氨酸、γ氨基丁酸(GABA)、活化型Caspase-3分别与reelin双重标记以研究CR细胞的组织化学特点及凋亡情况;最后利用免疫印迹方法对海马组织内reelin的活化片段进行半定量分析。 结果 随着海马发育CR细胞逐渐减少,不同时期的reelin阳性CR细胞可以分别被谷氨酸、GABA、Caspase-3标记;APPswe转基因小鼠海马内CR细胞的数量明显少于正常对照组,免疫印迹法结果与免疫细胞化学统计结果吻合。 结论 出生后CR细胞的丢失是由于凋亡所致,在海马发育的不同时期CR细胞分泌兴奋性或抑制性神经递质,以此来调节突触间的信息传递与突触可塑性。APPswe转基因小鼠海马内CR细胞低于正常对照组,提示CR细胞丢失可能与AD相关的神经元退行性病变有关。